Name: Arabidopsis In alt lavabo dokularında yüklü CFDA Tracer Shootward hareketi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Keşfedin Arabidopsis kök ve hipokotillerine CFDA yüklemeyi; floresan mikroskopiyle hücreler arası taşımayı görselleştirin. Bu yöntem, bitki biyolojisinde floem aktivitesini ve sempatik bariyerleri anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Çin 'in Ulusal Doğal Bilim Vakfı (31671257) ve Hubei ortak yenilik Merkezi tahıl endüstrisi (LXT-16-18) tarafından finanse edilmiştir.

1. MS orta Arabidopsis dikey büyüme
<ol><li>Laminar akış kabininin iç kısmı, kullanımdan önce 30 dk UV ışık ve 15 dk hava akımı ile tedavi edilmelidir. UV ışığı açık olduğunda cam kapıyı kapattığınızdan emin olun. % 70 etanol ile tüm araçları ve plakaları dolap yerleştirmeden önce sprey.</li>
	<li>Murashige ve Skoog (MS) ortamını, bir laminar akış kabininin altında Standart 90 mm çap Petri tabağı ile hazırlayın. Not: MS orta aşağıdaki bileşenleri içerir: 20,6 mM NH4No3, 18,8 mm kno3, 1,25 mM KH2Po4, 1,5 mm MgSO4· 7h2o, 3 mm CAcl2· 2H2o, 0,1 mm mnso4· H2o, 1,03 μm na2MoO4· 2H2o, 0,1 mm H3Bo,3, 30 ΜM Znso4· 7h2o, 0,1 μM Cuso4· 5h2o, 0,1 μm COCL2· 6h2o, 1,39 μm kı, 97 μ M FeSO4 · 7h2O, 114,5 μm etylenediaminetetraasetic asit (EDTA), 4,07 μm nikoinik asit, 2,44 μM piridoksin HCL, 0,15 μm tiamin HCL, 2,68 mm Glycine, 555 μm Myo-İnositol, 87,7 mm sakaroz ve 10 g/L agar.</li>
	<li>Sterilizasyon ipuçları veya diş, MS medyası için uç veya kürdan dokunarak nemlendirici, daha sonra her Petri çanak bir sabit pozisyon üzerine tek bir sterilize tohumları daldırma tohumlama kartı ile gösterilir.</li>
	<li>Parafin film ve yapışkan bant ile Petri tabak mühür ve dikey bir büyüme odasında açık bir stand üzerine yerleştirin (22 °C, 70% nem) bir gün döngüsü ile 16 saat ışık ve 8 karanlık h (aydınlatma 6 to 10 PM). Arabidopsis tesisi, ekim sonrası 9-13 gün boyunca CFDA yükleme için hazırdır. Not: Aşağıdaki prosedür öğleden sonra 2 PM 5 pm gerçekleştirilir.</li>
</ol>2. root kesme prosedürü ile CFDA yükleme
<ol><li>Hemen kullanmadan önce yeni CFDA çalışma çözümünü hazırlayın. 1 mm CFDA stok çözeltisi, 5 μM çalışma konsantrasyonuna steril Ultra Saf suyla-20 °c ' lik dondurucu içinde saklanır.</li>
	<li>Mikro-gözenekli parafin membran filmi (bkz. malzeme tablosu) 3 mm x 3 mm büyüklüğünde küçük parçalara keser.</li>
	<li>22 °C ' de odada büyüyen bitkileri ortaya çıkarın ve kağıt havlusu ile aşırı nemi temizleyin. Küçük film parçalarını her kökün altına yerleştirin. Not: Bu adım 2,6, tüm işlem 15 dakika içinde tamamlanması gerekir.</li>
	<li>Bitkiler Petri çanak kapağı üzerine kaldırın. Root-ikiyüzotil kavşak altında 5-10 mm hakkında bir pozisyonda kökleri kes. Orta üzerinde filme geri çekim parçası yerleştirin.</li>
	<li>CFDA 0,25 μL 'leri, her bir kökün kesme ucunu Diseksiyon mikroskobu altında dikkatle uygulayın. Bitkinin diğer bölgelerine sıçramadan kaçının.</li>
	<li>Plaka kapağı ve büyüme odasında 2-3 h (22 °C) için ışık altında bitkiler bırakın.</li>
	<li>Lekeli bitkileri üç kez sıralı olarak damıtılmış su ile dolu üç ayrı bezelerde durulayın, ardından 1.4 x 'den 3.3 x 'e yakınlaştırma ile stereo-floresans mikroskop altında bitkiler gözlemlemek ( malzeme tablosunabakın). Floresan algılama için, floresan sinyalini iletmek üzere monte edilen yüksek verimlilik filtre küpü (470/20 Nm uyarma, 495 nm bölünmüş ve 525/50 nm emisyonu) kullanın.</li>
</ol>3. cıkotil-pinching prosedürü ile CFDA yükleme
<ol><li>Hemen kullanmadan önce yeni CFDA çalışma çözümünü hazırlayın. 1 mm CFDA stok solüsyonu-20 °c ' de steril Ultra Saf suyla ( malzeme tablosunabakın) 5 μM ' lik bir çalışma konsantrasyonuna saklanan seyreltilebilir.</li>
	<li>Mikro-gözenekli parafin membran filmi (bkz. malzeme tablosu) 3 mm x 3 mm büyüklüğünde küçük parçalara keser.</li>
	<li>22 °C ' de odada büyüyen bitkileri ortaya çıkarın ve kağıt havlusu ile aşırı nemi temizleyin. Not: Bu adım 3,7, tüm işlem 15 dakika içinde tamamlanması gerekir.</li>
	<li>Her bitkinin kök-ikiyüzli kavşak altında film küçük bir parça Lay.</li>
	<li>Bir Diseksiyon mikroskobu altında kök-ikiyüzleril kavşak yakın ikiyüzüne hafifçe çimdik için forseps kullanın.</li>
	<li>CFDA 0,1 μL 'leri, Diseksiyon mikroskobu altında yara sitesine dikkatle uygulayın. Bitkinin diğer bölgelerine sıçramadan kaçının.</li>
	<li>Plaka kapağı ve 2-3 h için ışık (22 °C) altında bitkiler bırakın.</li>
	<li>Lekeli bitkileri üç kez sıralı olarak damıtılmış su ile dolu üç ayrı bezelerde durulayın, ardından 1.4 x 'den 3.3 x 'e yakınlaştırma ile stereo-floresans mikroskop altında bitkiler gözlemlemek ( malzeme tablosunabakın). Floresan algılama için, floresan sinyalini iletmek için yüksek verimli bir filtre küpü (470/20 Nm uyarma, 495 nm bölünmüş ve 525/50 nm emisyonu) monte edin.</li>
</ol>

<ol><li>Grignon, N., Touraine, B., Durand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((6%285%29Carboxyfluorescein+as+a+tracer+of+phloem+sap+translocation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Botany%22%5BJournal%5D)">6(5)Carboxyfluorescein as a tracer of phloem sap translocation.</a> American Journal of Botany. 76, 871-877 (1989).</li>
<li>Wright, K. M., Oparka, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fluorescent+probe+HPTS+as+a+phloem-mobile%2C+symplastic+tracer%3A+an+evaluation+using+confocal+laser+scanning+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Botany%22%5BJournal%5D)">The fluorescent probe HPTS as a phloem-mobile, symplastic tracer: an evaluation using confocal laser scanning microscopy.</a> Journal of Experimental Botany. 47 (3), 439-445 (1996).</li>
<li>Oparka, K. J., Prior, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Movement+of+Lucifer+Yellow+CH+in+potato+tuber+storage+tissues%3A+A+comparison+of+symplastic+and+apoplastic+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">Movement of Lucifer Yellow CH in potato tuber storage tissues: A comparison of symplastic and apoplastic transport.</a> Planta. 176 (4), 533-540 (1988).</li>
<li>Knoblauch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multispectral+Phloem-Mobile+Probes%3A+Properties+and+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Multispectral Phloem-Mobile Probes: Properties and Applications.</a> Plant Physiology. 167 (4), 1211-1220 (2015).</li>
<li>Oparka, K. J., Duckett, C. M., Prior, D. A. M., Fisher, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+phloem+unloading+in+the+root+tip+of+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Journal%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of phloem unloading in the root tip of Arabidopsis.</a> The Plant Journal. 6 (5), 759-766 (1994).</li>
<li>Viola, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuberization+in+Potato+Involves+a+Switch+from+Apoplastic+to+Symplastic+Phloem+Unloading%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Tuberization in Potato Involves a Switch from Apoplastic to Symplastic Phloem Unloading.</a> The Plant Cell. 13 (2), 385-398 (2001).</li>
<li>Roberts, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phloem+Unloading+in+Sink+Leaves+of+Nicotiana+benthamiana%3A+Comparison+of+a+Fluorescent+Solute+with+a+Fluorescent+Virus%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Phloem Unloading in Sink Leaves of Nicotiana benthamiana: Comparison of a Fluorescent Solute with a Fluorescent Virus.</a> The Plant Cell. 9 (8), 1381-1396 (1997).</li>
<li>Péron, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Insights+into+Phloem+Unloading+and+Expression+of+Sucrose+Transporters+in+Vegetative+Sinks+of+the+Parasitic+Plant+Phelipanche+ramosa+L+%28Pomel%29%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">New Insights into Phloem Unloading and Expression of Sucrose Transporters in Vegetative Sinks of the Parasitic Plant Phelipanche ramosa L (Pomel).</a> Frontiers in Plant Science. 7 (2048), (2017).</li>
<li>Spallek, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecies+hormonal+control+of+host+root+morphology+by+parasitic+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+USA%22%5BJournal%5D)">Interspecies hormonal control of host root morphology by parasitic plants.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 114 (20), 5283-5288 (2017).</li>
<li>Complainville, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nodule+initiation+involves+the+creation+of+a+new+symplasmic+field+in+specific+root+cells+of+medicago+species%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Nodule initiation involves the creation of a new symplasmic field in specific root cells of medicago species.</a> The Plant Cell. 15 (12), 2778-2791 (2003).</li>
<li>Bederska, M., Borucki, W., Znojek, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Movement+of+fluorescent+dyes+Lucifer+Yellow+%28LYCH%29+and+carboxyfluorescein+%28CF%29+in+Medicago+truncatula+Gaertn.+roots+and+root+nodules%5BTitle%5D)+AND+%22Symbiosis%22%5BJournal%5D)">Movement of fluorescent dyes Lucifer Yellow (LYCH) and carboxyfluorescein (CF) in Medicago truncatula Gaertn. roots and root nodules.</a> Symbiosis. 58 (1-3), 183-190 (2012).</li>
<li>Robards, A. W., Lucas, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmodesmata%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Plant+Physiology+and+Plant+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Plasmodesmata.</a> Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology. 41 (1), 369-419 (1990).</li>
<li>Roberts, A. G., Oparka, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmodesmata+and+the+control+of+symplastic+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Plant%2C+Cell+%26+Environment%22%5BJournal%5D)">Plasmodesmata and the control of symplastic transport.</a> Plant, Cell & Environment. 26 (1), 103-124 (2003).</li>
<li>Duckett, C. M., Oparka, K. J., Prior, D. A. M., Dolan, L., Roberts, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dye-coupling+in+the+root+epidermis+of+Arabidopsis+is+progressively+reduced+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Dye-coupling in the root epidermis of Arabidopsis is progressively reduced during development.</a> Development. 120 (11), 3247-3255 (1994).</li>
<li>Palevitz, B. A., Hepler, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+dye+coupling+of+stomatal+cells+of+Allium+and+Commelina+demonstrated+by+microinjection+of+Lucifer+yellow%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">Changes in dye coupling of stomatal cells of Allium and Commelina demonstrated by microinjection of Lucifer yellow.</a> Planta. 164 (4), 473-479 (1985).</li>
<li>van Bel, A. J. E., Kempers, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symplastic+isolation+of+the+sieve+element-companion+cell+complex+in+the+phloem+of+Ricinus+communis+and+Salix+alba+stems%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">Symplastic isolation of the sieve element-companion cell complex in the phloem of Ricinus communis and Salix alba stems.</a> Planta. 183 (1), 69-76 (1991).</li>
<li>Erwee, M. G., Goodwin, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symplast+domains+in+extrastelar+tissues+of+Egeria+densa+Planch%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">Symplast domains in extrastelar tissues of Egeria densa Planch.</a> Planta. 163 (1), 9-19 (1985).</li>
<li>Oparka, K. J., Prior, D. A. M., Wright, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symplastic+communication+between+primary+and+developing+lateral+roots+of+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Botany%22%5BJournal%5D)">Symplastic communication between primary and developing lateral roots of Arabidopsis thaliana.</a> Journal of Experimental Botany. 46 (2), 187-197 (1995).</li>
<li>Christensen, N. M., Faulkner, C., Oparka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+Unidirectional+Flow+through+Plasmodesmata%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Evidence for Unidirectional Flow through Plasmodesmata.</a> Plant Physiology. 150 (1), 96-104 (2009).</li>
<li>Wróbel-Marek, J., Kurczyńska, E., Płachno, B. J., Kozieradzka-Kiszkurno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+symplasmic+domains+in+the+embryo+and+seed+of+Sedum+acre+L.+%28Crassulaceae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">Identification of symplasmic domains in the embryo and seed of Sedum acre L. (Crassulaceae).</a> Planta. 245 (3), 491-505 (2017).</li>
<li>Liang, D., White, R. G., Waterhouse, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+silencing+in+Arabidopsis+spreads+from+the+root+to+the+shoot%2C+through+a+gating+barrier%2C+by+template-dependent%2C+non-vascular%2C+cell+to+cell+movement%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Gene silencing in Arabidopsis spreads from the root to the shoot, through a gating barrier, by template-dependent, non-vascular, cell to cell movement.</a> Plant Physiology. 159 (3), 984-1000 (2012).</li>
<li>Radford, J. E., White, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+tissue-preparation-induced+callose+synthesis+on+estimates+of+plasmodesma+size+exclusion+limits%5BTitle%5D)+AND+%22Protoplasma%22%5BJournal%5D)">Effects of tissue-preparation-induced callose synthesis on estimates of plasmodesma size exclusion limits.</a> Protoplasma. 216 (1-2), 47-55 (2001).</li>
<li>Kollist, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Responses+to+Abiotic+Stress%3A+Priming+the+Landscape+for+the+Signal+Transduction+Network%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Rapid Responses to Abiotic Stress: Priming the Landscape for the Signal Transduction Network.</a> Trends in Plant Science. 24 (1), 25-37 (2019).</li>
<li>Haupt, S., Duncan, G. H., Holzberg, S., Oparka, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+Symplastic+Phloem+Unloading+in+Sink+Leaves+of+Barley%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Evidence for Symplastic Phloem Unloading in Sink Leaves of Barley.</a> Plant Physiology. 125 (1), 209-218 (2001).</li>
<li>Botha, C. E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+xylem+sap+retrieval+pathway+in+rice+leaf+blades%3A+evidence+of+a+role+for+endocytosis%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Botany%22%5BJournal%5D)">A xylem sap retrieval pathway in rice leaf blades: evidence of a role for endocytosis?</a> Journal of Experimental Botany. 59 (11), 2945-2954 (2008).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Gelişmekte olan çalışmalar bitkiler hızla dış uyaranlara yanıt verebilir göstermiştir23, manipülasyon da dahil olmak üzere deneysel prosedürler tanıtıldı22. İlk deneyimizde, bu bilginin gözetimi genellikle boyama başarısızlığa yol açar. Bu derslerle, bu deneyi yaparken aşağıdaki önlemlerin akılda tutulması gerektiğini öneriyoruz: (1) hasat sonrası tohumlar düşük sıcaklık ve düşük nemi ayarlamak için bir depolama kabininde tutulmalıdır; (2) bitkilerin manipülasyon, özellikle...

5 (6)-karboksflorcein (CF)1, 8-hidrokpliroidi-1, 3, 6-trisulphonik asit2, Lucifer sarı ch (lych)3, esculin ve cter4gibi spektral özellikleri bir dizi ile birçok floresan izleyiciler geliştirilmiştir ve symplastik hareketi ve floem aktivitesini izlemek için bitkiler uygulanır. Genellikle, bir symplastic boya hedef doku bir kesim içine yüklenir ve bitkinin diğer bölgelerine içine gazetecinin sıralı dağılım hücresel iletişim gösterecektir. Boya emilimi mekanizması tam olarak anlaşılmamış olsa da, canlı hücreler içinde temel CF hareketinin ilkesi yaygın olarak kabul edilmiştir. CF (CF diacetate, CFDA) ester formu floresan olmayan, ancak membran geçirgen. Bu özellik, boyanın hücrelere hızlı membran difüzyon sağlar. Canlı hücreler içinde bir kez, hücre içi esterleri 3 ' ve 6 ' CFDA pozisyonunda asetat grupları kaldırmak, floresan ve membran geçirmez CF serbest (Şekil 1, alternatif Wright ve al.2bakın); CF daha sonra plasmodesmata aracılığıyla bitkilerin diğer bölgelerine taşıyabilirsiniz.
CFDA ile iyi kurulan bir prosedür bu kaynak yaprakları içine yüklenebilir ve floem akışı ve birçok türün lavabo dokularında boşaltma floem izlemek için kullanılan olduğunu, örn, Arabidopsis root5CF boşaltma olarak, floem boşaltma patates tüberkülasyonu6sırasında, Nicotiana lavabo içinde floem boşaltma7yaprakları, ve benzeri. Benzer yükleme yaklaşımlarıyla, diğer çalışmalar bu boya ana bilgisayar ve parazit arasında symplastic bağlantı göstermek için benimsenen8,9, ya da simbiyotik ilişkiler ortaya çıkarmak için10,11.
Bu boyayı kullanımın başka bir yolu da, dağıtım düzenini belirlemek için belirli hücrelere veya tek hücreye mikroenjeksiyon yoluyla yüklenecektir. Bu tür sofistike teknikler, özellikle symplastic Domain12,13konseptinin geliştirilmesinde, plasmodesmata-aracılı hücresel iletişimin daha derin anlayışımızı büyük ölçüde kolaylaştırdı. Örneğin, Arabidopsis kotiledon hücrelerine CFDA Mikroenjeksiyonu, ikiyüzlülik epidermis ancak altta yatan hücrelerde veya kök epidermis içinde boya-bağlantı deseni sonuçlandı, bu nedenle iki yüzlü epidermis formları symplastic etki alanı14. Evcikli Guard hücreleri gibi benzer etki alanları15, elek element-Companion hücreleri16, kök saç hücreleri14 ve root Cap17,18 mikroenjeksiyon tekniği ile tespit edilmiştir. En şaşırtıcı şekilde, bazı etki alanları izleyici moleküllerinin belirli bir yönde hareket etmesine izin verir. Örneğin diken alan alın, destekleyici epidermal hücreye bir floresan prob mikroenjeksiyon diken etki içine izleyici akışına yol açar, ancak, ters enjeksiyon gerçek tutmaz19. Son raporda ayrıca Sedum embriyo20' nin symplastic alanlarında da benzer durumlar bulunmuştur. Bu nedenle, yukarıdaki tüm durumlarda yükleme sitelerinin takas symplastik iletişim içine yeni Öngörüler yol açabilir anlamına gelir. Önceki deney kök-to-Shoot mobil susturma rota incelemek amaçlayan bir roman symplastic etki alanı veya HEJ (ikiyüzsüz-epicotyl Junction) bölge, daha fazla kök yükleme (non-kurallı lavabo-yükleme) CFDA üzerinden doğrulanmıştır tespit Deneme21. Burada, biz daha basit bir yöntem kullanarak root-to-Shoot CF hareketi ayrıntılı ve yükleme sitelerini değiştirerek potansiyel bir symplastic etki alanı kurtarmak. Ayrıca bu prosedür, kökten ateş eden uzun mesafe taşımacılığını değiştiren genetik kökenleri ayırt etmek için uyarlanabilir.

<table><tbody><tr><td>KNO3&nbsp; &nbsp;</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif</td><td>10017218</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4&nbsp;</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif</td><td>10017608</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4&middot; CaCl2O</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktifi</td><td>10013018</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2&middot; 2H < alt > 2 O</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif</td><td>20011160</td><td></td></tr><tr><td>MnSO 4 & orta nokta; H<alt>2</alt>O&nbsp;</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif</td><td>10013418</td><td></td></tr><tr><td>Na2MoO4&middot; 2H < alt > 2 O</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif</td><td>10019818</td><td></td></tr><tr><td>Borik Asit</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif</td><td>10004818</td><td></td></tr><tr><td>ZnSO4 ve orta nokta; 7H2O</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktifi</td><td>10024018</td><td></td></tr><tr><td>CuSO4&middot; 5H2O</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktifi</td><td>10008218</td><td></td></tr><tr><td>CoCl2&middot; 6H2O</td><td>Sinopharm Kimyasal Re</td><td></td> 10017160 aktifi 10007216 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> FeSO4&middot;<td></td></tr><tr><td> 7H2O</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktifi</td><td>10012118</td><td></td></tr><tr><td>EDTA&nbsp;</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif</td><td>10009717</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif</td><td>10019718</td><td></td></tr><tr><td>KOH</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif</td><td>10017018</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif</td><td>10021418</td><td></td></tr><tr><td>Myo-inositol&nbsp; &nbsp;</td><td>MACKLIN</td><td>I811835</td><td></td></tr><tr><td>Nikotinik Asit&nbsp;</td><td>MACKLIN</td><td>N814565</td><td></td></tr><tr><td>Piridoksin HCl MACKLIN</td><td></td><td>V820447</td><td></td></tr><tr><td>Tiamin HCl</td><td>MACKLIN</td><td>T818865</td><td></td></tr><tr><td>Glisin</td><td>MACKLIN</td><td>G800880</td><td></td></tr><tr><td>Agar tozu</td><td>Novon</td><td>ZZ14022</td><td></td></tr><tr><td>Floresan Mikroskobu</td><td>Zeiss</td><td>Axio Zoom V16</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>SDPTOP</td><td>SRE-1030</td><td></td></tr><tr><td>200&mu; l pipet</td><td>Dragon Laboratuvar Aletleri</td><td>713111110000-20-200ul</td><td></td></tr><tr><td>2.5&mu; l pipet</td><td>Eppendorf</td><td>3120000011</td><td></td></tr><tr><td>İnce forseps&nbsp;</td><td>CIMBIZ</td><td>ST-15</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>PARAFILM</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>Paslanmaz çelik çift taraflı bıçak</td><td>Gillette</td><td>Platinum-Plus Çift Kenarlı Bıçak</td><td></td></tr></tbody></table>

arabidopsis 'in alt lavabo dokularında yüklü cfda tracer shootward hareketi

Shootward Movement of CFDA Tracer Loaded in the Bottom Sink Tissues of Arabidopsis

Symplastic Tracer 5 (6)-carboxyfluorcein diasetat (CFDA), hücresel bağlantı, floem taşımacılığı ve vasküler desenlerin ortaya koyduğu yaşam tesislerinde yaygın olarak uygulanmaktadır. Bu protokol, sırasıyla kök kesme ve ikiyüzlü pinching prosedürünü kullanarak Arabidopsis 'te Alta-to-top carboxyflorcein (CF) hareketini gösterir. Bu iki farklı prosedür, CF hareketinin farklı verimlilikleri ile sonuçlanır: yaklaşık% 91 ' i, iki yüzlü-pinching prosedürü ile çekimler içinde CF 'nin% 70 ' i, root-kesme prosedürü ile CF 'nin yaklaşık%% ' i. Bu simplastik boya mobil verimlilikte önemli değişiklikler sonuçlanan yükleme siteleri, basit değişiklik, CF hareketi en büyük olasılıkla kök-ikiyüzotil kavşak tarafından, symplastic yönetmeliğine tabi olabilir öneriyor.

Symplastic hareketi genellikle çevresel dalgalanmalara tabidir. Bitki büyüyen devlet Perturbation, ve hatta doku hazırlama süreci plasmodesmata boyutu dışlama sınırını etkileyecektir, böylece symplastic taşıma etkileyen22. Boyama verimliliğini artırmak için, biz sıcaklık ve nem sıkıca kontrol edilir büyüme odasında, bizim operasyon Confine, ve aynı zamanda mümkün olduğunca hızlı bir şekilde tüm prosedürü gerçekleştirmek (ideal içinde 10-15 dakika Petri kapağı kaldı...

Bu protokol amacı nasıl Arabidopsisalt kısımlarında farklı sitelere CFDA yüklemek için göstermek için. Daha sonra çekim içinde CF ortaya çıkan dağıtım deseni sunuyoruz.

Arabidopsis 'In alt lavabo dokularında yüklü CFDA Tracer Shootward hareketi

The symplastic tracer 5(6)-carboxyfluorescein diacetate (CFDA) has been widely applied in living plants to demonstrate the intercellular connection, ...

Yaygın olarak kullanılan prob CFDA, ya da karboksifluorescein diasetat için kısa, non-floresan olduğunu. İki H3 grubu ve bu bileşiğin 3'6'pozisyonu membran-permeant hale getirir. Hücrelere girdikten sonra, iç hücresel asetatlar asetat gruplarını çıkaracak ve CFDA'nın yeni formunu serbest bırakacaktır.Bu bir karboksifluorescein, ya da CF, floresan. Ve bu yeni form daha az membran permeant olduğu için, ağırlık, tüm hücreler hücreler arası gözenekleri, ya da bitkilerde plazmodesmata ile hareket etmektir, bu deasetat phloem aktivitesinde hücre içi taşıma çalışma için ideal bir sonda yapıyor. Bugünkü videoda, CFD yüklemesini arabidopsis bitkilerinin köküne ve hipokotiline doğru yükleyeceğiz ve iki farklı işlemin bu floresan sondanın alttan üste hareketini nasıl etkileyeceğini göstereceğiz.Sürekli boyama sonuçları elde, biz dört santigrat derece hasat Arabidopsis tohumları saklamak, 40% nem kabine. Yedi günden fazla bu durumda saklanan yeni hasat edilen tohumlar ekim için kolayca kullanılır. Her bitki Petri çanak nispeten benzer bir alanda yetiştirilen sağlamak için, bir tohum bölge sınıf kartı kullanıyoruz.Şimdi, sterilize ucu ıslatma, sterilize tohumları daldırma, ve belirlenen pozisyonda tohumları birer birer ekin. Ekim bittikten sonra, parafilm ve yapışkan bir bant ile Petri çanak mühür, dikey büyümesini sağlamak için bir Petri çanak standı üzerine koyun. İşte bu deneyde kullanacağımız araçlar.Boyayı olabildiğince çabuk yüklememiz gerektiğini lütfen unutmayın. Normalde, 10 ila 15 dakika içinde tüm süreci bitirmek. CFDA yükleme deneyini gerçekleştirmeden önce her zaman taze CFDA çözümü hazırlıyoruz.Burada, hemen kullanmadan önce su ile beş mikromolar konsantrasyoniçine bir milimolar CFDA seyreltin. Parafilm üç milimetre boyutunda küçük parçalar halinde kesin. Petri kabının kapağında ve altında yoğuşma olduğundan, boyanın akmasını önlemek için onları kağıt havlu ile temizlememiz gerekir.Kökün altına küçük bir parafilm parçası konur. Bitkileri kaldırın ve kapağın üzerine koyun. Kökleri hipokotilin 5-10 milimetre altında kesin.Küçük parafilm parçalarının çekimlerini geri alın. Şimdi dikkatle kök kesme ucuüzerine bir mikrolitre CFDA uygulayın. Tüm proto-bitkilerkontamine önlemek için deneyin.Sonra kapağını kapatın ve iki saat boyunca büyüme odasında bırakın. Hipokodil pinching Yöntemi. Küçük parafilm parçası, daha önce hazırlandığı gibi, kök-hipokotil kavşak altına konur.Hipokotili kök dokusuna yakın bir şekilde çimdiklemek için bir forecep kullanıyoruz ve 0.1 mikrolitre CFDA'yı sıkıştırılmış tarafa dikkatlice uygulayıp bitkiyi iki saat bekletiyoruz. Bölge boyama tesislerinden 9 ila 12 gün sonra fotoğraflar. Hepsi hem cotyledons ve gerçek yapraklarıvasküler boyama desen göstermektedir.Sadece çok nadir bir durumda, cotyledon yaprağı yarım yaprak boyama deseni gösterdi. Yani temelde, iki yöntem CF boyama deseninde bir fark yaratmadı, ancak biz daha fazla bitki içine boya yükleme gerçekleştirmek, biz iki prosedür verimlilik önemli bir fark anlaşma vermek bulabilirsiniz. Kök kesme yöntemiyle, bitkilerin yaklaşık %70'i çekimde floresan sinyali gösterir.Ama hipokotil pinching yöntemi ile verimlilik% 91 artırılabilir. Biz de kök sıkıştırma yöntemi denedim, ama bu yöntem daha düşük verimlilik sonuç, yaklaşık% 30 Bu nedenle, boya yüklemek için yol boyama farkı için hesap yok gibi görünüyor. Fark büyük olasılıkla bir symplastic bariyer ile ayrılmış olabilir yükleme siteleri, yatıyor.CFDA'yı Arabidopsis köklerine ve hipokotillere nasıl yüklediğimizi gösterdik. Biz iki biraz farklı yordamlar kullanılan ve bu iki biraz farklı yordamlar üst prob hareketi bu alt önemli bir fark neden. Bu yöntemin, kökten türetilen ateş sinyalleri için potansiyel bir sempozyum bariyerini belirlememize yardımcı olabileceğini öneriyoruz.

shootward-movement-cfda-tracer-loaded-bottom-sink-tissues

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Mekansal özel Fitokrom yanıtlar moleküler temeli, doku ve organ spesifik Fitokrom eksiklikleri gösteren transgenik bitkiler kullanılarak araştırılmaktadır. Belirli hücrelerin izolasyonu mikroarray analizleri takip Sıralama mekansal özel Fitokrom yanıtları yer genleri tanımlamak için kullanılmaktadır Floresan-Aktif Hücre tarafından uyarılan Fitokrom kromofor tükenmesi sergiliyor.

Hücre tipi Özgül gösterilmeden FACS yardımlı kullanarak Doku ve Organ spesifik Fitokrom Yanıtları incelenmesi Arabidopsis thaliana</em

Bitki hücreleri arasındaki makromoleküler ticareti, geçici bir ilgi floresan etiketli protein ifade ve konfokal mikroskobu ile içi ve hücreler arası dağılımı analiz değerlendirilebilir.

-Cell Hücre makromoleküler Ulaştırma Testi Planta Biyolistik Bombardıman kullanımı

Biz perfluorodecalin infiltratif montaj aracı olarak kullanımı açıklanmaktadır. Bu görüntüleme derinliğini artırmak için basit bir yöntem.

Görüntüleme için Basit Bir Yöntem Arabidopsis Infiltratif Görüntüleme Orta Perfluorodecalin kullanarak bırakır.

Hücre Özgül Analizi<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Floresans Aktif Hücre Ayırma kullanma Leaves

Bu makale RootChip içinde Arabidopsis fide ekimi için bir protokol, mikroskobik kök izleme ve hücre içi metabolit düzeylerinin FRET tabanlı ölçümü ile büyüme koşullarını otomatik kontrol birleştiren bir mikroakışkan görüntüleme platform sağlar.

RootChip kullanarak Kök Çevre Rapid manipülasyonu ile Arabidopsis Kök Büyüme Time-lapse Floresans Görüntüleme

Ca 2 + sinyalizasyon tesislerinde çeşitli biyolojik süreçleri düzenler. Burada mekansal ve zamansal Ca kaynaklı abiyotik stres izlemek için yaklaşımlar sunmak Arabidopsis hücre ve genetik olarak kodlanmış Ca 2 + göstergeleri Aequorin veya Case12 kullanarak dokularda 2+ sinyaller.

Ölçme Mekansal ve zamansal Ca 2+ Sinyalleri

Floresan canlı görüntüleme Arabidopsis thaliana yaprakların uzun bir zaman aralığı içinde gerçekleştirmek için basit ve çok yönlü bir yöntemi bildirin. Biz bir transgenik Arabidopsis bitki bitki bağışıklık yanıtı kronolojik zamanmekansal anlayış kazanıyor için bir örnek olarak bir bağışıklık ile ilgili düzenleyici denetimi altındaki bir floresan muhabir gen ifade kullanın.

Arabidopsis montaj için çok yönlü bir yöntem Intravital zaman hata görüntüleme için yaprakları

Ribozom yakınlık arınması (TRAP) çevirisi, organ ve dokuların en az işlenmesi yle gelişim programlarını inceleme olanağı sunar. Protokol, yeşil floresan protein (GFP) etiketli ribozomal alt ünite ile hedeflenen hücrelerden yüksek kaliteli RNA verir. QRT-PCR veya RNA-seq gibi alt akış analiz araçları doku ve hücre tipine özgü ifade profillerini ortaya çıkarır.

Bir Hücre Tipine Özel Ölçekte Arabidopsis thaliana Kök Gelişimini Araştırmak Için Ribozom Affinity Arınma (TRAP) Çevirisi

Hücre dışı glutamat tetiklenen sistemik kalsiyum sinyali, bitkilerde mekanik yaralama ve otobur saldırısına karşı bitki savunma yanıtlarının indüksiyonu için kritik öneme sahiptir. Bu makalede, kalsiyum ve glutamaca duyarlı floresan biyosensörleri ifade eden Arabidopsis thaliana bitkilerini kullanarak her iki faktörün de mekansal ve zamansal dinamiklerini görselleştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Arabidopsis'te Lokal ve Sistemik Yara Sinyallerinin Geniş Alan, Gerçek Zamanlı Görüntülenmesi

Bir plazma membran reseptörü kinazının membran kaçakçılığı olaylarını incelemek için burada yaygın olarak kullanılan birkaç yöntem tanıtılmaktadır. Bu yazıda bitki materyali hazırlama, farmakolojik tedavi ve konfokal görüntüleme kurulumu dahil olmak üzere ayrıntılı protokoller açıklanmaktadır.

Stoma Soy Hücrelerinde Membran Kaçakçılığı Olaylarını İncelemek için Görüntü Tabanlı Yöntemler

Keşfedin Arabidopsis kök ve hipokotillerine CFDA yüklemeyi; floresan mikroskopiyle hücreler arası taşımayı görselleştirin. Bu yöntem, bitki biyolojisinde floem aktivitesini ve sempatik bariyerleri anlamaya yardımcı olur.

Arabidopsis 'In alt lavabo dokularında yüklü CFDA Tracer Shootward hareketi

Daha fazla video keşfet