Name: In Vitro Bath Fermantasyon Sistemleri Kullanılarak Endobiyotikler ve İnsan Bağırsak Mikrobiyotları Arasındaki Etkileşimlerin Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 s
Description: Keşfedin, in vitro toplu fermantasyon sistemleri kullanarak endobiyotikler ve insan bağırsak mikrobiyotları arasındaki etkileşimleri nasıl analiz edebilirsiniz. Bu yüksek verimli yöntem, tanısal araştırmalar için değerli bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (No. 31741109), Hunan Doğa Bilimleri Vakfı (No. 2018JJ3200) ve Hunan Bilim ve Mühendislik Üniversitesi'nde uygulamalı karakteristik disiplinin yapı programı tarafından finanse edilmiştir. LetPub'a (www.letpub.com) bu makalenin hazırlanmasısırasındaki dilsel yardımları için teşekkür ederiz.

Bu protokol, Hunan Bilim ve Mühendislik Üniversitesi (Hunan, Çin) ve Zhejiang Gongshang Üniversitesi (Zhejiang, Çin) etik komitesinin yönergelerini izler.
1. Bakterilerin hazırlanması
<ol><li>Bifidobacterium orta et suyu hazırlanması<ol>
<li>Aşağıdaki bileşenleri 950 mL distile suda birleştirin: et özü, 5 g/L; maya özü, 5 g/L; kazein peptone, 10 g/L; soya tonulu, 5 g/L; glikoz, 10 g/L; K2HPO4, 2.04 g/L; MgSO4·7H2O, 0.22 g/L; MnSO4. H20, 0.05 g/L; NaCl, 5 g/L; Tween 80, 1 mL; tuz çözeltisi, 40 mL (CaCl2.2H2O, 0.25 g/L; KH2PO4, 1 g/L; NaHCO3, 10 g/L; NaCl, 2 g/L); ve resazurin, 0.4 mL (2.5 mg/L). 2 M NaOH ile pH'ı 6,8'e ayarlayın.</li>
<li>121 °C'de 15 dakika boyunca otoklav ve suyu anaerobik koşullarda oda sıcaklığına (RT) soğumasını bekleyin (%10 H2, %10 CO2,%80 N2). Ortama filtre ile sterilize edilmiş sistein-HCl (0.5 g/L) ve mupirosin (5 mg/L) ekleyin.</li>
</ol>
</li>
<li>Anaerobik koşullarda 5 mL bifidobacterium orta et suyu ile bir kültür tüpüne dondurulmuş Bifidobacterium longum bir aliquot (50 μL) ekleyin, sonra 37 °C'de 24 saat için bir anaerobik kuluçka kültürü.</li>
</ol>2. Bifidobakteriyel EPS hazırlanması
<ol><li>PYG agar orta hazırlanması<ol>
<li>Aşağıdakileri birleştirin: peptone, 20 g/L; maya özü, 10 g/L; glikoz, 5 g/L; NaCl, 0.08 g/L; CaCl2, 0.008 g/L; MgSO4·7H2O, 0.008 g/L; K2HPO4, 0.04 g/L; KH2PO4, 0.04 g/L; NaHCO3, 0.4 g/L; agar, 12 g/L. 10 M NaOH kullanarak pH'ı 7,2'ye ayarlayın.</li>
<li>15 dakika boyunca 121 °C'de otoklav ve ~50 °C'ye kadar soğutun. Daha sonra, orta 1 L başına, filtre sterilize K1 çözeltisi 0.5 mL ekleyin (1 gK 1 vitamini 99% etanol 99 mL çözünmüş), haemin çözeltisi 5 mL (haemin 0.5 g 1 mol /L NaOH 1 mL çözünmüş , daha sonra distile su ile 100 mL kadar getirdi), ve sistein-HCl 0.5 g.</li>
<li>PYG plakalarını dökmeden önce, ortama filtre sterilize edilmiş 5-bromo-4-kloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside (X-Gal, 0.06 g/L), LiCl·3H2O (5.7 g/L) ve mupirocin (5 mg/L) ekleyin. NOT: X-Gal ve LiCl.3H2O renklendirme değişiklikleri ile plakalar üzerinde B. longum kolonilerinin tanımlanmasına izin verir.</li>
</ol>
</li>
<li>20 μL B. longum suşlarını (adım 1.2) PYG plakalarına aşıla ve 37 °C'de 72 saat boyunca anaerobik bir kuluçka makinesine yerleştirin.</li>
<li>Bir tartım kepçesi kullanarak PYG plakalarından mukoid bakteri kolonileri toplayın, sonra bir girdap osilatör kullanarak fosfat tamponlu salin (PBS) 10 mL tamamen askıya. NOT: Bakteriyel ve EPS karışımları, lifler PBS'de tamamen eriyene kadar tekrar tekrar yukarı veya aşağı borular girdap veya borulama ile tamamen askıya alınmalıdır.</li>
<li>Süspansiyonu 5 dk için 6.000 x g olarak santrifüj edin.</li>
<li>Supernatants'ı yeni bir santrifüj tüpüne dikkatlice aktarın ve tekrarlanan ters çevirme ve harmanlama ile üç cilt soğuk %99 etanol ile tamamen karıştırın.</li>
<li>Karışımı 5 dk için 6000 x g'da santrifüj edin ve süpernatantları tamamen çıkarın.</li>
<li>Hız vakum kullanarak bir gecede EPS ekstreleri kazıyarak ve kurutarak santrifüj tüpleri çökeltileri çıkarın.</li>
</ol>3. Fermantasyon ortamının hazırlanması
<ol><li>Temel kültür ortamının hazırlanması VI<ol>
<li>Aşağıdakileri birleştirin: peptone, 3 g/L; tripton, 3 g/L; maya özü, 4.5 g/L; müsin, 0.5 g/L; safra tuzları No. 3, 0.4 g/L; NaCl, 4.5 g/L; KCl, 2.5 g/L; MgCl2·6H2O, 4.5 g/L; 1 mL Tween 80; CaCl2.6H2O, 0.2 g/L; KH2PO4, 0.4 g/L; MgSO4·7H2O, 3.0 g/L; MnCl2·4H2O, 0.32 g/L; FeSO4·7H2O, 0.1 g/L; CoSO4·7H2O, 0.18 g/L; CaCl2·2H2O, 0.1 g/L; ZnSO4·7H2O, 0.18 g/L; CuSO4·5H2O, 0.01 g/L; ve NiCl2·6H2O, 0.092 g/L. PH'ı 1 M HCl ile 6,5'e ayarlayın.</li>
<li>Bölüm 2.1'de yapıldığı gibi haemin ve sistein hazırlayın ve otoklavlama ve soğutmadan sonra ekleyin.</li>
</ol>
</li>
<li>VI temel ortamile farklı karbon kaynakları içeren kültür ortamı hazırlayın. Otoklavlamadan önce, grup VI_Bif'i içeren orta VI'ye 8 g/L Bif EPS lifleri ekleyin. Buna ek olarak, grup VI_Starch temsil etmek için orta VI 8 g / L nişasta ekleyin. Son olarak, bir karbon kaynağı eklenmeden orta VI kontrol (grup VI) olarak kullanılır. NOT: Bif EPS ve nişasta önce manyetik bir karıştırıcı kullanılarak sıcak suda çözülür, daha sonra hazır VI ortamı ile karıştırılır.</li>
<li>15 dakika boyunca 121 °C'deki tüm ortamları otoklavla ve RT'ye soğumaya bırakın.</li>
<li>Her ortamdan bir alt numuneyi (5 mL) anaerobik kuluçka makinesinde kültür tüplerine aktarın ve kalan ortamı 4 °C'de saklayın.</li>
</ol>4. İnsan dışkı örnek hazırlama
<ol><li>Sağlıklı yetişkin insan gönüllülerdışkı kapları kullanarak taze dışkılama hemen sonra taze dışkı örnekleri toplamak ve daha sonra bulamaç hazırlanması için kullanın. NOT: Örnek toplama öncesinde, tüm gönüllüler antibiyotik, probiyotik veya prebiyotik tedavilerin en az 3 ay boyunca örnek bağışı ndan önce alınmaması için taranmalıdır. Buna ek olarak, tüm bağışçılar bilgilendirilmiş, yazılı onay vermelidir.</li>
<li>Taze dışkı örneğini (1 g) ila 0,1 M anaerobik PBS (pH 7,0) cam gagalara aktarın, ardından %10 (w/v) bulamaç hazırlamak için cam çubuklar kullanın.</li>
<li>Dışkı bulamacını filtrelemek için 0,4 mM elek kullanın. Daha sonra, toplu kültür fermantasyon deneylerini aşılamak için filtrelenmiş bulamaç alt örneğini kullanın ve geri kalanını daha fazla analiz için -80 °C'de saklayın. NOT: 4.2-4.3 basamakları anaerobik bir odada gerçekleştirilir.</li>
</ol>5. In vitro toplu fermantasyon
<ol><li>Bir anaerobik oda içinde adım 3.2 hazırlanan fermantasyon ortamına filtrelenmiş dışkı bulamacı (500 μL) ekleyin, ardından 37 °C'de kuluçkaya yatırın.</li>
<li>24 h ve 48 h'de mayalanmış numunelerden 2 mL'yi anaerobik odada toplayın ve 3 dk için 6.000 x g'da odanın dışında santrifüj edin.</li>
<li>Süpernatanları polisakkarit bozunma analizi ve kısa zincirli yağ asitleri (SCFA) ölçümleri için kullanılacak yeni bir santrifüj tüpüne dikkatlice aktarın.</li>
<li>Santrifüj peletlerini -80 °C'de saklayın ve daha sonra bakteriyel genomik DNA ekstraksiyonu için kullanın.</li>
</ol>6. İnsan dışkı mikrobiyotası tarafından EPS bozulması
<ol><li>Önceden kaplanmış silika jel-60 TLC alüminyum plakalara fermente edilmiş süpernatantların 0,2 μL'sini yükleyin, ardından saç kurutma makinesi kullanarak kurulayın.</li>
<li>Plakaları formik asit/n-butanol/su (6:4:1, v:v:v) çözeltisi içinde 20 mL'lik bir çözeltide geliştirin ve saç kurutma makinesi kullanarak kurulayın.</li>
<li>Boya için orsinol reaktif plakaları ıslatın, sonra bir saç kurutucu kullanarak kuru.<ol>
<li>Distile su 25 mL içinde Likenol 900 mg eriterek orsinol reaktifleri hazırlayın sonra etanol 375 mL ekleyerek. Daha sonra, konsantre sülfürik asit yavaş yavaş eklenmelidir ve çözelti iyice karıştırılmalıdır.</li>
</ol>
</li>
<li>120 °C'de bir fırında 3 dk ısı tonuyla pişirilir ve TLC bantlarını ölçerek EPS'nin bozulmasını değerlendirir.</li>
</ol>7. EPS'nin insan bağırsak mikrobiyotası üzerindeki etkileri
<ol><li>Adım 4.3'te hazırlanan orijinal dışkı örneklerini ve 5.4 adımda hazırlanan fermente numuneleri dondurun-eritin.</li>
<li>Üreticinin talimatları doğrultusunda bir dışkı bakteriyel genomik DNA çıkarma kiti kullanarak tüm örneklerden bakteriyel genomik DNA (gDNA) ayıklayın.</li>
<li>Mikro spektrofotometre ve agar jel elektroforezi kullanarak DNA konsantrasyonlarını, bütünlüklerini ve boyut dağılımlarını belirleyin.</li>
<li>Daha önce açıklanan ileri ve ters astarlar12aşağıdakileri kullanarak çıkarılan gDNA'dan bakteriyel 16S rRNA genlerinin PCR'sini gerçekleştirin: -ileri astar (barkodlu astar 338F): ACTCCTACGGGAGGCAGCA -ters astar (806R): GGACTACHVGGGTWTCTAAT Aşağıdaki termal döngü koşullarını kullanın:<ol>
<li>5 dk için 94 °C.</li>
<li>30 s için 94 °C.</li>
<li>30 s için 55 °C.</li>
<li>1 dk için 72 °C.</li>
<li>35 döngü için 2-4'u tekrarlayın</li>
<li>5 dk için 72 °C.</li>
<li>4 °C, termal döngüden çıkarılana kadar bekletin.</li>
</ol>
</li>
<li>PCR ürünlerinin yüksek iş yapma elde sini, ultra yüksek üretim mikrobiyal topluluk analizini kullanarak BIR DNA sıralama şirketinde gerçekleştirin.</li>
<li>Mikrobiyal Ekoloji (QIIME) dizi analizi boru hattı13içine Nicel Insights kullanarak temiz, yüksek kaliteli diziler elde edin.</li>
<li>Mothur yazılım paketi14gibi biyoinformatik araçları kullanarak %97'den fazla nükleotit benzerliği ile 16S rRNA gen dizileri için operasyonel taksonomik birimleri (Otus) tanımlayın.</li>
<li>Her OTU'dan bir temsilci sıra seçin ve temsili dizileri15sınıflandırmak için SILVA taksonomik veritabanı ile birlikte RDP sınıflandırıcısını kullanın.</li>
<li>Biyoinformatik araçları 16 kullanarak Good'un kapsamını, alfa çeşitliliği ölçümlerini (Simpson ve Shannon indeksidahil) ve zenginliği (gözlenen OTÜs sayısı) hesaplayın.</li>
</ol>8. EPS'nin insan bağırsak mikrobiyotası ile SCFA üretimiüzerine etkileri
<ol><li>Adım 5,3 ila 2 mL santrifüj tüpler hazırlanan fermente supernatants (1 mL) ekleyin.</li>
<li>Numunelerin her birine %0,2 mL (w/v) metafosforik asit ekleyin ve girdap yaparak çözeltileri iyice karıştırın.</li>
<li>Karışımları 13.000 x g'de 20 dk için santrifüj edin ve süpernatantları taze tüplere aktarın.</li>
<li>Buna eşlik etmek üzere, 120 mM asetik, propiyonik, bütirik, izobütirik, valerik ve izovalerik asitlerin çözeltilerini hazırlayın. Daha sonra, her bir hazırlanan asit 1 mL ekleyin 1.2 mL 25% (w / v) metafosforik asit ve standart kokteyller olarak kullanın.</li>
<li>Örnekleri 0,22 μM membran kullanarak filtreleyin.</li>
<li>Daha önce açıklanan protokollere göre yüksek performanslı gaz kromatografisi kullanarak SCFA konsantrasyonlarını saptamak11,17. NOT: Gaz kromatografisi (GC) için InertCap FFAP kolonu (0.25 mM x 30 m x 0.25 μM) kullanılır. SCFA konsantrasyonları daha sonra GC Solution yazılım paketinde tek noktalı dahili standart yöntemi kullanılarak en yüksek alanlara göre ölçülür.</li>
</ol>

<ol><li>Maarten, V. D. G., Blottière Hervé, M., Doré, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humans+as+holobionts%3A+implications+for+prevention+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Humans as holobionts: implications for prevention and therapy.</a> Microbiome. 6 (1), 81(2018).</li>
<li>Allen, A. P., Dinan, T. G., Clarke, G., Cryan, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+psychology+of+the+human+brain-gut-microbiome+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Social+and+Personality+Psychology+Compass%22%5BJournal%5D)">A psychology of the human brain-gut-microbiome axis.</a> Social and Personality Psychology Compass. 11 (4), e12309(2017).</li>
<li>Arora, T., Bäckhed, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gut+microbiota+and+metabolic+disease%3A+current+understanding+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">The gut microbiota and metabolic disease: current understanding and future perspectives.</a> Journal of Internal Medicine. 280, 39-349 (2016).</li>
<li>Maurice, C., Haiser, H., Turnbaugh, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenobiotics+shape+the+physiology+and+gene+expression+of+the+active+human+gut+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Xenobiotics shape the physiology and gene expression of the active human gut microbiome.</a> Cell. 152 (1-2), 39-50 (2013).</li>
<li>Carmody, R. N., Turnbaugh, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-microbial+interactions+in+the+metabolism+of+therapeutic+and+diet-derived+xenobiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Host-microbial interactions in the metabolism of therapeutic and diet-derived xenobiotics.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (10), 4173-4181 (2014).</li>
<li>Lu, K., Mahbub, R., Fox, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenobiotics%3A+interaction+with+the+intestinal+microflora%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Xenobiotics: interaction with the intestinal microflora.</a> ILAR Journal. 56 (2), 218-227 (2015).</li>
<li>Taguer, M., Maurice, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+complex+interplay+of+diet%2C+xenobiotics%2C+and+microbial+metabolism+in+the+gut%3A+implications+for+clinical+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacology+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">The complex interplay of diet, xenobiotics, and microbial metabolism in the gut: implications for clinical outcomes.</a> Clinical Pharmacology & Therapeutics. 99 (6), 588-599 (2016).</li>
<li>Anubhav, D., Meenakshi, S., Shankar, G. T., Mande, S. S., Wilson, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenobiotic+metabolism+and+gut+microbiomes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Xenobiotic metabolism and gut microbiomes.</a> PLoS One. 11 (10), e0163099(2016).</li>
<li>Koppel, N., Rekdal, V. M., Balskus, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+transformation+of+xenobiotics+by+the+human+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Chemical transformation of xenobiotics by the human gut microbiota.</a> Science. 356 (6344), 1246-1257 (2017).</li>
<li>Hidalgo-Cantabrana, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+overview+and+biological+functions+of+exopolysaccharide+biosynthesis+in+Bifidobacterium+spp%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Genomic overview and biological functions of exopolysaccharide biosynthesis in Bifidobacterium spp.</a> Applied and Environmental Microbiology. 80 (1), 9-18 (2014).</li>
<li>Liu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+bifidobacteria-produced+exopolysaccharides+on+human+gut+microbiota+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Effects of bifidobacteria-produced exopolysaccharides on human gut microbiota in vitro.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. , 1-10 (2018).</li>
<li>Tang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbial+profile+is+altered+in+primary+biliary+cholangitis+and+partially+restored+after+UDCA+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Gut microbial profile is altered in primary biliary cholangitis and partially restored after UDCA therapy.</a> Gut. 67 (3), 534-541 (2018).</li>
<li>Kuczynski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+QIIME+to+analyze+16S+rRNA+gene+sequences+from+microbial+communities%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Using QIIME to analyze 16S rRNA gene sequences from microbial communities.</a> Current Protocols in Microbiology. 27 (1), 1-28 (2012).</li>
<li>Hiltemann, S. D., Boers, S. A., van der Spek, P. J., Jansen, R., Hays, J. P., Stubbs, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galaxy+mothur+Toolset+%28GmT%29%3A+a+user-friendly+application+for+16S+rRNA+gene+sequencing+analysis+using+mothur%5BTitle%5D)+AND+%22GigaScience%22%5BJournal%5D)">Galaxy mothur Toolset (GmT): a user-friendly application for 16S rRNA gene sequencing analysis using mothur.</a> GigaScience. , giy166 (2018).</li>
<li>Wang, Q., Garrity, G. M., Tiedje, J. M., Cole, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Na%C3%AFve+Bayesian+classifier+for+rapid+assignment+of+rRNA+sequences+into+the+new+bacterial+taxonomy%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Naïve Bayesian classifier for rapid assignment of rRNA sequences into the new bacterial taxonomy.</a> Applied and Environmental Microbiology. 73 (16), 5261-5267 (2007).</li>
<li>Schloss, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introducing+mothur%3A+open-source%2C+platform-independent%2C+community-supported+software+for+describing+and+comparing+microbial+communities%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Introducing mothur: open-source, platform-independent, community-supported software for describing and comparing microbial communities.</a> Applied and Environmental Microbiology. 75 (23), 7537-7541 (2009).</li>
<li>Bai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+on+the+in+vitro+effects+of+pseudomonas+aeruginosa+and+seaweed+alginates+on+human+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Comparative study on the in vitro effects of pseudomonas aeruginosa and seaweed alginates on human gut microbiota.</a> Plos One. 12 (2), e0171576(2017).</li>
<li>Zhang, Z., Xie, J., Zhang, F., Linhardt, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thin-layer+chromatography+for+the+analysis+of+glycosaminoglycan+oligosaccharides%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Thin-layer chromatography for the analysis of glycosaminoglycan oligosaccharides.</a> Analytical Biochemistry. 371, 118-120 (2007).</li>
<li>Simon, J. C., Marchesi, J. R., Mougel, C., Selosse, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-microbiota+interactions%3A+from+holobiont+theory+to+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Host-microbiota interactions: from holobiont theory to analysis.</a> Microbiome. 7 (5), (2019).</li>
<li>Postler, T. S., Ghosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+Holobiont%3A+how+microbial+metabolites+affect+human+health+and+shape+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Understanding the Holobiont: how microbial metabolites affect human health and shape the immune system.</a> Cell Metabolism. 26 (1), 110-130 (2017).</li>
<li>Kramer, P., Bressan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humans+as+superorganisms%3A+how+microbes%2C+viruses%2C+imprinted+genes%2C+and+other+selfish+entities+shape+our+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Perspectives+on+Psychological+Science%22%5BJournal%5D)">Humans as superorganisms: how microbes, viruses, imprinted genes, and other selfish entities shape our behavior.</a> Perspectives on Psychological Science. 10 (4), 464-481 (2015).</li>
<li>Malfertheiner, P., Nardone, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota%3A+the+forgotten+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Digestive+Diseases%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota: the forgotten organ.</a> Digestive Diseases. 29 (6), (2011).</li>
<li>Andoh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gut+microbiota+is+a+new+organ+in+our+body%5BTitle%5D)+AND+%22The+Japanese+journal+of+Gastro-Enterology%22%5BJournal%5D)">The gut microbiota is a new organ in our body.</a> The Japanese journal of Gastro-Enterology. 112 (11), 1939-1946 (2015).</li>
<li>Mika, A., Van, W. T., González, A., Herrera, J. J., Knight, R., Fleshner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+is+more+effective+at+altering+gut+microbial+composition+and+producing+stable+changes+in+lean+mass+in+juvenile+versus+adult+male+f344+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Exercise is more effective at altering gut microbial composition and producing stable changes in lean mass in juvenile versus adult male f344 rats.</a> PLoS One. 10 (5), e0125889(2015).</li>
<li>Hugenholtz, F., de Vos, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+human+intestinal+microbiota+research%3A+a+critical+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Mouse models for human intestinal microbiota research: a critical evaluation.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 75 (1), 149-160 (2018).</li>
<li>Takagi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-batch+fermentation+system+to+simulate+human+colonic+microbiota+for+high-throughput+evaluation+of+prebiotics%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A single-batch fermentation system to simulate human colonic microbiota for high-throughput evaluation of prebiotics.</a> PLoS One. 11 (8), e0160533(2016).</li>
<li>Ning, T., Gong, X., Xie, L., Ma, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota+analysis+in+rats+with+methamphetamine-induced+conditioned+place+preference%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota analysis in rats with methamphetamine-induced conditioned place preference.</a> Frontiers in Microbiology. 8 (1), 1620(2017).</li>
</ol>

Yazarlar çıkar çatışmaları olmadığını beyan ederler. Rakamlar Yin ve ark belirtilmiştir. 11. Yıl.

Son on yılda insan bağırsak mikrobiyota bileşimi ve faaliyetleri anlama yolunda önemli ilerleme yapılmıştır. Bu çalışmaların bir sonucu olarak, holobiont kavramı ortaya çıkmıştır, hangi konaklar ve ilişkili mikrobiyal topluluklar arasındaki etkileşimleri temsil eden, insanlar ve bağırsak mikrobiyota arasında olduğu gibi19,20. Ayrıca, insanlar bile şimdi süperorganizmalar21olarak kabul edilir , bağırsak mikrobiyota insanlarda fonksiyonel or...

Gut mikrobiyota insan bağırsaklarının işleyişinde ve konak sağlığında önemli bir rol oynamaktadır. Sonuç olarak, bağırsak mikrobiyota son zamanlarda hastalık önlemeve tedavi için önemli bir hedef haline gelmiştir 1. Ayrıca, bağırsak bakterileri konak bağırsak hücreleri ile etkileşim ve metabolik faaliyetler, besin kullanılabilirlik, bağışıklık sistemi modülasyonu ve hatta beyin fonksiyonu ve karar verme dahil olmak üzere temel konak süreçlerini düzenleyen2,3 . Endobiyotikler bakteri bileşimi ve bağırsak mikrobiyota çeşitliliği etkilemek için önemli bir potansiyele sahip. Böylece, endobiyotikler ve insan bağırsak mikrobiyota arasındaki etkileşimler artan araştırma dikkat çekti4,5,6,7,8,9.
Biyoetik ve ekonomik kısıtlamalar nedeniyle endobiyotikler ve insan bağırsak mikrobiyotası in vivo arasındaki etkileşimleri değerlendirmek zordur. Örneğin, endobiyotikler ve insan bağırsak mikrobiyotası arasındaki etkileşimleri araştıran deneyler Gıda ve İlaç İdaresi izni olmadan yapılamaz, ve gönüllü alımı pahalıdır. Sonuç olarak, hayvan modelleri genellikle bu tür araştırmalar için kullanılır. Ancak, hayvan modellerinin kullanımı farklı mikrobiyota kompozisyonları ve hayvan-vs insan ilişkili topluluklarda çeşitlilik nedeniyle sınırlıdır. Alternatif in vitro yöntemi endobiyotikler ve insan bağırsak mikrobiyota arasındaki etkileşimleri keşfetmek için toplu kültür deneyleri kullanımı ile.
Eksopolisakkaritler (EPSs) önemli ölçüde insan sağlığının bakımına katkıda prebiyotikler10. Farklı monosakkarit bileşimlerinden ve yapılarından oluşan farklı EPS'ler farklı işlevler sergileyebilir. Daha önceki analizler, mevcut çalışmada hedeflenen temsili ksenobiyotik olan Bif EPSs'nin bileşimini belirlemiştir11. Ancak, konakilişkili metabolik etkileri EPS bileşimi ve çeşitliliği açısından dikkate alınmamıştır.
Burada açıklanan protokol bif EPSs fermantasyon için 12 gönüllü gelen dışkı mikrobiyota kullanır. İnce tabaka kromatografisi (TLC), 16S rRNA geni yüksek iş yapma alanı sıralaması ve gaz kromatografisi (GC) eps ve insan bağırsak mikrobiyotası arasındaki etkileşimleri araştırmak için birlikte kullanılır. Bu protokolün in vivo deneylere göre belirgin avantajları düşük maliyetli ve konak metabolizmasından kaynaklanan etkilerden kaçınmadır. Ayrıca, açıklanan protokol endobiyotikler ve insan bağırsak mikrobiyotaarasındaki etkileşimleri araştırmak diğer çalışmalarda kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>0.22 ve mikro; m membran filtreler</td><td>Kırlangıç SLGP033RB</td><td></td><td>Numuneleri filtrelemek için kullanın</td></tr><tr><td>0,4 mm Elek</td><td>Thermo Fischer</td><td>308080-99-1</td><td>İnsan dışkı örneklerini hazırlamak için kullanın</td></tr><tr><td>5-bromo-4-kloro-3-indolil ve beta;-D-galaktopiranosid (X-Gal)</td><td>Solarbio</td><td>X1010</td><td>Renk plakası hazırlamak için kullanın</td></tr><tr><td>Asetic</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71251</td><td>SCFA</td></tr><tr><td>Agar</td> için standart numune<td>Solarbio</td><td>YZ-1012214</td><td>Orta</td></tr><tr><td>Anaerobik oda</td><td>Electrotek bileşeni ve nbsp;</td><td>AW 400SG</td><td>Bakteri kültürü ve fermantasyon</td></tr><tr><td>Otoklav</td><td>SANYO</td><td>MLS-3750</td> Bacto soya <td>tonunu otoklavlamak için kullanın</td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70178</td><td>Orta</td></tr><tr><td>Pişirme fırınının</td> bileşeni <td>Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd</td><td>DHG-9240A</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Eti Özü</td><td>Solarbio</td><td>G8270</td><td>Ortamın bileşeni</td></tr><tr><td>Bifidobacterium longum Reuter</td><td>ATCC</td><td>ATCC&reg; 51870&trade;</td><td>bakteri</td></tr><tr><td>Safra Tuzları</td><td>Solarbio</td><td>YZ-1071304</td><td>Orta</td></tr><tr><td>Butirik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>19215</td><td>bileşeni SCFA</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Solarbio</td><td>C7250</td><td>Orta</td></tr><tr><td>Kılcal kolon</td><td>tuz çözeltisi SHIMADZU-GL</td><td>InertCap FFAP (0,25 mm ve kez; 30 m ve kez; 0,25 &mu; m)</td> <td>SCFA tespiti için kullanılır</td></tr><tr><td>Kazein Pepton</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>39396</td><td>Orta</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>bileşeni Thermo Scientific</td><td>Sorvall ST 8</td><td>Santrifüjleme için kullanın</td></tr><tr><td>CoSO4.7H 2 O</td><td>Solarbio</td><td>C7490</td><td>Orta</td></tr><tr><td>CuSO'nun bileşeni 4.5H 2 O</td><td>Solarbio</td><td>203165</td><td>Orta</td></tr><tr><td>Sistein-HCl</td> bileşeni <td>Solarbio</td><td>L1550</td><td>Orta</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>bileşeni Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td>K vitamini hazırlamak için kullanın 1</td></tr><tr><td>FeSO4.7H 2 O</td><td>Solarbio</td><td>YZ-111614</td><td>Orta</td></tr><tr><td>Formik Asit</td><td>Sigma-Aldrich</td> bileşeni<td>399388</td><td>TLC</td></tr><tr><td>Gaz kromatografisi</td> için kullanılır <td>Shimadzu Corporation</td><td>GC-2010 Plus</td><td>SCFA tespiti için kullanılır</td></tr><tr><td>Cam beher</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB10050</td><td>Bulamaç hazırlama için kullanılır</td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Solarbio</td><td>G8760</td><td>Orta</td></tr><tr><td>Haemin</td><td>Solarbio</td><td>H8130</td><td>bileşeni Orta</td></tr><tr><td>HCl'nin</td> <td>bileşeniSigma-Aldrich</td><td>30721</td><td>Tamponların pH'ını ayarlamak için kullanılan temel çözelti</td></tr><tr><td>İzobütirik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>46935-U</td><td>SCFA</td></tr><tr><td>İzovalerik Asitler</td> için standart numune <td>Sigma-Aldrich</td><td>129542</td><td>SCFA</td></tr><tr><td>K2HPO<>sub4</td><td>Solarbio</td><td>D9880</td><td>Orta</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Solarbio</td> tuz çözeltisi için standart numune<td>P9921</td><td>Orta</td></tr><tr><td>KH2PO 4</td><td>Solarbio</td><td>bileşeni P7392</td><td>Orta</td></tr><tr><td>LiCl.3H2O</td><td>Solarbio</td><td>C8380</td><td>Renkli plaka hazırlamak için kullanın</td></tr><tr><td>Et Özü</td><td>Sigma-Aldrich-Aldrich</td><td>70164</td> Orta Metafosforik Asit Sigma-Aldrich'in <td>bileşeni</td></tr><tr><td></td><td></td><td>B7350</td><td>SCFA</td></tr><tr><td>MgCl için standart numune MgCl<>2.6H 2O</td><td>Solarbio</td><td>M8160</td><td>Orta</td></tr><tr><td>MgSO4.7H 2O</td><td>Solarbio</td><td>M8300</td> Orta <td></td></tr><tr><td>MISEQ</td><td>Illumina</td><td>MiSeq 300PE sisteminin</td> tuz çözeltisi <td>DNA dizilimi</td></tr><tr><td>MnSO4. H20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8179</td><td>Orta</td></tr><tr><td>Mupirosin</td><td>tuz çözeltisi Solarbio</td><td>YZ-1448901</td><td>Antibiyotik</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Solarbio</td><td>YZ-100376</td><td>Orta</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma-Aldrich 792519</td><td></td><td>Tuz çözeltisi Orta</td></tr><tr><td>NanoDrop ND-2000</td><td>tuz çözeltisi NanoDrop Teknolojileri</td><td>ND-2000</td><td>DNA konsantrasyonlarını belirleyin</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30620</td><td>Tamponların pH'ını ayarlamak için kullanılan bazik çözelti</td></tr><tr><td>n-bütanol</td><td>ChemSpider</td><td>71-36-3</td><td></td></tr><tr><td>NiCl2</td><td>Solarbio</td><td>746460</td><td>Ortamın bileşeni</td></tr><tr><td>Orcinol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>447420</td><td>Orsinol reaktiflerini</td></tr> <tr><td>hazırlamak için kullanılırPropiyonik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>94425</td><td>SCFA</td></tr><tr><td>QIAamp DNA Dışkı Mini Kiti</td> için standart numune <td>QIAGEN</td><td>51504</td><td>Bakteriyel genomik DNA</td></tr><tr><td>Özü Kullanıma hazır PBS tozu</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A610100-0001</td><td>Lipid süspansiyonunu hazırlamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Resazurin</td><td>Solarbio</td><td>R8150</td><td>Anaerobik Ekipman</td></tr><tr><td>Hızlı Vakum Konsantratörü</td><td>LABCONCO</td><td>CentriVap</td><td>EPS'leri hazırlamak için kullanın</td></tr><tr><td>Nişasta</td><td>Solarbio</td><td>YZ-140602</td><td>Karbon kaynağına kullanın</td></tr><tr><td>Sülfürik Asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>150692</td><td>Orsinol reaktiflerini</td></tr> <tr>hazırlamak için kullanılır<td>T100 PCR</td><td>BIO-RAD</td><td></td> 1861096 <td>PCR amplifikasyonu</td></tr><tr><td>TLC alüminyum levhalar</td><td>MerckMillipore</td><td>116835</td><td>TLC</td></tr><tr><td>Triptikaz Pepton</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z699209</td><td>için kullanılır Orta</td></tr><tr><td>Tripton</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>bileşeni T7293</td><td>Ortamın bileşeni</td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Solarbio</td><td>T8360</td><td>Ortamın tuz çözeltisi</td></tr><tr><td>Valeric</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>75054</td><td>SCFA Vitamini K için standart numune</td></tr><tr><td>1</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V3501</td> Orta <td></td></tr><tr><td>Vorteks osilatörünün</td> bileşeni <td>Scientific Industries</td><td>Vortex.Genie2</td><td>Maya Ekstraktını girdaplamak için kullanın</td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Y1625</td><td>Orta</td></tr><tr><td>ZnSO4.7H bileşeni2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z0251</td><td>Ortamın bileşeni</td></tr></tbody></table>

in vitro bath fermantasyon sistemleri kullanılarak endobiyotikler ve İnsan bağırsak mikrobiyotları arasındaki etkileşimlerin analizi

Analysis of Interactions between Endobiotics and Human Gut Microbiota Using In Vitro Bath Fermentation Systems

İnsan bağırsak mikroorganizmaları son zamanlarda insan sağlığını teşvik ve hastalıkları önlemede araştırma önemli bir hedef haline gelmiştir. Sonuç olarak, endobiyotikler (örneğin, ilaçlar ve prebiyotikler) ve bağırsak mikrobiyotaları arasındaki etkileşimlerin araştırılması önemli bir araştırma konusu haline gelmiştir. Ancak, insan gönüllüleri ile in vivo deneyler biyoetik ve ekonomik kısıtlamalar nedeniyle bu tür çalışmalar için ideal değildir. Sonuç olarak, hayvan modelleri in vivo bu etkileşimleri değerlendirmek için kullanılmıştır. Bununla birlikte, hayvan modeli çalışmaları hala biyoetik hususlar ile sınırlıdır, hayvanlarda farklı kompozisyonlar ve hayvanlarda mikrobiyota çeşitlemeleri ek olarak insanlara karşı. Alternatif bir araştırma stratejisi endobiyotikler ve in vitro bağırsak mikrobiyota arasındaki etkileşimlerin değerlendirilmesi sağlayan toplu fermantasyon deneyleri kullanımıdır. Bu stratejiyi değerlendirmek için bifidobakteriyel (Bif) eksopolisakkaritler (EPS) temsili ksenobiyotik olarak kullanıldı. Daha sonra, Bif EPS ve insan bağırsak mikrobiyotası arasındaki etkileşimler ince tabaka kromatografisi (TLC), 16S rRNA geni yüksek iş yapma lı analiz ve gaz kromatografisi gibi çeşitli yöntemlerle incelenmiştir. kısa zincirli yağ asitleri (SCFAs). Burada sunulan in vitro toplu fermantasyon sistemleri kullanarak endobiyotikler ve insan bağırsak mikrobiyotları arasındaki etkileşimleri araştırmak için bir protokoldür. Daha da önemlisi, bu protokol aynı zamanda diğer endobiyotikler ve bağırsak mikrobiyotaarasındaki genel etkileşimleri araştırmak için değiştirilebilir.

Mukoid EPS üretimi 72 saat anaerobik kuluçka dan sonra PYG plakaları üzerinde B. longum kültürlerde görülebilir (Şekil1A). Kültür kazımalarının santrifüjü, ardından etanol çökeltme ve kuruma, selüloz benzeri EPS toplanması ile sonuçlanır (Şekil 1B). Kurutulmuş EPS ve çözünür nişasta daha sonra fermantasyon kültürleri için karbon kaynağı olarak kullanılmıştır. TLC oligosakkarit ayırma ve saflık analizi nedeniyle düşük maliyet ve hızlı sonuç dönüş<sup cla...

Burada açıklanan in vitro toplu fermantasyon sistemleri kullanarak endobiyotikler ve insan bağırsak mikrobiyotları arasındaki etkileşimleri araştırmak için bir protokoldür.

In Vitro Bath Fermantasyon Sistemleri Kullanılarak Endobiyotikler ve İnsan Bağırsak Mikrobiyotları Arasındaki Etkileşimlerin Analizi

Human intestinal microorganisms have recently become an important target of research in promoting human health and preventing diseases. Consequently, ...

Protokolümüz yaygın olarak endobiyotikler ve insan bağırsak mikrobiyotası arasındaki etkileşimlerin yüksek iş ve hızlı tarama için kullanılabilir. Düşük maliyet ve konak metabolizmasından girişim etkileri kaçınma. Bu işlem tanıda kullanılma potansiyeline sahiptir.İlk olarak, BIF EPS çözün ve litre başına sekiz gram konsantrasyon yapmak için bir manyetik karıştırıcı üzerinde sıcak suda ayrı ayrı nişasta. Hazırlanan temel kültür ortamı, VI, kültür VI BIF çözüm yapmak için BIF EPS çözüm 100 mililitre ekleyin. Kültür VI nişasta çözüm yapmak için nişasta çözeltisi 100 mililitre ekleyin.Otoklav karbon kaynağı ile iki medya, ve bir kontrol olarak karbon kaynağı olmadan orta, 121 derece santigrat dakika için. Onları oda sıcaklığına soğumasını bekleyin ve haymen ve sistein ekleyin. Her ortamdan beş mililitrelik bir alt numuneyi kültür tüplerine aktarın.Ve anaerobik bir kuluçka makinesinde saklayın. Kalan ortamı dört santigrat derecede saklayın. İnsan dışkı örneği hazırlamak için, bir cam kabın pH yedi 0.1 molar anaerobik PBS 10 mililitre içine taze dışkı örnek bir gram aktarın.Sonra bir bulamaç elde etmek için karıştırmak için bir cam çubuk kullanın. Bir anaerobik odada, üç hazırlanan fermantasyon medya içine filtrelenmiş dışkı bulamaç 500 mikrolitre ekleyin, ayrı ayrı. Sonra, 37 derecede kuluçkaya yat.24 saat ve 48 saat sonra, anaerobik odada fermente örnekleri iki mililitre toplamak. Ve sonra odanın dışında 6000 kez G'de üç dakika santrifüj. Süpernatanları polisakkarit yıkım analizi ve kısa zincirli yağ asidi ölçümleri için kullanılacak yeni santrifüj tüplerine dikkatlice aktarın.Santrifüj peletlerini 80 derecede saklayın. Her önceden kaplanmış silika jel 60 TLC alüminyum plaka üzerine fermente supernatants 0,2 mikrolitre yükleyin ve yayMak için girdap. Sonra kuruması için sıcak hava ile bir saç kurutma makinesi kullanın.Örneklenmiş plakaların bir ucunu 20 mililitre formik asit:n-butanol:su çözeltisine, elektroforez neredeyse diğer uca kadar uzatAna kadar birkaç dakika batırın. Sonra ponpile plakaları çıkarmak ve bir saç kurutma makinesi ile kuru. Sonra boyamak için iki dakika orsinol reaktif plakaları ıslatın.Ve tekrar kuru. Üç dakika ısıtmak için 120 santigrat derece bir fırına plakaları aktarın. Daha sonra TLC bantlarını ölçerek EPS'nin bozulmasını değerlendirmek için plakanın fotoğraflarını çekin.EPS'nin SCFA üretimi üzerindeki etkilerini incelemek için, iki mililitrelik santrifüj tüplere bir mililitre fermente süpernatant ekleyin ve her numuneye metafosforik asitin yüzde 25 ağırlık/hacim yüzdesi 0,2 mililitre ekleyin. Girdap iyice çözümleri karıştırmak için. Karışımları 13,000 kez G'de 20 dakika santrifüj edin.Bu arada, tüplerde 120 milimolar asetik, propiyonik, bütirik, izobütirik, valerik ve izovalerik asitlerin çözeltilerini hazırlayın. Daha sonra her bir hazırlanan asit bir mililitre ekleyin 1.2 mililitre içeren 25 ağırlık / hacim yüzde metafosforik asit. Ve standart kokteyller olarak gaz kromatografi aletiörnek şişe içine yükleyin.Tüpleri santrifüjden çıkarve süpernatantları taze tüplere aktarın. Gaz kromatografisi analizi için süpernatantları yeni tüplere filtrelemek için 0,22 mikron filtre ile donatılmış bir şırınga kullanın. Bu çalışmada, pyg plakalarında bifidobacterium longum kültürlerinde 72 saat anaerobik kuluçka sonrası mukoid EPS üretimi gözlendi.Kültür kazımalarının santrifüjünün, ardından etanol çökemi ve kurutulması, selüloz benzeri EPS'lerin toplanmasıyla sonuçlandı. TLC analizi, insan dışkı mikrobiyotası tarafından nişasta nın bozulma oranının BIF EPS'den daha hızlı olduğunu ortaya koymuştur. Ana Koordinat Analizi kültür VI BIF gösterir, ve kültür VI nişasta grupları, birbirinden ayrı kümelenmiş, EPS ve nişasta durumu farklı insan dışkı bakteri toplulukları şekil gösteren.Etki boyutu üzerine Lineer Ayırıcı Analiz, collinsella, coprococcus, parabacteroides ve rhodopseudomonas cinsinin vi nişasta örneklerine göre kültür VI BIF örneklerinde anlamlı olarak daha bol olduğunu göstermektedir. Ayrıca, GC ölçümleri fermantasyon kültürlerinden ölçülen SCFA'ları asetik, propiyonik, izobütirik, bütirik, izovalerik ve valerik asitleri göstermektedir. 24 saat 48 saat fermantasyondan sonra, altı SCFA konsantrasyonundan beşi benzerdi ve kültür VI BIF, kültür VI nişastası ve kültür VI grupları arasında istatistiksel olarak farklı değildi.Ancak, proprionik asit konsantrasyonları kültür VI BIF grubunda kültür VI nişasta grubuna göre anlamlı olarak daha yüksekti, fermantasyon 48 saat sonra. Anaerobik koşullar altında bu deneyi yapın ve sonra en kısa sürede bir anaerobik kuluçka içine sabit örnekleri aktarın. Bazı TLC reaktifleri tehlikelidir.Onları kullanırken dikkatli olmalısın.

analysis-interactions-between-endobiotics-human-gut-microbiota-using

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kaynak: Ahmadi, S. ve diğerleri. Girişimsel rejimlerin insan dışkı mikrobiyotası üzerindeki etkilerini tahmin etmek için in vitro toplu kültür modeli. J. Vis. Exp. (2019).Bu video, bağırsak mikrobiyotasının metabolit üretimini incelemek için anaerobik koşullarda diyetle fermente edilebilir lifle fekal örnekleri inkübe yoluyla bağırsak mikrobiyal fermantasyonunu modelleme yöntemini göstermektedir.

In Vitro İnsan bağırsak mikrobiyotası ile kolonik fermantasyonu taklit etmek için parti kültürü modeli

Kaynak: Hu, Y. ve diğerleri. Endobiyotikler ile İnsan bağırsak mikrobiyotası arasındaki etkileşimlerin In vitro banyo fermantasyon sistemleri kullanılarak analizi. J. Vis. Exp. (2019)Bu video, insan dışkı mikrobiyotası tarafından ekzopolisakkaridlerin (EPS) parçalanmasını değerlendirmek için ince katmanlı kromatografi (TLC) kullanımını göstermektedir. Fermantasyon süpernatantlarındaki EPS parçaları, TLC kullanılarak boyut ve polariteye göre ayrılır, ardından karbonhidrat-spesifik boyama sonrası...

Bakteriyel ekzopolisakkarit bozunmasını değerlendirmek için ince katmanlı kromatografi yapılması

Kaynak: Hu, Y. et.al., Endobiyotikler ile İnsan Bağırsak Mikrobiyotası Arasındaki Etkileşimlerin In Vitro Banyo Fermantasyon Sistemleri Kullanılarak Analizi. J. Vis. Exp. (2019)Bu video, insan bağırsak mikrobiyotasının ekzopolisakkaritlere karşı kısa zincirli yağ asidi üretiminin analizini göstermektedir. Bu, mikrobiyal fermantasyon ürünlerinin ayrılmasını ve gaz kromatografisi kullanılarak nicelendirilmesini vurgular. Sonuçlar, ekzopolisakkaridlerin bağırsaktaki konak-patojen dinamiklerini...

Ekzopolisakkaridler üzerindeki İnsan Bağırsağı Mikrobiyal Aktivitesinin Araştırılması

Bu videoda, fare bağırsak dokusu parçaları ile spesifik bağırsak bakterileri arasındaki etkileşimleri incelemek için bir ex vivo bağırsak organ kültürü sistemi kurma metodolojisini açıklıyoruz. Cihaz, ilki bağırsak dokusu lümenini birbirine bağlayan ve içine spesifik bakteri süspansiyonunu sağlayan ve ikincisi ex vivo doku canlılığını korumak için cihazın kuyularına sürekli olarak ortam sağlayan iki çift giriş-çıkış portundan oluşur.

Konak-mikrobiyota etkileşimlerini incelemek için bir ex vivo bağırsak organ kültürü sistemi

Biz, insan bağırsak-on-a-chip microphysiological sistemi kullanılarak uzun bir süre için bir in vitro protokole ko-kültür bağırsak mikrobiyomları ve bağırsak villi açıklar.

içinde Microengineered İnsan Bağırsak Villi Oturma mikrobiyomu Co-kültür, bir Gut-on-a-Chip mikroakışkan Aygıt

Gut ana bilgisayar-mikrop etkileşimleri sentetik bir sözlü topluluk, vitro gastrointestinal sindirim ve ince bağırsak epitel modeli birleştirerek yeni bir yaklaşım kullanarak değerlendirildi. Biz hücre istilası patojenler ve çoklu türler biyofilmler değerlendirmek veya bile probiyotik formülasyonları Beka sınamak için adapte edilebilir bir yöntem mevcut.

Sentetik bir bakteriyel konsorsiyum Vitro Gut ana bilgisayar-mikrop arabirimde canlılık değerlendirilmesi

Burada, fizyolojik şartlarda mide bağırsak, taklit Biyoreaktörler bir dizi kullanarak gut microbiota kolon tüp bebek, kültür için bir iletişim kuralı mevcut.

Uygulama gelişmiş teknoloji insan Gut Microbiota Eğitim Kültür Vitro

Bu protokol, insan dışkı Mikrobiyota bir in vitro toplu kültür fermantasyon sistemi açıklar, inulin kullanarak (iyi bilinen bir prebiyotik ve en yaygın olarak okudu Mikrobiyota Modulators) belirli etkileri tahmin bu sistemin kullanımını göstermek için dışkı mikrobiota kompozisyon ve metabolik faaliyetler üzerinde müdahaleler.

Bir In vitro Batch-kültür modeli ınsan dışkı microbiota üzerinde girişimsel rejimlerin etkilerini tahmin etmek

Bu makale, ex vivo deneyleri için yeni bir bağırsak organ kültürü sistemi kullanarak konak mikrobiyom etkileşimlerini analiz etmek için benzersiz bir yöntem salamaktadır.

Konak-Mikrobiyota Etkileşimlerini Analiz Etmek için Bağırsak Bağırsak Organ Kültürü Sistemi

Bu protokol, anaerobik koşullar altında karmaşık dışkı topluluklarının sürekli akış kültürü için kullanılacak mini biyoreaktör dizilerinin montajını detaylandırır. Daha fazla analiz için reaktörlerin montajı, aşılanması ve numune alınması yöntemlerini de tartışıyoruz.

Karmaşık dışkı topluluklarının sürekli kültürü için biyoreaktör düzeneği

Minibiyoreaktör Dizisi (MBRA), mikrobiyom dinamiklerini, terapötik etkileşimleri ve çevresel faktörlere mikrobiyal tepkileri incelemek için paralel deneyleri destekleyen, karmaşık mikrobiyal toplulukların yetiştirilmesini sağlayan yüksek verimli, özelleştirilebilir, sürekli akışlı bir kültür sistemidir.

Minibiyoreaktör Dizisinin (MBRA) montajı ve kullanımı için güncellenmiş protokol

Keşfedin, in vitro toplu fermantasyon sistemleri kullanarak endobiyotikler ve insan bağırsak mikrobiyotları arasındaki etkileşimleri nasıl analiz edebilirsiniz. Bu yüksek verimli yöntem, tanısal araştırmalar için değerli bir araç sunar.

In Vitro Bath Fermantasyon Sistemleri Kullanılarak Endobiyotikler ve İnsan Bağırsak Mikrobiyotları Arasındaki Etkileşimlerin Analizi (Video) | JoVE Journal

In Vitro Bath Fermantasyon Sistemleri Kullanılarak Endobiyotikler ve İnsan Bağırsak Mikrobiyotları Arasındaki Etkileşimlerin Analizi

Daha fazla video keşfet