Name: Dalak hücre biyoloji ve nakli bağışıklık eğitimi için vascularized heterotopik dalak transplantasyonunun fare modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Öğrenin fare modelinde vaskülerize heterotopik dalak transplantasyonunu kullanarak dalak hücre dinamiklerini ve bağışıklık mekanizmalarını incelemeyi. Bu yöntem iltihabi hastalıklarda hücre davranışlarını izlemeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Northwestern Üniversitesi kapsamlı nakil merkezi ve kaynak ve finansman desteği için Feinberg Tıp araştırma çekirdekleri programı teşekkür ederiz. Özellikle, akış Cytometri ve histoloji Hizmetleri Northwestern Üniversitesi akış sitometri çekirdek tesis ve fare histolojisi ve phenotyping Laboratuvarı tarafından, sırasıyla, her ikisi de NCı P30 tarafından desteklenmektedir-CA060553 Robert H verilir Lurie kapsamlı Kanser Merkezi. Bu taslağı düzeltmek için Bay Nate Esparza 'ya teşekkür ederiz.

Bu çalışmada tüm prosedürler ve hayvan kullanımı Northwestern Üniversitesi Iç hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (ıABUC) tarafından onaylanmış protokollere göre yapılmıştır. Bu çalışmada, 8 ila 10 hafta eski erkek CD 45.2 ve CD 45.1 fareler (hem BALB/c arka planda, Jackson laboratuvarından) dalak bağış ve alıcılar olarak kullanılan, sırasıyla syngeneic dalak transplantasyon modelleri oluşturmak için. Tüm hayvanlar Northwestern Üniversitesi hayvan tesislerinde steril ortamda yer aldı. Göz yağlayıcısı, kuruluğu önlemek için anestezinin sonrası tüm farelere uygulandı.
1. cerrahi hazırlık, Anestezizasyon ve Analgesia rejimi
<ol><li>Cerrahi platformda steril tek kullanımlık bir örtü (45,7 cm x 66 cm) yerleştirin. Yavaşça fareyi kapmak, ketamin enjekte (50 mg/kg) ve xylazine (10 mg/kg) intraperitoneal (i. p) anestezi için, ve enjekte 0,05 mg/kg buprenorfik analjezi için subkutan.</li>
	<li>Toe-tutam ile anestezi derinliği sağlamak, bir jilet ile tüm karın bölgesinde saç tıraş ve 6-10X büyütme işletim mikroskop altında Steril Cerrahi platforma fare yerleştirin.</li>
</ol>2. donör dalak hasat
<ol><li>Karın bir alkol hazırlık Pad ile sterilize, cerrahi bant ile ekstremite güvenli ve makas ile ksifoid süreci pubis bir 3-4 cm orta hat dikey cilt kesi yapmak.</li>
	<li>Karın duvarını, kağıt klipslerden yapılmış steril retraktörler ile geri çekin. Bağırsakları karın (cerrahın sol) tarafında, dalağı açığa çıkarmak için steril bir pamuklu çubukla sağ tarafa taşıyın. Bir steril düşük sıcaklık koter ile dalak bağlı kısa gastrik ven cauterize (Şekil 1a). Nemli tutmak için dalak üzerinde 37 °C serum tuz ile ıslatılmış steril bir gazlı bez parçası yerleştirin (Şekil 1B).</li>
	<li>Portal ven dalları (üstün pankreaticoduodenal ven ve sağ gastrik ven) bağlanması ile pankreas dokusundan (Şekil 1C) portalı ven ayrı ve seferber; splenik ven distal portal ven etrafında bir sütür koyun (Şekil 1D).</li>
	<li>Splenik arter ile aort ve çölyak gövde ortaya çıkarmak için sağ tarafına dalak çevirin (Şekil 1E). Hepatik arter ve gastrik arter bağlanarak aort-Çölyak-splenik arter dissect ve seferber; aort etrafında çölyak arter (Şekil 1F-G) proksimal bir sütür yerleştirin.</li>
	<li>100 uluslararası birimler (ıU) heparin inferior vena cava (ıVC) içine enjekte tüm vücudu heparinize ve heparin etkileri sağlamak için 3 dakika bekleyin. Aort, çölyak arter için proksimal, portal ven Transect ve daha sonra 10 ml heparinize soğuk (4 °c) tuzlu (10 ml/20 s) abdominal aort Çölyak gövdesine distal (Şekil 1h) kullanarak tüm vücudu serpmek.</li>
	<li>Dalak greft en bloğu ile ilişkili aort-Çölyak-splenik segment ve portal ven ile birlikte splenik ven bir segment ve pankreatik doku küçük bir kısmı ile toplayın. Nakil işleminden önce 5 mL 4 °C ' lik tuz içinde greftini koruyun. Servikal dislocation fare ötenize.</li>
</ol>3. alıcı splenektomi ve dalak greft Implantasyonu
<ol><li>Cerrahi platforma bir ısıtma yastığı yerleştirin ve sıcaklığı 37 °C ' ye ayarlayın. Steril bir cerrahi platform oluşturmak için ısıtma yastığı üstüne steril bir örtü (45,7 cm x 66 cm) yerleştirin. Cerrahi hazırlama ve anestezizasyon için 2,1 ve 2,2 adımları yineleyin. 3-4 cm orta hat kesi yapın ve adım 2,1 ve adım 2,2 ' de açıklandığı gibi karın duvarını geri çekin.</li>
	<li>Alıcı dalağını açığa çıkarmak için, bağırsaklarını dikkatli bir şekilde Mouse 'un sağ tarafına steril bir pamuklu çubukla taşıyın. Splenik ven ve arter ligate ve dalağı çıkarın.</li>
	<li>Dikkatle fare sol tarafına bağırsak hareket ve ıslak gazlı bez ile bağırsak kapağı (steril 37 °C tuz ile ıslatılmış). İnfrarenal aort ve IVC 'nin lomber dallarını ortadan sökme ve indirgeme uzman; Iki 4 mm mikrovasküler kelepçeleri kullanarak infrarenal aort ve ıVC Çapraz kelepçe.</li>
	<li>İnfrarenal aort (tam kalınlıkta) ile bir 11-0 naylon sütür yerleştirin ve mikromakas ile tek bir kesim ile eliptik aotomi oluşturmak için geri çekilmelidir (uzunluk donör aort çapı maç olmalıdır, Şekil 2a). Bir eliptik venotomi oluşturmak için 30 G iğne kullanarak ıVC delin ve mikromakas kullanarak donör portalı ven-eşleşen uzunlukta açılması uzatmak (Şekil 2a).</li>
	<li>İntraluminal kan veya kan pıhtısı (aort ve IVC) ile 500 μL heparinize tuz (10 adet/ml) ile temizleyin.</li>
	<li>Dalak greftini alıcının fare karnının sağ kanadına yerleştirin; Donörün aort manşet ve donör portal ven dikkatle tanımlayın. Damarların bükülmez olduğundan emin olduktan sonra, dalak greftini soğuk (4 °C) tuz ile ıslatılmış gazlı bez ile kapla.</li>
	<li>Donör aort manşeti, alıcının aortotominin proksimal ve distal zirvine iki konaklama sütür (11-0 naylon dikiş, aşağıda aynı) (Şekil 2B, C) ile bağlayın. 2-3, donör aort manşet ve alıcının aortaotomi (ön duvar) (Şekil 2D) arasında sürekli 11-0 naylon dikiş ısırıkları ile anastomoz yapın. Dalak greftini alıcının sol tarafına çevirin; donör aort manşet ve alıcının aotomi (arka duvar) arasında anastomoz yapmak (Şekil 2E).</li>
	<li>Alıcının portal ven, ıVC içinde sürekli sütürler 4 ila 5 ısırıkları kullanarak, alıcının ıVC posterior duvara bağlamak için bir anastomoz gerçekleştirin ve sonra ıVC dışında sütür kapatın (Şekil 2F, G).</li>
	<li>Gemi kelepçelerini serbest bırakın ve dalak rengi kurtarılana kadar kanamayı tamponad etmek için steril pamuklu çubukla kullanın (Şekil 2H).</li>
	<li>Sürekli bir desen 5-0 sentetik emici vicryl sütür ile karın kapatın. Kesilmiş bir desen bir 5-0 naylon sütür ile cilt tabakası kapatın. Not: Alternatif olarak 4.7-4.8 adımları için donör portal ven ve alıcının ıVC arasında anastomoz yapın (adım 4,8); daha sonra donör aort manşet ve alıcının aotunun posterior duvarı arasında bir anastomoz yapmak, aort içinde 2 ila 3 sürekli sütürler kullanarak ve aort dışında sütür kapatın.</li>
</ol>4. hayvan kurtarma
<ol><li>Karın kapattıktan sonra 4 ayrı yer (0,25 mL/konum) aracılığıyla subkutan 1 mL sıcak tuz enjekte et.</li>
	<li>Hareket sonrası ilk birkaç saat için sıcaklık kontrollü bir kuluçta (30 °C) fare tutun, yeterli bilinç geri kazanıncaya kadar fareyi izlemek ve sonra normal yiyecek ve su ile yeni bir temiz kafes, bir Isıtma Pad (30 ° c) ile fareyi aktarmak ) kafesin altında. Fare ameliyatı sonrası ayrı bir kafeste tutun.</li>
</ol>5. cerrahi sonrası ağrı yönetimi
<ol><li>Enjekte 0,05 mg/kg buprenorfik subkutan 24 h ve 48 h sonrası cerrahi analjezi rejimi korumak için.</li>
</ol>

<ol><li>Cesta, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+structure%2C+function%2C+and+histology+of+the+spleen%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Normal structure, function, and histology of the spleen.</a> Toxicologic Pathology. 34 (5), 455-465 (2006).</li>
<li>Mebius, R. E., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+the+spleen%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Structure and function of the spleen.</a> Nature Reviews Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).</li>
<li>Misiakos, E. P., Bagias, G., Liakakos, T., Machairas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laparoscopic+splenectomy%3A+Current+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Laparoscopic splenectomy: Current concepts.</a> World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 9 (9), 428-437 (2017).</li>
<li>Kristinsson, S. Y., Gridley, G., Hoover, R. N., Check, D., Landgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+risks+after+splenectomy+among+8%2C149+cancer-free+American+veterans%3A+a+cohort+study+with+up+to+27+years+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Long-term risks after splenectomy among 8,149 cancer-free American veterans: a cohort study with up to 27 years follow-up.</a> Haematologica. 99 (2), 392-398 (2014).</li>
<li>Thai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+complications+of+splenectomy+in+adult+immune+thrombocytopenia%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine+%28Baltimore%29%22%5BJournal%5D)">Long-term complications of splenectomy in adult immune thrombocytopenia.</a> Medicine (Baltimore). 95 (48), e5098(2016).</li>
<li>Sinwar, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overwhelming+post+splenectomy+infection+syndrome+-+review+study%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Overwhelming post splenectomy infection syndrome - review study.</a> International Journal of Surgery. 12 (12), 1314-1316 (2014).</li>
<li>Rorholt, M., Ghanima, W., Farkas, D. K., Norgaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+cardiovascular+events+and+pulmonary+hypertension+following+splenectomy+-+a+Danish+population-based+cohort+study+from+1996-2012%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Risk of cardiovascular events and pulmonary hypertension following splenectomy - a Danish population-based cohort study from 1996-2012.</a> Haematologica. 102 (8), 1333-1341 (2017).</li>
<li>Crary, S. E., Buchanan, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+complications+after+splenectomy+for+hematologic+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Vascular complications after splenectomy for hematologic disorders.</a> Blood. 114 (14), 2861-2868 (2009).</li>
<li>Di Carlo, I., Pulvirenti, E., Toro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+technique+for+spleen+autotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Innovation%22%5BJournal%5D)">A new technique for spleen autotransplantation.</a> Surgical Innovation. 19 (2), 156-161 (2012).</li>
<li>Holdsworth, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+the+spleen+and+splenic+autotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Regeneration of the spleen and splenic autotransplantation.</a> British Journal of Surgery. 78 (3), 270-278 (1991).</li>
<li>Tzoracoleftherakis, E., Alivizatos, V., Kalfarentzos, F., Androulakis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complications+of+splenic+tissue+reimplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+Royal+College+of+Surgeons+of+England%22%5BJournal%5D)">Complications of splenic tissue reimplantation.</a> Annals of the Royal College of Surgeons of England. 73 (2), 83-86 (1991).</li>
<li>Kato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+the+spleen%3A+effect+of+splenic+allograft+in+human+multivisceral+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of the spleen: effect of splenic allograft in human multivisceral transplantation.</a> Annals of Surgery. 246 (3), discussion 445-436 436-444 (2007).</li>
<li>Aronovich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction+of+hemophilia+as+a+proof+of+concept+for+treatment+of+monogenic+diseases+by+fetal+spleen+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Correction of hemophilia as a proof of concept for treatment of monogenic diseases by fetal spleen transplantation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (50), 19075-19080 (2006).</li>
<li>Cohen, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Splenosis%3B+review+and+report+of+subcutaneous+splenic+implant%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+surgery%22%5BJournal%5D)">Splenosis; review and report of subcutaneous splenic implant.</a> Archives of surgery. 69 (6), 777-784 (1954).</li>
<li>Coburn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spleen+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Spleen transplantation in the rat.</a> Transplantation. 8 (1), 86-88 (1969).</li>
<li>Lee, S., Orloff, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+splenic+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">A technique for splenic transplantation in the rat.</a> Surgery. 65 (3), 436-439 (1969).</li>
<li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+splenic+reservoir+monocytes+and+their+deployment+to+inflammatory+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of splenic reservoir monocytes and their deployment to inflammatory sites.</a> Science. 325 (5940), 612-616 (2009).</li>
<li>Hsiao, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spleen-derived+classical+monocytes+mediate+lung+ischemia-reperfusion+injury+through+IL-1beta%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1beta.</a> Journal of Clinical Investigation. 128 (7), 2833-2847 (2018).</li>
<li>Robbins, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extramedullary+hematopoiesis+generates+Ly-6C%28high%29+monocytes+that+infiltrate+atherosclerotic+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Extramedullary hematopoiesis generates Ly-6C(high) monocytes that infiltrate atherosclerotic lesions.</a> Circulation. 125 (2), 364-374 (2012).</li>
<li>Kim, E., Yang, J., Beltran, C. D., Cho, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+spleen-derived+monocytes%2Fmacrophages+in+acute+ischemic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Role of spleen-derived monocytes/macrophages in acute ischemic brain injury.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 34 (8), 1411-1419 (2014).</li>
<li>Bronte, V., Pittet, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spleen+in+local+and+systemic+regulation+of+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The spleen in local and systemic regulation of immunity.</a> Immunity. 39 (5), 806-818 (2013).</li>
<li>Wang, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recruitment+of+macrophages+from+the+spleen+contributes+to+myocardial+fibrosis+and+hypertension+induced+by+angiotensin+II%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Renin-Angiotensin-Aldosterone+System%22%5BJournal%5D)">Recruitment of macrophages from the spleen contributes to myocardial fibrosis and hypertension induced by angiotensin II.</a> Journal of the Renin-Angiotensin-Aldosterone System. 18 (2), 1470320317706653(2017).</li>
<li>Tian, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spleen+contributes+importantly+to+myocardial+infarct+exacerbation+during+post-ischemic+reperfusion+in+mice+via+signaling+between+cardiac+HMGB1+and+splenic+RAGE%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">The spleen contributes importantly to myocardial infarct exacerbation during post-ischemic reperfusion in mice via signaling between cardiac HMGB1 and splenic RAGE.</a> Basic Research in Cardiology. 111 (6), 62(2016).</li>
<li>Jang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+Edge%3A+Check+Your+Mice-A+Point+Mutation+in+the+Ncr1+Locus+Identified+in+CD45.1+Congenic+Mice+with+Consequences+in+Mouse+Susceptibility+to+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cutting Edge: Check Your Mice-A Point Mutation in the Ncr1 Locus Identified in CD45.1 Congenic Mice with Consequences in Mouse Susceptibility to Infection.</a> Journal of Immunology. 200 (6), 1982-1987 (2018).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Çekici kanıtlar, dalak türevi monositlerin ateroskleroz19, akut iskemik beyin20 veya akciğer hasarı18gibi steril inflamatuar süreçlerde önemli bir rol oynarlar, hem de miyokard I/R yaralanma ve remodeling21,22,23. Bu raporlar, kalp-damar hastalığının önemli bir (özellikle de bir numaralı katil küresel olduğu verilen) bir çok kronik hastalıklarda dalağın altı...

Dalak vücutta en büyük ikincil lenfoid organ ve bağışıklık ve hematopoetik sistemlerde kritik öneme sahiptir. Fonksiyonları öncelikle iki morfolojik ayrı bölmeler, kırmızı hamuru ve beyaz hamuru1tarafından gerçekleştirilir. Kırmızı selüloz, venöz sinüslerin ve retiküler liflerden, retiküler hücrelerden ve ilişkili makrofajlardan oluşan splenik kabloların üç boyutlu meshişidir. Bu eşsiz yapı, kırmızı hamuru, yabancı maddeleri ve eski veya hasarlı eritrositleri kaldıran etkili bir kan filtresi olarak hareket etmesini sağlar. Beyaz hamuru foliküller, marjinal bölge ve periarteriolar lenfoid Kılıf (PALS) içerir ve antijen bindirme ve işleme, lenfosit homing, dönüşüm, proliferasyon ve olgunlaşma için önemli bir sitedir2. Yine de, dalak genellikle bir vazgeçilebilir organ olarak kabul edilmiştir, çünkü diğer lenfatik organlar, lenf nodları gibi, ayrıca bazı işlevlerini yürütmek ve dalak kaybı genelde ölüme yol açmaz. Splenektomi bu nedenle splenik yaralanma veya benign hematolojik hastalıklar olan hastalar için terapötik bir yöntem olarak yaygın olarak yapılmıştır3. Ancak splenektomi olan hastalarda uzun süreli komplikasyonlar görülmektedir. Bakteriyel enfeksiyonlar splenektomi en iyi tanınan komplikasyonlarıdır4,5. Son zamanlarda, ezici sonrası splenektomi sepsis yüksek mortalite ile ilişkili splenektomi yoğun bir komplikasyon olarak tanınmıştır6. Dahası, son epidemiyolojik çalışmalar splenektomi kardiyovasküler hastalıkların oluşumu ile ilişkili olabileceğini gösteriyor, dalak daha fazla fizyolojik fonksiyonların incelenecek kalır düşündürmektedir,7,8.
Klinikte hem dalak ototransplantasyon hem de dalak allotransplantasyon kullanılmıştır. Şu anda, splenik doku bölümlerini büyük omentum 'da oluşturulan torbalar içine yerleştirerek dalak ototransplantasyon, travmatik splenektomi sonrası splenik fonksiyon korunması için tek olasılık olarak kabul edilir9,10. Bununla birlikte, bu ameliyatın etkinliği, Dalik dokuda aseptik nekroz ve postoperatif yapışmalar nedeniyle küçük barsak tıkanıklığı gibi cerrahi sonrası komplikasyonlar ortaya çıkabilir11. Dalak allotransplantasyonu çok viseral transplantasyon12' de yer almaktadır. Multivisceral transplantasyondan gelen klinik kanıtlar, dalak allonakli 'nin, Greft-versus-Host hastalığına (GVHD)12' ye neden olmadan küçük barsak allogreft reddi içinde koruyucu rol oynayabileceği anlamına gelmiştir. Ancak dalak allotransplantasyonunun çok viseral transplantasyonun bir bileşeni olarak yararlı etkisi ile ilgili literatür hala sınırlıdır ve temel mekanizmalar tanımlanmaya devam eder. 2006 yılında, Yair Reisner ve ark., GVHD13neden olmadan bir genetik hastalık hemofili a tedavi edebilir fareler hiçbir T hücreleri olan nakil domuz embriyonik dalak doku bildirdi, bu dalak transplantasyonu destekleyen terapötik söz tutar Bazı hastalıklar. Bu nedenle, dalak nakli terapötik potansiyeli hakkında daha fazla soruşturma için bir ihtiyaç vardır.
Dalak transplantasyonunun hayvan modelleri, hastalık ilerlemesinde dalak türevi immün hücrelerin tanınmaz fonksiyonunu keşfetmek ve dalak transplantasyonunun potansiyel terapötik etkisini test etmek için değerlidir. Deneysel tüm dalak nakil modelleri, Cohen14tarafından gözden geçirildiği gibi 1900 ' lerin başlarında belgelenmiştir. 1969 yılında, Coburn Richard J. ve Lee et al. fareler15,16dalak transplantasyon tekniği detaylı. Daha Geçenlerde, Swirski FK ve ark. dalak nakli17bir fare modeli nitelendirdi. Sıçan modelleriyle karşılaştırıldığında, dalak transplantasyonunun fare modelleri, çeşitli doğal avantajları nedeniyle daha çekicidir. Örneğin, bir fare modeli kullanarak, biz sıçan modelleri için kullanılamıyor reaktifler geniş bir çeşitlilik erişebilirsiniz. Ayrıca, konjenik fareler kullanarak (örneğin, CD 45.1/CD 45.2 arka plan ile fareler), bir syngeneic dalak nakli mümkün kaderi izlemek için yapar, uzun ömürlü, ve splenanosit fonksiyonu18. Swirski FK ve ark.17' nin çalışmalarına dayanarak, farelerde Bu basitleştirilmiş ve gelişmiş dalak nakli protokolünü kurduk. Aşağıda açıklanan protokol hem güvenilirlik hem de fizibilite standartlaştırılmış bir şekilde birleştirir ve dalak biyoloji ve nakil bağışıklık çalışması için bir araç olarak kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Ketamin</td><td>Wyeth</td><td>206205-01</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Lloyd Laboratories</td><td>139-236</td><td></td></tr><tr><td>Heparin çözeltisi</td><td>Abraxis Farmasötik Ürünler</td><td>504031</td><td></td></tr><tr><td>Enjeksiyon sınıfı normal salin</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-4888-20</td><td></td></tr><tr><td>%70 Etanol</td><td>Pharmco Ürünleri A.Ş.</td><td></td><td></td>111000140</tr><tr><td>ThermoCare Küçük Hayvan Yoğun Bakım Sistemi</td><td>Thermocare, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adson Forseps</td><td>Roboz Cerrahi Aletler</td><td>RS-5230</td><td></td></tr><tr><td>Derf İğne Tutucu</td><td>Roboz Cerrahi Aletler</td><td>RS-7822</td><td></td></tr><tr><td>Ekstra İnce Mikro Diseksiyon Makası</td><td>Roboz Cerrahi Aletler</td><td>RS-5881</td><td></td></tr><tr><td>Mikro klipsli</td><td>Roboz Cerrahi Aletler</td><td>RS-5420</td><td></td></tr><tr><td>7-0 ipek</td><td>Braintree Bilimsel</td><td>SUT-S 103</td><td></td></tr><tr><td>11-0 naylon 4 mm (3/8) iğne üzerinde</td><td>Sharpoint DR4</td><td>AK-2119</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD45.2 antikoru</td><td>BD Bioscience</td><td>553772</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD45.1 antikoru</td><td>BD Bioscience</td><td>553776</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD11b antikoru</td><td>BD Bioscience</td><td>557657</td><td></td></tr><tr><td>Ms B220 antikoru</td><td>BD Bioscience</td><td>553089</td><td></td></tr><tr><td>Ms Ly6C antikor</td><td>eBioscience</td><td>48-5932-80</td><td></td></tr><tr><td>Ms Ly6G antikoru</td><td>BD Bioscience</td><td>561236</td><td></td></tr><tr><td>Ms F4/80 antikoru</td><td>BD Bioscience</td><td>565614</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD11c antikoru</td><td>BD Bioscience</td><td>558079</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD3 antikoru</td><td>eBioscience</td><td>48-0032-82</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD4 antikoru</td><td>BD Bioscience</td><td>552051</td><td></td></tr><tr><td>Bayan CD8 antikoru</td><td>BD Bioscience</td><td>563786</td><td></td></tr><tr><td>CANLI/ÖLÜ&ticaret; Sabitlenebilir Menekşe Ölü Hücre Leke</td><td>Kiti Thermo Fisher</td><td>L34955</td><td></td></tr></tbody></table>

dalak hücre biyoloji ve nakli bağışıklık eğitimi için vascularized heterotopik dalak transplantasyonunun fare modeli

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

Dalak, bağışıklık ve hematopoetik sistemlerin homeostazı 'te kritik bir rol oynayan benzersiz bir lenfoid organıdır. Ne olursa olsun çökelme nedenleri splenektomi geçirmiş hastalar ezici bir sonrası splenektomi enfeksiyon geliştirmek ve derin venöz tromboz ve malignite riskleri artan deneyim eğilimli. Son zamanlarda, epidemiyolojik çalışmalar splenektomi kardiyovasküler hastalıkların oluşumu ile ilişkili olabileceğini belirtti, dalak fizyolojik fonksiyonları henüz tam olarak tanınmadı düşündürmektedir. Burada, sadece farklı biyolojik süreçlerde splenik immün hücre alt setlerinin fonksiyon ve davranışsal aktivitesini incelemek için kullanılabilecek değil, aynı zamanda test etmek için güçlü bir araç olabilir vaskülarize heterotopik dalak nakli, bir fare modeli tanıtmak bazı hastalıklarda dalak nakli terapötik potansiyeli. Bu modelin Ana cerrahi adımlar donör dalak hasat içerir, alıcı yerli dalak kaldırılması, ve dalak greft revaskülarizasyon. Konjenik fare suşları (örn., CD 45.1/CD 45.2 arka planlar ile fareler) kullanarak, syngeneic transplantasyondan sonra, hem donör türetilen splenik lenfositler ve miyeloid hücreler, ameliyat sonrası gün olarak erken olarak greft dışına göç ederek böylece benzersiz bir Chimera üreten alıcı hücrelerinin birden fazla tür akını.  Nispeten zorlu tekniklere rağmen, bu prosedür >% 90 başarı oranı ile yapılabilir. Bu model, sürekli devlet sırasında ve dalak nakli takiben bir hastalık ayarında, böylece dalak türevi bağışıklık hücrelerinin farklı rolünü keşfetmek için büyük bir fırsat sunan, kaderin, uzun ömürlü ve splenanositlerin fonksiyonunu izleme sağlar farklı hastalık süreçleri.

Fare dalak nakli tüm prosedür deneyimli mikrocerrahlar tarafından 90 dk içinde tamamlanabilir. Laboratuvarımız farelerde 100 üzerinde dalak nakli gerçekleştirdi. Başarı oranı her iki alıcı fare ve dalak greft sonrası ameliyat günü (POD) 1 veya POD 7 (bizim çalışma uç noktası) hayatta kalma tarafından tanımlanan% 90 üzerinde. Dalak greftinin hayatta kalması, splenanositlerin makroskopik görünümü ve akış sitometri analizi ile doğrulandı. Deneyimimize dayanarak, akış sitometri Analizi (canlı...

Bu protokol, dalak hücrelerin kaderi ve uzun ömürlü çalışmasında güçlü bir araç olarak hizmet veren, farklı dalak mekanizmaları olan vaskülarized heterotopik dalak transplantasyonunun bir fare modelinin cerrahi adımlarını ayrıntılarıyla araştırabilir. hastalık progresyonunda hücre nüfusa ve nakli bağışıklık.

Dalak hücre biyoloji ve nakli bağışıklık eğitimi için vascularized heterotopik dalak transplantasyonunun fare modeli

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

Dalak transplantasyonunun fare modeli, inflamatuar hastalıklarda lokal ve sistemik immün yanıtların düzenlenmesinde dalak hücrelerinin rolünü ortaya çıkarmak için büyük bir fırsat sunmaktadır. Bu protokolün en büyük avantajı, konjenijen fareler kullanılarak dalak naklinin dalak hücrelerinin kaderini, uzun ömürlülüğünü ve işlevini kontrol etmeyi mümkün kılmıştır. İşleme başlamadan önce, cerrahi platform üzerine steril bir tek kullanımlık perde yerleştirin ve anestezi donör farede parmak kıskacına yanıt eksikliğini onaylayın.Tüm karın bölgesinden saç tıraş ve 6 ila 10X büyütme bir işletim mikroskop altında steril bir cerrahi platform üzerine fare yerleştirin. Bir alkol hazırlık pedi ile maruz kalan cildi sterilize ve cerrahi bant ile uzuvları güvenli. Pubis'ten ksifoid sürecine kadar 3-4 santimetrelik orta hat dikey deri kesisinden karına girin.Cilt damarları cauterize ve daha iyi pozlama elde etmek için her iki tarafta lateral karın kesi uzatmak. Steril bir pamuklu bez kullanarak, dalak maruz bırakmak için karın sağ kanadına bağırsak hareket ve dalak bağlı kısa mide damarı cauterize için steril bir düşük sıcaklık cautery kullanın. Nemli tutmak ve ayrı ve pankreas dokusundan portal ven seferber etmek için dalak üzerinde 37 derece santigrat tuzlu tuzlu ile ıslatılmış steril gazlı bez bir parça yerleştirin.Gösterildiği gibi portal venin dallarını inkâr edin. Dalak ven portal ven distal etrafında bir dikiş yerleştirin ve çölyak gövde üzerinde aort ve dalak arter ortaya çıkarmak için sağ tarafa dalak çevirmek. Diseksiyon ve aort çölyak dalak arterler seferber ve çölyak artera aort proksimal etrafında bir dikiş yerleştirin.Tüm vücudu heparinize etmek için inferior vena kava veya IVC içine heparin 100 uluslararası birimleri enjekte. Üç dakika sonra, çölyak artera aort proksimal hepatik ve gastrik arterler ligate. Portal ven transect ve çölyak gövde abdominal aort distal gelen dört derece santigrat heparinize salin 10 mililitre ile tüm vücut perfit.Dalak grefti toplamak ve portal ven ilişkili aort çölyak dalak segmenti ile blok ve pankreas dokusunun küçük bir kısmı ile birlikte. Sonra grefti dört derece santigrat derece lik beş mililitrede koruyun. Cerrahi bölge donör için olduğu gibi hazırlandıktan sonra orta hat kesi ile alıcı karın girin ve dalak ve arter ligating tarafından alıcı yerli dalak çıkarın.37 derece santigrat ıslatılmış gazlı bez ile bağırsak dokuları kapak ve dikkatle sol tarafa bağırsak hareket ettirin. IVC'deki infrarenal aortun lomber dallarını kesip inceleyin ve kesin ve ivc'deki infrarenal aortu iki dört mililitrelik mikrovasküler klemplerle çapraz kelepçeleyin. Infrarenal aort yoluyla bir 11-0 naylon dikiş yerleştirin ve mikroscissors ile eliptik bir aortomi oluşturulmasına izin vermek için damar geri.Eliptik bir venotomi oluşturmak ve donör portal damar uzunluğuna açıklık uzatmak için IVC delmek için 30 gauge iğne kullanın. Aort ve IVC'yi 500 mikrolitre heparinize salin ile yıkayın, intralüminaal kan veya kan pıhtılarını damarlardan temizleyin ve donör dalak greftini alıcı karının sağ kanına yerleştirin. Dikkatle donör aort manşet ve portal ven tanımlayın.Damarların bükülmediğini doğruladıktan sonra, dalak greftini dört derece santigrat derece tuzlu gazlı bezle kaplayın. İki 11-0 kalmak sütür kullanarak, alıcı aortotomi proksimal ve distal apeks donör aort manşet bağlayın ve donör aort manşet ve alıcı aortotomi ön duvarı arasında sürekli 11-0 naylon dikiş iki ila üç ısırık ile bir anastomoz yapmak. Dalak greftini alıcının sol tarafına çevirin ve donör aort manşeti ile alıcıa aortotominin arka duvarı arasındaki anastomoz yapın.Donör portal ven ve alıcı IVC arasında venöz anastomoz her iki tarafta sürekli dikiş dört ila beş ısırık ile gerçekleştirin. Önce damar lümeni içindeki arka duvarı dikin ve sonra aynı sütürle ön duvarı kapatın. Anastomozu IVC'nin alt köşesine yerleştirilen bir düğümle tamamlayın.Şimdi damar kelepçeleri bırakın ve dalak rengi iyileşene kadar kanama tamponade steril bir pamuklu bez kullanın. Sürekli bir desen 5-0 sentetik emilebilir Vicryl dikiş ile karın kapatın ve kesilen bir desen 5-0 naylon dikiş ile cilt tabakası kapatın. Daha sonra 250 mikrolitre ılık salini dört ayrı yere enjekte edin ve fareyi 30 derece sıcaklık kontrollü bir kuluçka makinesinde ilk birkaç saat boyunca hayvan ev kafesine nakletmek için yeterli bilinci kazanana kadar izleyerek ısıtın.Transplantasyondan bir ve yedi gün sonra dalak İzogreftlerinin hematoksilin ve eozini, ameliyat sonrası ilk hafta boyunca dalak isogreftlerinin mimarisinin bozulmadığını ortaya koymaktadır. Transplantasyon sonrası donör dalak hücre göçünü araştırmak için yapılan akış sitometrik analizi, dalak hücrelerinin yaklaşık %50'sinin transplantasyondan bir gün sonra donör dendiğini ve yaklaşık %46'sının alıcı kaynaklı olduğunu göstermektedir. Transplantasyondan yedi gün sonra, donörden elde edilen lökositler toplam dalak hücrelerinin yaklaşık %32'sini oluştururken, alıcı elde edilen hücreler yaklaşık %53'e kadar artmış olan Donör dalak lökositler de ilk gün gibi erken saatlerde lenf düğümlerine, kana ve kemik iliğine göç etmiş ve en az yedinci güne kadar splenocyte ticareti araştırmaları için değerli benzersiz bir Chimera oluşturur.Dalak donörleri olarak genetiği değiştirilmiş knock-in farelerin kullanılması, dalak hücre kaynaklı arabulucuların veya hastalık süreçlerinde anahtar sinyal yollarının rollerinin araştırılmasına olanak sağlayacaktır. Bu model patojenler yanıt dalak hücre popülasyonlarının mekanizmalarını keşfetmek için güçlü bir araç olabilir, yaralanma, inflamasyon, veya organ nakli reddi.

a-mouse-model-vascularized-heterotopic-spleen-transplantation-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Fare heterotopik kalp transplantasyonu modeli ret ve immün yanıt mekanizmaları eğitim için önemli bir yöntem olduğu birçok araştırmacı tarafından kanıtlanmıştır. Ancak, söz konusu teknikleri hala zorlu. Standart teknikler değiştirerek 1000 nakli ile daha fazla başarı elde ettiler.

Farelerde Heterotopik Kalp Nakli

Video, vaskülarize heterotopik dalak transplantasyonunun bir fare modelini oluşturmak için cerrahi bir yöntemi göstermektedir. Anestezi uygulanmış bir donör farenin karın boşluğu, dalağı çıkarmak için cerrahi olarak açılır. İnferior vena kava ve infrarenal aort tanımlanır, bel dalları bağlanır ve konjenik bir donör fareden bir dalağın heterotopik nakli için açıklıklar yapılır. Vasküler anastomoz tamamlandıktan ve implante edilen dalağa kan akışı yeniden sağlandıktan sonra, kesi kapatılır ve...

Vaskülarize Heterotopik Dalak Transplantasyonunun Bir Fare Modeli

Bu video, insan bağışıklık sistemi ve karaciğer hücreleri ile ikili insanlaştırılmış bir fare modeli oluşturmak için bir yöntemi göstermektedir. İnsan karaciğer hücrelerinin ve hematopoietik kök ve progenitör hücrelerin intrasplenik enjeksiyon yoluyla transgenik immün yetmezliği olan bir fareye nakledilmesini içerir, bu da karaciğer hücrelerinin aşılanmasına ve insan bağışıklık hücrelerinin gelişmesine yol açar.

İnsan Karaciğer Hücreleri ve Bağışıklık Hücreleri ile İnsanlaştırılmış Bir Fare Modeli Geliştirme

Karaciğer metastazlarının klinik öncesi bir sıçangil modeli, hemispleen enjeksiyon tekniği ile gerçekleştirilir.

Karaciğer metastazları Klinik öncesi fare modeli

Farelerde aort interpozisyon greftlemesi için bir protokol açıklıyoruz. Protokolün amacı, arterlerdeki alloimmün reaksiyonlar ve organ nakli başarısızlığına katkıda bulunan ortaya çıkan arteriyel değişikliklerle ilgili patolojik süreçleri ve terapötik stratejileri incelemek için bir model sağlamaktır.

Aloimmün kaynaklı Vasküler Reddi ve Nakli arterioskleroz Fare Modeli

Kombine katı organ ve vaskülarize kompozit allotransplantasyonu incelemek için, servikal dikişsiz manşet tekniği kullanarak farelerde yeni bir heterotopik en blok göğüs duvarı, timus ve kalp nakli modelini açıklıyoruz.

Farelerde A Novel Mikrocerrahi Heterotopik Modeli, En Bloku Göğüs Duvarı, Thymus ve Kalp Nakli

Süper mikrovasküler anastomoz olmayan bir dikiş manşet tekniği uygulayarak fare ortotopik arka uzuv nakli için bu yeni model, vaskülarize kompozit doku yamasında (VCA) ile ilgili in vivo mekanik immünolojik araştırmalar için güçlü bir araç sağlar.

Fare Ortotopik Hind Ekstremite nakli

Fare kardiyak transplantasyon modelleri, transplantasyon immünolojisini incelemek için değerli araştırma araçlarını temsil etmektedir. Mevcut protokol, laminer kan akışına izin vermek için alıcının ortak karotis arterine ve donörün pulmoner arter gövdesine manşetlerin yerleştirilmesini içeren fare heterotopik servikal kardiyak transplantasyonunu detaylandırmaktadır.

Vasküler Manşetler Kullanılarak Fare Heterotopik Servikal Kardiyak Transplantasyonu

Bu makale, yarı katı bir bazal membran matrisi içinde dalak hücrelerini toplamak ve kapsüllemek için bir protokolü açıklamaktadır. Bazal membran matris yapıları, organoid gelişimini incelemek için veya in vivo transplantasyon ve doku rejenerasyon çalışmaları için üç boyutlu kültürde kullanılabilir.

Murin Dalak Dokusu Oluşumunu Araştırmak için Bazal Membran Matris Kapsüllü Hücre Agregasyonu

Heterotopik arka uzuvdan boyuna vaskülerize kompozit allotransplantasyonlu tekrarlanabilir bir fare modeli sunuyoruz. Bu süpermikrocerrahi protokol, 0,3-0,5 mm damar anastomozlarını içerir ve naylon filament yönlendirmesi ile venöz kelepçeleme ile birleştirilir. Vaskülerize kompozit allotransplantasyonda tolerans, iskemi-reperfüzyon hasarı ve immünolojik mekanizmalar üzerine translasyonel çalışmalar için güvenilir bir platform sağlar.

Farede Heterotopik Arka Uzuvdan Boyuna Nakil: Vaskülerize Kompozit Allotransplantasyonun Süpermikrocerrahi Modeli

Bu protokol, sare servikal kalp nakli için basitleştirilmiş ve uçtan yana dikiş anastomozu tekniği sunarak nakil immünolojisini incelemek için sağlam ve tekrarlanabilir bir model sunar.

Nakil İmmünolojisini Çalışmak İçin Uçtan Yana Anastomoz Tekniği Kullanılarak Servikal Heterotopik Fare Kalp Nakli

Öğrenin fare modelinde vaskülerize heterotopik dalak transplantasyonunu kullanarak dalak hücre dinamiklerini ve bağışıklık mekanizmalarını incelemeyi. Bu yöntem iltihabi hastalıklarda hücre davranışlarını izlemeye olanak tanır.

Dalak hücre biyoloji ve nakli bağışıklık eğitimi için vascularized heterotopik dalak transplantasyonunun fare modeli

Daha fazla video keşfet