In vitro transkripsiyonu RNA tabanlı luciferase Reporter assay Poxvirus-virüslü hücrelerde çeviri Yönetmeliği çalışma

RNA tabanlı luciferase testi nin transkripsiyonu için protokolümüz, çiçek virüsü enfekte hücrelerde çeviri regülasyonunun incelenmesine yardımcı olur. Ayrıca, Poly (A) litre özelleştirilmiş bir uzunluk çeviri üzerindeki düzenleyici etkileri incelenmesine olanak sağlar. Bu tekniğin en büyük avantajı, mRNA'da 5'UTR ve 3'UTR gibi Cis elemanları tarafından çeviri düzenlemesinin incelenmesine ve geniş çeviri başlatma spektrumuna olanak sağlamasıdır.

In vitro transkripsiyonlu RNA tabanlı luciferase muhabir testi, kap ve diğer modifikasyonlara değişiklik yapmak üzere uyarlanmış ve çeviri üzerindeki etkisini test etmek için kullanılabilir. Başlamak için, 5'to 3'yönünde aşağıdaki öğeleri içeren PCR amplicon oluşturmak için ileri ve geri astar tasarımı:T7-Promoter, Poly(A)litre, Firefly Luciferase ORF bir Poly (A) kuyruk T7_12A-Fluc olarak anılacaktır, ileri astar birkaç ekstra nükleotitler t7-Promoter Poly (A)litre veya istenen 5'UTR dizisi ve yaklaşık 20 nükleotit muhabir genin ORF 5'sonuna karşılık gelen takip içerir. Astar uzunluğunu, muhabir genin ORF'sinin 5'sonuna karşılık gelen erime sıcaklığına göre ayarlayın ve astardaki ilgili bölgenin genin duyu iplikçiği ile aynı olmasını sağlar.