Sıçan içinde torasik omurilik Hemiseksiyon cerrahisi ve açık saha lokomotor değerlendirmesi

Sıçan torasik spinal hemiseksiyon lokomotor kurtarma ve tedavi etkinliğini nöral mekanizmaları araştırmak için tek taraflı omurilik hasarı değerli ve tekrarlanabilir bir modeldir. Bu makalede, hemiseksiyon prosedürü gerçekleştirmek ve bir açık alan arenada lokomotor performansını değerlendirmek için ayrıntılı bir adım adım kılavuz içerir.

Spinal hemisection geliştirdiğimiz lokomotif ölçeği ile yakalanabilir ölçülebilir ve ideal tekrarlanabilir lokomotor açıkları üretir. Bu tekniğin en büyük avantajı lezyonun seçiciliği ve tekrarlanabilirliğidir, bu da hayvanlar arasındaki davranışsal fenotiplerde değişkenliğe yol açar. Anesteziye dayalı yetişkin bir sıçanda parmak kıskacına yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, T-6 ile T-10 omurları örten traş lı deride 2,5 santimetrelik bir kesi yapın ve cildi ve yüzeysel yağı geri çekmek için künt makas kullanın.

Künt diseksiyon makası ve paravertebral kasları ayırmak için kendi kendini koruyan bir retraktör kullanın, T-7'nin dorsal yönünü T-9 omurlarına yerleştirin ve spinöz süreçleri ve vertebral laminaları ortaya çıkarmak için kalan dokuları debride ve temizlemek için ince çalgılar ve pamuk uçlu aplikatörler kullanın. Bir stereo mikroskop altında oranı yerleştirin ve dikkatle T-7 ve T-8 omurlar üzerinde iki taraflı yönlerini kesmek için hassas kemik kesiciler kullanın. T-8 ve T-9 vertebral laminae arasında dorsal bağ dokusunda bir milimetrelik yüzeysel kesim yapmak için bir milimetre yüzeysel kesim yapmak için bir neşter kullanın, altta yatan kordon zarar değil dikkat ve T-8 vertebra spinous süreci kaldırmak için kemik kesiciler kullanın.

T-7 spinous prosesine dikkatlice kenetlenmiş kavisli hemostatik forceps ile T-8 laminanın kaudal ucunu yaklaşık 20 derece döndürün ve kemik kesicileri T-8 laminanın altına yerleştirin. Lamina boyunca uzanan bir orta hat kesim yapmak, vertebral lamina medial sol ve sağ tarafında ki kesikleri omurilik ortaya çıkarmak için enine süreçlere tekrarlayarak laminektomi devam. Maruz kalan spinal kanal içine% 2 lidokain 100 mikrolitre damla ve T-8 spinal segmenti böşme dura kaldırmak için ince forceps ve iridektomi makas kullanın.

Maruz kalan kordoniçin lidokain yönetimini tekrarlayın ve maruz kalan T-7 ile T-9 omurları arasında uzanan spinous prosesler arasında oluşturulan bir merkez çizginin görselizasyonu ile kordonun orta çizgisini tanımlayın. Omurilik stabilize etmek için ince forceps kullanarak, hayvanın bir tarafına doğru orta hattan omurilik hemisect için bir diseksiyon bıçak kullanın, ventral tarafında ön spinal arter kesmek için dikkat. Iridektomi makas kullanarak, dikkatlice ventral-lateral kadranda uygun transekted ve steril bir yer sağlamak için omurilik lezyon tarafında kalan doku ile kesilmiş, yaklaşık altı iki milimetre tuzlu batırılmış sünger omurilik üzerinde maruz kalan boşluğuiçine.

Daha sonra, kas tabakalarını ve kesi bölgesinin etrafındaki deriyi kapatmak için 4-O poliglactin 910 sütür kullanın ve tam bir iyileşme kadar izlenmesi ile bir ısı lambası altında sıcak bir ortamda sıçan yerleştirin. Davranışsal testler için uygun deneysel zaman noktasında, sıçanlar arenaya alıştıktan sonra, video kaydına başlayın ve lokomotor aktiviteyi teşvik etmek için lokomotor aktiviteyi teşvik etmek için lokomotor koşulları altında lokomotor koşullar altında arenanın ortasına bir fare yerleştirin. Farenin en az dört dakika boyunca keşfetmesine izin verin, fareyi hareket hareketini teşvik etmek için 20 saniyeden uzun süre sabit kaldığında arenanın merkezine geri hareket ettirin.

Ardından, kaydedilen test oturumunun lokomotor performansını skorlayın. Eklem ekstremite hareketleri için, spontan hareket sırasında arka ekstremite eklem hareketlerini ayak bileği, diz ve kalça için ayrı ayrı, normal, hafif veya yok olarak skor. Ağırlık desteği için, arka ekstansör kasların sözleşme yeteneğini değerlendirmek ve ekstremite sıçan sabit olduğu zaman yerde olduğunda yüklü vücut ağırlığı nı desteklemek, yanı sıra aktif hareket sırasında.

Basamak pozisyonu için, fare sabit ve hareket sırasında arka bacak basamakkonumunu değerlendirin. Adımlama parametresini tamamlayın, ancak fare adımlama sırasında arka bacak pati yerleşiminin yönünü derecelendirerek ve adım lama sırasında salıncak fazının akışkanlığına ek olarak yerden kalkarak vücut ağırlığını destekleyebilirse tamamlayın. Ön ekstremite/arka ekstremite koordinasyon parametresini ancak test sırasında art arda dört adım oluşursa ve ekstremiteler vücut ağırlığını aktif olarak destekleyebilirse tamamlayın.

Hareket sırasında kuyruk pozisyonunu yukarı veya aşağı olarak değerlendirin. Sonra 20 puan maksimum her arka bacak için bir toplam sağlamak için her parametre bireysel puanları ekleyin. Deney grupları arasındaki lezyon büyüklüklerini değerlendirmek ve karşılaştırmak için, omuriliğin toplam kesitinin yüzdesi olarak lezyonun maksimal alanı omurilik kesitlerinin histolojik boyaması ile kolayca hesaplanabilir.

Örneğin, sol hemikordun sıçanlar arasında paylaşılan maksimal lezyon alanının oranının bir kaplaması ile bu temsili lezyon, kesitkordon alanının yaklaşık %47'si kadar ortalama lezyon boyutunu göstermiştir. Sol taraf hemiseksiyise sonrası ilk beş hafta boyunca bozulmak durumundaki lokomotor performanstaki bu temsili değişiklikler, ameliyattan sonraki ilk üç hafta boyunca hayvanın sol arka kısmında önemli bir lokomotion bozukluğu olduğunu göstermektedir. İşlem sonrası sağ arka ekte hareket düzeyinde bir iyileşme gözlenir.

Unutulmaması gereken en önemli şey, hemizeksiyon için spinal orta hattın doğru bir şekilde tanımlanması ve cerrahi sonrası uygun hayvan bakımı ve takibinin başarılı bir protokol için gerekli olduğudur. Bu davranışsal değerlendirme lokomotor kurtarma ilgi belirli bir soruyu ele almak için özel test ile tamamlamak için üst paretrecorvial indeksleri ekrana ideal bir protokol sağlar.