Name: Minyatür Domuzlardan Birincil Aort Endotel Hücrelerinin İzolasyon ve Kültürü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Öğrenin, minyatür domuzlardan birincil aort endotel hücrelerinin enzimatik izolasyonunu. Bu yöntem, ksenotransplantasyonda immün ve koagülasyon yanıtlarını araştırmak için yüksek saflıkta hücreler sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çalışma Guangdong Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı hibe, Hibe / Ödül Numarası: 2016A030313028 tarafından desteklenmiştir; Guangdong Eyaleti Tıbbi Bilimsel Araştırma Vakfı, Hibe/Ödül Numarası: B2018003; Shenzhen Bilim ve Teknoloji Vakfı, Hibe/Ödül Numarası: JCYJ20180306172449376, JCYJ20180306172459580, JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ2016042511ve JCYJ201604281420444444444444444444444444444444444444444444444444444444444442; Shenzhen Longhua Bölge Bilim ve Teknoloji Vakfı, Hibe/Ödül Numarası: 2017013; Çin Ulusal Anahtar Ar-Ge Programı, Hibe/Ödül Numarası: 2017YFC103704; Shenzhen Tıp Sanming Projesi, Hibe / Ödül Numarası: SZSM201412020; Guangdong Eyaleti Yüksek Düzeyli Hastanelerin İnşaatı Için Özel Fonlar (2019); Shenzhen Yüksek Düzeyde Tıbbi Disiplin İnşaatı Fonu, Hibe/Ödül Numarası: 2016031638; Shenzhen Sağlık ve Aile Planlaması Komisyonu Vakfı, Hibe/Ödül Numarası: SZXJ2017021 ve SZXJ2018059. Biz Hancheng Zhang ve Zhicheng Zou Shenzhen Üniversitesi'nden el yazması hazırlanmasında yardımcı olmak için teşekkür ederiz.

Hayvanların kullanımı Shenzhen İkinci Halk Hastanesi Etik İnceleme Komitesi tarafından, hayvan refahı ilkelerine uygun olarak onaylandı.
1. Hayvanların, orta ve tamponların hazırlanması
<ol><li>Minyatür domuzu hazırlayın. NOT: Tüm minyatür domuzlar Çin Wuzhishan veya Bama domuz (erkek) idi. Domuzların yaşı ve ağırlığı sırasıyla 100 gün ± 8 gün ve 5.7 kg ± 1.0 kg (ortalama ± SD, n = 3) idi.</li>
	<li>Kültür ortamını hazırlayın: endotel hücreli orta (ECM) %10 (v/v) ısıya inaktive fetal sığır serumu (FBS), %1 (v/v) penisilin/streptomisin (P/S) ve %1 (v/v) endotel hücre büyüme takviyesi (EKGS) ile desteklenmiştir.</li>
	<li>Yıkama tamponu hazırlayın: 1x PBS çözeltisi (pH 7.4) ile % 1 (v/v) P/S.</li>
	<li>%0.005 kollajenaz IV sindirim çözeltisi hazırlayın: PBS çözeltisinin 20 mL'sinde 1 mg kollajenaz IV tozu. Önceden 37 °C'de kollajenaz sindirim çözeltisi ısıtın.</li>
	<li>Durdurma tamponu hazırlayın: Dulbecco modifiye Eagle's orta (DMEM) ile desteklenmektedir 10% ısı-inaktive FBS ve 1% P / S.</li>
</ol>2. Cerrahi ve domuz etitik endotel hücre izolasyonu için hazırlık
<ol><li>Ameliyat tan önce ameliyathanenin 1 saat UV ışığı ve tıbbi dezenfektan 84 sıvı (mevcut klor içeriği %4,0 - %5,0, MalzemeTablosu) ile dezenfekte edilebgereklidir.</li>
	<li>Minyatür domuz15 mg/kg Ketamin, 15 mg/kg Ksilazin hidroklorür ve 0.05 mg/kg Fenasetin hidroklorür (Hacimler: 100μL/kg, MalzemeTablosu) (Şekil1A) domuz ağrılı uyarıcı kontrol ile anestezi durumu (örneğin, bir kulak pinching veya bir ön bacak sallayarak) ve fizyolojik indeks (örneğin kan basıncı, kalp ve solunum hızı). NOT: Uyanma belirtileri ni gösteriyorsa domuza yarım doz daha enjeksiyon yapılabilir.</li>
	<li>Bir neşter ile karın kesin, inferior vena kava maruz ve sonuç olarak 5 mL şırınga ile inferior vena kava içine heparin sodyum (5.000 U, MalzemeTablosu) enjekte.</li>
	<li>Beş dakika sonra, karın aort kan ateter takın, göğüs deri kesilmiş ve bir neşter ile diyafram eğim ve daha sonra sol ventrikül kapalı kesti. NOT: O domuz kan ve kalp kestikten sonra aort nabız kontrol ederek ötenazi olduğundan emin olun.</li>
	<li>Kemik forceps ile kaburga çıkarmak(Malzeme Tablosu), ve kalp ve akciğerler ortaya çıkarmak. Kalp ve akciğerler için aort posterior bulmak ve iki ucunu kelepçe. Aortu önceden soğutulmuş yıkama tamponuyla bir kez yıkayın (Şekil 1B,C).</li>
	<li>Makasla aortu kesin ve aortu her iki ucunda kenetletin. Steril forceps ve makas ile aort etrafında aşırı doku excise. Aortu 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne koyun, aortu önceden soğutulmuş yıkama tamponu 3x (yıkama başına 30 mL) ile yıkayın ve aortu laboratuvara aktarın (Şekil1D).</li>
</ol>3. Domuz etiaort endotel hücrelerinin izolasyonu
<ol><li>Aseptik koşullar altında, domuz aortu yıkama tamponundan çıkarın ve 150 mm Petri kabına yerleştirin (Şekil2A).</li>
	<li>Aortun iki ucunu hafifçe kesip aort çevresindeki fazla dokuyu tekrar steril çalgılar ve makaslarla dışarı çıkarır (Şekil2B). 20−50 mL yıkama tamponu ile aortun dışını ve içini (oda sıcaklığında kültür çanağı üzerinde) yıkayın. NOT: Bazı EC'ler bu bölgede hasar gördüğünden, sadece ameliyat sırasında kelepçelerin yerleştirildiği bölgeyi kesmeye çalışın ve fazla dokuları ve arteriyel yan dalları çıkarın.</li>
	<li>Aort üzerinden bir cerrahi dikiş geçirin ve daha sonra cerrahi dikiş kullanarak aort bir ucunu kravat (5-0, 90cm, MalzemeTablosu). Cerrahi sütürü aort içinde tutun (Şekil 2C,D).</li>
	<li>Aort'u bağlı ucuna yakın aortu forceps ile yavaşça düzeltin ve aortun endotel yüzeyi açığa çıkana kadar aortu yavaşça tersine çevirmek için cerrahi sütürü yavaşça çekin (Şekil2E-G). NOT: Bağlı ucuna yakın aort düzeltmek için emin olun ve sıkıca aort düzeltmek değil, aksi takdirde aort cerrahi dikiş çekerek ters olamaz.</li>
	<li>Aort endotel yüzeyini yıkama tamponu 3x (yıkama başına 10 mL) ile yıkayın ve bu çözeltiyi atın. Aortu 15 mL'lik bir santrifüj tüpüne yerleştirin ve aortu tüpe %0,005 kollajenaz IV sindirim çözeltisi ile kaplayın (Şekil2H). NOT: Önceden ısıtmak 0.005% kollajenaz IV sindirim çözeltisi 37 °C sindirim önce.</li>
	<li>15 dakika boyunca 37 °C'de kuluçkaya yat. Sindirilmiş aort ve sindirim solüsyonu 100 mm'lik bir kültür kabına yerleştirin ve önceden soğutulmuş durdurma tamponuna 10−15 mL ekleyerek %0,005 kollajenaz IV'ün etkilerini durdurun. NOT: Önerilen sindirim süresi 10 ile 20 dakika arasındadır. Aort endotel yüzeyinin durdurma tamponu ile kaplı olduğundan emin olun.</li>
	<li>Bir hücre kazıyıcı kullanarak aort iç yüzeyinden pAEC'leri yavaşça kazıyın (Şekil2I). Kazınmış aort 3x yıkama tamponu (zaman başına 5 mL) ile yıkayın. Kültür çanasından gelen çözeltiyi 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne koyun. Kültür kabının altını 2 kat yıkayın ve yıkama tamponu (her seferinde 5 mL) ve çözeltiyi tekrar 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne koyun. NOT: Tek bir yöne hafifçe kazıyın ve sıkıştırmayın. Kenarlara ve deliklere yakın dokuya dokunmayın. 5−8x kazıma önerilir.</li>
	<li>Tüpü 600 x g'de 4 °C'de 6 dk santrifüj edin. Supernatant'ı atın ve 50 mL'lik bir santrifüj tüpünün altında 10 mL çözelti bırakın. 50 mL santrifüj tüpüne 20 mL yıkama tamponu ekleyin ve peletleri yeniden askıya alın. Bu adım sırasında kabarcıklar kaçının.</li>
	<li>Santrifüj 600 x g için 6 dk 4 °C'de. Yavaşça supernatant atın. 1 mL kültür ortamı ile hücre peletlerini yeniden askıya alın ve iyice karıştırın. NOT: Elde edilen ortalama CM aort sayısı 1,9 x 105 ± 1,4 x 104 'dir (ortalama ± SD, n = 3).</li>
	<li>Hücreleri hücre sayacıyla sayın. Plaka ve kültür hücre numarasına göre herhangi bir malzeme kaplama olmadan bir kap içinde hücreleri. Hücre sayısı 1,0 x 10 6'danaz veya eşitse, 25 cm2 şişedeki kültür hücreleri. Hücre sayısı 1.0 x 106'dan büyükse, birkaç 25 cm2 şişedeki kültür hücreleri (şişe başına 1.0 x 106 hücre). Şişeyi 37 °C'de %5 CO2 ile bir kuvöze (sallamadan) yerleştirin ve orta yı 2−3 günde bir değiştirin. NOT: Bazı hücreler hücre kazıyıcı tarafından zarar görür. Hücre canlılığı telbettecanlı hücrelerinin yüzdesinin %95.7 ± %1.7 olduğunu saptamıştır (ortalama ± SD, n = 3). İzole hücrelerin iki katına çıkarma süresi yaklaşık 1−2 gündür.</li>
</ol>4. Saf endotel hücrelerinin hasat ve karakterizasyonu
<ol><li>Hücreleri yaklaşık 4−5 gün boyunca büyümesini bırakın. Hücreler %80 birleştiğinde (Şekil3A),%0.25 tripsin ile hücreleri sindirir ve hücreleri iletir. Daha sonra, bazı izole hücreleri toplamak (Gün 3, Passage 1 ve Passage 2) ve akış sitometri (bir anti-CD31 antikor ile) ile tanımlamak.</li>
	<li>Etiket izole pAECs (hücre numarası: 1 x 105) (Gün 3, Passage 1 ve Passage 2) anti-domuz cd31-floresan isothiocyanate (FITC) konjuge antikor (10 μL antikor 100 μL hücreleri başına, 30 dakika için 4 °C için boyanmış) akış sitometri analizi için.</li>
	<li>Bir ileri dağınık arsa ile kapı toplam canlı hücre popülasyonu, negatif bir kontrol olarak lekesiz örnek. Daha sonra kapılı hücrelerin CD31 pozitif hücrelerini histogramla birlikte sunun. NOT: CD31-pozitif hücrelerin etkinliği sırasıyla %97.4 ± %1.2 (Gün 3), %94.4 ± %1.1 (P1) ve %92.4 ± %1.7 (P2) (± SD) dir.</li>
</ol>

<ol><li>Zhang, G. Y., Liao, T., Fu, X. B., Li, Q. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+transplantation+in+China%3A+concerns+remain%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Organ transplantation in China: concerns remain.</a> Lancet. 385 (9971), 854-855 (2015).</li>
<li>Ekser, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+xenotransplantation%3A+the+next+medical+revolution%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Clinical xenotransplantation: the next medical revolution?</a> Lancet. 379 (9816), 672-683 (2012).</li>
<li>Cooper, D. K., Ekser, B., Ramsoondar, J., Phelps, C., Ayares, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+genetically+engineered+pigs+in+xenotransplantation+research%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">The role of genetically engineered pigs in xenotransplantation research.</a> The Journal of Pathology. 238 (2), 288-299 (2016).</li>
<li>Pober, J. S., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolving+functions+of+endothelial+cells+in+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Evolving functions of endothelial cells in inflammation.</a> Nature Reviews Immunology. 7 (10), 803-815 (2007).</li>
<li>McGill, S. N., Ahmed, N. A., Christou, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells%3A+role+in+infection+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells: role in infection and inflammation.</a> World Journal of Surgery. 22 (2), 171-178 (1998).</li>
<li>Ekser, B., Cooper, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+the+barriers+to+xenotransplantation%3A+prospects+for+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Overcoming the barriers to xenotransplantation: prospects for the future.</a> Expert Review of Clinical Immunology. 6 (2), 219-230 (2010).</li>
<li>Yeom, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+aortic+endothelial+cell+genes+responsive+to+selected+inflammatory+stimulators%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Veterinary+Medical+Science%22%5BJournal%5D)">Porcine aortic endothelial cell genes responsive to selected inflammatory stimulators.</a> The Journal of Veterinary Medical Science. 71 (11), 1499-1508 (2009).</li>
<li>Beigi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+method+for+isolating+highly+purified+and+functional+porcine+aortic+endothelial+and+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Optimized method for isolating highly purified and functional porcine aortic endothelial and smooth muscle cells.</a> Journal of Cellular Physiology. 232 (11), 3139-3145 (2017).</li>
<li>Jansen of Lorkeers, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenotransplantation+of+Human+Cardiomyocyte+Progenitor+Cells+Does+Not+Improve+Cardiac+Function+in+a+Porcine+Model+of+Chronic+Ischemic+Heart+Failure.+Results+from+a+Randomized%2C+Blinded%2C+Placebo+Controlled+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">Xenotransplantation of Human Cardiomyocyte Progenitor Cells Does Not Improve Cardiac Function in a Porcine Model of Chronic Ischemic Heart Failure. Results from a Randomized, Blinded, Placebo Controlled Trial.</a> PLOS One. 10 (12), e0143953(2015).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+Antigens+Involved+in+Delayed+Xenograft+Rejection+in+a+Ggta1%2FCmah+Dko+Pig-to-Monkey+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Potential Antigens Involved in Delayed Xenograft Rejection in a Ggta1/Cmah Dko Pig-to-Monkey Model.</a> Scientific Reports. 7 (1), 10024(2017).</li>
<li>Paris, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ASGR1+expressed+by+porcine+enriched+liver+sinusoidal+endothelial+cells+mediates+human+platelet+phagocytosis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">ASGR1 expressed by porcine enriched liver sinusoidal endothelial cells mediates human platelet phagocytosis in vitro.</a> Xenotransplantation. 18 (4), 245-251 (2011).</li>
<li>Paris, L. L., Chihara, R. K., Sidner, R. A., Tector, A. J., Burlak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+human+and+porcine+platelet+oligosaccharides+may+influence+phagocytosis+by+liver+sinusoidal+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Differences in human and porcine platelet oligosaccharides may influence phagocytosis by liver sinusoidal cells in vitro.</a> Xenotransplantation. 19 (1), 31-39 (2012).</li>
<li>Bernardini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+protein+70%2C+heat+shock+protein+32%2C+and+vascular+endothelial+growth+factor+production+and+their+effects+on+lipopolysaccharide-induced+apoptosis+in+porcine+aortic+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stress+%26+Chaperones%22%5BJournal%5D)">Heat shock protein 70, heat shock protein 32, and vascular endothelial growth factor production and their effects on lipopolysaccharide-induced apoptosis in porcine aortic endothelial cells.</a> Cell Stress & Chaperones. 10 (4), 340-348 (2005).</li>
<li>Endemann, D. H., Schiffrin, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%3A+JASN%22%5BJournal%5D)">Endothelial dysfunction.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 15 (8), 1983-1992 (2004).</li>
<li>Graupera, M., Claret, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+Cells%3A+New+Players+in+Obesity+and+Related+Metabolic+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+and+Metabolism%3A+TEM%22%5BJournal%5D)">Endothelial Cells: New Players in Obesity and Related Metabolic Disorders.</a> Trends in Endocrinology and Metabolism: TEM. 29 (11), 781-794 (2018).</li>
<li>Kawamoto, A., Asahara, T., Losordo, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+endothelial+progenitor+cells+for+therapeutic+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Radiation+Medicine%22%5BJournal%5D)">Transplantation of endothelial progenitor cells for therapeutic neovascularization.</a> Cardiovascular Radiation Medicine. 3 (3-4), 221-225 (2002).</li>
<li>Rafii, S., Lyden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+stem+and+progenitor+cell+transplantation+for+organ+vascularization+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Therapeutic stem and progenitor cell transplantation for organ vascularization and regeneration.</a> Nature Medicine. 9 (6), 702-712 (2003).</li>
<li>Jain, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+death%2C+angiogenesis%2C+and+microvascular+function+after+castration+in+an+androgen-dependent+tumor%3A+role+of+vascular+endothelial+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell death, angiogenesis, and microvascular function after castration in an androgen-dependent tumor: role of vascular endothelial growth factor.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (18), 10820-10825 (1998).</li>
<li>Pratumvinit, B., Reesukumal, K., Janebodin, K., Ieronimakis, N., Reyes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+characterization%2C+and+transplantation+of+cardiac+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Isolation, characterization, and transplantation of cardiac endothelial cells.</a> BioMed Research International. 2013, 359412(2013).</li>
<li>Crouch, E. E., Doetsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS+isolation+of+endothelial+cells+and+pericytes+from+mouse+brain+microregions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">FACS isolation of endothelial cells and pericytes from mouse brain microregions.</a> Nature Protocols. 13 (4), 738-751 (2018).</li>
<li>Nakano, H., Nakano, K., Cook, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Purification+of+Epithelial+and+Endothelial+Cells+from+Mouse+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Isolation and Purification of Epithelial and Endothelial Cells from Mouse Lung.</a> Methods in Molecular Biology. 1799, 59-69 (2018).</li>
<li>Naschberger, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Human+Endothelial+Cells+from+Normal+Colon+and+Colorectal+Carcinoma+-+An+Improved+Protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation of Human Endothelial Cells from Normal Colon and Colorectal Carcinoma - An Improved Protocol.</a> Journal of Visualized Experiments. (134), e57400(2018).</li>
<li>Yu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+endothelial+colony-forming+cells+from+mononuclear+cells+of+rat+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of endothelial colony-forming cells from mononuclear cells of rat bone marrow.</a> Experimental Cell Research. 370 (1), 116-126 (2018).</li>
<li>Chi, L., Delgado-Olguin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Culture+of+Mouse+Placental+Endothelial+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Isolation and Culture of Mouse Placental Endothelial Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1752, 101-109 (2018).</li>
<li>Hawthorne, W. J., Lew, A. M., Thomas, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+strategies+to+bring+islet+xenotransplantation+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Organ+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Genetic strategies to bring islet xenotransplantation to the clinic.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 21 (5), 476-483 (2016).</li>
<li>Yi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+Forces+Accelerate+Collagen+Digestion+by+Bacterial+Collagenase+in+Lung+Tissue+Strips%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mechanical Forces Accelerate Collagen Digestion by Bacterial Collagenase in Lung Tissue Strips.</a> Frontiers in Physiology. 7, 287(2016).</li>
<li>Masson-Pevet, M., Jongsma, H. J., De Bruijne, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagenase-+and+trypsin-dissociated+heart+cells%3A+a+comparative+ultrastructural+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Collagenase- and trypsin-dissociated heart cells: a comparative ultrastructural study.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 8 (10), 747-757 (1976).</li>
<li>Yonenaga, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+conditions+of+collagenase+treatment+for+isolation+of+articular+chondrocytes+from+aged+human+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Therapy%22%5BJournal%5D)">Optimal conditions of collagenase treatment for isolation of articular chondrocytes from aged human tissues.</a> Regenerative Therapy. 6, 9-14 (2017).</li>
<li>French, M. F., Mookhtiar, K. A., Van Wart, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+proteolysis+of+type+I+collagen+at+hyperreactive+sites+by+class+I+and+II+Clostridium+histolyticum+collagenases%3A+complementary+digestion+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Limited proteolysis of type I collagen at hyperreactive sites by class I and II Clostridium histolyticum collagenases: complementary digestion patterns.</a> Biochemistry. 26 (3), 681-687 (1987).</li>
<li>Hara, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+investigation+of+pig+cells+for+resistance+to+human+antibody-mediated+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+International%3A+Official+Journal+of+the+European+Society+for+Organ+Transplantation%22%5BJournal%5D)">In vitro investigation of pig cells for resistance to human antibody-mediated rejection.</a> Transplant International: Official Journal of the European Society for Organ Transplantation. 21 (12), 1163-1174 (2008).</li>
<li>Takashima, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+fibroblast+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Establishment of fibroblast cultures.</a> Current Protocols in Cell Biology. Chapter 2, 2.1.1-2.1.12 (2001).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Endotel hücreleri yaygın vasküler disfonksiyon araştırmalarında kullanılır, diyabet, doku rejenerasyonu, transplantasyon, ve kanserler14,15,16,17,18. Anlamak ve bu hastalıklarda ECs işlevini anlamak ve karakterize etmek için, farklı hastalıklı organ veya dokuların ECs izole etmek için çok sayıda yöntem bildirilmiştir8,<sup cl...

Transplantasyon için mevcut organ sıkıntısı dünya çapındaolağanüstü bir sorundur 1. Çin Kızıl Haç Derneği'ne göre, 2018 yılında Çin'de son dönem organ yetmezliği olan hastaların sadece az sayıda uygun bir organ aldı.
Xenotransplantasyon organ yetersizliği sorununu çözmek için umut verici bir yoldur. Domuz organları anatomik ve fizyolojik benzerlikler nedeniyle insanlar için en uygun organ olarak kabul edilir2,3. Bir domuz ksenograft yetmezliği büyük ölçüde primat bağışıklık reddi ve pıhtılaşma yanıtları ile ilgilidir. Bu hücreler antikor, kompleman, sitokinler ve bağışıklık hücreleri (örneğin, T hücreleri, B hücreleri ve makrofajlar)4,5içeren primat bağışıklık sistemi ile etkileşime ilk beri domuz eti endotel hücreleri (ECs) kritiktir . Domuz eti ecs domuz organ ve adacık xenotransplantasyon hayati bir rol oynamaktadır6,7. Bu nedenle, ECs bir domuz grefti reddi ve pıhtılaşma yanıtları araştırmak için önemli hücrelerdir. Knenotransplantasyon araştırmaları için yüksek kaliteli domuz eti izolasyonu gereklidir.
Farklı organlardan (örneğin, kalp, böbrek, karaciğer ve aort) EC'leri izole etme girişimlerinde, xenotransplant ayarında8,9,10,11,12gibi çeşitli protokoller bildirilmiştir. Ancak, yalıtılmış EC'lerin ultra saf kültürünü korumak standart protokollerde olağanüstü bir sorundur. Sindirilmiş çözeltinin artan konsantrasyonu, uygun olmayan sindirim süresi ve sıyrık yoğunluğu mevcut çalışmalarda artmış fibroblast kontaminasyonuna katkıda bulunabilir8,10,13. Ayrıca, minyatür domuzizole pAECs yöntemi daha az çalışılmıştır. Burada, minyatür domuzlardan (Wuzhishan veya Bama) yüksek oranda saflaştırılmış pAEC'leri izole etmek için optimize edilmiş bir enzimatik yöntemi tanımlıyoruz. Protokoldeki birkaç adım fibroblast kontaminasyonunu azaltmak ve yüksek saflıkta EC'ler elde etmek için tasarlanmıştır.

<table><tbody><tr><td>BD FACSAria II</td><td>BD Bioscience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Boneforceps</td><td>Pekin HeLi KeChuang Teknoloji Geliştirme CO., Ltd. Çin</td><td>HL-YGQ&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>BOON Tek Kullanımlık Şırınga (10ml)</td><td>Jiangsu Yile medical Article Co., Ltd. Çin</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD31-FITC antikoru</td><td>Bio-Rad</td><td>MCA1746F</td><td></td></tr><tr><td>Hücre kazıyıcı</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3010 #</td><td></td></tr> <tr><td>Kollajenaz IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138 # -1G</td><td></td></tr><tr><td>Bileşik ketamin enjeksiyonu &nbsp;</td><td>Shenyang Veteriner İlaç Fabrikası, Çin</td><td></td><td>Ketamin Hidroklorür?0.3g/2ml,Ksilazin hidroklorür: 0.3g/2ml, Fenasetin hidroklorür?1mg/2ml</td></tr><tr><td>DAPI (4 ',6-Diamidino-2-fenilindol, Dihidroklorür)</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>D1306#</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>11965118#</td><td></td></tr><tr><td>ECM</td><td>Sciencell</td><td>1001#</td><td></td></tr><tr><td>EKGS</td><td>Sciencell</td><td>1052 #</td><td></td></tr> <tr><td>Eppendorf Çıtçıtlı Mikrotüp (1.5 mL) &nbsp;</td><td>AXYGEN</td><td>MCT-150-C#</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 100mm Hücre Kültürü Tabağı</td><td>Corning</td><td>353003#</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>GIBCO</td><td>10270-106#</td><td></td></tr><tr><td>Flowjo v10.0</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forseps&nbsp;</td><td>ShangHai tıbbi aletler Co, Ltd.Çin</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparin sodyum</td><td>Jiangsu WanBang biyofarmasötik Co., Ltd.China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İyot tentürü</td><td>Guilin LiFeng Medical Supplies Co., Ltd.China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Minyatür Domuz (Bama veya Wuzhishan)</td> <td>Kang Yi Ekolojik Tarım Co., Ltd, Çin</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mshot mikroskobu & nbsp;</td><td>Guangzhou Mikro Atış Technology Co., Ltd.</td><td>M152</td><td></td></tr><tr><td>Petri Kapları (150 x 15 mm)</td><td>Biologixgroup</td><td>66-1515#</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin/Streptomisin</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15070063#</td><td></td></tr><tr><td>Havalandırma Kapaklı Dikdörtgen Eğimli Boyun Hücre Kültürü Şişesi ? T25 mi?</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3289 #</td><td></td></tr> <tr><td>Makas</td><td>ShangHai tıbbi aletler Co, Ltd.China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Serolojik Transfer Pipetleri (10ml)</td> <td>JET Biofil</td><td>GSP010010#&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Steril Pastör Pipeti</td><td>GeneBrick</td><td>GY0025 #</td><td></td></tr> <tr><td>Steril Şırınga Filtresi (0.22 & mikro; m)</td> <td>Millipore</td><td>SLGV033RS #</td><td></td></tr> <tr><td>Cerrahi neşter</td><td>ShangHai tıbbi aletler Co., Ltd.China</td><td>22 #</td><td></td></tr> <tr><td>Cerrahi sütür</td><td>Şangay Pudong Jinhuan Tıbbi Malzemeler Co, Ltd</td><td>5-0 #</td><td></td></tr> <tr><td>Şırınga?5mL?</td><td>Shengguang Medical Instrument Co., Ltd.China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA (% 0.25), fenol kırmızısı</td><td>GIBCO</td><td>25200056 #</td><td></td></tr> <tr><td>75% Tıbbi alkol</td><td>Guilin LiFeng Medical Supplies Co., Ltd.China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>20 x PBS çözeltisi (pH 7.4, Nükleaz içermez)</td> <td>Sangon Biotech</td><td>B540627 #</td><td></td></tr> <tr><td>Tıbbi dezenfektan 84 sıvı</td><td>Sichuan Eyaleti Yijieshi Tıp Teknolojisi A.Ş., Ltd</td><td>450ml / şişe</td><td></td></tr></tbody></table>

minyatür domuzlardan birincil aort endotel hücrelerinin İzolasyon ve kültürü

Isolation and Culture of Primary Aortic Endothelial Cells from Miniature Pigs

Xenotransplantasyon son dönem organ yetmezliği olan hastalar için insan organı sıkıntısı gidermek için umut verici bir yoldur, ve domuz uygun bir organ kaynağı olarak kabul edilir. Bağışıklık reddi ve pıhtılaşma ksenotransplantasyonun başarısı için iki önemli engeldir. Vasküler endotel hücresi (EC) yaralanması ve disfonksiyonu ksenotransplantasyonda inflamasyon ve koagülasyon yanıtlarının gelişimi için önemlidir. Bu nedenle, domuz etitik endotel hücrelerinin izolasyon (pAECs) bağışıklık reddi ve pıhtılaşma yanıtları araştırmak için gereklidir. Burada, minyatür domuzlardan son derece saflaştırılmış pAEC'lerin izolasyonu, karakterizasyonu ve genişlemesi için basit bir enzimatik yaklaşım geliştirdik. İlk olarak, minyatür domuz ketamin ile anestezi ve aort uzunluğu çıkarıldı. İkinci olarak, aort endotel yüzeyi 15 dk. Üçüncü, aort endotel yüzeyi bir hücre kazıyıcı ile sadece bir yönde kazınmış oldu (<10 kez) için% 0.005 kollajenaz IV sindirim çözeltisi maruz kaldı ve süreci sırasında sıkıştırılmış değildi Kazıma. Son olarak, 3. CD31-pozitif hücrelerin yüzdeleri sırasıyla %97.4 ± %1.2, %94.4 ± %1.1 ve %92.4 ± %1.7 (ortalama ± SD) idi. Kollajenaz IV konsantrasyonu, sindirim süresi, yönü ve sıklığı ve kazıma sıklığı ve yoğunluğu fibroblast kontaminasyonu azaltmak ve yüksek saflıkta ve ECs çok sayıda elde etmek için önemlidir. Sonuç olarak enzimatik yöntemimiz, minyatür domuz aortundaki EC'leri izole etmek için son derece etkili bir yöntemdir ve ksenotransplantasyonda immün ve pıhtılaşma yanıtlarını araştırmak için hücreler in vitro olarak genişletilebilir.

Yöntemimiz, yüksek oranda arıtılmış EC'leri aortlardan minyatür domuzlardan ayırmak için etkili bir yol sağlamayı amaçlamaktadır. Aort cerrahisi süreci Şekil1'de gösterilmiştir. İlk adım, tüm aort domuz dan excised olmasıdır. Diğer hücre veya bakteriyel kontaminasyonu önlemek çok önemlidir. Bu nedenle, hedeflenmemiş hücre veya bakteri aort kontamine durumda diğer organ veya dokuları zarar vermez ve önceden soğutulmuş yıkama tampon 3x ile aort yıkayın (Şekil1<str...

Primer domuz aort endotel hücrelerinin (pAECs) minyatür domuzlardan izolasyonu için etkili bir enzimatik yöntem tanımlanmıştır. İzole primer pAEC'ler ksenotransplantasyonda immün ve koagülasyon yanıtını araştırmak için kullanılabilir.

Minyatür Domuzlardan Birincil Aort Endotel Hücrelerinin İzolasyon ve Kültürü

Xenotransplantation is a promising way to resolve the shortage of human organs for patients with end-stage organ failure, and the pig is considered as a ...

Yöntem minyatür domuz endotel hücrelerini izole etmek için son derece etkili bir yöntemdir. Ve hücreler de genişletilebilir, knenotransplantasyonda immün ve pıhtılaşma yanıtını araştırın. Tekniğin ana avantajı domuz son derece saflaştırılmış endotel hücrelerini izole etmek için sadece kolay, son derece etkili değil, aynı zamanda diğer PAECs ne zaman geçerken tutmak için daha iyi olmasıdır.Anestezi domuz ağrı refleks yanıt eksikliği doğruladıktan sonra, domuz karın duvarı üç kez yıkamak 75% tıbbi alkol, ve iyot bir tentür. Son yıkamadan sonra, inferior vena kava ortaya çıkarmak için bir karın kesi yapmak için bir neşter kullanın, ve inferior vena kava içine heparin sodyum 5000 birim enjekte etmek için beş mililitreşli şırınga kullanın. Beş dakika sonra, abdominal aort içine bir kateter takın ve diyafram incise için bir neşter kullanın.İkinci bir araştırmacı yardımıyla, sol ventrikül kaldırmak ve kalp ve akciğerlerortaya çıkarmak için kaburga çıkarmak için kemik forseps kullanın. Kalp ve akciğerler için aort posterior bulun ve uçları kelepçe. Aort çıkarmak için makas kullanın ve önceden soğutulmuş yıkama tampon ile bir kez yıkayın.Steril forseps ve makas ile aort çevresindeki herhangi bir fazla doku çıkarın ve laboratuvara transferi için taze önceden soğutulmuş yıkama tampon içeren 50 mililitrelik santrifüj tüp içine gemi yerleştirin. Domuz etit liyal hücre izolasyonu için domuz aortunu aseptik koşullarda 150 milimetrelik petri kabına aktarın ve geminin her iki ucunu nazikçe çıkarın. Damarın kenetlendiği ek fazla dokuyu steril çalgılar ve makaslarla kırpın ve aortun dışını ve içini durulamak için 20 ila 50 mililitre taze yıkama tamponu kullanın.Sonra, aort yoluyla cerrahi bir dikiş geçmek ve gevşek lumen içinde dikiş tutarak, geminin bir ucunu kravat. Aortun endotel yüzeyine maruz kalana kadar aortu ters çevirmek için aortu yavaşça bağlı ucuna yakın aortun ucunu ponplarla sabitle ve sonra cerrahi sütürü yavaşça çekin. Aort endotel yüzeyini yıkama başına 10 mililitre taze yıkama tamponu ile üç kez yıkayın ve aortu 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne yerleştirin.37 santigrat derece 10 mililitre ile kapak% 0.005 kollajenaz IV sindirim çözeltisi ısıtılır ve 15 dakika boyunca 37 santigrat derece doku kuluçka. Kuluçka sonunda, 100 milimetrelik bir kültür çanağı içine tüm tüp içeriğini aktarmak ve önceden soğutulmuş durdurma tampon 10 ila 15 mililitre ile sindirim tutuklama. Bir hücre kazıyıcı kullanarak, yavaşça kabın iç yüzeyinden aort endotel hücreleri kaldırmak ve yıkama başına yıkama tampon beş mililitre ile üç kez kabı yıkayın.Son yıkamadan sonra, 50 mililitrelik bir santrifüj tüp içine supernatant aktarın ve yıkama başına, 50 mililitrelik tüp yıkama çekerek, taze yıkama tampon beş mililitre ile kültür çanak iki kez alt yıkayın. Santrifüj ile hücreleri toplamak ve supernatant son 10 mililitre hariç tüm atın. Pelet resuspend için yıkama tampon 20 mililitre ekleyin, kabarcıklar önlemek için özen, ve başka bir santrifüj ile hücreleri toplamak.Toplama için hücre kültürü orta bir mililitre pelet resuspend ve 25 santimetre kare şişe konsantrasyonu altı hücre ye bir kez on hücreleri plaka. Daha sonra hücre kültürü kuluçka makinesindeki hücreleri %5 karbondioksitte 37 derecede yerleştirin ve her 2-3 günde bir ortamı yeniler. İzolasyondan sonra endotel hücreleri sıfır, birinci ve ikinci gün ve birinci ve ikinci geçitlerden sonra kontaminasyon ve morfolojik değerlendirmeleri için denetlenir.Bir anti-CD31-FITC antikor kullanarak akış sitometrik analizi kültürün üçüncü gününde tipik olarak %97'den daha büyük bir endotel hücre belirteci pozitif popülasyongösterir ve bu iki pasajdan sonra bile %90'ın üzerinde saflıkta korunur. Aort endotel yüzeyi sadece bir yönde kazınmış, bir hücre kazıyıcı ile, az 10 kez, ve kazıma işlemi sırasında sıkıştırılmış değildi. En iyi cevap, pAECs izolasyon optimize yöntemi, biz bireysel deneyler gerçekleştirmek ve ksenotransplantasyon bağışıklık reddi ve pıhtılaşma yanıtı araştırmak için saflaştırılmış pAECs kullanabilirsiniz.

isolation-culture-primary-aortic-endothelial-cells-from-miniature

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Yalıtma ve kalp kapakçığı endotel hücreleri (VEC) saf kültür popülasyonları için bir yöntem sağlar. VEC tüberkülü veya broşürün her iki taraftan da izole edilmiş ve hemen şu olabilir, altta yatan interstisyel hücre (VIC) izolasyonu basittir.

Kapak Endotel Hücreleri İzolasyon

Kan ile temas eden otolog hücre ve test biyouyumluluk biyomalzemeler tohumlama titanyum için bir yöntem açıklanmıştır. Bu yöntem, cerrahi implantasyon dakika içinde domuz venae kava numaralı seribaşı endotel progenitör hücrelerin ve titanyum tüpler, kullanır. Bu teknik, diğer birçok implante biyomedikal cihazlar için uyarlanabilir.

Otolog Endotelyal progenitör Hücre-Yayımlama Teknoloji ve Büyük Hayvan Modeli Kardiyovasküler Cihazlar için Biyouyumluluk Testleri

Bu videoda, aortun minyatür domuzlardan cerrahi olarak çıkarılması için bir prosedür gösteriyoruz. Bu izole aortlardan toplanan endotel hücreleri, pıhtılaşma ve immün tepkileri incelemek için in vitro koşullarda daha fazla kültürlenebilir.

Domuz Aort İzolasyonu: Aşağı Akış Analizi için Minyatür Domuzlardan Torasik Aortu Eksize Etmek İçin Cerrahi Bir Prosedür

Bu videoda, tek adımlı kollajenaz sindirimi kullanılarak bir domuz modelinin abdominal aortundan endotel hücrelerinin izolasyonunu gösteriyoruz. Endotel hücreleri, daha sonraki aşağı akış uygulamaları için kültürlenebilir.

Domuz Aort Endotel Hücresi (pAEC) İzolasyonu: Hasat Edilen Domuz Abdominal Aortundan Endotel Hücrelerini İzole Etmek İçin Enzim Tabanlı Bir Yöntem

Kalp kapakçığı endotel hücrelerini (VEC'ler) izole etme yeteneği, kapak gelişimi, bakımı ve hastalık mekanizmalarını anlamak için kritik öneme sahiptir.  Burada, VEC'lerin gelişimsel ve hastalık süreçlerine katkısını belirleyen çalışmalara izin verecek FACS kullanarak embriyonik ve yetişkin Tie2-GFP farelerinden VEC'lerin izolasyonunu açıklıyoruz.

Murin Vana Endotel Hücreleri İzolasyon

Vasküler endotel hücreleri birçok önemli kardiyovasküler hastalıkta önemli rol oynamaktadır. Bu makale, herhangi bir özel ekipman kullanmadan fare aortundan endotel hücrelerini izole etmek ve genişletmek için basit bir yöntemi açıklamaktadır. Protokolümüz, endotel hücre fizyopatolojisindeki mekanizmaları tanımlamak için etkili bir yol sağlar.

İzolasyon ve Fare aort endotel hücreleri İlköğretim Kültür

Primer endotel hücrelerinin kan damarlarından yeni izolasyon yöntemlerine ihtiyaç vardır. Bu protokol, ilgilenilen kan damarlarını tamamen tersine çeviren ve sadece endotel tarafını enzimatik sindirime maruz bırakan yeni bir tekniği tanımlar. Elde edilen saf endotel hücre kültürü, kardiyovasküler hastalıkları, hastalık modellemesini ve anjiyogenezi incelemek için kullanılabilir.

Köpek arter ve venlerin Primer Endotel Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Bir fare kalpten farklı kardiyak hücre tiplerinin izolasyonu için çeşitli protokoller geliştirilmiş ve açıklanmıştır. Burada, yüksek kaliteli ana kardiyak hücre tiplerinin (kardiyomiyosit, endotel hücreleri ve fibroblastların) tek bir preparasyondan izole edilmesini sağlayan deneysel maliyetleri düşüren optimize edilmiş bir protokol tarif edilmiştir.

Bir Yetişkin Sıçan Kalpten Yüksek Kalitede Kardiyomiyosit, Endotel Hücresi ve Fibroblastların Eşzamanlı İzolasyonu

Biz bütün, anticoagulated kan çalışma ve koagülasyon analizini sağlayan bir vitro modeli mevcut. Anticoagulation sistemi sağlıklı endotel hücreleri doğal anticoagulation etkisi bağlıdır ve endotel hücre aktivasyonu pıhtılaşma içinde sonuçlanır.

Endotel hücreleri kullanarak 3D hücre kültürü ve sigara anticoagulated tam kan antikoagülan ve anti-enflamatuar özellikleri değerlendirilmesi

Bu protokol, cerrahi aort kapak replasman prosedürleri sırasında veya kadavra dokusundan ekstrakte edilen insan aort kapaklarının toplanmasını ve ardından hastaya özgü primer kapak endotel ve interstisyel hücrelerinin izolasyonunu, genişlemesini ve karakterizasyonunu tanımlar. Hücre canlılığını ve fenotip spesifikliğini sağlamak için gereken süreçlerle ilgili önemli detaylar dahildir.

In vitro Hastalık Modellemesi için İnsan Primer Kapak Hücrelerinin İzolasyonu

Bu makalede, primer akciğer endotel hücreleri yenidoğan farelerden izole edilmiş ve kültürlenmiştir.

Primer Fare Akciğer Endotel Hücrelerinin İzolasyonu

Öğrenin, minyatür domuzlardan birincil aort endotel hücrelerinin enzimatik izolasyonunu. Bu yöntem, ksenotransplantasyonda immün ve koagülasyon yanıtlarını araştırmak için yüksek saflıkta hücreler sağlar.

Minyatür Domuzlardan Birincil Aort Endotel Hücrelerinin İzolasyon ve Kültürü

Daha fazla video keşfet