Fare Üreme Yolu Spontan Hareketliliği Değerlendirmek için Ex Vivo Yöntemi ve Veri Analizi için MATLAB tabanlı Rahim Hareket Takip Algoritması

Protokolümüz önemli, çünkü bozulmamış bir rahmin spontan hareketliliğini değerlendirmek için ilk kantitatif ex vivo yöntemini sağlar. Bu yeni yaklaşım sentetik bileşikler doğal olarak meydana gelen ilaçların gevşetici potansiyelini test etmek için kolay ve daha az pahalı bir alternatif sağlar. Bu tekniğin en büyük avantajı, tüm rahim içi hücresel etkileşimlerin deney boyunca bozulmadan kalmasıdır.

Rahim kontrility üzerinde dismenore ile ilişkilidir, hangi rahim gevşetici tedavi için yararlı olabilir. Bu yöntem yeni gevşetici test etmek için kolay bir yol sağlar. Estrous döngüsü aşamasında doğruladıktan sonra, supine pozisyonda fare yerleştirin, ve karın pelvik bölge ortaya çıkarmak için ekstremiteleri yayıldı.

% 70 etanol ile karın ıslak, ve dikkatle klitoris üstün cilt kaldırmak için forseps kullanın. Periton ortaya çıkarmak için üst ekstremitelere kadar alt karın bölgesinin lateral yönleri üzerinde küçük enine kesiler olun. Dikkatle rahim boynuzları zarar vermeden gastrointestinal sistem ortaya çıkarmak için periton ile kesilmiş, ve fasya kaldırmak için forceps kullanın ve gastrointestinal sistemi kapsayan yağ dokusu.

Duodenum çıkarın, jejunum, ileum, çekum, ve artan ve enine kolon. Doğrudan idrar kesesi altında bulunan vajina bulmak için idrar kesesi bulun. Kasık kemikleri birleştiğinde kasık symphysis bulun, mesane kaudal, ve dikkatle giridem fibrocartilaginous doku ile kasık symphysis lateral taraflarında bir kesi yapmak için makas kullanın erişim ve vajinal ekstraksiyon için bir yol sağlamak için.

Anüs ve vulva alt kısmı arasında bulunan perine ile kesin ve rektum yavaş bir eksizyon sağlamak için vajina kaldırmak için forseps kullanın. Vajinaya bir çatal rostrally içine çatal ve her boynuz sonunda bir kıvrık oviduct ve yumurtalık bulmak iki rahim boynuzları tanımlayın. Rahim boynuzlarının doğru bir şekilde tanımlanması, dokuların zarar görmemesini sağlamak için prosedür açısından çok önemlidir.

Karın boşluğuiçinde boynuzları, oviducts ve yumurtalıklar bağlamak ve desteklemek ve vajina, rahim, oviducts ve yumurtalıklar kaldırmak için küçük diseksiyon makas kullanın. Tüm izole üreme yollarını 10 milimetrelik Bir Petri kabına aktarın 10 Mililitre Dulbecco'nun PBS'si. Tervenat boynuzları ve vajina çevreleyen herhangi bir bağ ve yağ dokusu yanı sıra görüntü kalitesini engelleyebilir kasık bölgesinde herhangi bir kürk kaldırmak için forceps ve cerrahi makas kullanın.

Rahim boynuzlarının hareketliliğini sağlamak için geniş ligamenti çıkarın ve izole üreme yi, üç mililitre oksijenli Krebs çözeltisi içeren 35 milimetrelik Petri kabına aktarmadan önce, dokuyu yıkama başına taze Dulbecco'nun PBS'i ile iki kez yıkayın. Spontan hareketlilik görüntüleme için Petri kabını oda sıcaklığında siyah bir yüzeye yerleştirin ve spontan kasılmalar için 15 ila 30 dakika bekleyin. Hareket gözlemlenebildiği zaman, her türlü dijital video ekipmanı kullanarak eksenel bir uçaktan 10 dakika boyunca spontan rahim motilitesini kaydedin.

Daha sonra, test bileşiği ile takviye oksijenli Krebs tampon içeren bir Petri kabına hazırlık aktarın ve aynı şekilde ek bir 10 dakika için spontan rahim motilitesi kaydedin. Kayıt döneminin sonunda, 100 milimetrelik Petri kabında Dulbecco'nun PBS'sinin 10 mililitresinde tüm üreme yöntemini yıkayın ve tedavinin geri döndürülebilirliğini değerlendirmek için numuneyi taze oksijenli Krebs tamponundan oluşan yeni bir Petri kabına aktarın. Son iki kayıtta olduğu gibi, spontan rahim motilitesini yaklaşık 10 dakika boyunca aynı şekilde kaydedin.

Daha sonra spontan rahim motilitesinde mekanik olarak indüklenen değişiklikler olmadığından emin olmak için test bileşiği için araçla desteklenen oksijenli Krebs tamponu yla dolu 35 milimetrelik başka bir Petri kabına aktarın. Üreme sistemi hazırlığı epinefrin yokluğunda A ve C panellerinde yüksek hareketlilik sergiledi. Ama bu fenotip bir mikro muller epinefrin varlığı ile panel B atıl olduğunu.

Burada, epinefrin uygulaması ve spontan hareketlilik kurtarma örnek veri analizi gösterilmiştir, üreme sistemi spontan hareketlilik üzerinde hormon etkileri nasıl test bileşik tedavi öncesi alınan doku kayıtlarından ölçülebilir gösteren, ve test bileşik tedavi den sonra. Rahim boynuzlarının sıkıştırılmasından veya aşırı esnemekten kaçınmak önemlidir, aksi takdirde spontan kontrüzyon gözlenmez. Yöntemimiz aynı zamanda rahmin kasıklığını artırabilecek bileşiklerin test edilmesinde de kullanılabilir.

Bu işlem gebeliğin erken evrelerinde gebe fare uterisine uygulanabilir. Bu deney, elde etme uyuşturucu taraması için altı kuyu luk formatına yükseltilme potansiyeline sahiptir.