Name: Floresans canlı hücre mikroskobu ile mitotik ve meiotic Fission Maya nükleer dinamiklerinin incelenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-24T14:45:00.000+00:00
Duration: 12 min 4 s
Description: Öğrenin, canlı hücre mikroskobisiyle Schizosaccharomyces pombe'de mitotik ve meiyotik nükleer dinamikleri gerçek zamanlı olarak nasıl gözlemleyeceğinizi. Bu yöntem, toksik fiksasyon kullanmadan protein davranışını incelemenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar bu yazının hazırlanması için daha keyifli bir çaba yapmak için Natalia La Fourcade ve Mon LaFerte teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışmanın tamamlanması için onların anlayış, deney fikirleri ve ahlaki destek katkıda Forsburg Lab üyeleri sayesinde. Bu proje NIGMS R35 GM118109 tarafından SLF tarafından destekleniyordu.

<ol><li>Frigault, M. M., Lacoste, J., Swift, J. L., Brown, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-cell+microscopy%E2%80%93tips+and+tools%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Live-cell microscopy–tips and tools.</a> Journal of Cell Science. 122 (6), 753-767 (2009).</li>
<li>Green, M. D., Sabatinos, S. A., Forsburg, S. L. Microscopy techniques to examine DNA replication in fission yeast. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGreen%2C+MD+%22DNA+Replication%22">DNA Replication</a>. (13-41), Humana Press. New York, NY. (2015).</li>
<li>Lee, J. Y., Kitaoka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+beginner%E2%80%99s+guide+to+rigor+and+reproducibility+in+fluorescence+imaging+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">A beginner’s guide to rigor and reproducibility in fluorescence imaging experiments.</a> Molecular Biology of the Cell. 29 (13), 1519-1525 (2018).</li>
<li>Ohkura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meiosis%3A+an+overview+of+key+differences+from+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Biology%22%5BJournal%5D)">Meiosis: an overview of key differences from mitosis.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7, a015859(2015).</li>
<li>Sabatinos, S. A., Ranatunga, N. S., Yuan, J. P., Green, M. D., Forsburg, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+stress+in+early+S+phase+generates+apparent+micronuclei+and+chromosome+rearrangement+in+fission+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Replication stress in early S phase generates apparent micronuclei and chromosome rearrangement in fission yeast.</a> Molecular Biology of the Cell. 26 (19), 3439-3450 (2015).</li>
<li>Ding, D. Q., Matsuda, A., Okamasa, K., Nagahama, Y., Haraguchi, T., Hiraoka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meiotic+cohesin-based+chromosome+structure+is+essential+for+homologous+chromosome+pairing+in+Schizosaccharomyces+pombe%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">Meiotic cohesin-based chromosome structure is essential for homologous chromosome pairing in Schizosaccharomyces pombe.</a> Chromosoma. 125 (2), 205-214 (2016).</li>
<li>Okamoto, S. Y., Sato, M., Toda, T., Yamamoto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SCF+ensures+meiotic+chromosome+segregation+through+a+resolution+of+meiotic+recombination+intermediates%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">SCF ensures meiotic chromosome segregation through a resolution of meiotic recombination intermediates.</a> PloS One. 7 (1), e30622(2012).</li>
<li>Klutstein, M., Fennell, A., Fernández-Álvarez, A., Cooper, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+telomere+bouquet+regulates+meiotic+centromere+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The telomere bouquet regulates meiotic centromere assembly.</a> Nature Cell Biology. 17 (4), 458-469 (2015).</li>
<li>Okamoto, S. Y., Sato, M., Toda, T., Yamamoto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SCF+ensures+meiotic+chromosome+segregation+through+a+resolution+of+meiotic+recombination+intermediates%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">SCF ensures meiotic chromosome segregation through a resolution of meiotic recombination intermediates.</a> PloS One. 7 (1), e30622(2012).</li>
<li>Cooper, J. P., Watanabe, Y., Nurse, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fission+yeast+Taz1+protein+is+required+for+meiotic+telomere+clustering+and+recombination%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Fission yeast Taz1 protein is required for meiotic telomere clustering and recombination.</a> Nature. 392 (6678), 828-831 (1998).</li>
<li>Reyes, C., Serrurier, C., Gauthier, T., Gachet, Y., Tournier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aurora+B+prevents+chromosome+arm+separation+defects+by+promoting+telomere+dispersion+and+disjunction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Aurora B prevents chromosome arm separation defects by promoting telomere dispersion and disjunction.</a> Journal of Cell Biology. 208 (6), 713-727 (2015).</li>
<li>Mastro, T. L., Forsburg, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+meiotic+crossovers+and+reduced+genome+stability+in+absence+of+Schizosaccharomyces+pombe+Rad16+%28XPF%29%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Increased meiotic crossovers and reduced genome stability in absence of Schizosaccharomyces pombe Rad16 (XPF).</a> Genetics. 198 (4), 1457-1472 (2014).</li>
<li>Escorcia, W., Forsburg, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Destabilization+of+the+replication+fork+protection+complex+disrupts+meiotic+chromosome+segregation%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Destabilization of the replication fork protection complex disrupts meiotic chromosome segregation.</a> Molecular Biology of the Cell. 28 (22), 2978-2997 (2017).</li>
<li>Fennell, A., Fernández-Álvarez, A., Tomita, K., Cooper, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Telomeres+and+centromeres+have+interchangeable+roles+in+promoting+meiotic+spindle+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Telomeres and centromeres have interchangeable roles in promoting meiotic spindle formation.</a> Journal of Cell Biology. 208 (4), 415-428 (2015).</li>
<li>Forsburg, S. L., Rhind, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+methods+for+fission+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Yeast%22%5BJournal%5D)">Basic methods for fission yeast.</a> Yeast. 23 (3), 173-183 (2006).</li>
<li>Sabatinos, S. A., Forsburg, S. L. Molecular genetics of Schizosaccharomyces pombe. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSabatinos%2C+SA+%22Methods+in+enzymology%22">Methods in enzymology</a>. 470, Academic Press. 759-795 (2010).</li>
<li>Diffraction PSF 3D. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.optinav.info/Diffraction-PSF-3D.htm">http://www.optinav.info/Diffraction-PSF-3D.htm</a> (2019).</li>
<li>Optinav.info. Convolve ED. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.optinav.info/Convolve_3D.htm">http://www.optinav.info/Convolve_3D.htm</a> (2019).</li>
<li>Optinav.info. Iterative Deconvolve. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.optinav.info/Iterative-Deconvolve-3D.htm">http://www.optinav.info/Iterative-Deconvolve-3D.htm</a> (2019).</li>
<li>Ferreira, T., Rasband, W. S. ImageJ User Guide — IJ 1.46. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/docs/guide/146.html">https://imagej.nih.gov/ij/docs/guide/146.html</a> (2019).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>De Oliveira, F. M. B., Harris, M. R., Brazauskas, P., De Bruin, R. A., Smolka, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+DNA+replication+checkpoint+to+MBF+cell%E2%80%90cycle+transcription+reveals+a+distinct+class+of+G1%2FS+genes%5BTitle%5D)+AND+%22The+EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Linking DNA replication checkpoint to MBF cell‐cycle transcription reveals a distinct class of G1/S genes.</a> The EMBO Journal. 31 (7), 1798-1810 (2012).</li>
<li>Ostapenko, D., Burton, J. L., Solomon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+anaphase+promoting+complex+substrates+in+S.+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Identification of anaphase promoting complex substrates in S. cerevisiae.</a> PLoS One. 7 (9), e45895(2012).</li>
<li>Watanabe, Y., Nurse, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cohesin+Rec8+is+required+for+reductional+chromosome+segregation+at+meiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cohesin Rec8 is required for reductional chromosome segregation at meiosis.</a> Nature. 400 (6743), 461-464 (1999).</li>
<li>Zhu, Y. H., Hyun, J., Pan, Y. Z., Hopper, J. E., Rizo, J., Wu, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+the+fission+yeast+UNC-13%2FMunc13+protein+Ync13+in+late+stages+of+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Roles of the fission yeast UNC-13/Munc13 protein Ync13 in late stages of cytokinesis.</a> Molecular Biology of the Cell. 29 (19), 2259-2279 (2018).</li>
<li>Tay, Y. D., Leda, M., Goryachev, A. B., Sawin, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+global+Cdc42+guanine+nucleotide+exchange+factors+for+fission+yeast+cell+polarity+are+coordinated+by+microtubules+and+the+Tea1%E2%80%93Tea4%E2%80%93Pom1+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Local and global Cdc42 guanine nucleotide exchange factors for fission yeast cell polarity are coordinated by microtubules and the Tea1–Tea4–Pom1 axis.</a> Journal of Cell Science. 131 (14), jcs216580(2018).</li>
<li>Dudin, O., Bendezú, F. O., Groux, R., Laroche, T., Seitz, A., Martin, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+formin-nucleated+actin+aster+concentrates+cell+wall+hydrolases+for+cell+fusion+in+fission+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">A formin-nucleated actin aster concentrates cell wall hydrolases for cell fusion in fission yeast.</a> Journal of Cell Biology. 208 (7), 897-911 (2015).</li>
<li>Kurokawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+secretory+cargo+transport+within+the+Golgi+apparatus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Visualization of secretory cargo transport within the Golgi apparatus.</a> Journal of Cell Biology. , jcb-201807194 (2019).</li>
<li>Kraft, L. M., Lackner, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conserved+mechanism+for+mitochondria-dependent+dynein+anchoring%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">A conserved mechanism for mitochondria-dependent dynein anchoring.</a> Molecular Biology of the Cell. , mbc-E18 (2019).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Mitoz ve mayoz sırasında canlı hücre görüntüleme, veri edinme sırasında nükleer dinamikleri büyük ölçüde parçalama işlemi yapmadan incelemek için fırsat sunar. Ancak, hücrelerin çevresel gerilimlerin istenilen yoğunluklarına yetişmesini sağlamak için dikkat edilmelidir; ve Meiosis için, hücrelerin Terminal farklılaşma sırasında görüntülenmiş ve çok erken veya geç değil. Aşırı hücresel kalabalık, açlık ve uygunsuz büyüme sıcaklıkları, yeniden üretilemeyen gözlemlere katkıda bulunan ortak faktörlerdir. Buna ek olarak, gerinim yapımı sırasında, floresan etiketleri hedef genler fonksiyonları veya etkisi genel hücre Fitness müdahale yok test etmek için çok önemlidir. Floresan işaretçileri taşıyan suşların phenoypes yakından incelemek için başarısızlık benzer genotypes arasında tutarsız ve eşsiz sonuçlara neden olabilir.
Mikroskop agaroz pedleri montajı basit olmasına rağmen, onlar da değerli görüntüleme verileri elde etmek bir engel oluşturabilir. Agaroz pedleri oluşturmak, birbirine paralel üç mikroskop kaydırağı yerleştirmek, orta slaytta erimiş agaroz dağıtmak ve diğer slaytların üst kısmına transayet eden bir slayt koyarak kadar basittir. Ancak, dayanıklı, duruma özgü agaroz pedleri üretmek için Genişlik modifikasyonları sağlayan bir Slayt Maker aparatı birleştirmek için yararlıdır. Ped genişliği esnekliği sağlayan basit bir slayt yapımcısı bir platformdan (pipet uçları tutucu veya tezgah), iki mikroskop kaydırağı ve pad-Width ayar mekanizması (Şekil 1a) olarak hareket eden laboratuar bandı içerir. Tam ped kalınlığı görüntüleme süresi gereksinimleri, agaroz marka, sıcaklık, lamel magazini sızdırmazlık maddesi, buharlaşma oranı, vb bağlıdır. Böylece, teknik yeniden üretilebilirliği artırmak ve canlı hücre görüntüleme1,2,3kalitesini artırmak için veri edinme önce görüntüleme sistemi kalibre etmek önemlidir. Uzun süreli görüntü edinme sırasında Pad yüzeyi, rijitlik ve kompozisyon esastır. Agarose düşük arka plan floresan vardır, kolayca kalıplanabilir, ve uygun konsantrasyon, buharlaşma nedeniyle yapısal deformasyona karşı. Dahası, agaroz ile fisyon Maya medyasını birleştirerek görüntü kalitesini tehlikeye atmaz ve birden fazla mitoz ve mayoz döngüsünün genişletilmiş gözlem sağlar. Ayrıca, zaman atlamalı microkopi için herhangi bir hava kabarcıkları önlemek önemlidir. Agaroz pedleri içinde ve numunenin içinde, hava cepleri zaman içinde genişleyerek hücre değiştirme ve odak düzlemlerini bozmaya neden olur. Sağlanan hücreler verimli lamel magazini rotasyon tarafından yaymak, araştırmacılar birkaç nesilden mitotik süreçler ve sporulation nükleer füzyon Mayoz bölünmenin olaylar takip edebilirsiniz. Görüntüleme deneyleri için doğru Pad yapma ve seçme ana zaman alır, ancak bir kez elde, son derece bilgilendirici mikroskop gözlemlere katkıda bulunabilir.
Diğer yöntemlerle olduğu gibi, canlı hücre mikroskobu da teknik sınırlamalar içermeyen bir durumdur. Floresan etiketli proteinler kullanımı incelenebilir ne kapsamını sınırlamak deneyler sınırları tanıtır. Fotoğraf ağartma ve fotoğraf-toksisite uzun süreli görüntü edinme tipik sorunlarla. Onlar çok uzun veya çok sık kısa dalga boyları için hücreleri açığa değil tarafından karşı olabilir. GFP, CFP, YFP, MRFP ve DSRed içeren deneyler için, tipik floresan proteinleri fisyon Maya canlı hücre görüntülemede kullanılan, rutin deneyler için 5-15% uyarma ışık ve 100-500 MS pozlama süresi istihdam yaygındır. Ancak bu parametreler, araştırmacının belirli deneme gereksinimlerine göre değişir. Buna ek olarak, 60x hedef kullanarak 0,5 μm aralıkla 9-13 bölümden oluşan z-yığınları, bir fisyon Maya hücresinin kalınlığını çözmek için yeterlidir. Ayrıca, floresan işaretçileri doğru düzenleme veya hedef proteinlerin işlevini bozmaz veya sahte fenotürleri oluşturmak onaylamak önemlidir. Böylece, farklı araçlarla gözlemler için aynı hedef geni farklı floresan ve benzeşme etiketleri içeren suşları oluşturmak için tavsiye edilir. Ayrıca, deneysel parametrelerin deneyler arasında çoğaltılabileceğini ve toplanan verilerin Akış Analizi1,3için uygun olduğunu sağlamak araştırmacıların sorumluluğundadır. Hiçbir teknoloji, floresan sinyallerini tespit etmek için dikkatli gözlem ve doğrusallık titiz muayene ile titizlikle doğrulama deneysel sistemlerin zaman test uygulama değiştirebilirsiniz.
Son olarak, RAW görüntüleri değiştirmez biçimlerde mikroskobik veri analiz etmek çok önemlidir. Fiji ham veri ölçümleri izlemek için mükemmel dokümantasyon araçları sağlar ve araştırmacılar tek bir oturumda farklı hücre parametrelerini incelemek için izin verir. Bu özelliklerin yanı sıra, online öğreticiler ve kapsamlı literatür kapsamı zenginliği, Fiji 'nin mitozis ve Meiosis 'teki fisyon Maya 'nın nükleer dinamiklerini tarif eden canlı hücre görüntüleme verilerini ölçmek, analiz etmek ve sunmak için önemli bir araç haline getirmek.

Canlı hücre mikroskobu, araştırmacılar nükleer dinamikleri fisyon Maya hücrelerini öldürmeden incelemek ve ölümcül fiksatif ve lekeleri ihtiyacını ortadan kaldırır sağlar. Membran ve sitozin yanı sıra kromozom çoğaltma, yeniden kombinasyon ve ayrım gibi önemli olaylara katılan floresan etiketli proteinlerin istikrar, hareket, lokalizasyonu ve zamanlamasını gözlemlemek mümkündür. Hareket. Hücre canlılığı ve toksik olmayan sinyal tespiti koruyarak, minimal fizyolojik saldırı vardır. Düzgün şekilde gerçekleştirildiğinde, bu mikroskobik Yöntem, genişletilmiş teknik elleçleme veya sahte kimyasal reaktiviteye kaynaklanan karıştırıcı efektleri azaltabilir. Ayrıca, bir deney sırasında, araştırmacılar fisyon Maya beslenme ve stres durumları, proliferatif verimlilik ve uygunsuz görüntüleme parametreleri veya anormal Hücre fizyolojisi 1 gösteren apoptotik durum ilgili gözlemler yapabilirsiniz ,2,3.
Mitoz ve mayoz nükleer ve hücresel bölünme ile karakterize edilir. Meiosis 'te, mitozun aksine, ebeveyn hücrelerinin kız hücrelerini4' e yükselmesine karşın genetik içerik yarıya düşüdür. Canlı hücre görüntüleme uzamsal ilişkinin yanı sıra geçici bir boyut sağladığından, çok sayıda hücre gerçek zamanlı olarak incelenebilir. Canlı hücre mikroskobu, araştırmacılar Histonlar için floresan etiketleri kullanarak nükleer bölünme dinamiklerini incelemek için sağladı5, cohesin altbirimden6, mikrotübüller7, centromeres8, kinetochores9, bileşenleri mil direği gövdesi (SPB)10ve kromozom yolcu KOMPLEKSININ (CPC)11' i. Kromozom ayrışma cihazının dışında, canlı hücre görüntüleme de gerekli proteinlerin davranışını ele geçirdi, ancak doğrudan kromozom ayrımcılık dahil değil. Bu proteinlerin fonksiyonu çoğaltmayı etkileyen gösterilmiştir, kromozom rekombinasyon, nükleer hareket, ve mikrotübüller için kromozom Eki12,13,14. Bu gözlemler, fonksiyonel bileşenleri biyokimyasal veya genetik muayene için etkin olmayan hücresel olayların daha iyi anlaşılması için katkıda bulundular. Mikroskopi teknolojisindeki yeni gelişmeler ile, kötü çözünürlük, photobleaching, fototoksisite ve odaklama stabilitesi gibi sınırlamalar, böylece mitotik ve Mayoz bölünmenin nükleer dinamiklerin daha iyi gerçek zamanlı gözlemlerini kolaylaştıracak, azaltır1, 2,3. Meiosis, zamanlamaya yakın dikkat gerektiren bir Terminal farklılaşma yolu olduğu için özellikle zordur.
Bu protokolün amacı, mitoz ve Meiosis 'te gerçek zamanlı fisyon Maya nükleer dinamiklerini incelemek için nispeten basit bir yöntem sunmaktan ibaret. Bunu başarmak için, çevresel strese maruz kalmadı hücreleri kullanmak için gerekli olan, uzun süreli görüntüleme dayanabilir agaroz pedleri hazırlamak, ve tek hücreli dinamikleri görselleştirme kolaylaştırmak yoğunluklarda hücreleri monte. Dahası, bu protokol nükleer kinetik (Hht1-MRFP veya Hht1-Gfp), kromozom segregasyon (Sad1-DSRed), siterit dinamikleri (Atb2-MRFP), transkripsiyonel için yararlı belirteçleri olarak hizmet floresan etiketli protein taşıyan hücrelerin kullanımı yapar G1/S (Tos4-Gfp) ve mayoz (Rec8-Gfp) uyumu stabilitesi aktivasyonu. Bu yöntem, belirli hücresel süreçlerle ilgili soruları ele almak için farklı kombinasyonlarda kullanılabilecek ek nükleer ve sitosolik işaretçileri (Tablo ı) da tanıtır. Ayrıca, temel Fiji araçları araştırmacılar canlı hücre görüntüleri işlemek ve veri farklı türde analiz yardımcı olmak için özellikli. Bu yaklaşımın gücü, mitozis ve Meiosis 'in doğru şekilde yürütülmesi için integral olan süreçleri açıklamak için protein dinamiklerinin, zamanlamanın ve istikrarı gerçek zamanlı gözlemlerin kullanımından kaynaklanıyor.

<table><tbody><tr><td>60x Plan Apochromat objektif lens</td><td>Olympus</td><td>AMEP4694</td><td></td></tr><tr><td>Adenin</td><td>Sigma</td><td>A-8751</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>7558B</td><td>IB4917-10 kg</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Sigma</td><td>A9539-500g</td><td></td></tr><tr><td>Dansöz döndürücü</td><td>Stovall</td><td>ABD Patenti #4.702.610</td><td></td></tr><tr><td>Biotin</td><td>Sigma</td><td>B-4501</td><td></td></tr><tr><td>Borik asit</td><td>Sigma</td><td>B-6768-5kg</td><td></td></tr><tr><td>CaCl<alt>2</alt> ve orta nokta; 2H < alt > 2 < / alt >0,</td> <td>Sigma</td><td>C3306-500G</td><td></td></tr><tr><td>Sitrik asit</td><td>Sigma</td><td>C-0759</td><td></td></tr><tr><td>Convolve 3D yazılım eklentisi</td><td>OptiNav, Inc.</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>CoolSnap HQ CCD kamera</td><td>Roper</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Kapak kayması</td>, <td>VWR</td><td>16004-302</td><td></td></tr><tr><td>CuSO4&middot; 5H20,END</td><td></td> <td>CX-2185-1</td><td></td></tr><tr><td>DeltaVision evrişim dekonvolüsyon floresan mikroskobu</td><td>GE Healthcare/Applied Precision</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Kırınım PSF 3D yazılım eklentisi</td><td>OptiNav, Inc.</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Edinburgh minimal orta (EMM) Notrogen</td><td>Sunrise</td><td>2023; 1kg</td><td></td></tr><tr><td>FeCl<alt>2</alt> ve orta nokta; 6H2O</td><td>END</td><td>FX9259-04</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Sigma</td><td>G-7021</td><td></td></tr><tr><td>Isı plakası</td><td>Barnstead</td><td>Thermo Lyne</td><td></td></tr><tr><td>Histidine</td><td>Sigma</td><td>H8125-100g</td><td></td></tr><tr><td>Huygens evrişim yazılımı</td><td>SVI</td><td>yok</td><td></td></tr><tr><td>Imaris evrişim çözme yazılımı</td><td>Bit düzlemi</td><td>yok</td><td></td></tr><tr><td>Kuluçka</td><td>Kabuğu laboratuvarı</td> <td># 3015</td><td></td></tr><tr><td>Inositol</td><td>Sigma</td><td>I-5125</td><td></td></tr><tr><td>Yinelemeli Deconvolve 3D yazılım eklentisi</td><td>OptiNav, Inc.</td><td></td><td></td>yok</tr><tr><td>KCl</td><td>Mallinckvadt</td><td>6858-04</td><td></td></tr><tr><td>Lanolin</td><td>Sigma</td><td>L7387-1kg</td><td></td></tr><tr><td>Lösin</td><td>Sigma</td><td>L8912-100g</td><td></td></tr><tr><td>Lizin</td><td>Sigma</td><td>L5626-500g</td><td></td></tr><tr><td>Malt özü (ME)</td> <td>MP</td><td>4103-032</td><td></td></tr><tr><td>MgCl < alt > 2 < / alt > ve orta nokta; 6H20</td><td>AMRESCO</td><td>0288-500G</td><td></td></tr><tr><td>MetaMorph</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop slaytları</td><td>VWR</td><td>16004-422</td><td></td></tr><tr><td>MnSO4,</td><td>Mallinckvadt</td><td>6192-02</td><td></td></tr><tr><td>Molibdik asit</td><td>Sigma</td><td>M-0878</td><td></td></tr><tr><td>Na2S04 </td><td>Mallinckvadt</td><td>8024-03</td><td></td></tr><tr><td>Nikotinik asit,</td> <td>Sigma</td><td>N-4126</td><td></td></tr><tr><td>Pantotenik asit</td><td>Sigma</td><td>P-5161</td><td></td></tr><tr><td>Parafin mumu</td><td>Fisher</td><td>s80119WX</td><td></td></tr><tr><td>Pombe glutamat ortamı (PMG)</td><td>Sunrise</td><td>2060-250</td><td></td></tr><tr><td>softWorx v3.3 görüntü işleme yazılımı</td><td>GE Healthcare</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Sporülasyon Orta toz</td><td>Gündoğumu</td><td>1821-500</td><td></td></tr><tr><td>Sıcaklık kontrollü santrifüj</td><td>Beckman</td><td>Allwgra 6KR xentrifuge</td><td></td></tr><tr><td>Urasil</td><td>AMRESCO</td><td>0847-500g</td><td></td></tr><tr><td>Vazelin</td><td>Equaline</td><td>F79658</td><td></td></tr><tr><td>Maya özü</td><td>EMD</td><td>1.03753.0500</td><td></td></tr><tr><td>Maya özü artı takviyeleri (EVET)</td><td>Gündoğumu</td><td>2011-1kg</td><td></td></tr><tr><td>ZnSO<alt>4</alt>&orta nokta; 7H2O</td><td>J.T.Baker</td><td>4382-04</td><td></td></tr></tbody></table>

floresans canlı hücre mikroskobu ile mitotik ve meiotic fission maya nükleer dinamiklerinin incelenmesi

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

Canlı hücre görüntüleme, yaşam hücrelerinde hücre ve protein dinamiklerini incelemek için kullanılan bir mikroskobik tekniktir. Bu görüntüleme yöntemi toksik değildir, genellikle hücre fizyolojisine müdahale etmez ve minimal deneysel elleçleme gerektirir. Düşük düzeyde teknik girişim, araştırmacıların birden fazla mitozis döngüsü boyunca hücreler incelemelerine ve başından sonuna kadar mayoz gözlemlemek için olanak sağlar. Yeşil floresan protein (GFP) ve kırmızı floresan protein (RFP) gibi floresan etiketleri kullanarak, araştırmacılar fonksiyonları transkripsiyon, DNA çoğaltma, uyum ve ayrım gibi süreçler için önemli olan farklı faktörler analiz edebilirsiniz. Fiji (ücretsiz, optimize edilmiş ımagej sürümü) kullanarak veri analizi ile birleştiğinde, canlı hücre görüntüleme, protein hareketini, lokalizasyonu, stabilitesi ve zamanlamanın yanı sıra nükleer dinamikleri ve kromozom ayrımcılık yöntemlerini değerlendirmenin çeşitli yollarını sunar. Ancak, diğer mikroskopi yöntemleri ile olduğu gibi, canlı hücre görüntüleme ışık iç özellikleri ile sınırlıdır, yüksek büyütmelerde çözünürlük gücüne bir sınır koymak, ve aynı zamanda yüksek dalga boyu fotobleaching veya fototoksisite duyarlıdır Frekanslar. Ancak, bazı bakım ile, araştırmacılar dikkatlice doğru koşulları, suşları ve floresan belirteçleri mitotik ve Mayoz bölünmenin olayların uygun görselleştirme için izin seçerek bu fiziksel sınırlamaları bypass olabilir.

Burada, araştırmacıların mitoz ve Meiosis sırasında yaşayan fisyon Maya hücrelerinde protein davranışları ve nükleer dinamikleri incelemesini sağlayan toksik olmayan bir mikroskopi yöntemi olan canlı hücreli görüntüleme sunuyoruz.

Floresans canlı hücre mikroskobu ile mitotik ve meiotic Fission Maya nükleer dinamiklerinin incelenmesi

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...

Canlı hücre mikroskopisi araştırmacıların mitoz ve mayoz bölünmede fisyon mayası nükleer dinamiklerini gerçek zamanlı olarak incelemelerine olanak tanır. Bu yöntemin gücü toksik fiksatifler ve lekeler ihtiyacını ortadan kaldırır normal fizyolojik koşullar altında yaşayan hücrelerde nükleer süreçlerin incelenmesi geliyor. Bu teknik, genetik veya biyomekanik manipülasyona uygun olmayan protein zamanlaması, stabilitesi ve hareketliliği ile ilgili soruları ele alır.Görüntülemeden önce fizyon maya hücrelerinin sağlığına ve zindeliyetine dikkat etmek önemlidir. Deneyler arasında sonuçların tutarlılığını sağlamak için her zaman morfolojiyi ve büyüme özelliklerini inceleyin. Bu protokol, doğru bir şekilde ustalaşıldığında uzun süreli canlı hücre görüntülemesinin tutarlılığını ve tekrarlanabilirliğini artırabilecek mikroskop slaytlarını hazırlamanın nispeten basit bir yolunu gösterir.Hücre maddesini kriyojenik uyandırma plakasından almaya başlamak için, EVET plakaları üzerine yerleştirin ve kriyojenik korumadan fisyon mayası suşlarını uyandırmak için maya genotipine bağlı olarak 25 santigrat veya 32 santigrat derece kuluçkaya yatırın. Daha sonra uyanmış fisyon maya suşları bireysel kolonilerden hücreleri almak ve EVET sıvı orta üç mililitre içeren test tüpleri içine aşılamak için steril bir döngü kullanın. Tüpleri 150 ila 220 rpm'de bir çalkalayıcıya yerleştirin ve bir gecede 25 veya 32 santigrat derecede nisbık büyüyün ve istenilen optik yoğunluk okuması 0,7 ila 1,0 arasında geç günlük fazı elde edin.Kültürün 10 mikrolitresini mikroskop slaytına aktarın. Bir coverslip koyun ve uygun hücre morfolojisi ve beslenme durumu kontrol etmek için bir mikroskop altına yerleştirin. Mitoz veya kızamık analizi için bir mikroskop slayt kurmak için ilk 500 mililitrelik şişe ya minimal orta artı mitoz veya sıvı sporulating orta için takviyeleri içeren agarose iki gram ekleyin.Agarose çözeltisini mikrodalga fırında 10 saniyelik artışlarla %60 güçte ısıtın veya kabı 55 derece lik su banyosuna 10 dakika ısıtın. Verimli erime sağlamak için çözeltiyi döndürün. Bir pipet ucu tutucuüzerinde iki mikroskop slaytı ayarlayın ve üst teki slayt, çapraz şekil oluşturmayı desteklemek için her iki uçta da iki laboratuvar bandı yığınına dayanıyor.Uzun süreli görüntüleme için aşağıdaki adımlarda kalın bir yastık oluşturmak için iki slayt arasındaki mesafeyi iki milimetreden büyük olarak ayarlayın. Erimiş agarose'u oda sıcaklığında bir dakika soğuttuktan sonra üstteki kaydırağı çıkarın ve bir nokta yapmak için alt kaydırağa 50 ila 100 mikrolitre dağıtmak için geniş delikli pipet ucu kullanın. Agarose soğumadan önce yaklaşık bir ve çapı iki santimetre bir yayNif ped oluşturmak için üst slayt üstüne yerleştirin.Optimal canlı hücre görüntüleme sonraki veri işleme adımları için önemlidir. Erimiş agarose herhangi bir hava baubles ortadan kaldırmak ve dört saatten daha uzun görüntüleme süreleri için ince bir ped oluşturmak emin olun. Mitotik olayları incelemek için ya sıvı EMM veya PMG artı takviyeleri bir gecede başlangıç kültürlerden hücreleri büyümek.Kültürün bir mililitresini bir cuvette aktarın ve spektrofotometreyi 595 nanometre dalga boyunda ölçün. Optik yoğunluk 0.4'e ulaştığında hücre büyümesi orta log fazı olarak kabul edilir. Sonra bir mililitre hücre süspansiyonuna 1, 375 kez g'yi bir dakika santrifüj edin.Supernatant çıkarın ve 100 mikrolitre son hacmi ne kadar az orta artı takviyeleri hücre pelet resuspend. Meyotik olaylar görüntü için minimal orta artı takviyeleri gecede başlangıç kültürlerden hücreleri büyümek. 595 nanometredeki optik yoğunluk 0.7 ile 1 arasında olduğunda hücre büyümesi geç günlük fazı olarak kabul edilir.Sonra, geç günlük kültürlerden her mate tipi zorlanma 500 mikrolitre elde, H negatif ve H pozitif, ve bir mililitre hücre süspansiyon yapmak için birleştirir. Hücreleri 1, 375 kez g'de bir dakika santrifüj edin. Supernatant çıkarın ve sıvı maltoz ekstresi bir mililitre pelet resuspend.Verimli besin giderimi sağlamak için maltoz ekstresini üç kez daha tekrarlayın. Son maltoz ekstresi yıkama sonra maltoz ekstresi bir mililitre hücreleri resuspend ve maltoz ekstresi dokuz mililitre içeren 50 mililitrelik bir şişe karışımı transfer. 50 ve 100 rpm arasında en az dönüş hızı 22 ila 25 santigrat derece 12 ila 16 saat kuluçka.Bol kendini flokülasyon kaynaklanan birçok yuvarlak fizyon maya kümelerinin görünümü verimli bir şekilde büyümesini gösterir. Daha sonra, bir dakika için 1, 375 kez g de miyon kültürü ve santrifüj bir mililitre örnek alın. Supernatant 750 mikrolitre çıkarın ve kalan supernatant hücreleri yeniden askıya.Girdap, kümeleri bozmak için beş saniye boyunca şiddetle. 2% agarose ped üzerinde bir mitotik veya meiyotik hücre süspansiyon 20 mikrolitre dağıtın. Slaytı ters çevirerek ve tüy bırakmayan kağıt havlunun üzerine koyarak 2-3 saniye boyunca fazla ortamı çıkarın.Kaydırağı çevirin ve hava kabarcıkları oluşturmamalarını sağlayarak kapağın üstüne cam bir kapak kaydırın. Bir hücre monolayer oluşturmak için mitoz hücreleri veya iki tam dönüş için bir tam dönüş için işaret parmağı ile saat yönünde coverslip döndürmek için meyoz hücreleri için. Hücre maddesinin agarose pedboyunca dağıldığından emin olun ve tek hücre veya ascinin daha iyi ayrılmasını sağlayın.Küçük bir ahşap sopa yardımı ile her agarose ped mühür kapağı kenarları boyunca erimiş hidrokarbon dolgu dağıtmak. Agarose ped mühürlendikten sonra mikroskop aşamasına yerleştirin. Sıcaklık odasını açın ve istenilen sıcaklığa ayarlayın.Mikroskop sisteminin nemini kontrol etmek için odaya ıslak kağıt havlu ile bir tabak yerleştirin. Uygun görüntüleme koşullarında 10-15 dakika dengeleyelim. Bu kalan hava kabarcıkları dağıtmak ve herhangi bir son dakika agarose vardiya meydana sağlar.Görüntüye uygun görüş alanlarını bulmak için 40X hedefini kullanın. Veri toplamaya başlamak için 60X hedefine geçin. Mikroskop fonksiyonunu kontrol eden yazılımda, gözlem altındaki floroforlerle en iyi eşleşen mikroskop filtre kümelerini seçin.Uyarma dalga boylarını kullanılan floroforlarla eşleşecek şekilde ayarlayın, tutarlı bir sinyal üreten en düşük uyarma gücünü kullanın ve kabul edilebilir ancak ölçülebilir ve tekrarlanabilir görüntüleme verileri oluşturmak için dört ila sekiz saatlik pozlama sürelerini kullanın. Her saat en az altı edinme zaman puanı toplayın. Görüntü toplama yazılımında veri elde etmek ve 0,5 mikrometre aralıklı 13 bölümden oluşan bir Z-stok kullanmak için en az bir floresan kanalı seçin.Fiji yazılımında eklentiler menüsü altında Bio-Formats Importer özelliğini seçerek dekonvolved bir görüntü yükleyin. Alma Seçenekleri açılır penceresinde Hyperstack, Varsayılan Renk modu'nu seçin, Otomatik Ölçek'i işaretleyin ve Tamam düğmesine basın. Görüntülenen pencerenin alttaki ilgili çubuklarda yan lara kaydırarak doğru sayıda floresan kanalve zaman çerçevesine sahip olduğundan emin olun.Verileri sıkıştırmayan bir Tiff dosyası olarak kaydedin. Daha sonra Analyze menüsünün altında farklı parametreler seçmek için Ölçümleri Ayarla seçeneğini kullanın. Örneğin:Alan, Min max gri değeri, Tümleşik yoğunluk, Ortalama gri değeri, Ortanca, Yığın konumu, Çevre ve Görüntü etiketi.Renk'i seçin ve Kanallar Aracı'na tıklayın. Kanallar açılır penceresinde yoğunluk veya alanın ölçüleceği Renk Kanalı'nı kontrol edin. Resim'i seçin, ardından Yazın ve 32 bit'e tıklayın.Resim menüsünün altındaki Ayarla ve Eşik özelliklerini seçin. Koyu arka plan kutusunu işaretleyin, Varsayılan yöntemi seçin ve ilgi sinyallerini kaplamak için Kırmızı'yı seçin. İlgi çekici her yapıyı vurgulamak için değnek aracını kullanın ve seçilen YG yöneticisi penceresine seçilen YG'yi eklemek için klavyedeki T harfine basın.Ardından, YG yöneticisini yüklemek için sıkıştırılmış YG klasörünü açın ve sol yan paneldeki her yg identifier'ini tıklatın. Analiz menüsünden Ölçü'yü seçin ve görüntü yığınının tüm dilimlerindeki ilgi çekici nesneleri ölçmek için her YG tanımlayıcısında bu komutu tekrarlayın. Sonuçları istatistiksel analiz için CSV dosyası olarak kaydedin.Bu çalışmada hücreler besin sınırlaması veya aşırı büyüme nedeniyle açlıktan, onlar aşırı vakuoller ve azalmış hücre büyüklüğü gösterecektir. Logaritmik hücreler aktif DNA replikasyonu ve hücre bölünmesinin yanı sıra pan-nükleer Tos4-GFP ekspresyonu ve Sad1-DsRed foci ayrımı gösterir. Hücrelerin yeterince azot akıtılmadığında olduğu gibi çiftleşmenin yapılamaması, onların mayoz bölünmeye girmesini önleyecektir.Karyogami geçiren bir çift fisyon hücresi gösterilmiştir. Miyon hücre süspansiyonunun sağlam flokülasyonu hücreden hücreye etkileşimi artırır ve böylece başarılı bir miyonvel ve verimli meyotik indüksiyon gösterir. Zigotik asci zig-zag ve muz hücre şekilleri de dahil olmak üzere birden fazla form alır.Mitozbölünmede hücreler metafazdan telosfaza geçerken, ilk değişiklik metafazda nükleer boyutun daralmasını içerirken, ikincisi anafaz sırasında çekirdeğin bölünmesini gösterir. Bazı ayırma dinamiklerini mitotik hücrelerle paylaşmanın yanı sıra, meyotik hücreler homolog rekombinasyon sırasında nükleer salınım sergilerler ve anafaz II.It sonunda nükleozitlerin daha da azaltılması deney parametrelerinin deneyler arasında çoğaltılmasını ve toplanan verilerin aşağı analiziçin uygun olmasını sağlamak araştırmacıların sorumluluğundadır. Canlı hücre görüntülemesi, araştırmacıların mitoz ve kekoze nükleer bölünmenin mekaniğini yakından incelemelerine olanak sağladı.Floresan etiketler ve mikroskop yetenekleri arttıkça gözlemleyebileceğimiz süreçlerin sayısı ve türü artacaktır.

examination-mitotic-meiotic-fission-yeast-nuclear-dynamics

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Fisyon Maya Kantitatif Canlı Hücre Floresan mikroskopi Analizi

Fisyon mayası cinsel yaşam döngüsünün uzun süreli mikroskobu için tekrarlanabilir bir temel yöntem sunuyoruz. Açıklanan küçük ayarlamalarla, sunulan protokol, araştırmanın üreme sürecinin farklı adımlarına odaklanmasına izin verir.

Bölünme Maya Cinsel Yaşam Döngüsü Mikroskopi

Fisyon maya, Schizosaccharomyces pombe sitokinezi incelemek için mükemmel bir model sistemi, hücre bölünmesi son aşamasıdır. Burada canlı fisyon maya hücreleri farklı cytokinetic olayları analiz etmek için bir mikroskop yaklaşım açıklar.

Fisyon Maya Cytokinetic Olayların zamanmekansal Analizi

Burada mil oluşumu ve mitotik progresyon dinamiklerini değerlendirmek için bir protokol sıyoruz. Hızlandırılmış görüntüleme uygulamamız, kullanıcının mitozbölünmenin çeşitli aşamalarındaki hücreleri belirlemesini, mitotik defektleri izlemesini ve tanımlamasını ve anti-mitotik ilaçlara maruz kalındığında mil dinamiği ve mitotik hücre kaderini analiz etmesini sağlar.

Mitotik Mil Pertürbasyonları Sonrası Metafaz Zamanlaması ve Hücre KaderiniN Dinamiği Nin Dinamiği Nin Dinamitini Değerlendirmek Için Canlı Hücre Görüntülemesi

Hızlandırılmış mikroskopi, tomurcuklanan mayadaki mayozu incelemek için değerli bir araçtır. Bu protokol, mayotik kromozom ayrışması sırasında belirli bir proteinin işlevinin nasıl çalışılacağını göstermek için hücre döngüsü senkronizasyonunu, hızlandırılmış mikroskopiyi ve bir hedef proteinin koşullu tükenmesini birleştiren bir yöntemi açıklar.

S. cerevisiae'de Mayozu İncelemek için Hızlandırılmış Mikroskopi ve Proteinlerin Aşamaya Özgü Nükleer Tükenmesinin Kullanılması

Bu protokol, maya hücresi döngüsü durdurma ve isteğe bağlı salım için iki yöntemi detaylandırır ve hücre döngüsüne bağlı süreçleri incelemek için floresan mikroskobunun kullanımını detaylandırır.

Tomurcuklanan mayada hücre döngüsüne bağlı süreçlerin manipülasyonu ve analizi

Seçimi, mikroenjeksiyon ve görüntüleme floresan ile F-aktin floresan etiketli (FSM) mikroskopi speckle.

Floresan üzerinden F-aktin Dynamics Canlı Hücre Görüntüleme speckle Mikroskopi (FSM)

İşte biz görüntüye bir temel protokolü açıklamak ve siRNA transfeksiyon sonra canlı memeli doku kültürü hücrelerinde mitoz zamanlama ölçmek.

Zaman atlamalı Görüntüleme siRNA Transfeksiyon sonra Mitoz

Biz floresan büyüyen maya hücreleri mikroskop film ve tek hücreli zaman serisi veri ayıklamak için bir GUI tabanlı yazılım paketi elde etmek için basit protokol mevcut. Analizi otomatik soy ve görsel denetim ve izlenen verileri manuel küratörlüğü ile entegre bölümü zaman atama içerir.

Tomurcuklanma Maya Floresan Time-lapse Filmler Kazanılması ve GREFTLERİ kullanarak Tek hücreli Dynamics analiz

Burada, trakea terminali hücrelerinin ışık mikroskobu analizinde için bir yöntem...

İncelenmesi<em&gt; Drosophila</emIşık Mikroskopi tarafından&gt; Larva Trakeal Terminal Hücreleri

Öğrenin, canlı hücre mikroskobisiyle Schizosaccharomyces pombe'de mitotik ve meiyotik nükleer dinamikleri gerçek zamanlı olarak nasıl gözlemleyeceğinizi. Bu yöntem, toksik fiksasyon kullanmadan protein davranışını incelemenizi sağlar.

Floresans canlı hücre mikroskobu ile mitotik ve meiotic Fission Maya nükleer dinamiklerinin incelenmesi

Daha fazla video keşfet