Name: Mouse Rhabdomiyosarkomlardan İzole Edilen Primer Tümör Hücrelerinden Tümörfer Türevve Tedavisi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-13T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: Öğrenin fare rabdomiyosarkomlarından primer tümör hücreleri izolasyonu, tümörfer oluşumu ve tedavi yöntemlerini. Bu protokol ilaç tarama çalışmaları için tümör mikroçevresini taklit eden güvenilir bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma Ellison Medical Foundation hibe AG-NS-0843-11 ve NCI Kanser Merkezi Destek Hibe P30CA030199 a.S. içinde NIH Pilot Grant tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Dagogo-Jack, I., Shaw, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+heterogeneity+and+resistance+to+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumour heterogeneity and resistance to cancer therapies.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 15 (2), 81-94 (2018).</li>
<li>Wicha, M. S., Liu, S., Dontu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+an+old+idea--a+paradigm+shift%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: an old idea--a paradigm shift.</a> Cancer Research. 66 (4), 1883-1890 (2006).</li>
<li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+National+Academy+of+Science+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proceedings National Academy of Science of the United States of America. 100 (7), 3983-3988 (2003).</li>
<li>Oishi, N., Yamashita, T., Kaneko, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+biology+of+liver+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular biology of liver cancer stem cells.</a> Liver Cancer. 3 (2), 71-84 (2014).</li>
<li>Crous, A. M., Abrahamse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+cancer+stem+cells+and+low-intensity+laser+irradiation%3A+a+potential+future+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Lung cancer stem cells and low-intensity laser irradiation: a potential future therapy.</a> Stem Cell Research & Therapy. 4 (5), 129(2013).</li>
<li>Tomao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+molecular+profiles+of+ovarian+cancer%3A+an+update+on+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Investigating molecular profiles of ovarian cancer: an update on cancer stem cells.</a> Journal of Cancer. 5 (5), 301-310 (2014).</li>
<li>Zhan, H. X., Xu, J. W., Wu, D., Zhang, T. P., Hu, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+cancer+stem+cells%3A+new+insight+into+a+stubborn+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Pancreatic cancer stem cells: new insight into a stubborn disease.</a> Cancer Letters. 357 (2), 429-437 (2015).</li>
<li>Sharpe, B., Beresford, M., Bowen, R., Mitchard, J., Chalmers, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Searching+for+prostate+cancer+stem+cells%3A+markers+and+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews+and+Reports%22%5BJournal%5D)">Searching for prostate cancer stem cells: markers and methods.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 9 (5), 721-730 (2013).</li>
<li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367 (6464), 645-648 (1994).</li>
<li>Lee, C. -H., Yu, C. -C., Wang, B. -Y., Chang, W. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorsphere+as+an+effective+in+vitro+platform+for+screening+anti-+cancer+stem+cell+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Tumorsphere as an effective in vitro platform for screening anti- cancer stem cell drugs.</a> Oncotarget. 7 (2), 1215-1226 (2015).</li>
<li>Sultan, I., Qaddoumi, I., Yaser, S., Rodriguez-Galindo, C., Ferrari, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+adult+and+pediatric+rhabdomyosarcoma+in+the+surveillance%2C+epidemiology+and+end+results+program%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Comparing adult and pediatric rhabdomyosarcoma in the surveillance, epidemiology and end results program.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (20), 3391-3397 (1973).</li>
<li>Blum, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+and+overlapping+sarcoma+subtypes+initiated+from+muscle+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Distinct and overlapping sarcoma subtypes initiated from muscle stem and progenitor cells.</a> Cell Reports. 5 (4), 933-940 (2013).</li>
<li>Rubin, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+an+unanticipated+relationship+between+undifferentiated+pleomorphic+sarcoma+and+embryonal+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Evidence for an unanticipated relationship between undifferentiated pleomorphic sarcoma and embryonal rhabdomyosarcoma.</a> Cancer Cell. 19 (2), 177-191 (2011).</li>
<li>Keller, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+rhabdomyosarcomas+in+conditional+Pax3%3AFkhr+mice%3A+cooperativity%5BTitle%5D)+AND+%22of+Ink4a%2FARF+and+Trp53+loss+of+function.+Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Alveolar rhabdomyosarcomas in conditional Pax3:Fkhr mice: cooperativity.</a> of Ink4a/ARF and Trp53 loss of function. Genes & Development. 18 (21), 2614-2626 (2004).</li>
<li>Tremblay, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Hippo+transducer+YAP1+transforms+activated+satellite+cells+and+is+a+potent+effector+of+embryonal+rhabdomyosarcoma+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The Hippo transducer YAP1 transforms activated satellite cells and is a potent effector of embryonal rhabdomyosarcoma formation.</a> Cancer Cell. 26 (2), 273-287 (2014).</li>
<li>Hatley, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+rhabdomyosarcoma+originating+from+the+adipocyte+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">A mouse model of rhabdomyosarcoma originating from the adipocyte lineage.</a> Cancer Cell. 22 (4), 536-546 (2012).</li>
<li>Drummond, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+Pathway+Drives+Fusion-Negative+Rhabdomyosarcoma+Initiated+From+Non-myogenic+Endothelial+Progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Hedgehog Pathway Drives Fusion-Negative Rhabdomyosarcoma Initiated From Non-myogenic Endothelial Progenitors.</a> Cancer Cell. 33 (1), 108-124 (2018).</li>
<li>Almazan-Moga, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+Pathway+Inhibition+Hampers+Sphere+and+Holoclone+Formation+in+Rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Hedgehog Pathway Inhibition Hampers Sphere and Holoclone Formation in Rhabdomyosarcoma.</a> Stem Cells International. , (2017).</li>
<li>Walter, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD133+positive+embryonal+rhabdomyosarcoma+stem-like+cell+population+is+enriched+in+rhabdospheres%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">CD133 positive embryonal rhabdomyosarcoma stem-like cell population is enriched in rhabdospheres.</a> PLoS One. 6 (5), (2011).</li>
<li>Ciccarelli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+role+of+MEK%2FERK+pathway+in+sustaining+tumorigenicity+and+in+vitro+radioresistance+of+embryonal+rhabdomyosarcoma+stem-like+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer%22%5BJournal%5D)">Key role of MEK/ERK pathway in sustaining tumorigenicity and in vitro radioresistance of embryonal rhabdomyosarcoma stem-like cell population.</a> Molecular Cancer. 15, (2016).</li>
<li>Deel, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Transcriptional+Coactivator+TAZ+Is+a+Potent+Mediator+of+Alveolar+Rhabdomyosarcoma+Tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The Transcriptional Coactivator TAZ Is a Potent Mediator of Alveolar Rhabdomyosarcoma Tumorigenesis.</a> Clinical Cancer Research. 24 (11), 2616-2630 (2018).</li>
<li>Boscolo Sesillo, F., Fox, D., Sacco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+Stem+Cells+Give+Rise+to+Rhabdomyosarcomas+in+a+Severe+Mouse+Model+of+Duchenne+Muscular+Dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Muscle Stem Cells Give Rise to Rhabdomyosarcomas in a Severe Mouse Model of Duchenne Muscular Dystrophy.</a> Cell Reports. 26 (3), 689-701 (2019).</li>
<li>Chamberlain, J. S., Metzger, J., Reyes, M., Townsend, D., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin-deficient+mdx+mice+display+a+reduced+life+span+and+are+susceptible+to+spontaneous+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Dystrophin-deficient mdx mice display a reduced life span and are susceptible to spontaneous rhabdomyosarcoma.</a> The FASEB Journal. 21 (9), 2195-2204 (2007).</li>
<li>Kessel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Throughput+3D+Tumor+Spheroid+Screening+Method+for+Cancer+Drug+Discovery+Using+Celigo+Image+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Technology%22%5BJournal%5D)">High-Throughput 3D Tumor Spheroid Screening Method for Cancer Drug Discovery Using Celigo Image Cytometry.</a> SLAS Technology. 22 (4), 454-465 (2017).</li>
<li>Johnson, S., Chen, H., Lo, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Tumorsphere+Formation+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-Protocol%22%5BJournal%5D)">In vitro Tumorsphere Formation Assays.</a> Bio-Protocol. 3 (3), (2013).</li>
<li>Zhu, Z. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+three-dimensional+tumorsphere+culture+system+for+the+efficient+and+low-cost+enrichment+of+cancer+stem+cells+with+natural+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">A novel three-dimensional tumorsphere culture system for the efficient and low-cost enrichment of cancer stem cells with natural polymers.</a> Experimental and Therapeutic. 15 (1), 85-92 (2018).</li>
<li>Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downstream+molecular+pathways+of+FLT3+in+the+pathogenesis+of+acute+myeloid+leukemia%3A+biology+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Jornal+of+Hematology+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Downstream molecular pathways of FLT3 in the pathogenesis of acute myeloid leukemia: biology and therapeutic implications.</a> Jornal of Hematology and Oncology. 4, (2011).</li>
<li>Laouar, Y., Welte, T., Fu, X. Y., Flavell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT3+is+required+for+Flt3L-dependent+dendritic+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">STAT3 is required for Flt3L-dependent dendritic cell differentiation.</a> Immunity. 19 (6), 903-912 (2003).</li>
<li>Ogawa, M., Bergsagel, D. E., McCulloch, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+melphalan+on+mouse+myeloma+%28adj.+PC-5%29+and+hemopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Differential effects of melphalan on mouse myeloma (adj. PC-5) and hemopoietic stem cells.</a> Cancer Research. 31 (12), 2116-2119 (1971).</li>
<li>Hamburger, A. W., Salmon, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+bioassay+of+human+tumor+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Primary bioassay of human tumor stem cells.</a> Science. 197 (4302), 461-463 (1977).</li>
<li>Hamburger, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+tumor+clonogenic+assay+as+a+model+system+in+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Cell+Cloning%22%5BJournal%5D)">The human tumor clonogenic assay as a model system in cell biology.</a> The International Journal of Cell Cloning. 5 (2), 89-107 (1987).</li>
<li>Jimenez-Hernandez, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NRP1-positive+lung+cancer+cells+possess+tumor-initiating+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+Reports%22%5BJournal%5D)">NRP1-positive lung cancer cells possess tumor-initiating properties.</a> Oncology Reports. 39 (1), 349-357 (2018).</li>
<li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).</li>
<li>Kimlin, L. C., Casagrande, G., Virador, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+three-dimensional+%283D%29+models+in+cancer+research%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">In vitro three-dimensional (3D) models in cancer research: an update.</a> Molecular Carcinogenesis. 52 (3), 167-182 (2013).</li>
<li>Salerno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sphere-forming+cell+subsets+with+cancer+stem+cell+properties+in+human+musculoskeletal+sarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Sphere-forming cell subsets with cancer stem cell properties in human musculoskeletal sarcomas.</a> International Journal of Oncology. 43 (1), 95-102 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Tümör klojen iyotlar, FACS izolasyonu ve tümörsphere formasyon testi: tümör klojeni tahlilleri, tümör klojeni tahlilleri ve tümörsphere oluşumu tahlillerinden TBM'lerin izolasyonu ve karakterizasyonu için birden fazla yöntem kullanılmıştır. Tümör klojenisi titreti ilk olarak 1971 yılında tanımlanmıştır, kök hücre çalışmaları için kullanılan, ve sadece daha sonra kanser biyolojisi29uygulanan,30. Bu yöntem yumuşak jeller kültürlerde kısıtlamalar olmadan genişletmek...

Kanser heterojen bir hastalıktır; ayrıca, aynı tip tümör farklı hastalarda farklı genetik mutasyonlar sunabilir, ve bir hasta içinde bir tümör hücrelerin birden fazla popülasyonları oluşur1. Heterojenlik, kanserin başlatılmasından ve yayılmasından sorumlu hücrelerin belirlenmesinde bir sorun teşkil eder, ancak bunların karakterizasyonu etkin tedavilerin geliştirilmesi için gereklidir. Tümör yayılma hücreleri kavramı (TPC), tümör gelişimine katkıda bulunan hücrelerin nadir bir popülasyon, daha önce kapsamlı olarak gözden geçirilmiştir2. TPTS kanser birden fazla tip karakterize olmasına rağmen, onların güvenilir izolasyon için belirteçleri belirlenmesi çeşitli tümör tipleri için bir sorun olmaya devam etmektedir3,4,5,6 , 7.000 , 8.000 , 9- Bu nedenle, moleküler belirteçlere değil, TPC fonksiyonel özelliklerine (yüksek kendini yenileme ve düşük bağlanma koşullarında büyüme yeteneği) dayanan bir yöntem, tümörküre oluşumu tsay olarak bilinen, yaygın olarak uygulanabilir çoğu tümörden TPC'lerin belirlenmesi. Daha da önemlisi, bu tsay da TPCs genişlemesi için istihdam edilebilir ve böylece doğrudan kanser ilaç tarama ve kanserdirenciçalışmaları 1 ,10.
Rhabdomyosarcoma (RMS) yumuşak doku sarkomu en küçük çocuklarda en sık görülen birformudur 11. Althoug RMS histolojik olarak miyojenik belirteçlerin ekspresyonunun değerlendirilmesi ile saptanabilir, RMS kökenli hücre birden fazla tümör alt tipleri ve tümör gelişimsel uyaranlarının yüksek heterojenliği nedeniyle tek kesin olarak karakterize edilmemiştir. Nitekim, son çalışmalar RMS miyojenik veya non-miyojenik kökenli olup olmadığı hakkında önemli bilimsel tartışma üretti, RMS bağlam12bağlı olarak farklı hücre tiplerinden elde edilebilir düşündüren 12,13, 14.000 , 15.000 , 16.02.20 , 17- Tümör gelişimi ve yüksek oranda kendini yenileme popülasyonları ile ilişkili belirteçlerin karakterizasyonu ile ilgili yolların belirlenmesi için tümörküre oluşumu tetkiklerinin geliştirilmesi için RMS hücre hatları üzerinde çok sayıda çalışma yapılmıştır. 18.000 , 19.09.20 , 20.000 , 21. yıl.
Ancak, tümörküre oluşumu tsay kökenli RMS hücrelerini tanımlamak için potansiyeline rağmen, birincil RMS hücreleri üzerinde istihdam edilebilir güvenilir bir yöntem henüz tarif edilmemiştir. Bu bağlamda, grubumuzdan yeni bir çalışmada duchenne kas distrofisi (DMD) fare modeli22kökenli RMS hücrelerinin belirlenmesi için optimize edilmiş bir tümörsphere oluşumu tetkik istihdam . Kas dokularından izole edilmiş birden fazla pre-tümörijenik hücre tipi, düşük bağlanma koşullarında büyüme yetenekleri açısından test edilerek, distrofik bağlamlarda RMS için başlangıç hücreleri olarak kas kök hücrelerinin tanımlanmasına olanak sağlar. Burada tanımlanan, fare RMS gelişiminden sorumlu son derece nadir hücre popülasyonlarının belirlenmesinde başarıyla kullanılan tümörsphere formasyon uyrmuş test(Şekil 1)için tekrarlanabilir ve güvenilir bir protokoldür.

<table><tbody><tr><td>Akaktaz hücre ayrışma reaktifi</td><td>Gibco</td><td>A1110501</td><td>Yapışık hücreleri ayırın ve tümör kürelerini ayırın</td></tr><tr><td>Celigo</td><td>Nexcelom</td><td>Celigo</td><td>Yapışık ve süspansiyon hücreleri için mikrowell plaka tabanlı görüntü sitometresi</td></tr><tr><td>Kollajenaz, Tip II</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>17101015</td><td>Doku sindirim enzimi</td></tr><tr><td>Dispase II, proteaz</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>17105041</td><td>Doku sindirim enzimi</td></tr><tr><td>DMEM yüksek glukoz ortamı</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>Tümör hücreleri ortamının</td></tr> bileşeni <tr><td>DMEM/F12 ortamı</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td>Tümosfer ortamının bileşeni</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>ThermoFisher</td><td>S312500</td><td>FACS tamponunun bileşeni</td></tr><tr><td>EGF rekombinant fare proteini</td><td>Gibco</td><td>PMG8041</td><td>Tümörosfer ortamının bileşeni</td></tr><tr><td>FACSAria II Akış Sitometrisi</td><td>BD Biosciences</td><td>650033</td><td>Floresan aktif hücre sıralayıcı</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>Omega Scientific</td><td>FB-11</td><td>Tümör hücreleri ortamının bileşeni</td></tr><tr><td>Fluriso (İzoflorna) anestezik ajan</td><td>MWI Vet Hayvanlar</td><td></td><td>için 502017 Anestezik reaktif</td></tr><tr><td>tedarik FxCycle Menekşe Leke</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>F10347</td> Canlı <td>ve ölü hücreleri ayırt edin</td></tr><tr><td>Keçi Serumu</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>16210072</td><td>FACS tamponunun bileşeni</td></tr><tr><td>Ham'ın F10 Media</td><td>Life Technologies</td><td>11550043</td><td>FACS tamponunun bileşeni</td></tr><tr><td>At Serumu</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>16050114</td><td>Hücre izolasyon ortamının bileşeni</td></tr><tr><td>Lipofektamin 3000 transfeksiyon reaktifi</td><td>ThermoFisher</td><td>L3000015</td><td>Transfeksiyon Reaktifi</td></tr><tr><td>Matrigel membran matrisi</td><td>Corning</td><td>CB40234</td><td>Ekilen hücrelere destek sağlar</td></tr><tr><td>N-2 Supplemtns (100X)</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>Tümörosfer ortamının bileşeni</td></tr><tr><td>Neomisin-Polimiksin B Sülfatlar-Basitrasin Çinko Oftalmik Merhem</td><td>MWI Veteriner Kaynağı</td><td>701008</td><td>Göz merhemi</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td>FACS tamponunun bileşeni ve hücreleri yıkamak için kullanılır</td></tr><tr><td>pEGFP-C1</td><td>Addgene</td><td>6084-1</td><td>GFP plazmid</td></tr><tr><td>Penisilin - Streptomiyosin</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15140163</td><td>Tümörosfer ve tümör hücrelerinin bileşeni ortam</td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan ve beta; FGF-basic</td><td>Peprotech</td><td>10018B</td><td>Tümör ortamının bileşeni</td></tr><tr><td>Rekombinant fare Flt-3 Ligand Proteini</td><td>R& D Systems</td><td>427-FL-005</td><td>Rekombinant protein</td></tr><tr><td>Tripan mavisi</td><td>ThermoFisher</td><td>15250061</td><td>Canlı ve ölü hücreleri ayırt edin</td></tr></tbody></table>

mouse rhabdomiyosarkomlardan İzole edilen primer tümör hücrelerinden tümörfer türevve tedavisi

Tumorsphere Derivation and Treatment from Primary Tumor Cells Isolated from Mouse Rhabdomyosarcomas

Rhabdomyosarkom (RMS) çocuklarda en sık görülen yumuşak doku sarkomudur. Önemli çabalar RMS ile ilişkili yaygın mutasyonların belirlenmesini ve farklı RMS alt tiplerinin ayrımcılığa izin vermesine rağmen, prognozu daha da iyileştirmek için yeni tedavilerin geliştirilmesinde hala büyük zorluklar vardır. Miyojenik belirteçlerin ekspresyonu ile tanımlansa da, rms'nin miyojenik mi yoksa miyojenik olmayan kökenleri mi yoksa miyojenik olmayan kökenleri mi olduğu konusunda hala önemli tartışmalar vardır, çünkü menşe hücresi hala tam olarak anlaşılamamıştır. Bu çalışmada fare RMS için tümörfer tetkik için güvenilir bir yöntem sağlanmıştır. Test tümör hücrelerinin fonksiyonel özelliklerine dayanmaktadır ve tümörijenik fonksiyonlar ile tümörnadir popülasyonların belirlenmesini sağlar. Ayrıca rekombinant proteinlerin test edilmesi, transfeksiyon protokollerinin tümörküre testi ile bütünleştirilmesi ve tümör gelişimi ve büyümesinde rol oynayan aday genlerin değerlendirilmesi için yapılan prosedürler de tanımlanmıştır. Ayrıca açıklanan in vivotümörijenik fonksiyonu doğrulamak için alıcı fareler içine tümörkürelerin allogreft nakli için bir prosedürdür . Genel olarak, açıklanan yöntem, farklı bağlamlarda ortaya çıkan RMS'lere uygulanabilen nadir RMS tümörijenik popülasyonların güvenilir bir şekilde tanımlanmasına ve test edilmesine olanak sağlar. Son olarak, protokol ilaç taraması ve terapötik gelecekteki gelişimi için bir platform olarak kullanılabilir.

Tümör küreleri tespiti Hücre izolasyonu tümör dokusunda bulunan hücre popülasyonlarının maksimum heterojenliğini elde etmek için optimize edildi. İlk olarak, izole dokular morfolojik olarak farklı alanlar sunduğından, tek tip nadir hücre popülasyonlarını izole etme şansını artırmak için, tümörün birden fazla alanından örnekleme yapıldı(Şekil 1A, soldaki ilk panel). İkinci olarak, hasat edilen numunelerin mekanik ayrılması, kıyma doku boyut...

Bu protokol, fare rabdomiyosarkom primer hücrelerinin izolasyonu, tümörsphere oluşumu ve tedavisi ve tümörküre kültürlerinden başlayan allograft transplantasyonu için tekrarlanabilir bir yöntemi tanımlar.

Mouse Rhabdomiyosarkomlardan İzole Edilen Primer Tümör Hücrelerinden Tümörfer Türevve Tedavisi

Rhabdomyosarcoma (RMS) is the most common soft tissue sarcoma in children. Although significant efforts have enabled the identification of common ...

Rabdomiyosarkom, histolojik olarak doku morfolojisi ve miyojenik belirteçlerin ekspresyonu ile karakterize yumuşak doku sarkomlarının nadir bir formudur. Ancak, bu tümörlerin farklı alt tiplerinin varlığı ve oluşumuna katkıda bulunan uyaranların heterojenliği göz önüne alındığında, menşe hücresinin tanımlanması çok zor olmuştur. Burada farelerden taze hasat tümör dokularından başlayarak rabdomiyosarkomların menşe hücresinin tanımlanması için tekrarlanabilir ve güvenilir yöntemler tarif ve bu tetkik tümör küre oluşumu tetkik.Tümörlü sferans formasyon uyruplamanın başlıca avantajları, tümör kaynaklı hücrelerde bulunduğu bilinen hücresel özelliklere dayanması ve spesifik hücre popülasyonunun genişlemesi ve zenginleşmesi için de kullanılabilmeözelliğidir. Ayrıca, küresel yapısı tümör ortamını taklit eder, böylece ilaç tarama çalışmaları olarak kullanılabilir. Bu yöntem, moleküler belirteçler hakkında önceden bilgi gerektirmediği, ancak kültür koşullarının optimizasyonu gerektirebileceği nden diğer tümör tipine uygulanma potansiyeline sahiptir.Tümörküre oluşturmak için biraz zaman alabilir, Özellikle tümör içinde nadir bir hücre popülasyonu belirlemeye çalışıyorsanız. Bu nedenle, deneme

tumorsphere-derivation-treatment-from-primary-tumor-cells-isolated

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetik

Bu protokol, izolasyon, zenginleştirme, ektopik Sonic hedgehog yolu aktivite ile mutant farelerde elde edilen medulloblastom tümör kök hücreler bakım ve açıklar.

Medulloblastom Kök Hücreleri İzolasyon, Zenginleştirme ve Bakım

Insan retinoblastom farelerde tümörlerin yaymak için bir yöntem açıklanmıştır. Tümör hücreleri bağışıklık eksikliği olan farelerde gözlerinin içine doğrudan enjekte edilir. İkincil tümörlerin başarıyla doğrudan insan tümörleri ve kültürlü tumorspheres hasat hücreler kullanılarak kurulmuştur.

Bağışıklık Eksik Fare Kuruluş ve İnsan Retinoblastom Tümörler yayılımı

Bu video protokolü neurosphere tahlil kültürü yöntemi kullanılarak insan glioblastoma mutliforme cerrahi rezeksiyon (GBM) tümör dokusu hücreleri gibi izolasyon ve kök genişlemesi göstermektedir.

Neurosphere Testi İnsan Glioblastoma Multiforme Tümör Hücreleri İzolasyon ve Genişleme

Kemik sarkomlarda kanser kök hücrelerinin varlığı (rulmanları) son zamanlarda onların patogenezi ile bağlantılı olmuştur. Bu makalede, yapışmayan koşullarda büyümeye CSCS yeteneğini kullanılarak geleneksel osteosarkoma (OS) insan biyopsilerinden elde edilen birincil hücre kültürlerinden CSCS izole sunulmuştur.

Kanser kurulması İnsan Konvansiyonel Osteosarkom Hücre Kültürleri Kök

Aşağıdaki iletişim kuralı hasta elde edilen yumuşak doku sarkomu (STS) birincil kültürünün kurulması üzerinde duruluyor. Bu model bize moleküler arka plan ve bu nadir maligniteler farmakolojik profil daha iyi anlamak için yardımcı ve daha fazla STS yönetimi iyileştirme amaçlı araştırma için bir başlangıç noktası temsil edebilir.

Hasta elde edilen yumuşak doku sarkomu birincil kültürünün kurulması

Tümör Başlatan hücrelerin insan sarkomu hasta türevi xenograflarından floresan-aktif hücre sıralama ile yalıtılması için ayrıntılı bir protokol tanımlayarak, insan lökosit antijen-1 (HLA-1) ' i negatif bir işaret olarak kullanarak ve daha fazla doğrulama ve Bu HLA-1-negatif tümör başlatma hücrelerinin karakterizasyonu.

Sarkom hasta türevi xenografts tümör-başlatma hücrelerinin yalıtım ve karakterizasyonu

Bu metodolojinin amacı, kanser hücre hatlarındaki kanser kök hücrelerini (CSC) ve primer insan tümör örneklerini küre oluşturma protokolü ile sağlam bir şekilde, fonksiyonel tahliller ve akış sitometrisi ve Batı ile henotypik karakterizasyon kullanarak tanımlamaktır. Leke.

Jinekolojik ve Meme Kanseri Tümörlerinden Kanser Kök Hücre Kürelerinin Alınması

Bu protokolde, yumuşak doku sarkomunun (neo) adjuvan tedavileri test etmek için tamamlanmamış cerrahi rezeksiyonunun fare modelini tanımladık.

Test (Neo) adjuvan Tedaviler için İntam Rezeke Yumuşak Doku Sarkomu Bir Fare Modeli

Burada, rabdomiyosarkom fare modelinde sıcaklığa duyarlı lipozomlardan ilaç salınımını tetiklemek için manyetik rezonans rehberliğinde yüksek yoğunluklu odaklanmış ultrason tarafından üretilen kontrollü hipertermiyi kullanmak için bir protokol sunulmaktadır.

Manyetik Rezonans Rehberliğinde Yüksek Yoğunluklu Odaklanmış Ultrason Tarafından Üretilen Hipertermi: Bir Murin Rabdomiyosarkom Modelinde Uygulanabilir Bir Tedavi Yöntemi

Bu protokol, primer kanser hücrelerinden 3D tümör kültürü modelleri oluşturmayı ve hücre canlılık testleri ve mikroskobik incelemeler kullanarak ilaçlara duyarlılıklarını değerlendirmeyi açıklamaktadır.

Hasta Kaynaklı Tümör Örneklerinden 3 Boyutlu Sferoidlerin Oluşturulması ve İlaçlara Duyarlılıklarının Değerlendirilmesi

Ortotopik pediatrik beyin tümörü modellerinin geliştirilmesi, kanser hücrelerini hassas bir şekilde implante etmek için stereotaksik bir cihaz kullanarak titiz bir hassasiyet gerektirir. Burada sunulan metodoloji, beyin tümörü hücrelerinin hazırlanması, intrakraniyal enjeksiyonların gerçekleştirilmesi ve beyin tümörü aşılanmasını değerlendirmek için ameliyat sonrası bir izleme sisteminin uygulanmasında yer alan adımları özetlemektedir.

Stereotaksik Cihaz Kullanılarak Beyin Tümörleri İçin Ortotopik Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellerinin Oluşturulması

Öğrenin fare rabdomiyosarkomlarından primer tümör hücreleri izolasyonu, tümörfer oluşumu ve tedavi yöntemlerini. Bu protokol ilaç tarama çalışmaları için tümör mikroçevresini taklit eden güvenilir bir model sunar.

Mouse Rhabdomiyosarkomlardan İzole Edilen Primer Tümör Hücrelerinden Tümörfer Türevve Tedavisi

Daha fazla video keşfet