Name: Hindekstremite Iskemi bir Murine modelinde terapötik anjiyogenezi değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Öğrenin, farelerde arka ekstremite iskemi modeli kullanarak terapötik anjiyogenezin fonksiyonel, histolojik ve moleküler etkilerini nasıl değerlendireceğinizi. Bu yöntem, yeni anjiyojenik ajanların kapsamlı analizi için standart bir temel sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz, sırasıyla Instituto de Medicina moleküler João Lobo Antunes Bioımaging tesis ve Histoloji ve karşılaştırmalı patoloji laboratuvarı başkanları José Rino ve Tânia Carvalho teşekkür ederiz. Ayrıca Nova Tıp Fakültesi/Faculdade de Ciências médicas, Universidade Nova de Lisboa anatomisi bölümünden Vyacheslav Sushchyk teşekkür ederiz.
Finansman referansı: UID/ıC/0306/2016 Fundação para a Ciência e a Tecnologia tarafından finanse edilen proje. Paula de Oliveira, Fundação para a Ciência e Tecnologia 'dan bir burs (SFRH/BD/80483/2011) tarafından desteklenmektedir.

Tüm hayvan prosedürleri Direktifi 2010/63/EU uyarınca ve kurumsal hayvan refah organı tarafından onaylanmış ve DGAV tarafından lisanslı, hayvan koruma için Portekiz yetkili kurumu (lisans numarası 023861/2013)
DIKKAT: protokollerde kullanılan kimyasalların birkaç tanesi toksik ve zararlıdır. Lütfen tüm uygun güvenlik uygulamalarını ve kişisel koruyucu ekipmanları (eldiven, laboratuar ceket, tam boy pantolon ve kapalı ayak ayakkabıları) kullanın
1. hindekstremite iskemi murine modeli
Not: tüm deneyler 22 haftalık C57BL/6 kadın fareler üzerinde gerçekleştirilir.
<ol><li>Çözümlerin hazırlanması
	<ol>
<li>
Anestezik çözümün hazırlanması Not: Bu anestezik kombinasyon (Medetomidin ve ketamin) kadar sağlar 30 dk immobilizasyon ve bir cerrahi pencere 15 dakika. Etki atipamezol yönetimi tarafından geri alınabilir.<ol>
<li>Temiz, 1cc şırınga ile, 1 mL Medetomidin (1 mg/kg vücut ağırlığı) geri çekin, doğru ölçümler için hava kabarcıkları ortadan kaldırmak ve 15 mL Falcon tüp ekleyin.</li>
			<li>Temiz, 1 cc şırınga ile, 0,75 mL ketamin (75 mg/kg vücut ağırlığı) geri çekin, doğru ölçümler için hava kabarcıkları ortadan kaldırmak ve medetomidine içeren 15 mL şahin tüp ekleyin.</li>
			<li>10 mL anestezik çözelti elde etmek için 8,25 mL steril tuz (0,9% NaCl) ekleyin.</li>
			<li>Bileşiklerin adı ile tüp tanımlamak, Tarih karışık ve son kullanma tarihi.</li>
			<li>4 °C ' de karanlıkta saklayın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Anti-sedatif çözümün hazırlanması
		<ol>
<li>Temiz, 1 cc şırıngayla, 1 mL atipamezol (5 mg/kg vücut ağırlığı) çekin, doğru ölçümler için hava kabarcıklarını ortadan kaldırın ve 15 mL 'Lik şahin tüpüne ekleyin.</li>
			<li>10 mL reversiyon çözeltisi elde etmek için 9 mL steril tuz (0,9% NaCl) ekleyin.</li>
			<li>Bileşiklerin adı ile tüp tanımlamak, Tarih karışık ve son kullanma tarihi.</li>
			<li>4 °C ' de karanlıkta saklayın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Ameliyat sonrası analjezi çözeltisi hazırlanması
		<ol>
<li>Temiz, 1 cc şırıngayla, 0,5 mL buprenorfik (100 μL/15-30 g vücut ağırlığı) çekin, doğru ölçümler için hava kabarcıklarını ortadan kaldırın ve 15 mL 'Lik şahin tüpüne ekleyin.</li>
			<li>10 mL analjezi çözeltisi elde etmek için 9,5 mL steril tuz (0,9% NaCl) ekleyin.</li>
			<li>Bileşiklerin adı ile tüp tanımlamak, Tarih karışık ve son kullanma tarihi.</li>
			<li>4 °C ' de karanlıkta saklayın.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Hindekstremite iskemi cerrahi indüksiyon
	<ol>
<li>Bu müdahale için gerekli cerrahi aletler: sivri forseps, yay makas, oftalmik iğne tutucu, cerrahi makas ve iğne tutucu. Kullanmadan önce tüm cerrahi aletleri Otoklav içinde sterilize edin. Subkutan yağ diseksiyonu için pamuk bezlerden kullanın.</li>
		<li>Fare tutmadan önce anestezi çözeltisi ile şırıngayı yükleyin.</li>
		<li>Fare hareketli tutmak için mümkün olduğunca çok cilt tutarak, kafes ızgarasına karşı kulaklarının arkasında kuvvet uygulayarak hayvan restrain.</li>
		<li>Kafasını indirdi ile eğilmiş hayvan tutun ve anestezi çözeltisi bir intraperitoneal enjeksiyon gerçekleştirmek, fare gövdesi ile 45 ° açı şırınga tutarak.</li>
		<li>Anestezi derinliği değerlendirmek için, pedal çekilme refleksleri yokluğunda kontrol edin.</li>
		<li>Bir elektrikli tıraş makinesi kullanarak sağ arka ekstremite saç çıkarın. Cilt hazırlama için bir klorheksisin dezenfektan sabun fırçalayın kullanın. Suds kaldırmak için temiz bir kağıt havlu kullanın. Bir klorheksisin cerrahi fırçalayın uygulayın ve cerrahi steril paketi fareler taşımadan önce steril bir örtü ile cilt alanı korumak.</li>
		<li>Hayvan dorsal dekübitus yerleştirin ve dört ekstremite ayrı yaymak ve teyp ile güvenli ile dizginlemek. DIKKAT: hayvanın vücut sıcaklığını kararlı tutmak için ısıtmalı bir yastık üzerinde prosedürü gerçekleştirin; cerrahi prosedür, 10X veya 20X büyütme sırasında bir diseksiyon mikroskop kullanılarak gerçekleştirilir.</li>
		<li>Cilt hazırlığı sonuçlandırmak için steril gazlı bez kullanarak bir klorheksidin antiseptik solüsyon uygulayın. 11 numaralı Cerrahi neşter bıçağını kullanarak, sağ bacakın uyluk üzerine 1 cm 'lik bir cilt kesi gerçekleştirin.</li>
		<li>Künt subkutan yağ nörovasküler paket açığa sökme. Sivri forseps kullanarak, yay makas ve oftalmik iğne tutucu, distal dış iliak ve femoral damarların ortaya çıkarmak için membranöz İLİO-Femoral Kılıf açın.</li>
		<li>Damarları (arter ve ven) sinirden ayırır ve ayırın. Bir 7,0 kullanarak Emilemeyen polipropilen sütür distal dış iliak arter ve ven ve distal femoral arter ve ven indirgeme uzman.</li>
		<li>İLİO-femoral arter ve damarları, yay makas ile distal ve proksimal knot arasındaki segmenti Transect.</li>
		<li>Kesi emilebilen sütür ile kapatın (örn., 5,0 vicryl sütür).</li>
		<li>Şırıngayı Anti-sedatif çözelti ile yükleyin ve anti-sedatif çözeltinin intraperitoneal enjeksiyonu yapmak için 1.2.3 ve 1.2.4 'de ayrıntılı olarak aynı yöntemi kullanın.</li>
	</ol></li>
	<li>Ameliyat sonrası izleme Not: hayvanlar dikkatle tüm hayvanların Anti-sedatif iyi kurtarmak emin olmak için her 15-20 dk gözlenen; anestezileştirilmiş hayvanlar asla gözetimsiz bırakılmamalıdır.<ol>
<li>Anestezi kurtarma değerlendirmek: 1) solunum hızını ve derinliği izlemek; 2) hayvan refleksleri (pedal ve göz pozisyonu) değerlendirmek</li>
		<li>Post-operatif analjezi her 8-12 h bir Subkutan Enjeksiyon gerçekleştirin.</li>
		<li>Hayvan sağlık durumu ve cerrahi site görünümü kısa bir açıklama kayıt ameliyattan sonra günlük hayvanları izlemek, tüm dikiş kapalı olduğundan emin olun.</li>
		<li>Eğer ayrılması oluşursa, kesi yeniden dikişe. Başarısız olursa, idrar, dışkı atılımları, sürtünme ve cildin kesme korumak ve iyileşme sürecine yardımcı olmak için kesi bir cilt bariyer film uygulayın.</li>
	</ol></li>
</ol>2. anjiyojenik etkisinin değerlendirilmesi
Not: iskemi indüksiyon sonra, çalışmada terapötik ajan uygulamak ve aşağıdaki prosedürleri elde. Diğer zaman noktalarında gerçekleştirilen adımlar ilgili bölüm altında ayrıntılı olarak görülmektedir.
<ol><li>Lazer Doppler perfüzyon görüntüleme
	<ol>
<li>Bir gün önce bir elektrikli tıraş makinesi kullanarak analizinden sonra her iki hindekstremite saç çıkarın dondurmacı krem.</li>
		<li>Anestezik çözeltisi kullanarak fareler anestezize.</li>
		<li>İşlem sırasında sıcaklık değişmeyecek sağlamak için 5 dakika için 37 °C Isıtma pad üzerinde hayvan yerleştirin</li>
		<li>Hayvanı, bacaklarla birlikte, uzun bir pozisyonda güvenli bir konuma yerleştirin. Zaman içinde hindekstremite perfüzyon değişiklikleri takip etmek için prosedür tekrarlanmalıdır zaman hayvan konumlandırma benzer olmalıdır her hayvan için sağ ve sol bacaklar ve ayaklar arasındaki mesafeyi ölçmek.</li>
		<li>Lazer Doppler perfüzyon görüntüleştirici kullanarak veri almaya başlayın.</li>
		<li>Satın alma tamamlandıktan sonra, Anti-sedatif solüsyon ile anestezi geri dönün.</li>
		<li>Görüntü analiz yazılımını açın ve iskemik hindekstremite etrafında ilgi alanı (YG) ve non-iskemik hindekstremite etrafında karşılaştırılabilir bir YG çizin.</li>
		<li>Flux değerleri gözlemlemek ve iskemik ekstremite perfüzyon bir oranı olarak perfüzyon belirlemek olmayan-iskemik ekstremitede. Perfüzyon oranındaki değişiklikler zamanla ölçülür.</li>
	</ol></li>
	<li>İmmünhistokimya ve kılcal Yoğunluk Analizi
	<ol>
<li>Anestezinden sonra, fareleri servikal dislocation ile feda et.</li>
		<li>Her iki bacakların gasrocnemius kasları toplamak için, ilk olarak, her iki arka ekstremite cilt çıkarın.</li>
		<li>Aşil tendonu tanımlayın ve bir 11-Blade neşter kullanarak kemik tendon ayırın.</li>
		<li>Aşil tendonu tutun ve yay makas ile diz eklem kadar Tibia ve fibula kas ayırın.</li>
		<li>Pazı femoris 'i gastroknemius kasından ayırın.</li>
		<li>Diz eklem seviyesinde gastroknemius kaslarının eklemeler kesmek için yay makas kullanın.</li>
		<li>10% tragacanth yardımıyla küçük bir mantar disk üzerinde bir enine yönde hasat gastrorocnemius kasları yerleştirin.</li>
		<li>Numuneleri sıvı nitrojen soğutmalı isopentane ile dondurur ve sekene kadar-80 °C ' de saklayın.</li>
		<li>Kas numunelerinin 7 μm bölümlerini bir kriyostat üzerinde kesebilir ve cam slaytlarda monte edilir. Not: protokol burada duraklatılmış olabilir.</li>
		<li>Soğutucu saf aseton (yaklaşık 50 mL) içeren bir şişe içinde-20 °C ' de 10 dakika boyunca cam slaytları düzeltin.</li>
		<li>Oda sıcaklığında 30 dakika boyunca metanol (50 mL) olarak seyreltilmiş% 0,3 hidrojen peroksidaz ekleyin.</li>
		<li>Toplam 10 dakika boyunca fosfat-tamponlu tuz (PBS) (50 mL) olarak iki kez yıkayın.</li>
		<li>Bölümler etrafında hidrofobik kalem kullanın. Not: hidrofobik kalem kullanımı, protokol sırasında harcanan çözümlerin miktarını azaltmanıza olanak tanır. Tüm inküler için 100 μL tüm çözümleri, bölüm başına kullanın.</li>
		<li>Oda sıcaklığında 30 dakika boyunca PBS 'de% 5 tavşan serumu engelleme çözümü uygulayın.</li>
		<li>Numuneleri, PBS 'de% 1 sığır serum albümin (BSA) olarak 1:500 ' de seyreltilmiş Anti-CD31 Rat monoklonal antikor ile Oda sıcaklığında 1 h için inküt.</li>
		<li>Toplam 30 dakika boyunca PBS 'de üç kez yıkayın.</li>
		<li>PBS 'de% 1 BSA ve oda sıcaklığında 30 dakika boyunca% 5 tavşan serumu olarak 1:200 at ikincil biyotinlenmiş tavşan Anti-Rat IgG antikor ekleyin.</li>
		<li>Daha önce olduğu gibi PBS 'de yıkayın ve oda sıcaklığında 30 dakika boyunca etiketli avidin-konjueli peroksidaz kompleksi ekleyin.</li>
		<li>5 dakika boyunca PBS 'de 3 kez durulayın ve başka bir 5 dakika diaminobenzidin (DAB) peroksidaz substrat kiti ekleyin.</li>
		<li>Montajdan önce 10 s için hematoksilen ile bölümleri counterstain.</li>
		<li>Her örnekli 4 ayrı anatomik alanın 2 farklı bölümünde (yani, miyoksit sayısı başına kılcal sayısı) bir dik aydınlık alan mikroskop kullanarak kılcal yoğunlukları ölçün.</li>
	</ol></li>
	<li>Kontrast aracı perfüzyon
	<ol>
<li>Anestezik çözeltisi kullanarak fareler anestezize.</li>
		<li>15 numaralı neşter bıçağı kullanarak Median laparotomi gerçekleştirin.</li>
		<li>Abdominal aort ve kaudal Vena Cava 'ı açığa çıkararak, küçük bağırsak ve yay makası kullanarak yanal geri çekildikten sonra.</li>
		<li>1 26-Gauge kateteri kransal olarak abdominal aort ve başka bir şekilde aynı yönde olan kaudal Vena Cava 'ya yerleştirin.</li>
		<li>Bir konaklama sütür gerçekleştirmek için bir 5/0 ipek dikiş kullanarak yerde güvenli kateterler.</li>
		<li>Vasküler sistemi, 10 ml Şırıngayı kullanarak abdominal aort içine itilmiş heparin (500 adet/100 ml) içeren 37 °c ' lik bir tuz çözeltisi ile yıkayın. Kaudal Vena Cava içine yerleştirilen kateter dışarı çıkan net bir çözüm görülene kadar nazik perfüzyon devam edin. Not: genellikle 30 için 40 ml bir heparinize tuz çözeltisi bir yetişkin sıçan vasküler sistemi durulamak için gereklidir.</li>
		<li>2 dakika boyunca adenozin (1 mg/L) ve papaverin (4 mg/L) karışımı yönetin.</li>
		<li>Aort kateterine enjekte 10% 50 Baryum sülfat ve% 5 jelatin karışımı mL. Not: çözeltinin kalınlaşmasını önlemek için 60 °C ' de tutulması gerekir.</li>
		<li>Damar dökümüne katılaşma sağlamak için fareler-4 °C ' de en az 4 saat bırakın.</li>
		<li>Her fare alt gövdesinde cilt çıkarın.</li>
	</ol></li>
	<li>Diaphonization - spalteholz tekniği
	<ol>
<li>En az 72 h için% 10 formaldehit çözeltisi içinde daldırma tarafından fareler düzeltin.</li>
		<li>24 saat boyunca% 30 hidrojen peroksit çözeltisi içinde daldırma tarafından fare Bleach.</li>
		<li>Dondurma değiştirme tekniği kullanarak fareler susuz. Bu metodoloji, fareleri, her biri 24 saat boyunca-20 °C ' de saf aseton olan Art arda geçişte (ortalama dört) göndererek oluşur.</li>
		<li>100% Benzil benzoat ve 100% metil salisilat bir 3:5 oranında karışımı içeren bir çözelti içine daldırarak fareler açıklığa kavuşturmak (Bu karışımı da Spalteholz çözüm olarak da bilinir) 13.</li>
		<li>Fareleri Spalteholz solüsyonu içinde bir vakum odasında batırın, genellikle 5 ila 7 gün sürer.</li>
		<li>Numunenin temizlenmeden önce karanlık hale gelirse, çözümü değiştirin.</li>
	</ol></li>
	<li>Teminat gemiler ölçümü
	<ol>
<li>Stereotaktik mikroskop kullanarak Spalteholz çözeltisi içinde transaydınlatma altında askıya alınan farelere dikkat edin. Hafifçe kavramak ve taşımak için mikrocerrahi forseps kullanın.</li>
		<li>Mikroskop bağlı bir dijital kamera kullanarak tüm ekstremite fotoğraf.</li>
		<li>Uygun yazılımı kullanarak tüm ekstremite fotoğraflarını alın.</li>
		<li>Uygun yazılımı kullanarak onları vurgulayarak teminat gemileri manuel segmentasyon gerçekleştirin. Not: teminat gemileri longland 'ın tanımına göre tanımlanır, tanımlanmış bir kök, orta bölge, ve yeniden giren, 20 ve 300 μm arasında bir çap ile, femoral, safen ve popliteal arterlerin ve tüm venöz yapıları hariç.</li>
		<li>Cerrahi tıkanıklığı çevreleyen ve altında, adductor aynı anatomik bölgede her fare Roıs tanımlayın.</li>
		<li>Toplam ekstremite alanının% 20 ' sini eşdeğer ROIs 'te bulunan teminat damar yoğunluğunu (CVD) ölçün. CVD, vasküler alan ile ROIs alanları arasındaki oran olarak hesaplanır. Tüm yoğunluk ölçümleri ımagej yazılımı kullanılarak gerçekleştirilir. Not: her fare için iskemik ekstremite CVD değeri anatomi, perfüzyon veya diaphonization prosedürlerinde varyasyonları dışlamak için% 100 ' e karşılık kabul edilir. İskemik ekstremite CVD yüzdesi, bu nedenle, olmayan-iskemik bir göreli olarak hesaplanır.</li>
		<li>CVD artış yüzdesini iskemik ve noniskemik ekstremite arasında CVD yüzdesi arasındaki fark olarak belirleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>Lazer yakalama mikrodiseksiyonu kapillaries
	<ol>
<li>Anestezinden sonra, fareleri servikal dislocation ile feda et.</li>
		<li>Her iki bacakların gasrocnemius kasları hasat etmek için, fareler her iki arka ekstremite cilt çıkarın.</li>
		<li>Aşil tendonu tanımlayın ve bir 11-Blade neşter kullanarak kemik tendon ayırın.</li>
		<li>Aşil tendonu tutun ve yay makas ile diz eklem kadar Tibia ve fibula kas ayırın.</li>
		<li>Pazı femoris 'i gastroknemius kasından ayırın.</li>
		<li>Diz eklem seviyesinde gastroknemius kaslarının eklemeler kesmek için yay makas kullanın.</li>
		<li>10% tragacanth yardımıyla küçük bir mantar disk üzerinde bir enine yönde hasat gastrorocnemius kasları yerleştirin.</li>
		<li>Numuneleri sıvı nitrojen soğutmalı isopentane ile dondurur ve sekene kadar-80 °C ' de saklayın.</li>
		<li>Kas örneklerinin bir kriyostat 12 μm bölümleri üzerinde kesme ve cam slaytlar üzerinde monte. Not: RNA koruması Için, ön soğutmalı bir slayt alın ve slaytın arka tarafına parmağınızı (eldivenler) dokunup, yalnızca bölümü yerleştirmek için bölgeyi ısıtın. Kriyostat bıçağından transfer bölümü, sıcak alan ile dokunarak ve-20 °c ' de 2-3 dk. için kriyostat 'ta kuru. Protokol burada duraklatılmış olabilir.<ol>
<li>-20 °C ' de 5 dakika boyunca soğutmalı saf aseton (yaklaşık 50 mL) içeren bir şişede cam slaytları düzeltin ve onları havaya kurutun.</li>
			<li>Bölümler etrafında hidrofobik kalem kullanın. Not: hidrofobik kalem kullanımı, protokol sırasında harcanan çözüm miktarının azaltılmasına yardımcı olur. Tüm inküler için 100 μL tüm çözümleri, bölüm başına kullanın.</li>
			<li>4 °C ' de 2 M NaCl/PBS ile rehidrat ve 1:500 Ila 2M NaCl/PBS 'de Anti-CD31 Rat monoklonal antikor ile 4 °C ' de bir gecede örneklerin inküyesi.</li>
			<li>Toplam 6 dakika boyunca 2M NaCl/PBS 'de iki kez yıkayın.</li>
			<li>1:200 at 2m NaCl/PBS ve% 5 tavşan serumu 4 °c ' de 30 dakika için ikincil biyotinlenmiş tavşan Anti-Rat IgG antikor ekleyin.</li>
			<li>Daha önce olduğu gibi 2 M NaCl/PBS 'de yıkayın ve 4 °C ' de 30 dakika boyunca etiketli avidin-konjueli peroksidaz kompleksini ekleyin.</li>
			<li>DAB peroksidaz substrat kiti 5 dakika boyunca durulayın ve ekleyin.</li>
			<li>Buz-soğuk bölümler% 90 etanol% 100 etanol takip ve kuru bırakın.</li>
			<li>Darbe katı hal 355 nm lazer ile donatılmış bir lazer gösterilmesi sistemi kullanarak fare başına 10 000 kapiller dissect ve bir mikrofuge tüp yapıştırıcı-Cap içine disseke kapillaries mancınık.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>RNA ekstraksiyon, cDNA sentezi, ön amplifikasyon ve RT-PCR
	<ol>
<li>Mikrodissected kapillarilerin toplam RNA 'sını uygun bir kit kullanarak yalıtın, elde edilen toplam RNA 1,5-3 ng/μL arasındadır.</li>
		<li>Tablo 1' de açıklanan astar kullanarak sentez ve iki tur ön amplifikasyon Için bir cDNA sentezi kiti kullanın.</li>
		<li>Önceki adımda açıklanan aynı hedefler için RT-PCR gerçekleştirin. 95 °C ' de 10 dakika boyunca ilk denatürasyon adımından oluşan bir program, 15 s için 95 °C ' de 50 döngüleri ve 1 dk için 60 °C ' de kullanılır.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Becker, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+I%3A+Definitions%2C+epidemiology%2C+clinical+presentation+and+prognosis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Chapter I: Definitions, epidemiology, clinical presentation and prognosis.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 42 Suppl 2, S4-S12 (2011).</li>
<li>Fowkes, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+artery+disease%3A+epidemiology+and+global+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Peripheral artery disease: epidemiology and global perspectives.</a> Nature Reviews Cardiology. 14 (3), 156-170 (2017).</li>
<li>Abu Dabrh, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+history+of+untreated+severe+or+critical+limb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">The natural history of untreated severe or critical limb ischemia.</a> Journal of Vascular Surgery. 62 (6), 1642-1651 (2015).</li>
<li>Lejay, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+murine+model+of+sustainable+and+durable+chronic+critical+limb+ischemia+fairly+mimicking+human+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">A new murine model of sustainable and durable chronic critical limb ischemia fairly mimicking human pathology.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 49 (2), 205-212 (2015).</li>
<li>Sprengers, R. W., Lips, D. J., Moll, F. L., Verhaar, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitor+cell+therapy+in+patients+with+critical+limb+ischemia+without+surgical+options%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Progenitor cell therapy in patients with critical limb ischemia without surgical options.</a> Annals of Surgery. 247 (3), 411-420 (2008).</li>
<li>Lotfi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+more+relevant+hind+limb+model+of+muscle+ischaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Towards a more relevant hind limb model of muscle ischaemia.</a> Atherosclerosis. 227 (1), 1-8 (2013).</li>
<li>Masaki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenic+gene+therapy+for+experimental+critical+limb+ischemia%3A+acceleration+of+limb+loss+by+overexpression+of+vascular+endothelial+growth+factor+165+but+not+of+fibroblast+growth+factor-2%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Angiogenic gene therapy for experimental critical limb ischemia: acceleration of limb loss by overexpression of vascular endothelial growth factor 165 but not of fibroblast growth factor-2.</a> Circulation Research. 90 (9), 966-973 (2002).</li>
<li>Limbourg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+postnatal+arteriogenesis+and+angiogenesis+in+a+mouse+model+of+hind-limb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Evaluation of postnatal arteriogenesis and angiogenesis in a mouse model of hind-limb ischemia.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1737-1746 (2009).</li>
<li>Hellingman, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variations+in+surgical+procedures+for+hind+limb+ischaemia+mouse+models+result+in+differences+in+collateral+formation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Variations in surgical procedures for hind limb ischaemia mouse models result in differences in collateral formation.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 40 (6), 796-803 (2010).</li>
<li>Brevetti, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise-induced+hyperemia+unmasks+regional+blood+flow+deficit+in+experimental+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Exercise-induced hyperemia unmasks regional blood flow deficit in experimental hindlimb ischemia.</a> Journal of Surgical Research. 98 (1), 21-26 (2001).</li>
<li>Ministro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-dose+ionizing+radiation+induces+therapeutic+neovascularization+in+a+pre-clinical+model+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Low-dose ionizing radiation induces therapeutic neovascularization in a pre-clinical model of hindlimb ischemia.</a> Cardiovascular Research. 113 (7), 783-794 (2017).</li>
<li>Pereira, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+angiogenesis+induced+by+human+umbilical+cord+tissue-derived+mesenchymal+stromal+cells+in+a+murine+model+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+Therapy%22%5BJournal%5D)">Therapeutic angiogenesis induced by human umbilical cord tissue-derived mesenchymal stromal cells in a murine model of hindlimb ischemia.</a> Stem Cell Research Therapy. 7 (1), 145(2016).</li>
<li>Azaripour, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+clearing+techniques+for+3D+imaging+of+tissues+with+special+reference+to+connective+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues with special reference to connective tissue.</a> Progress in Histochemistry and Cytochemistry. 51 (2), 9-23 (2016).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

CLI murine modelleri çoğunlukla femoral arter ligasyon sadece Profunda femoris orijini distal oluşmuştur 4,5,6,7,8,9. Bu, 7 gün içinde ekstremite kan akışını geri yükler, korunmaz sirkülasyon çoğunu terk göstermiştir 9. Teminat yatağı kaldırılması femoral arter eksizyonu ile elde edilebilir. Ancak, ori...

Periferik arter hastalığı (PAD) ağırlıklı olarak alt ekstremite etkiler. PAD ateroskleroz neden olur, alt ekstremite kan akışına ciddi kısıtlama neden olabilir bir arter tıkanıklığı1. Aralıklı klodicasyon PAD ilk tezahürü ve yürüyüş kas ağrısı anlamına gelir. CLı, iskemik dinlenme ağrısı, ülser veya kangren2gösteren hastalarda teşhis EDILIYOR, Pad en şiddetli aşamasıdır. CLı olan hastalarda özellikle tedavi edilmemiş3amputasyon riski yüksektir. Alt ekstremite revaskülarizasyon (ya açık cerrahi veya endovasküler prosedür) Şu anda ekstremite kurtarma elde etmek için tek yoldur. Ancak, bu prosedürler için, lezyonların yerini, arter tıkanıklığı ve geniş komorbiditesi4,5' i içeren nedenlerle, CLI hastalarının yaklaşık% 30 ' unda bu yordamlar için uygun değildir. Bu nedenle, bu başka tedavi edilemez hastalar için yeni tedaviler gereklidir, anjiyogenez tanıtımı ile daha yoğun soruşturma altında strateji olmak.
İnsanlarda test yapmadan önce, yeni terapilerin etkinliği ve güvenliği hayvan modellerinde değerlendirilmelidir. Birkaç model, genellikle fareler6,7,8,9,10içinde hindekstremite iskemi (HLI) inducing tarafından, CLI çalışması için geliştirilmiştir. Ancak, bu modeller ve/veya ekisize ve damarları ve sinirler çevreleyen da6,7,8disseke olup olmadığını arterlerin doğası da dahil olmak üzere çeşitli yönleri farklıdır 9,10. Birlikte alındığında, bu yönleri her hayvanın iskemi-reperfüzyon yaralanması şiddeti etkileyecektir, sonuçları karşılaştırmak zor hale. Bu nedenle, belirli bir anjiyojenik tedavinin etkili olup olmadığını değerlendirmek için iskemi ve farklı hedeflerin değerlendirilmesine neden olan prosedürün standartlaştırılmalıdır etkili bir protokol geliştirmek önemlidir. Tüm bu yönleri kapsayacak şekilde tasarlanan deneysel bir protokol, anjiyojenik tedavilerin etkilerini ve bunların her bir sonuçlarının her birinde etkinliğini ölçen mekanizmalar tarafından kapsamlı bir anlayış sağlayacaktır. Son zamanlarda ekibimiz tarafından yayınlanan iki farklı eserler iyi bir örnek olan11,12, hangi farklı yaklaşımlar terapötik anjiyojenezi neden bu daha fazla ayrıntı ile tarif edilecektir aynı protokol kullanılarak değerlendirildi Protokolü.
Bu protokolün genel amacı, CLı 'nin etkilerini taklit edebilir ve deneysel anjiogenik fonksiyonel, histolojik ve moleküler etkilerinin kapsamlı bir şekilde değerlendirilmesi için deney temelini koyabilen yeniden üretilebilen bir deneysel modeli açıklamak. Ajan.

<table><tbody><tr><td>7500 Hızlı Gerçek Zamanlı PCR</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td></td><td>Enstrümanı</td></tr><tr><td>Aseton</td><td>Merk</td><td>1000141000</td><td>Reaktifi; Dikkat - son derece yanıcı</td></tr><tr><td>Adenozin</td><td>Valdepharm</td><td></td><td>Reaktifi</td></tr><tr><td>Atipamezol</td><td>OrionPharma</td><td></td><td>Reaktifi</td></tr><tr><td>Baryum sülfat (Mikroopak)</td><td>Guebert</td><td>8671404 (ref. Infarmed)</td><td>Reaktif</td></tr><tr><td>Buprenorfin</td><td>RichterPharma</td><td></td><td>Reaktifi</td></tr><tr><td>Carl Zeiss Opmi-1 FC Cerrahi Mikroskopi</td><td>Carl Zeiss Mikroskobu, Almanya</td><td></td><td>Enstrüman</td></tr><tr><td>cDNA RT2 PreAMP cDNA Sentez kiti</td><td>Qiagen</td><td>7335730</td><td>Reaktif</td></tr><tr><td>Kriyostat Leica CM</td><td>Leica Microsystems</td><td>3050S</td><td>Enstrüman</td></tr><tr><td>DAB peroksidaz substrat kiti</td><td>DAKO; Vektör Laboratuvarları</td><td>K3468</td><td>Reaktif</td></tr><tr><td>hidrojen peroksidaz</td><td>Merk</td><td>1072090250</td><td>Reaktif; Dikkat - nocif</td></tr><tr><td>hidrofobik kalem</td><td>Dako</td><td>411121</td><td>Reaktif; Dikkat - toksik</td></tr><tr><td>Ketamidor</td><td>Richterpharma</td><td>CN:580393,7 630/01/12 Dfvf Reaktif</td><td></td></tr><tr><td>Lazer Doppler perfüzyon görüntüleyici moorLDI2-HIR</td><td>MoorLDI-V6.0, Moor Instruments Ltd, Axminster, İngiltere</td><td>5710</td><td>Enstrüman</td></tr><tr><td>Leica DM2500 dik parlak alan mikroskobu</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>Enstrüman</td></tr><tr><td>Medetor</td><td>Virbac</td><td>037/01/07RFVPT</td><td>Reaktif</td></tr><tr><td>metanol</td><td>VWR</td><td>UN1230</td><td>Reaktifi; Dikkat - toksik ve son derece yanıcı</td></tr><tr><td>Papaverine</td><td>Labesfal</td><td></td><td>Reaktifi</td></tr><tr><td>Pentano Isso</td><td>Merk</td><td>1060561000</td><td>Reaktifi; Dikkat - son derece yanıcı</td></tr><tr><td>Güç SYBR&reg; Yeşil</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>4309155</td><td>Reaktif</td></tr><tr><td>Saflaştırılmış sıçan anti-fare CD31</td><td>Pharmingen</td><td>550274</td><td>Reaktif</td></tr><tr><td>RNeasy Mikro kit</td><td>Qiagen</td><td>74004</td><td>Reaktif</td></tr><tr><td>Cerrahi-Pro 6.0</td><td>Medtronic (Coviden)</td><td>VP733X</td><td>Sütür</td></tr><tr><td>VECTASTAIN ABC HRP Kiti (Peroksidaz, Sıçan IgG)</td><td>Vectastain ABC kiti; Vektör Laboratuvarları</td><td>PK-4004</td><td>Reaktif</td></tr><tr><td>Vicryl5.0/ Vicryl 6.0</td><td>Medtronic (Covidien)</td><td>UL202/ UL101</td><td>Sütür</td></tr><tr><td>Zeiss PALM MicroBeam Lazer Mikrodiseksiyon Sistemi</td><td>Carl Zeiss Mikroskopi, Almanya</td><td>1023290916</td><td>Aletli</td></tr><tr><td>Stereotaksik mikroskop</td><td>Carl Zeiss Mikroskopi, Almanya</td><td></td><td>Enstrüman</td></tr><tr><td>Dijital kamera</td><td>Linux</td><td></td><td>enstrüman</td></tr></tbody></table>

hindekstremite iskemi bir murine modelinde terapötik anjiyogenezi değerlendirilmesi

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Kritik ekstremite iskemi (CLı), alt ekstremite amputasyonu riski yüksek olan ciddi bir durumdur. Revaskülarizasyon altın standardı tedavi olmasına rağmen, önemli sayıda CLI hasta ya cerrahi veya endovasküler revaskülarizasyon için uygun değildir. Anjiyojenik tedaviler bu hastalar için bir seçenek olarak ortaya çıkmaktadır ancak halen soruşturma altındadır. İnsanlarda uygulamadan önce, bu tedaviler hayvan modellerinde test edilmelidir ve mekanizmaları açıkça anlaşılmalıdır. Hindekstremite iskemi (HLı) bir hayvan modeli, farelerde distal dış iliak ve femoral arterlerin ve damarların ligasyon ve eksizyonu ile geliştirilmiştir. İskemi ve Putatif anjiyojenik tedavilerin fonksiyonel, histolojik ve moleküler seviyelerde etkilerini değerlendirmek için kapsamlı bir test panosu toplandı. Lazer Doppler, perfüzyonun akış ölçümü ve fonksiyonel değerlendirilmesi için kullanılmıştır. Doku tepkisi, gasronemius kasının histolojik bölümlerinde Anti-CD31 antikor ile boyama sonrası kapiller yoğunluğunun analizi ile ve terleme sonrası damar yoğunluğunun ölçülmesi ile değerlendirildi. Anjiyojenik genlerin ifadesi, fare gastroknemius kaslarından lazer yakalama mikrodiseksiyondan sonra yalnızca endotel hücrelerinde (ECS) seçilen anjiyojenik faktörleri hedefleyen RT-PCR tarafından ölçülebilir. Bu yöntemler, iskemik ve iskemik olmayan ekstremite arasında ve tedavi edilen ve tedavi edilmeyen ekstremite arasındaki farklılıkları tanımlamada hassastır. Bu protokol, tekrarlanabilir bir CLı modeli ve anjiyojenik tedaviler test etmek için bir çerçeve sağlar.

Tanımlanan protokolün kullanılması, göbek kordon mezenkimal kök hücreleri ve düşük doz iyonlaştırıcı radyasyon (ldır) Putatif anjiyojenik tedaviler olarak test edildi 11,12. Lazer Doppler perfüzyon ölçümleri, iskemi İndüksiyon öncesi ve iskemi indüksiyon hemen sonra 45 gün sonrası iskemi arasında değişen önceden belirlenmiş timepoints elde edildi. Lazer Doppler ile doku perfüzyon ölçümleri, koyu mavi olarak görüntülenen perfüzyon ve kırmızı olarak görüntülenen en...

Burada, anjiogenik tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için fonksiyonel, histolojik ve moleküler testlerin bir pil tarafından izlenen kritik bir hindekstremite iskemi deneysel modeli sunulmuştur.

Hindekstremite Iskemi bir Murine modelinde terapötik anjiyogenezi değerlendirilmesi

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Bu deneyin genel amacı, bizim hindlimb iskemi modeli deney putatif anjiyojenik ajanların fonksiyonel, histolojik ve moleküler etkileri kapsamlı bir değerlendirme için bir temel ışık etmektir. Bu protokol, klinik bağlamda gelecekteki uygulamalar için potansiyel ile küçük bir hayvan modeli olası anjiyojenik tedavilerin test için bir standart alanları. Kritik iskemi hastalarının %20-30'unda revaskülarizasyon uygun olmadığı için terapötik anjiyogenez iskemik bölgede kan profüzyonunu iyileştirmek için yeni bir strateji olarak ortaya çıkmıştır.Bu deneysel protokol, anjiyojenik tedavilerin her bir sonuçlarındaki etkinliğini ölçmede etkilerini uyguladıkları mekanizmaların kapsamlı bir şekilde anlaşılmasını sağlayabilir. 22 haftalık C57 siyah altı dişi farede ayak parmak kıskacına yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, sağ arka bacaktan saçı tıraş edin ve hayvanı ısıtılmış bir ped üzerinde kübitpozisyona kadar sırtta sabitler. Hayvanı bir kesme mikroskobu altına yerleştirin.Ve sağ arka bacak uyluk üzerinde bir santimetre deri kesi yapmak için bir numara on bir cerrahi neşter bıçak kullanın. Künt nörovasküler demet ortaya çıkarmak için deri altı yağ incelemek. Ve distal dış iliak ve femoral damarları ortaya çıkarmak için membranöz ileofemoral kılıf açmak için sivri forceps, bahar makas ve oftalmik iğne tutucu kullanın.Diseksiyon ve sinir arter ve ven ayıran sonra, distal femoral arter ve ven ve distal dış iliak arter ve ven ligate için yedi O emilir polipropilen sütür kullanın. Distal eksternal iliak arterin tanımlanması, distal eksternal iliak ile femoral arter ve damarların ligasyonu ve eksizyonu işlemin başarısı için kritik öneme yöneliktir. Distal ve proksimal düğümler arasındaki iliofemoral arter ve damarlar segmentini transect için bahar makası kullanın.Ve kesiği emilebilir bir dikişle kapatın. Daha sonra, peritoneally hayvan içine antisitif çözüm teslim ve tam iyileşme kadar izleme ile ev kafesi için fare dönmek. Gastroknemius kasları hasat etmek için, her iki arka bacaklardan deri kaldırın.Ve kasları deri ayırmak için pamuklu bez kullanın. Aşil tendonu tutarak, diz eklemine kadar tibia ve fibula kas ayırmak için bahar makası kullanın. Ve pazı femorisi gastroknemius kaslarından ayırın.Diz eklem düzeyinde gastroknemius kas eklemeleri kesmek için bahar makası kullanın. Ve küçük bir mantar disk üzerinde enine yönde hasat kasları konumlandırmak için% 10 trigasanth kullanın. Daha sonra, sıvı nitrojen soğutulmuş isopentane eksi 80 santigrat depolama için numuneleri ani dondurma.Kapiller mikrodiseksiyon lazer yakalama için, kas örneklerinin 12 mikrometre bölümleri elde ettikten sonra, eksi yirmi derece santigrat beş dakika boyunca soğutulmuş saf aseton 50 mililitre slaytlar dokuları düzeltmek. Hava kurutuldıktan sonra her numuneyi hidrofobik bir kalemle daire içine alın. Ve numuneleri PBS'de dört santigrat derecede iki azı kaşığı sodyum klorürle yeniden sulendirin.Yeniden hidrasyon sonunda, bir gecede dört derece santigrat ilgi uygun birincil antikor ile örnekleri etiketleyin. Ardından, yıkama başına PBS'de taze iki azı kaşığı sodyum klorür iki üç dakikalık yıkar. İkinci yıkamadan sonra, dört santigrat derece de otuz dakika için uygun bir ikincil antikor ile uygun bir ikincil antikor ile etiket pbs sodyum klorür iki yıkar gösterildiği gibi.Daha sonra, avidin konjuge peroksidaz kompleksi ile etiket otuz dakika dört santigrat derece. Bir yıkama ve DAB peroksidaz substrat ile etiketleme beş dakika izledi. Kuluçka sonunda, sıralı buz soğuk dokuları dehydrate 90%etanol ve% 100 etanol emersions.Daha sonra, fare başına 10,000 kılcal damarı incelemek ve inceltme kılcal damarlarını mikrofuge tüpü yapışkan kapağına mancınık lamak için 355 nanometre lazere darbe ile donatılmış daha sonraki bir mikrodisese sistemi kullanın. Görüldüğü gibi hindlimb iskemi indüksiyonundan hemen sonra hindlimb perfüzyonunun tam bir kaybı gözlenir. ISC'nin NISC ekstremitesine oranı olarak ifade edilen kan akımının kan akımının kan titreşmesinde, 15 ve 45 hli sonrası pro-anjiyojenik uyarana maruz kalan farelerde önemli ölçüde gelişmiş ekstremite kan perfüzyonu gösterilmiştir.Gastroknemius kas dokusu bölümlerinin histolojik bölümlerinde CD31 pozitif kılcal damarların nicelliği, iskemik olmayan ekstremitelere karşı kapiller yoğunluğun daha fazla olduğunu göstermektedir. Beklendiği gibi. Ama bu etki pro-anjiyojenik ajan ile tedaviden sonra daha da artar.Kollateral damar yoğunluğu da iskemik ekstremitede sürekli olarak artar ve pro-anjiyojenik uyaranile maruz kaldıktan sonra bu artış önemli ölçüde daha yüksektir. CD31 pozitif endotel hücrelerinde pro-anjiyojenik gen ekspresyonunun ters transkripsiyonaz polimeraz zincir reaksiyonanalizi, pro-anjiyojenik ajana maruz kalan veya olmayan fareler arasında gen ekspresyonunda açık bir varyasyon olduğunu göstermektedir. Bu damar diseksiyon sırasında arter ve ven yırtılma önlemek için membranöz iliofemoral kılıf açmak için eski bir oftalmik iğne kullanmak önemlidir.Lazer doppler bazlı perfüzyon ölçümleri ile kolayca değerlendirilen arka ekstremite iskemisine yanıt verir ve kapiller damar yoğunluğunun histolojik niceliği anjiyogenezi değerlendirmemizi sağlar.

assessing-therapeutic-angiogenesis-murine-model-hindlimb

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Lazer Doppler perfüzyon sintigrafisi ile iskemi onayı ile tek taraflı hindlimb iskemi indüksiyonu için cerrahi işlem olduğunu göstermiştir.

Murin Model Hindlimb İskemi

Fizyolojik anjiyogenez ve yoksun Normal erişkin vaskülarize memeli doku çalışma için kullanılan cerrahi müdahaleye maruz kalmamış: (i) başlatılması ve test ajanların intraperitoneal uygulanması aşağıdaki anjiyogenez geliştirilmesi; ve sistemik uygulanması aşağıdaki (ii) anjiyogenez değişiklik Test ajanlar seçilir.

Rat mezenter Anjiyogenez Testi

Beyin dokusuna kan akışını geçici olarak engelleyen cerrahi bir prosedür olan orta serebral arter tıkanıklığına maruz kalan bir sıçan ile başlayın.Bu, beyin dokusu hasarına yol açan iskemik bir inmeye neden olur.Ardından, kan akışını eski haline getirmek için tıkanıklığı giderin.Çalışma alaka düzeyini sağlamak için nörolojik defisit sergileyen fareleri seçin.Daha sonra, diğer gruba salin enjekte ederken test ilacını deney grubuna uygulayın.İlaç ve salin uygulamasını tekrarlayın.Test ilacı, yeni...

İskemik İnmenin Sıçan Modelinde Bir Test İlacının Anjiyogenez Etkilerinin Değerlendirilmesi

Biz bir adım-adım prosedürü ve gerekli enstrümantasyon açıklaması dahil murin spinotrapezius kas bir roman arter ligasyonu modeli göstermektedir. Biz cerrahi ve intravital ve konfokal mikroskopi kullanılarak vasküler ağ şekillenmesi ve fonksiyonel vazodilatasyon ile ilgili, sonuç ölçümleri açıklayacağız.

Mikrovasküler Fonksiyon ve Tadilat üzerine Arteriolar Ligasyonu etkisini değerlendirmek için mürin Spinotrapezius Modeli

Mikro-Bilgisayarlı Tomografi Görüntüleme için Microfil ile İskemik arka ayaklarında ve damarları bir Perfüzyon için osmotik İlaç Taşıyıcı

Bu biyolojik olarak parçalanabilir bir polimerik nano-tanecikleri kullanılarak anjiyojenez için tedavi edici faktörler aşırı ifade programlama kök hücrelerin bir yöntem tarif eder. Tarif edilen işlemler in vitro yağ elde edilen kök hücreleri transfekte etmek ve bir murin arka bacak anjiyojenezi, iskemi modelinde desteklemek için programlanmış kök hücrelerin etkinliğini doğrulamak, polimer sentezi içerir.

Biyobozunur polimerik nano partiküllerin kullanılması Tedavi Angiogenezis Programlama Kök Hücreler

Farede arka bacak iskemisinin cerrahi indüksiyonu, anjiyogenezi incelemek için yararlıdır, ancak bu, belirgin iskemiye bağlı doku nekrozu gösteren bazı akraba fare suşlarında tehlikeye girer. Kademeli arteriyel oklüzyonun indüksiyonu yoluyla bu sorunu aşmak için ameroid büzücüler kullanarak subakut ekstremite iskemisini indüklemek için yöntemler açıklanmaktadır.

Akut ve Subakut Fare Arka ayağın İskemi Yöntemleri

Monosit arteriogenesis periferik arter hastalığı bağlamında önemli arabulucu vardır. Bu iletişim kuralı bir membran benzeri matris ve intravital mikroskobu kullanarak, monosit enjeksiyon femoral arter ligasyonu fare modeli sonra monosit izleme ve tümör ile ilgili angiogenez inceler.

Monosit posta ve tümör ile ilgili angiogenez periferik arter hastalığı, bir fare modeli intravital mikroskobu

Biz hiperlipidemi ve diyabet ile tavşanlar periferik iskemi ikna etmek için kullanılan bir cerrahi prosedür açıklanmaktadır. Bu cerrahi hastalarda periferik arter hastalığında deneyimli koşullar için preklinik bir model olarak davranır. Anjiyografi, tanıtılan iskemi ve perfüzyon iyileşmesi kapsamını ölçmek için bir araç olarak da tanımlanır.

Diyabetik tavşanların arka ekstremite Iskemi preklinik modeli

Bu makale, küçük bir kesi ile farelerde akut iskemi kurmak için etkili bir cerrahi yaklaşım göstermektedir. Bu yaklaşım, laboratuvar yükseltmesi yapılmadan çoğu araştırma grubu tarafından uygulanabilir.

ApoE'de Hind Limb iskemisinin Modifiye Cerrahi Modeli-/- Minyatür Kesi Kullanan Fareler

Bu protokol, FVB farelerde arka bacak kangrenini indüklemek için femoral arter ve ven elektrokoagülasyonunu nitrik oksit sentaz inhibitörü uygulamasıyla birleştiren benzersiz, klinik olarak ilgili bir periferik arter hastalığı modelini tanımlamaktadır. İntrakardiyak DiI perfüzyonu daha sonra ayak yastığı vaskülatürünün yüksek çözünürlüklü, üç boyutlu görüntülenmesi için kullanılır.

Murin Arka Ekstremite Kangren Modelinde Footpad Vaskülatürünün Yüksek Çözünürlüklü Üç Boyutlu Görüntülenmesi

Öğrenin, farelerde arka ekstremite iskemi modeli kullanarak terapötik anjiyogenezin fonksiyonel, histolojik ve moleküler etkilerini nasıl değerlendireceğinizi. Bu yöntem, yeni anjiyojenik ajanların kapsamlı analizi için standart bir temel sağlar.

Hindekstremite Iskemi bir Murine modelinde terapötik anjiyogenezi değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet