Name: Sıçan içinde torasik omurilik Hemiseksiyon cerrahisi ve açık saha lokomotor değerlendirmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-26T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Öğrenin sıçanlarda torasik omurilik hemiseksiyonu ve açık saha lokomotor değerlendirmesi yöntemini. Bu teknik omurilik yaralanması sonrası davranışsal iyileşmeyi niceliksel olarak ölçmek için güvenilir bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Kanada Sağlık Araştırmaları Enstitüleri tarafından destekleniyordu (CIHR; MOP-142288) için m. m. Fonds de Recherche Québec Santé (FRQS) bir maaş Ödülü tarafından desteklenen ve A. R. B FRQS bir burs tarafından desteklenmektedir.

Bu makalede açıklanan deneyler, Kanada hayvan bakımı Konseyi 'nin yönergelerine uygun olarak gerçekleştirildi ve Université de Montréal Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. torasik hemiseksiyon cerrahisi
<ol><li>Cerrahi için aseptik bir ortam sağlamak için uygun koruyucu ekipman (eldiven, maske ve elbise) giyin. Cerrahi alanı alkol mendilleri ile temizleyin ve cerrahi alan üzerinde Steril Cerrahi perdeler yerleştirin. Cerrahi tarlada Steril Cerrahi aletler ve yer.</li>
	<li>İsofluran gazının (% 3 indüksiyon, 0.5 − 3% bakım) ve oksijeni (1 L/dak) karışımı altında sıçan anestezi. Ayak tutam ve kornea refleks yanıtlarının yokluğunda doğrulayarak uygun cerrahi anestezik derinliği onaylayın. Tüm prosedür sırasında sıçan sürekli izlemek ve cerrahi anestezik derinliği korumak için gerekli anestezik teslimat miktarını ayarlayın.</li>
	<li>Kalça ve boyun arasındaki dorsal gövdeyi tıraş edin, sıçan ameliyatı cerrahi alana yerleştirin, kesi alanını alkol mendilleri ve proviodine çözeltisi ile dezenfekte edin ve 37 °C ' de çekirdek vücut sıcaklığının korunması, rektal tarafından izlenen bir geri besleme kontrollü ısıtma yastığı kullanarak Termometre.</li>
	<li>Onları susuz tutmak ve gerektiğinde ameliyat boyunca yeniden uygulamak için gözlerde oftalmik merhem yerleştirin.</li>
	<li>T6 − T10 vertebraları bir neşter ile taşarak deride 2,5 cm kesi yapın. Deri ve yüzeysel yağ künt Diseksiyon makas kullanarak geri çekin. Not: T6 − T10 vertebral segmentleri, 2ND torasik vertebra24veya kaudal tarafından belirgin bir titreşim başlayarak kafatasının tabanında dorsal omurilik segmentlerinin nazik palpasyonu ile ya rostrally tespit edilebilir 13. torasik vertebra hareket edecek en posterior yüzen kaburga palpasyonu.</li>
	<li>T7 − T9 vertebra 'nın dorsal yönünü künt diseksiyon makası ve kendinden istinat Retraktörü kullanarak eklemeli paravertebral kasları ayırın. Debride ve spinöz süreçleri ve vertebra laminalar ortaya çıkarmak için ince forseps ve pamuk uçlu aplemler kullanarak kalan doku temizleyin. Not: Bu, ve aşağıdaki adımlar büyük ölçüde mikroskobik görselleştirme (~ 5 − 15x) ile desteklenir.</li>
	<li>Hassas kemik kesicileri ile T7 ve T8 vertebraları üzerinde ardışık olarak (zygapophy T8 ve T9 vertebral laminalar arasındaki dorsal bağ dokusunu, bir neşter (1 mm derinlik) ile yüzeysel olarak yıkarak, underdöşeme kablosunu incitmemeye dikkat edin.</li>
	<li>T8 vertebra spinöz süreci kemik Trimmers ile çıkarın. , T7 spinöz süreç üzerinde dikkatlice yapışmış eğri hemostatik forseps ile, T8 laminun kaudal ucunu biraz rostrally (~ 20 °) döndürün, T8 lamina altında kemik kesicileri yerleştirin ve lamina boyunca uzanan bir orta çizgi kesme yapın. Omurilik ortaya çıkarmak için enine süreçlere vertebral lamina medial sol ve sağ tarafındaki kesikler tekrarlayarak laminektomi devam edin. Not: laminektomi oluşturulan tüm kemik parçalarını kaldırmak için dikkatli olun.</li>
	<li>Damla lidokain (% 2, 0,1 ml) maruz spinal kanalda ve ince forseps ve iridektomi makas kullanarak T8 spinal segment taşarak dura çıkarın. Lidokain yönetimini maruz kalan kordona tekrarlayın ve maruz kalan T7 − T9 vertebra arasında uzanan spinöz süreçler arasında oluşturulan bir merkez hattının görselleştirilmesi ile kablonun orta çizgisini belirleyin. Not: T7 ve T9 üzerinde spinöz süreçler ile birlikte, T8 üzerinde maruz dorsal kök ganglionlar da orta hat tanımlaması yardımcı olmak için kullanılabilir ve bir 30 G iğne sonraki hemisection yardımcı olmak için kablo orta çizgisinde yerleştirilebilir.</li>
	<li>Omuriliği orta hattan bir tarafa doğru, diseksiyon bıçağıyla hemisect. Ventral tarafında anterior spinal arter üzerinden kesmemeye dikkat edin (vertebral vücuda sağlam basınç uygulanmaz). İridektomi makas kullanarak, dikkatli bir şekilde omuriliğin lezioned tarafında kalan doku üzerinden kesilmiş ventrolateral çeyreği uygun şekilde geçiş sağlamak için.</li>
	<li>Omuriliğin üzerinde maruz kalan boşlukta steril tuz batırılmış hemostatik sünger (~ 6 x 2 mm) yerleştirin ve Kas katmanları (4-0 polyglactin 910) sütür. Sonra, kesi yerinin etrafında cilt dikiş.</li>
	<li>Cerrahiden hemen sonra yeterli analjezik (buprenorfik 0,05 mg/kg subkutan [s.c.]), antibiyotik (Enrofloxacin, 10 mg/kg s.c.) ve 5 cc lakslu zil sesi (intraperitoneal [IX]) ile kayıp sıvıları doldurmak sağlar.</li>
	<li>Faresi anesteziden çıkarın. Sıçan, sıcak bir ortamda bir Isıtma Pad veya lamba (~ 33 °C) altında hayvan tamamen uyanık kadar yerleştirin.</li>
	<li>İlk 3 cerrahi sonrası gün boyunca günlük ek analjezi sağlamak ve sürekli ağrı, kilo kaybı, yanlış mikturition, enfeksiyon, yara iyileşmesi ile ilgili sorunlar, ya da autophagia belirtileri izlemek.</li>
</ol>2. açık alan test prosedürü ve Lokomotor performans skorlama
<ol><li>1 hafta boyunca her gün fareler kolu ve iki 5-dk oturumlar için arenaya habituate önce almak için boyunca uyum sağlamasına için test öncesinde, Orta gövde nazikçe, açık alan ve test sırasında ölçüm güvenilirliği sağlamak için.</li>
	<li>Çevrimdışı analiz için test oturumlarını kaydetmek üzere dairesel Pleksiglas açık alan arenasına bakan zemin seviyesinde bir kamera yerleştirin (minimum 30 − 60 kare/sn).</li>
	<li>Video kaydı başlayın ve Lokomotor etkinliğini teşvik etmek için loş ışık koşullarında arenanın ortasına sıçan yerleştirin.</li>
	<li>Analiz için yeterli miktarda lokomotor nöbeti sağlamak için test seansına 4 dakika devam edin. Lokomotif teşvik etmek için 20 s 'den daha uzun süre sabit kaldığınızda arenanın merkezinde fareler alın ve değiştirin.</li>
	<li>Kaydedilmiş test oturumunun lokomotor performansını, verilen dereceli Puanlama anahtarınıTablo 1Aşağıdaki alt bölümlerde parametrelere göre. Not: her bir parametreyi, değişken oynatma hızı ve Frame-by-Frame Analizi (örneğin, VLC Media Player) için izin veren yazılımları kullanarak kaydedilmiş test oturumunun tekrar görüntülenmesi yoluyla ayrı olarak puanlanması yararlıdır.<ol><li>Eklem ekstremite hareketleri için, kendiliğinden lokomotif sırasında ayak bileği, diz ve kalça veya normal olarak (hareket aralığının yarısından fazlası, ödül = 2 ' den fazla), hafif (hareket aralığının yarısından daha az, ödül puanı verildi = 1) veya bulunmayan (ödül = 0).</li>
		<li>Ağırlık desteği için, taşekstremite ekstansiyon kaslarının sözleşme ve destek yüklü vücut ağırlığı yeteneğini değerlendirmek ne zaman ekstremite ayrı olarak sıçan sabit olduğu ve aktif lokomotif sırasında yerde. Ödül bir puan 1 kilo desteği mevcut olduğunda ve 0 puan kilo desteği olmadığında. Not: sabit ağırlık desteği aktif ağırlık desteği için bir ikramiye olarak kabul edilir.</li>
		<li>Basamak konumu için, sıçan sabit ve lokomotif sırasında arka ekstremite basamak konumunu değerlendirmek. Ödül bir puan 2 ne zaman hindekstremite basamak uzatılır, birbirinden ayrı aralıklı, ve tonik daha fazla içinde lokomotlu sırasında% 50 test döneminin (normal kabul). Rakam, basamak ağırlıklı olarak atonik kalırken, rakamlara 1 derece esnek ve puanı 0 olarak kalırsa bir puan kazandı.</li>
		<li>Stepping için, sadece sıçan adım sırasında vücut ağırlığını destekleyebiliyorsa bu parametreyi tamamlayın. İlk temas sırasında ve Adımlama sırasında salıncak aşamasının akışkanlığı ek olarak yerden asansörün sırasında hindekstremite pençe yerleştirme yönünü derecelendirerek adım değerlendir. Not: aşağıdaki alt bölümlerde ayrı olarak değerlendirilerek açıklanan bu parametre için 3 puan vardır: 1) ekstremite temas (dorsal/plantar yerleştirme) Paw yerleştirme eksenel oryantasyon, 2) ilk temas pençe yerleştirme boyuna yönü ve Asansör sırasında (vücut eksenine paralel veya dahili/dıştan döndürülmüş), ve 3) salıncak sırasında ekstremite hareketinin kalitesi (düzenli veya düzensiz).<ol>
<li>Ekstremite temasa Paw yerleştirme için, dorsal yerleşimler adımların% 50 daha fazla oluştuğunda 0 olarak ekstremite temas pençe yerleştirme eksenel yönünü puan. Not: plantar yerleştirme iletişim ve Asansör (adım 2.5.4.2), salıncak hareketi (adım 2.5.4.3) ve forelimb-hindekstremite koordinasyonu (adım 2.5.5) pençe oryantasyonu Puanlama için bir ikramiye olarak kabul edilir.</li>
			<li>Ekstremite temas ve Asansör Paw oryantasyon için, ödül 2 uzunlamasına pençe ve vücut eksenleri paralel ve 1 zaman ekstremite dış veya dahili olarak, hem ekstremite temas ve Asansör için ayrı olarak döndürüldüğünde bir puan.</li>
			<li>Salıncak hareketi için, ödül bir puan 2 zaman dallı eklemler Swing sırasında uyumlu ve düzenli bir şekilde hareket ve bir puan 1 zaman sarsıntılı veya eklem spazmodik hareketleri salıncak sırasında ortaya çıkar.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Forelimb-hindekstremite koordinasyonu için, bu parametreyi yalnızca test sırasında 4 ardışık adım oluşursa ve ekstremite aktif olarak vücut ağırlığını destekleyebiliyorsa tamamlayın. Ödül 3 ' ün koordinasyonu tutarlı olduğunda (adımların >% 90), 2 sık (adımların% 50 − 90 ' ı), 1 zaman zaman zaman (<% 50) veya olmadığında 0 (adımların% 0 ' ı). Not: forelimb-hindekstremite koordinasyonu bir düzenli değişim olarak tanımlanan hindekstremite ve vücudun aynı tarafında forelimb attı olmak arasında adım.</li>
		<li>Kuyruk pozisyonu için, lokomotif sırasında (yerden, puan = 1) ya da aşağı (yere dokunmadan, ödül = 0) olarak Kuyruk pozisyonunu değerlendir. Not: lokomotif sırasında yükseltilmiş bir kuyruk pozisyonu, sıçan içinde gövde istikrarı göstergesidir. Hemiseksiyon sonra, kuyruk normalde yakın veya gövde stabilitesi bozulmuş olarak yere dokunmadan tutulur.</li>
		<li>Her bir parametrede, en fazla 20 puanla her bir üst ekstremite toplamını sağlamak için bireysel puanları ekleyin. Not: 20 puanı normal lokomotor performansını gösterir. Skorlar < 20 lokomotor bozukluğu artan miktarlarda temsil ve 0 puanı ekstremite felç gösterir.</li>
	</ol></li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Hemiseksiyon tekniğinin büyük bir gücü, hayvanlar arasındaki histolojik ve davranışsal fenotiplerde azaltılmış değişkenliğe yol açan lezyonun seçicilik ve yeniden üretilebilirliği olan25. Uygun omurilik seviyesinde tek taraflı bir lezyonun sağlanması için, hem uygun vertebral segment hem de omurilik orta hattının doğru tespiti önemlidir. Hemiseksiyon işlemi sırasında kesme yönünde döndürmek için omurilik için bir eğilim olabilir gibi, bu prosedür sırasında her iki tarafında yerleştirilen ince fors...

Omurilik hasarı (SCı) motor, duyusal ve otonjik işlevdeki şiddetli bozukluklarla ilişkilidir. SCı 'nin deneysel hayvan modelleri, SCı patolojisinde yer alan anatomik ve fizyolojik olayları anlamak, onarım ve iyileşmenin nöral mekanizmalarını araştırmak ve potansiyel terapötik tedavinin etkinliğini ve güvenliğini görmek için değerli araçlardır. Müdahale. Sıçan, SCı araştırma1' de en sık kullanılan türdür. Rat modelleri düşük maliyetli, yeniden oluşturulması kolay, ve davranış testleri büyük bir pil fonksiyonel sonuçları değerlendirmek için kullanılabilir2. Sistem lokasyonlarında bazı farklılıklar olmasına rağmen, sıçan omuriliği, primatlar3,4de dahil olmak üzere büyük memeliler ile genel benzer sensorimotor fonksiyonları paylaşır. Fareler Ayrıca insan5ile ilgili SCI için benzer fizyolojik ve davranışsal sonuçları paylaşır. İnsan dışı primat ve büyük hayvan modelleri insan SCı6 ' nın daha yakın bir yaklaşımı sağlayabilir ve insan deneyinden önce tedavi güvenliğini ve etkinliğini kanıtlamak için önemlidir, ancak etik ve hayvan refahı nedeniyle daha az yaygın olarak kullanılır hususlar, giderler ve düzenleyici Gereksinimler7.
Rat transeksiyon SCI modelleri, laminektomi sonrası diseksiyon bıçağı veya iridectomi makası kullanılarak seçici bir lezyon ile omuriliğin hedeflenen kesilmesi ile gerçekleştirilir. Tam bir transeksiyon ile karşılaştırıldığında, sıçan kısmi transeksiyon daha az şiddetli yaralanmalara neden, daha kolay postoperatif hayvan bakımı, spontan lokomotor kurtarma, ve daha yakından modelleri SCı ağırlıklı olarak eksik olan insanlarda kısmi koruyucu omurilik ve Supraspinal orijinli yapıları bağlayan doku8. Tek taraflı bir hemiseksiyon tüm artan ve azalan yolları sadece bir tarafta bozar ve ölçülebilir ve son derece tekrarlanabilir lokomotor açıkları üretir ve altta yatan biyolojik mekanizmaların araştırılması artırılabilir. Hemiseksiyonun en belirgin fonksiyonel sonucu, birkaç hafta içinde lokomotor fonksiyonunun dereceli spontan geri kazanımı ile aynı tarafta ve lezyonun altında ilk ekstremite felç olduğunu,9,10, 11 ' i , 12. hemiseksiyon modeli özellikle hasarlı ve kalıntı yolları ve fonksiyonel kurtarma ile ilişkili devreler nöronal plastisite araştırmak için yararlıdır9,11,12, 13,14,15,16,17,18. Özellikle, torasik düzeyde yapılan hemiseksiyon, Yani, arka ekstremite lokomotisi kontrol eden spinal devrelerin üzerinde, lokomotor kontrolünde yapılan değişiklikleri araştırmak için özellikle yararlıdır. SCı19' dan sonra lezyon şiddeti ve Lokomotor kurtarma arasında doğrusal olmayan bir ilişki var olarak, fonksiyonel sonuçları değerlendirmek için uygun davranışsal testler deneysel modellerde çok önemlidir.
Fare2,20fonksiyonel lokomotor kurtarma belirli yönlerini değerlendirmek için davranış testleri kapsamlı bir pil mevcuttur. Birçok lokomotor testleri, sıçan olarak vücut ağırlığını desteklemek için çok devre dışı olduğu için SCı 'nin başlarında güvenilir tedbirler sağlamaz. Yaralanma sonrası erken açıkları duyarlı spontan lokomotor performansı bir ölçü, ve preoperatif eğitim veya özel ekipman gerektirmeyen, uygun zaman noktaları için lokomotor kurtarma izlemek için hangi hangi için yararlıdır özel davranış testi ek. Martinez açık alan değerlendirme puanı10, aslında sıçan servikal SCI sonra lokomotor performansını değerlendirmek için geliştirilen, bir 20-puan sıralı puanı spontan üstü lokomotiit sırasında küresel lokomotor performansını değerlendirmek bir açık alan. Puanlama, eklem ekstremite hareketi, ağırlık desteği, basamak pozisyonu, Adımlama yetenekleri, forelimb-hindekstremite koordinasyonu ve kuyruk gibi bir dizi lokomotor önleminin belirli parametrelerini değerlendiren bir dereceli Puanlama anahtarı kullanarak her ekstremite için ayrı olarak gerçekleştirilir Konum. Değerlendirme puanı, torasik çürüme21' den sonra lokomotor performansını değerlendirmek üzere tasarlanan Basso, Beattie ve Bresnahan (BBB) açık alan derecelendirme ölçeğinde elde edilir. Bu doğru ve güvenilir hem forelimb ve hindekstremite lokomotor işlevini değerlendirmek için adapte edilir, BBB hiyerarşik Puanlama ile sağlamlık değil farklı Puanlama parametrelerinin bağımsız değerlendirilmesi için izin verir ve doğrusal bir kurtarma sağlar profili10. Ayrıca, bbb karşılaştırıldığında, değerlendirme puanı hassas ve daha şiddetli yaralanma modelleri güvenilir10,11,20,22. Değerlendirme puanı, servikal10,12 ve torasik9 SCI tek başına ve travmatik beyin hasarı23ile kombinasyon halinde aşağıdaki sıçan lokomotor bozukluğu değerlendirmek için kullanılmıştır.
Biz burada kadın Long-Evans sıçan T8 vertebral düzeyinde bir torasik hemiseksiyon SCı gerçekleştirmek için ve açık alanda hindekstremite lokomotor kurtarma değerlendirmek için ayrıntılı bir adım adım protokol sunuyoruz.

<table><tbody><tr><td>Baytril</td><td>CDMV</td><td>11242</td><td></td></tr><tr><td>Künt diseksiyon makası</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>503669</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin hidrokarit</td><td>CDMV</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kamera lensi</td><td>Pentax</td><td>C31204TH</td><td>12.5-75mm, f1.8, 2/3 "format, C-mount</td></tr><tr><td>CMOS video kamera</td><td>Basler</td><td>acA2000-165uc</td><td>2/3" format, 2048 x 1088 piksel, 165 fps'ye kadar, C montajlı, USB3</td></tr><tr><td>Basınçlı oksijen gazı</td><td>Praxair</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pamuk uçlu aplikatörler</td><td>CDMV</td><td>108703</td><td></td></tr><tr><td>Hassas kemik düzelticiler</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>16109-14</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon bıçağı</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>10055-12</td><td></td></tr><tr><td>Dumont ince forseps (# 5</td><td>) Güzel Bilim Araçları</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Ethicon Vicryl 4/0 Menekşe Örgülü FS-2&nbsp; sütür (J392H)</td><td>CDMV</td><td>111689</td><td></td></tr><tr><td>Geri besleme kontrollü ısıtma yastığı</td><td>Harvard Aparatı</td><td>55-7020</td><td></td></tr><tr><td>Dişi Long-Evans sıçanları</td><td>Charles Nehri Laboratuvarları</td><td>Suş kodu: 006</td><td>225-250g</td></tr><tr><td>Jel Köpük</td><td>CDMV</td><td>102348</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli hemostat forseps</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>13003-10</td><td></td></tr><tr><td>Sıcak boncuk sterilizatörü</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>Hidrojel</td><td>70-01-5022</td><td>Şeffaf H20</td><td></td></tr><tr><td>İzofloran</td><td>CDMV</td><td>118740</td><td></td></tr><tr><td>Laktasyonlu Ringer çözeltisi</td><td>CDMV</td><td>116373</td><td></td></tr><tr><td>Lidokain (% 2)</td><td>CDMV</td><td>123684</td><td></td></tr><tr><td>İğne 30 ga</td><td>CDMV</td><td>4799</td><td></td></tr><tr><td>Açık alan</td><td></td><td></td><td>Özel Dairesel Pleksiglas arena 96 cm çap, 40 cm duvar yüksekliği</td></tr><tr><td>Oftalmik merhem</td><td>CDMV</td><td>110704</td><td></td></tr><tr><td>Kişisel bilgisayar&nbsp;</td><td></td><td></td><td>Listelenen kamera ile video kaydetmek için USB3 bağlantısı ile</td></tr><tr><td>Fizyolojik tuzlu</td><td>CDMV</td><td>1399</td><td></td></tr><tr><td>Proviodine</td><td>CDMV</td><td>4568</td><td></td></tr><tr><td>Kemirgen Sıvı Diyet</td><td>Bioserv</td><td>F1268</td><td></td></tr><tr><td>Kafa derisi bıçağı #11</td><td>CDMV</td><td>6671</td><td></td></tr><tr><td>Kendinden tutucu ekartör</td><td>World Precision Instruments</td><td>14240</td><td></td></tr><tr><td>Vannas iridektomi yaylı makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>Veteriner Anestezi Makinesi ve izofluan buharlaştırıcı</td><td>Dispomed</td><td>975-0510-000</td><td></td></tr><tr><td>VLC medya oynatıcı</td><td>VideoLAN</td><td></td><td>videolan.org/vlc</td></tr></tbody></table>

sıçan içinde torasik omurilik hemiseksiyon cerrahisi ve açık saha lokomotor değerlendirmesi

Thoracic Spinal Cord Hemisection Surgery and Open-Field Locomotor Assessment in the Rat

Omurilik hasarı (SCı), lezyonun altındaki motor, duyusal ve otonjik işlevdeki bozukluklara neden olmaktadır. Deneysel hayvan modelleri, SCı 'den sonra lokomotor iyileşmesi ile ilgili nöral mekanizmaları anlamak ve klinik nüfusa yönelik tedaviler tasarlamak için değerli araçlardır. Çok çeşitli türlerde kullanılan çürüme, sıkıştırma ve transeksiyon yaralanmaları da dahil olmak üzere çeşitli deneysel SCı modelleri vardır. Bir hemiseksiyon omuriliğin tek taraflı transeksiyonunu içerir ve tüm artan ve azalan yolları sadece bir tarafta bozur. Spinal hemiseksiyon, fonksiyonel iyileşme ile ilişkili kurtarılan ve hasarlı yolların nöral plastisite araştırılması için yararlı olan çürüme veya sıkıştırma tekniklerine kıyasla son derece seçici ve tekrarlanabilir bir yaralanma üretir. Biz fare içinde T8 vertebral düzeyde bir göğüs hemiseksiyon gerçekleştirmek için ayrıntılı bir adım-adım protokol sunuyoruz, birkaç üzerinde lokomotor fonksiyonunun dereceli spontan kurtarma ile lezyonun tarafında ilk felci sonucu Hafta. Ayrıca açık alanda fonksiyonel iyileşmeyi değerlendirmek için bir lokomotor Puanlama Protokolü sağlıyoruz. Lokomotor değerlendirmesi doğrusal bir kurtarma profili sağlar ve daha özel davranışsal testler yapmak için uygun zaman noktaları için hayvanları doğru şekilde ekrana almak için yaralanmadan sonra hem erken hem de art arda gerçekleştirilebilir. Sunulan hemiseksiyon tekniği, diğer transeksiyon modellerine ve türlerine kolayca adapte edilebilir ve Lokomotor değerlendirmesi, lokomotor fonksiyonuna karşı çeşitli SCı ve diğer yaralanma modellerinde kullanılabilir.

Hemiseksiyon tekniği ile yüksek derecede tutarlılık ile tekrarlanabilir lezyonlar oluşturulabilir. Deneysel gruplar arasında lezyonların boyutlarını değerlendirmek ve karşılaştırmak için, omuriliğin toplam kesit yüzdesi olarak lezyonun maksimal alanı spinal kord bölümlerin histolojik lekelenmesine kolayca hesaplanabilir. Şekil 1 , sol hemicord 'un temsili bir lezyonu ve çapraz parçalı kordon alanının% 47,3 ±% 4,0 ' inin ortalama lezyonu boyutu olan fareler arasında paylaşılan maksimum lezyon...

Sıçan torasik spinal hemiseksiyon lokomotor kurtarma ve tedavi etkinliğini nöral mekanizmaları araştırmak için tek taraflı omurilik hasarı değerli ve tekrarlanabilir bir modeldir. Bu makalede, hemiseksiyon prosedürü gerçekleştirmek ve bir açık alan arenada lokomotor performansını değerlendirmek için ayrıntılı bir adım adım kılavuz içerir.

Sıçan içinde torasik omurilik Hemiseksiyon cerrahisi ve açık saha lokomotor değerlendirmesi

Spinal cord injury (SCI) causes disturbances in motor, sensory, and autonomic function below the level of the lesion. Experimental animal models are ...

Spinal hemisection geliştirdiğimiz lokomotif ölçeği ile yakalanabilir ölçülebilir ve ideal tekrarlanabilir lokomotor açıkları üretir. Bu tekniğin en büyük avantajı lezyonun seçiciliği ve tekrarlanabilirliğidir, bu da hayvanlar arasındaki davranışsal fenotiplerde değişkenliğe yol açar. Anesteziye dayalı yetişkin bir sıçanda parmak kıskacına yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, T-6 ile T-10 omurları örten traş lı deride 2,5 santimetrelik bir kesi yapın ve cildi ve yüzeysel yağı geri çekmek için künt makas kullanın.Künt diseksiyon makası ve paravertebral kasları ayırmak için kendi kendini koruyan bir retraktör kullanın, T-7'nin dorsal yönünü T-9 omurlarına yerleştirin ve spinöz süreçleri ve vertebral laminaları ortaya çıkarmak için kalan dokuları debride ve temizlemek için ince çalgılar ve pamuk uçlu aplikatörler kullanın. Bir stereo mikroskop altında oranı yerleştirin ve dikkatle T-7 ve T-8 omurlar üzerinde iki taraflı yönlerini kesmek için hassas kemik kesiciler kullanın. T-8 ve T-9 vertebral laminae arasında dorsal bağ dokusunda bir milimetrelik yüzeysel kesim yapmak için bir milimetre yüzeysel kesim yapmak için bir neşter kullanın, altta yatan kordon zarar değil dikkat ve T-8 vertebra spinous süreci kaldırmak için kemik kesiciler kullanın.T-7 spinous prosesine dikkatlice kenetlenmiş kavisli hemostatik forceps ile T-8 laminanın kaudal ucunu yaklaşık 20 derece döndürün ve kemik kesicileri T-8 laminanın altına yerleştirin. Lamina boyunca uzanan bir orta hat kesim yapmak, vertebral lamina medial sol ve sağ tarafında ki kesikleri omurilik ortaya çıkarmak için enine süreçlere tekrarlayarak laminektomi devam. Maruz kalan spinal kanal içine% 2 lidokain 100 mikrolitre damla ve T-8 spinal segmenti böşme dura kaldırmak için ince forceps ve iridektomi makas kullanın.Maruz kalan kordoniçin lidokain yönetimini tekrarlayın ve maruz kalan T-7 ile T-9 omurları arasında uzanan spinous prosesler arasında oluşturulan bir merkez çizginin görselizasyonu ile kordonun orta çizgisini tanımlayın. Omurilik stabilize etmek için ince forceps kullanarak, hayvanın bir tarafına doğru orta hattan omurilik hemisect için bir diseksiyon bıçak kullanın, ventral tarafında ön spinal arter kesmek için dikkat. Iridektomi makas kullanarak, dikkatlice ventral-lateral kadranda uygun transekted ve steril bir yer sağlamak için omurilik lezyon tarafında kalan doku ile kesilmiş, yaklaşık altı iki milimetre tuzlu batırılmış sünger omurilik üzerinde maruz kalan boşluğuiçine.Daha sonra, kas tabakalarını ve kesi bölgesinin etrafındaki deriyi kapatmak için 4-O poliglactin 910 sütür kullanın ve tam bir iyileşme kadar izlenmesi ile bir ısı lambası altında sıcak bir ortamda sıçan yerleştirin. Davranışsal testler için uygun deneysel zaman noktasında, sıçanlar arenaya alıştıktan sonra, video kaydına başlayın ve lokomotor aktiviteyi teşvik etmek için lokomotor aktiviteyi teşvik etmek için lokomotor koşulları altında lokomotor koşullar altında arenanın ortasına bir fare yerleştirin. Farenin en az dört dakika boyunca keşfetmesine izin verin, fareyi hareket hareketini teşvik etmek için 20 saniyeden uzun süre sabit kaldığında arenanın merkezine geri hareket ettirin.Ardından, kaydedilen test oturumunun lokomotor performansını skorlayın. Eklem ekstremite hareketleri için, spontan hareket sırasında arka ekstremite eklem hareketlerini ayak bileği, diz ve kalça için ayrı ayrı, normal, hafif veya yok olarak skor. Ağırlık desteği için, arka ekstansör kasların sözleşme yeteneğini değerlendirmek ve ekstremite sıçan sabit olduğu zaman yerde olduğunda yüklü vücut ağırlığı nı desteklemek, yanı sıra aktif hareket sırasında.Basamak pozisyonu için, fare sabit ve hareket sırasında arka bacak basamakkonumunu değerlendirin. Adımlama parametresini tamamlayın, ancak fare adımlama sırasında arka bacak pati yerleşiminin yönünü derecelendirerek ve adım lama sırasında salıncak fazının akışkanlığına ek olarak yerden kalkarak vücut ağırlığını destekleyebilirse tamamlayın. Ön ekstremite/arka ekstremite koordinasyon parametresini ancak test sırasında art arda dört adım oluşursa ve ekstremiteler vücut ağırlığını aktif olarak destekleyebilirse tamamlayın.Hareket sırasında kuyruk pozisyonunu yukarı veya aşağı olarak değerlendirin. Sonra 20 puan maksimum her arka bacak için bir toplam sağlamak için her parametre bireysel puanları ekleyin. Deney grupları arasındaki lezyon büyüklüklerini değerlendirmek ve karşılaştırmak için, omuriliğin toplam kesitinin yüzdesi olarak lezyonun maksimal alanı omurilik kesitlerinin histolojik boyaması ile kolayca hesaplanabilir.Örneğin, sol hemikordun sıçanlar arasında paylaşılan maksimal lezyon alanının oranının bir kaplaması ile bu temsili lezyon, kesitkordon alanının yaklaşık %47'si kadar ortalama lezyon boyutunu göstermiştir. Sol taraf hemiseksiyise sonrası ilk beş hafta boyunca bozulmak durumundaki lokomotor performanstaki bu temsili değişiklikler, ameliyattan sonraki ilk üç hafta boyunca hayvanın sol arka kısmında önemli bir lokomotion bozukluğu olduğunu göstermektedir. İşlem sonrası sağ arka ekte hareket düzeyinde bir iyileşme gözlenir.Unutulmaması gereken en önemli şey, hemizeksiyon için spinal orta hattın doğru bir şekilde tanımlanması ve cerrahi sonrası uygun hayvan bakımı ve takibinin başarılı bir protokol için gerekli olduğudur. Bu davranışsal değerlendirme lokomotor kurtarma ilgi belirli bir soruyu ele almak için özel test ile tamamlamak için üst paretrecorvial indeksleri ekrana ideal bir protokol sağlar.

thoracic-spinal-cord-hemisection-surgery-open-field-locomotor

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Ardışık düşük doz X-ray taramaları kullanarak omurilik yaralanması sonrası kemik kaybı, yetişkin farelerin femur ve süresince tibialar boyuna muayene yapıldı. Tibia kemik kaybı, kemik kaybı femur kadar 40 gün yaralanma tespit edilmedi ise çalışma boyunca tespit edildi.

Roman kullanarak Spinal Kord Yaralanması sonra Fare Hind Ekstremite Kemik Kaybı Boyuna değerlendirilmesi, In vivo, Metodolojisi

Bu video, sıçanlarda torasik omurilik hemiseksiyonu yapmak için cerrahi prosedürü göstermektedir. T8 omurilik segmentini ortaya çıkarmak, bir taraftaki nöral yolları bozmak için hemiseksiyonu gerçekleştirmek ve ameliyat sonrası bakım sağlamak için adımları ana hatlarıyla belirtir.

Sıçanlarda Torasik Omurilik Hemiseksiyonu Ameliyatı Yapılması

Ciddi omurilik yaralanmaları sıklıkla doku defektlerine neden olur. Akut yaralanmadan sonra ve tam omurilik transeksiyonundan beş hafta sonra mekanik bir mikrokonektör sisteminin implantasyonu yoluyla sıçanlarda doku adaptasyonunu, rejeneratif yanıtları ve fonksiyonel iyileşmeyi teşvik etmek için bu tür boşlukları başarılı bir şekilde kapatmak için iki olasılık tanımlanmıştır.

Deneysel Stratejileri Akut ve Kronik Lezyon sonra Yaralı Omurilik Büyük Doku boşlukları doldurmak için

Burada lazer Doppler perfüzyon görüntüleme (LDPI) bir arada sunmak ve lazer Doppler perfüzyon (LDPM) spinal ölçmek için izleme kordon yerel kan akışı ve oksijen doygunluğu (SO2), omurilik tanıtmak için standart bir prosedür yanı sıra sıçan travmada.

Lazer Doppler görüntüleme ve izleme sıçan Spinal kord mikro analiz etmek için kullanma

Burada erişkin sıçanlarda9'uncu torasik düzeyde güvenilir bir spinal kord lateral hemiksiyon (HX) üretmek için yapılan cerrahi prosedürleri ve böyle bir tek taraflı yaralanma sonrası asimetrik açıkları tespit etmek için tasarlanmış nörodavranışsal değerlendirmeleri açıklıyoruz.

Erişkin Sıçanlarda Spinal Kord Lateral Hemisite ve Asimetrik Davranış Değerlendirmeleri

Bu iletişim kuralı modelimiz lokomotor koşu bandı etkinlik tabanlı eğitim için rats Medulla Spinalis Yaralanmalarında (SCI) ile gösterir. Hem dört ayaklı ve salt forelimb gruplarına ek olarak iki farklı tür denetim sigara eğitimli grup içerir. Müfettişler eğitim etkileri bu iletişim kuralını kullanan SCI fareler üzerinde değerlendirmek edebiliyoruz.

Etkinlik tabanlı eğitim omurilik ile bir koşu bandı üzerinde Wistar fareler yaralı

Bu protokol, fare modelinde stabil traneksiyon tipi omurilik yaralanmasıinin indüksiyonu için hassas bir laminektominin nasıl oluşturulacak larını, omurilik yaralanması araştırmaları için en az ikincil hasarın nasıl yaratılabildiğini açıklamaktadır.

Farelerde Tam Traneksiyon Tipi Spinal Kord Yaralanması İndüksiyonu

Otomatik yürüyüş analizi periferik sinir yaralanması ve omurilik kontüzyonu yaralanması kemirgen modellerinde fonksiyonel iyileşme değerlendirmek için uygun bir araçtır. Çeşitli deneysel modellerde lokomotor fonksiyonu değerlendirmek için tek bir kurulum gerektirmesine gerek kalırken, hayvanların titiz sert ve yumuşak gereç lerin ayarlanmave eğitimi son derece önemlidir.

Periferik Sinir veya Spinal Kord Kontüzyonu Yaralanması olan Kemirgenlerde Fonksiyonel İyileşmeyi Değerlendirmek için Otomatik Yürüyüş Analizi

Burada, sıçanlarda laminektomiyi ortadan kaldıran açık omurilik yaralanmasını modelleyen yeni ve hızlı bir teknik tanımlanmıştır. Lateral hemiseksiyon mikroskopla görüntülenirken yapılır. Teknik çok yönlüdür ve diğer hayvanların omuriliğinin servikal, torasik ve bel bölgelerinde de kullanılabilir.

Sıçanlarda Açık Omurilik Yaralanmalarını Modellemek için Minimal İnvaziv, Hızlı Omurilik Lateral Hemikesim Tekniği

Solunum komplikasyonları, servikal omurilik yaralanması (cSCI) olan bireylerde önde gelen ölüm nedenidir. cSCI'nin hayvan modelleri, mekanik değerlendirmeler ve klinik öncesi çalışmalar için gereklidir. Burada, sıçanlarda tek taraflı C2 spinal hemiseksiyon (C2SH) sonrası diyafram kası (DIAm) aktivitesinin fonksiyonel iyileşmesini değerlendirmek için tekrarlanabilir bir yöntem sunuyoruz.

Sıçanlarda Tek Taraflı Servikal Omurilik Hemiseksiyonu Sonrası Eupneik Diyafram Aktivitesinin Fonksiyonel İyileşmesinin Değerlendirilmesi

Bu cerrahi protokol, hedefe yönelik tedavi sağlamak için bir kemirgenin spinal subdural boşluğuna intratekal kateter yerleştirmek için adım adım bir kılavuzdur.

Tedavi sunumu için kemirgen omuriliğinin subdural boşluğuna erişim

Öğrenin sıçanlarda torasik omurilik hemiseksiyonu ve açık saha lokomotor değerlendirmesi yöntemini. Bu teknik omurilik yaralanması sonrası davranışsal iyileşmeyi niceliksel olarak ölçmek için güvenilir bir model sunar.

Sıçan içinde torasik omurilik Hemiseksiyon cerrahisi ve açık saha lokomotor değerlendirmesi

Daha fazla video keşfet