Meyve sinekleri Işlemek için basit ev yapımı Araçlar-Drosophila melanogaster
July 24th, 2019
Burada açıklanan çeşitli ev yapımı araçların transferi, Chill, ve yetişkin Drosophilaöldürmek, yanı sıra cam kültür şişeleri temizlemek ve yumurta toplamak için kullanılır. Bu araçların yapmak kolaydır ve Drosophila işleme oldukça etkilidir.
Bu transfer ve meyve sinekleri immobilize zor olabilir. Bu teknikleri ve araçları kullanarak, rutin sinek transferi ve immobilizasyon daha kolay yapabilirsiniz. Bu araçları yapmak için gerekli malzemeler ucuz ve elde edilmesi kolaydır.
Danışmanlık ve öğretim veya araştırma laboratuvarı kolaylıkla yapabilirsiniz. Bu prosedüre başlamadan önce, sinekaktarmak için kullanılacak şişelerin iç çapı daha büyük iki sünger fişleri merkezlerinde bir delik yapmak için bir elektrikli isşif demir kullanın. Daha sonra, bir milimetrelik mikropipet ucunu ikiye keletip, ikinci bir milimetrelik mikropipet ucunun ucundan 1,5 santimetre kesmek için keskin bir bıçak kullanın.
Çok amaçlı bir yapıştırıcı ile birlikte iki pipet uçlarının parçaları tutkal. Daha sonra uzatılmış mikropipet ucunu bir sünger fişe takın ve diğer sünger fişe bir huni takın ve pipet uçlarını tek tek 100 mikrolitrelik mikrosantrifüj tüpleriyle kaplayın. Mikrodiseksiyon iğnelerini hazırlamak için, ergonomik mekanik kalemlerin kurşun dolumlarının çaplarına uyan böcek pimlerini seçin ve iğnelerin tek gözlü uçlarını kesmek için bir çift iğne kullanın.
Daha sonra kesikleri düz dosyalayın ve kalemlerdeki kurşunu değiştirilmiş iğnelerle değiştirin. Bir Drosophila yumurta toplama durumda hazırlamak için, bir yumuşak plastik 500 mililitrelik içecek şişesi yaklaşık 2 / 3 şişe aşağı kesmek için bir çırpıda kesici kullanın ve 60 milimetre çapında elma suyu plakası etrafında kart kağıt bir şerit güvenli bant kullanın. Yetişkin sinekleri şişeler arasında aktarmak için huni durdurucudaki huninin sapını ve uçlu stoperdeki pipetin ucunu dikkatlice kontrol edin.
İlk şişedeki sinekleri indirin ve fişi bir uç durdurucuyla değiştirin. İkinci şişeyi huni durdurucusuyla takın ve ilk şişeyi ikinci şişenin üzerine yerleştirin, ki uç durdurucunun pipet ucu ucu huni durdurucunun huni açılışına eklenir. Sineklerin pipet ucundan dışarı ve huninsap sapı ile ikinci şişe içine kayma izin vermek için ilk şişe nin kenarına vurun.
İlk şişedeki herhangi bir eski yiyecek daha az kompakt hale gelirse ve şişe ters çevrildiğinde düşerse, ikinci şişeyi ilk şişenin üzerine ters çevirin ve sineklerin ikinci şişeye girmesine izin verin. İstenilen sayıda sinek aktarıldığında, uç durdurucuyu huni durdurucusundan ayırın ve uç durdurucuyu orijinal fişle değiştirin. Daha sonra ikinci şişedeki huni durdurucuyu uygun bir fişle değiştirin.
Yetişkin meyve sinek immobilizasyon için soğutma, oda sıcaklığında, en az 24 saat boyunca eksi 80 derece santigrat soğutulmuş olan bir yeniden serbest leştirilebilir buz paketi yerleştirin ve ezilmiş buz boş bir şişe soğutun. 20 dakika sonra, biraz olmayan aseptik tıbbi gazlı bez bir parça nemlendirin, bu biraz soğuk buz paketi daha küçük, akan su ile. Gazlı bezin buz kütlesinin yüzeyine yerleştirin, böylece gazlı bez sürü yüzeyine sıkıca tutunur.
Daha sonra soğutulmuş, boş şişeden su silmek için emici kağıt bir parça kullanın ve şişe içine hareketsiz olması gereken yetişkin sinekler aktarmak. Tüm sinekler transfer edildiğinde, soğutulmuş şişenin üzerini kapatın ve şişenin dibine kadar tüm sineklere dokunmak için şişeyi ezilmiş buza 2-3 kez vurun. Sinekler hemen hareketsiz kalacak.
Buz paketi kapsayan gazlı bez üzerine sinekdökmeden önce bir dakika için buz üzerinde şişe geri yerleştirin. Sonra örtüşen sinekler yaymak için bir paintbrush kullanın. Bir stereo mikroskop altında hareketsiz sinekler incelemek için, diseksiyon mikroskop sahne klipleri kaldırmak ve plastik film bir parça ile sahne kapağı.
Buz paketini sahneye yerleştirin ve mikroskobun soğuk ışık kaynağını açık olarak açın. Sonra stereo mikroskobu odaklayın ve soğutulmuş sinekler açıkça görülene kadar buz paketini hareket ettirin. Sinekleri gördükten sonra, her bir sineği kanatla yeni bir kültür şişesine aktarın.
Geri sayım, sıralama veya atmak için yetişkin sineklerini mikrodalgada feda etmek için, yetişkin sineklerini boş bir şişeye aktarın ve şişeyi petri kabıyla kapatın. Sonraki bir mikrodalga içinde şişe ters ve 80 saniye boyunca standart sıcaklıkta şişe ısı. Ölü sinekler Petri kabına düşecek.
Koruyucu çalışma eldivenleri giyerek, sinekleri beyaz, kağıt kart üzerine dökün ve kartı daha önce hazırlanmış mikrodiskes iğneleri ile incelenmek ve/veya saymak için stereo mikroskop altında transfer edin. Sinekler sınav sonunda atılabilir. Şişe şeklindeki yumurta toplama kafes transferi için, değiştirilmiş yumurta toplama kafesi şişesini elma suyu tabağına takın.
İki bileşenetrafında ortak mühür parafin film bir şerit kullanın. Sonra kafesi huni durdurucuyla takın ve kültür şişesini stoperin üzerine ters çevirin. Sonra kültür şişesi stoper ile kafes takmadan önce, huni stoper aracılığıyla, kafese sinekekleyin.
Gıda değiştirmek için, yeni bir tabak ile elma suyu plakası değiştirmeden önce boş bir şişe sinekler aktarın. Sonra sinekleri şişeden kafese geri aktarın. Yumurta koleksiyonunun sonunda, birkaç yeni kültür şişeleri içine sinek aktarmadan önce boş bir şişe içine sinek transfer.
Bu modifiye chill anestezi yöntemi kullanılarak, sinekler buz paketi üzerinde hareketsiz tutulur ve yoğuşmalı suyu emen tıbbi gazlı bez sinekler kuru tutar ve fenotipleme veya soğutulmuş sineklerin kolayca işleme sağlar. 25 santigrat derece oda sıcaklığında, soğutulmuş, sert buz kütlesinin yüzeyinin sıcaklığı önemli ölçüde artar, eksi 19 santigrat derece eksi santigrat derece, eksi 20 dakika içinde, hızlı bir şekilde hem eski hem de yeni yumurtadan sinekler için güvenli bir plato ulaşan. Mikrodalga dielektrik ısıtma aşırı etherizing veya derin donma ile karşılaştırıldığında yetişkin sineköldürmek için daha hızlı, daha uygun bir ajandır.
Aşırı eterize sineklere benzer şekilde, mikrodalgada pişirilen sinekler kanatlarını vücuttan dik açılarla uzalar. Genellikle, mikrowaving tarafından öldürülen sinek karkas lar eter veya donma tarafından öldürülenlere göre önemli ölçüde hafiftir, ancak ısı vücut şeklini bozmaz ve leşler gevrek veya turgid olmaz. Buz torbasıüzerine basmadan önce nemlendirilmiş gazlı bezden mümkün olduğunca çok su sıktıktan ve gazlı bezin buz paketine sıkıca tutunduğundan emin olun.
Ayrıca şişe içine sinek ler aktarmadan önce soğutulmuş, boş şişe yoğunlaştırılmış su silmek için önemlidir.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Genel Bakış
Bu çalışma, yetişkin Drosophila (meyve sineği) transferi, soğutma ve ölçme için birkaç ev yapımı aletin geliştirilmesini, ayrıca cam kültür tüplerinin temizlenmesi ve yumurta toplama yöntemlerini anlatmaktadır. Amaç, araştırma ortamlarında Drosophila'nın kullanımını kolaylaştıracak şekilde, elde bulunabilen malzemelerden verimli ve düşük maliyetli aletler yaratmaktır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Araştırma Alanı
- Entomoloji
- Meyve sineği manipülasyon teknikleri
- Laboratuvar aracı geliştirme
Arka Plan
- Drosophila'yı kullanmak, boyutları ve hareketlilikleri nedeniyle zor olabilir.
- Ev yapımı aletler, sinek transferi ve immobilizasyonunda verimliliği artırabilir.
- Basit tasarım, öğretim ve araştırma laboratuvarları için erişilebilirliği teşvik eder.
Kullanılan Yöntemler
- Sineklerin transferi için modifiye edilmiş pipet uçları ve sünger tapalarının yaratılması.
- Mobilizasyon için buz paketleri kullanarak soğutma teknikleri.
- Yetişkin sinekleri hızlı ve etkili bir şekilde öldürmek için mikrodalga yöntemi.
Ana Sonuçlar
- Açıklanan aletler, Drosophila'nın transferi, immobilizasyonu ve öldürülmesi süreçlerini basitleştirir.
- Soğutma, sinekleri daha kolay kullanılabilir hale getirir.
- Mikrodalga ile öldürme, geleneksel yöntemlere hızlı bir alternatif sunar.
Sonuçlar
- Çalışma, ev yapımı aletlerin Drosophila araştırmaları için verimli ve işlevsel olduğunu gösterir.
- Bu yöntemler, biyolojideki eğitim ve araştırma uygulamaları için uygundur.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
Efficient handling of model organisms like Drosophila melanogaster is critical for maintaining throughput in target validation and phenotypic screening workflows. Simple, reproducible tools for fly transfer and immobilization reduce variability in experimental outcomes, supporting predictive confidence in early discovery. These low-cost solutions enable scalable use across teaching and research laboratories, improving operational consistency in genetic and mechanistic studies.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables reliable transfer and immobilization of adult flies for consistent phenotypic assessment in genetic screens.
- Operational Value: Reduces manual handling time and variability, supporting high-throughput target validation efforts.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Provides standardized preparation of Drosophila for consistent compound or genetic interaction screening.
- Operational Value: Facilitates reproducible fly handling across assay plates, improving data quality in phenotypic screens.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Supports maintenance of healthy fly stocks for disease-relevant models used in mechanistic de-risking.
- Operational Value: Enables reliable collection and sorting of flies for longitudinal phenotypic tracking in preclinical studies.
Pipeline & Workflow Integration
The described tools integrate into early discovery workflows by improving the reliability of Drosophila handling, which underpins genetic screening, target validation, and phenotypic assay development. Standardized fly transfer and immobilization reduce experimental noise, supporting consistent data generation across screening campaigns. These methods are positioned as enabling capabilities that enhance reproducibility from initial hypothesis testing through lead identification stages.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing by enabling consistent handling of flies for genetic and phenotypic analysis.
- Screening: Enhances assay readiness through standardized preparation of Drosophila for compound or genetic interaction evaluation.
- Analytics: Improves measurement reliability by reducing variability introduced during fly transfer and immobilization steps.
- Translational Research: Contributes to preclinical continuity by maintaining viable, well-handled fly stocks for disease model studies.
- Enterprise Reuse: Represents a reusable, low-cost platform for fly handling applicable across multiple projects and teams.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence by minimizing handling-induced variability in phenotypic outcomes.
- Operational Value: Improves standardization and scalability of fly handling across laboratories.
- Strategic Value: Supports better go/no-go decisions by reducing biological noise in early-stage screening data.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted advancement decisions through more reliable phenotypic data from genetic screens.
Implementation Considerations
- Basic laboratory skills for assembling tools using sponge plugs, pipette tips, and adhesive.
- Access to standard lab equipment such as ice packs, microscopes, and microwaves.
- Need for consistent training to ensure reproducible use of transfer and immobilization techniques.
- Adaptation considerations when applying tools across different Drosophila strains or experimental conditions.
- Practical limitation: manual nature may limit use in ultra-high-throughput automated settings.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
0:04
Title
0:31
Material and Tool Preparation
2:03
Adult Fly Transfer
3:16
Chill Immobilization
5:03
Adult Drosophila Microwave Euthanasia
5:50
Bottle-shaped Egg Collection Cage Transfer
6:50
Results: Representative Effects of Killing Agents on Drosophila Carcass Weight and Body Characteristics
7:56
Conclusion
