Name: Arabidopsis Çift Döllenmede Sperm Nükleer Morfolojisinin İzlenmesi ile Döllenme Durumunun Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 s
Description: Öğrenin, Arabidopsis çift döllenmesinde sperm nükleer morfolojisini değerlendirerek döllenme durumunu hızlıca belirleme yöntemini. Bu teknik, bilinmeyen döllenme düzenleyicilerinin fonksiyonel analizi için istatistiksel veri toplamayı kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Japonya Bilim KAKENHI hibe (JP17H05832 T. I.) teşvik için Japonya Derneği tarafından desteklenen ve Phytochemical Bitki Moleküler Bilimler Stratejik Öncelik Araştırma Tanıtım Programı fon tarafından, Chiba Üniversitesi (Japonya).

1. Yapay Tozlaşma
NOT: İşleme başlamadan önce, 5 numaralı forceps bir çift gereklidir.
<ol><li>A. thaliana (Col-0) 22 °C'de 16-h ışık/8-h karanlık bir döngü altında bir büyüme odasında büyüyün. NOT: Kes ve aksiller tomurcukları gelişimini teşvik etmek makas ile ilk geliştirilen çiçek sapı kaldırın. Şiddetle büyüyen bitkiler (ilk sap kestikten 2-3 hafta sonra; bitki yüksekliği yaklaşık 25 cm) analiz için uygundur.</li>
	<li>Emasculate için, sepal kaldırmak (Şekil 1B), yaprak (Şekil 1C), ve stamen (Şekil 1D) evre118 (Şekil1A) No 5 forceps kullanarak çiçek tomurcukları. Üst kısmında görülen yaprakları parçaları ile Tomurcuk en iyisidir. NOT: Uygun bir kadın gamet işaretleyici hattı kullanın. Bu protokolde, kadın ebeveyn olarak yabani bir bitki kullandık.</li>
	<li>Emasculation sonra on beş ila on sekiz saat, evre 138 bir DMP9KD/HTR10-mRFP çiçek stamen almak forceps ile filament pinching tarafından.</li>
	<li>Tozlaşmak için, hafifçe bir dehiscent anther ile bir hadım pistil birkaç kez stigma pat.</li>
</ol>2. Gözlem için Ovule hazırlanması
NOT: Aşağıdaki öğeler gereklidir: çift taraflı bant takılı bir slayt cam, No. 5 forceps, 27 G enjeksiyon iğnesi, ve bir diseksiyon mikroskop.
<ol><li>Tozlaşmadan (HAP) 7 ila 8 saat sonra, pistil'i toplayın ve çift taraflı bandın üzerine yerleştirin, ardından banttaki pisti düzeltmek için plasepsiyonla hafifçe bastırın (Şekil2A,A'). NOT: Bir pistil en ovules en az bir polen tüpü 10 HAP9alırsınız. İlk polen tüpünden sperm hücrelerinin her ikisi de veya herhangi biri döllenmeyi başaramazsa, ikinci bir polentüpü döllenme kurtarma sistemi nedeniyle ovule tarafından çekilir 10 . İlk polen tüpünden sperm çekirdekleri morfolojisini analiz etmek için ovule preparatını en geç 10 HAP ile tamamlaması önerilir.</li>
	<li>Bir diseksiyon mikroskobu altında bir enjeksiyon iğnesi kullanarak yumurtalığın üst ve alt uçlarını kesin (Şekil2B,B').</li>
	<li>Enjeksiyon iğnesinin ucunu hareket ettirerek yumurtalık duvarını replum 'un her iki tarafı boyunca (Şekil2C,C') yarık. NOT: Ovule'nin septumdan ayrılmasını önlemek için enjeksiyon iğnesini sığ bir şekilde yerleştirin.</li>
	<li>Evert enjeksiyon iğnesi kullanarak yumurtalık duvarı (Şekil 2D,D').</li>
	<li>Ovules'in bağlı olduğu septumun tabanını çimdikle ve forsepslerle dikkatlice kaldırın (Şekil2E).</li>
	<li>Ovules bir slayt cam üzerinde su damlası içine aktarın ve yavaşça bir floresan mikroskobu altında gözlem için bir kapak cam ile kaplayın (Şekil2E,E').</li>
</ol>3. Mikroskopi
NOT: Bu protokolde, floresan filtre küpü (bkz. MalzemeTablosu), bir dijital fotoğraf makinesi ve beraberindeki yazılımla donatılmış bir epifloresan mikroskobu kullandık.
<ol><li>20x veya 40x objektif lens ve donanımlı dijital fotoğraf makinesi kullanarak mRFP ile etiketlenmiş sperm çekirdekleri içeren ovules görüntüleri elde edin.</li>
	<li>Bir embriyo kesesinde mRFP etiketli sperm çekirdeklerinin sayısını doğrulayın. NOT: İki mRFP etiketli sperm çekirdeği içeren ovules istatistiksel analiz için popülasyon büyüklüğüne dahil edilebilir.</li>
	<li>Bir embriyo kesesinde mRFP etiketli her sperm çekirdeğinin şeklini ve konumunu doğrulayın. NOT: Polen tüpünden çıktıktan hemen sonra, bir çift yoğunlaştırılmış mRFP etiketli sperm çekirdeği yumurta ile merkezi hücre arasında lokalize edilir. Chalazal end tarafında saptanan bir decondensed mRFP etiketli sperm çekirdeği merkezi hücre döllenme gösterir, örneğin. Uygun bir kadın gamet membran marker hattı kullanılarak, Ek Şekil1'de gösterildiği gibi, sperm hücresinin plazmogami geçirilip geçirilmediği (membran füzyonundan sonra ama karyogamiden önce) net bir şekilde izlenebilir.</li>
</ol>

<ol><li>Mori, T., Kawai-Toyooka, H., Igawa, T., Nozaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gamete+dialogs+in+green+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant%22%5BJournal%5D)">Gamete dialogs in green lineages.</a> Molecular Plant. 8, 1442-1454 (2015).</li>
<li>Dresselhaus, T., Sprunck, S., Wessel, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertilization+mechanisms+in+flowering+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Fertilization mechanisms in flowering plants.</a> Current Biology. 26, R125-R139 (2016).</li>
<li>Mori, T., Kuroiwa, H., Higashiyama, T., Kuroiwa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GENERATIVE+CELL+SPECIFIC+1+is+essential+for+angiosperm+fertilization%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">GENERATIVE CELL SPECIFIC 1 is essential for angiosperm fertilization.</a> Nature Cell Biology. 1, 64-71 (2006).</li>
<li>von Besser, K., Frank, A. C., Johnson, M. A., Preuss, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arabidopsis+HAP2+%28GCS1%29+is+a+sperm-specific+gene+required+for+pollen+tube+guidance+and+fertilization%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Arabidopsis HAP2 (GCS1) is a sperm-specific gene required for pollen tube guidance and fertilization.</a> Development. 133, 4761-4769 (2006).</li>
<li>Mori, T., Igawa, T., Tamiya, G., Miyagishima, S. Y., Berger, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gamete+attachment+requires+GEX2+for+successful+fertilization+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Gamete attachment requires GEX2 for successful fertilization in Arabidopsis.</a> Current Biology. 24, 170-175 (2014).</li>
<li>Takahashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+male+gamete+membrane+protein+DMP9%2FDAU2+is+required+for+double+fertilization+in+flowering+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The male gamete membrane protein DMP9/DAU2 is required for double fertilization in flowering plants.</a> Development. 145, dev170076(2018).</li>
<li>Ingouff, M., Hamamura, Y., Gourgues, M., Higashiyama, T., Berger, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+dynamics+of+HISTONE3+variants+between+the+two+fertilization+products+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Distinct dynamics of HISTONE3 variants between the two fertilization products in plants.</a> Current Biology. 17, 1032-1037 (2007).</li>
<li>Smyth, D. R., Bowman, J. L., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+flower+development+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Early flower development in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 2, 755-767 (1990).</li>
<li>Kasahara, R. D., Maruyama, D., Higashiyama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertilization+recovery+system+is+dependent+on+the+number+of+pollen+grains+for+efficient+reproduction+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Signaling+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Fertilization recovery system is dependent on the number of pollen grains for efficient reproduction in plants.</a> Plant Signaling & Behavior. 8, e23690(2013).</li>
<li>Kasahara, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertilization+recovery+after+defective+sperm+cell+release+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Fertilization recovery after defective sperm cell release in Arabidopsis.</a> Current Biology. 22, 1084-1089 (2012).</li>
<li>Hamamura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-cell+imaging+reveals+the+dynamics+of+two+sperm+cells+during+double+fertilization+in+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Live-cell imaging reveals the dynamics of two sperm cells during double fertilization in Arabidopsis thaliana.</a> Current Biology. 21, 497-502 (2011).</li>
<li>Igawa, T., Yanagawa, Y., Miyagishima, S., Mori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+gamete+membrane+dynamics+during+double+fertilization+of+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plant+Research%22%5BJournal%5D)">Analysis of gamete membrane dynamics during double fertilization of Arabidopsis.</a> Journal of Plant Research. 126, 387-394 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

HTR10-mRFP etiketleri baba kromatin (yani, sperm hücre çekirdekleri görselleştirir), ve çift döllenme dinamikleri bildirilmiştir7. Polen tüpünden salındıktan hemen sonra HTR10-mRFP etiketli sperm çekirdekleri hala yoğunlaşır. Ancak, sperm çekirdeklerinin her biri gamet membran füzyon7sonra karyogamy üç ila dört saat bir döllenmiş kadın gamet çekirdeği ile birleştirme üzerine decondensed . Döllenmemiş sperm hücreleri yoğun kalır, hangi gcs1 sperm hücrelerinin döllen...

Çiçekli bitkiler çift gübreleme yoluyla tohum üretmek, doğrudan gamet plazma membran lokalize proteinler arasındaki etkileşimler tarafından kontrol edilen bir süreç1,2. Çiçekli bitki erkek gametler, sperm hücrelerinin bir çift, polen gelişir. Tozlaşma dan sonra büyüyen bir polen tüpü kadın gametler, bir yumurta hücresi ve bir embriyo kesesinde geliştirmek merkezi bir hücre, sperm hücrelerinin bir çift sunar. Erkek ve dişi gametler karşılaştıktan sonra, gamet yüzeyindeki proteinler çift döllenmeyi tamamlamak için tanıma, bağlanma ve füzyonu teşvik eder. Daha önceki çalışmalarda erkek gamet membran proteinleri GENERATIVE CELL SPECIFIC 1 (GCS1)/HAPLESS2 (HAP2)3,4 ve GAMETE EXPRESSED 2 (GEX2)5 gamet füzyonu ile ilgili döllenme düzenleyicileri olarak tanımlanmış ve sırasıyla ek. Yakın zamanda bir erkek gamet özgü membran proteini, DUF679 DOMAIN MEMBRAN PROTEIN 9 (DMP9), gamet etkileşimi dahil bir döllenme regülatörü olarak tespit. DMP9 ekspresyonundaki azalmanın A. thaliana6'da çift döllenme sırasında yumurta hücresi döllenmesinin önemli ölçüde inhibisyonuna yol açabilen bir azalma olduğunu bulduk.
Çift döllenme yumurtalık dokusu ile daha fazla sarılmış bir ovule gömülü bir embriyo kese, oluşur gibi, gözlemlemek ve çift döllenme süreçlerinin durumları analiz etmek zordur. Bu nedenle, çift döllenme kontrolü tüm mekanizmasının tam bir anlayış engelleyen birçok belirsiz noktaları hala vardır. İn vivo koşullarda çift döllenme sırasında gametlerin davranışlarını takip etmek için gözlem tekniklerinin oluşturulması, döllenme düzenleyicileri için potansiyel adayların fonksiyonel analizi için vazgeçilmezdir. Son çalışmalarda gamet alt hücreli yapıların floresan proteinlerile etiketlendiği marker çizgileri ortaya çıkar. Bu makalede, yapay tozlaşma pistillerden elde edilen bir embriyo kesesinde meydana gelen çift döllenmeyi gözlemlemek için basit ve hızlı bir protokol göstermiş bulunuyoruz. Sperm hücresi çekirdek marker hattı HTR10-mRFP7kullanılarak, her dişi gametin döllenme durumu sperm nükleer sinyal morfolojisi temelinde ayrımcılığa uğrayabilir. Döllenmede sperm çekirdeklerinin bu kadar morfolojik değişimine odaklanan protokolümüz, istatistiksel kanıt için yeterli miktarda veri elde edebilir. Tek bir döllenme paterni göstermek için erkek bitki olarak HTR10-mRFP arka planlı(DMP9KD/HTR10-mRFP)dmp9-knockdown hattı kullanılmıştır. Protokol aynı zamanda diğer gübreleme regülatörlerinin fonksiyonel analizi için de uygundur.

<table><tbody><tr><td>BX51</td><td>Olympus</td><td></td><td>Epifloresan mikroskobu</td></tr><tr><td>Kapak camı</td><td>Matsunami camı</td><td>C018181</td><td></td></tr><tr><td>DMP9KD/HTR10-mRFP<></td><td></td><td></td><td>Arabidopsis thaliana, HTR10-mRFP background Takahashi ve ark. (2018)6</td></tr><tr><td>Çift taraflı bant</td><td>Nichiban</td><td>NW-15S</td><td>15 mm genişlik</td></tr><tr><td>DP72</td><td>Olympus</td><td></td><td>Degital kamera</td></tr><tr><td>Forseps</td><td>Vigor</td><td></td><td>Herhangi bir No. 5 forseps mevcuttur</td></tr><tr><td>Büyüme odası</td><td>Nihonika</td><td>LPH-411PFQDT-SP</td><td></td></tr><tr><td>HTR10-mRFP</td><td></td><td></td><td>Arabidopsis thaliana, ekotip Columbia-0 (Col-0) background Ingouff ve ark. ( 2007)7</td></tr><tr><td>Enjeksiyon iğnesi</td><td>Terumo</td><td>NN-2719S</td><td>27 G</td></tr><tr><td>Sürgülü cam</td><td>Matsunami camı</td><td>S9443</td><td></td></tr><tr><td>SZX9</td><td>Olympus</td><td></td><td>Diseksiyon mikroskobu</td></tr><tr><td>U-MRFPHQ</td><td>Olympus</td><td></td><td>Floresan Filtre Küpü (Uyarma: BP535-555, Emisyon: BA570-625, Dikromatik ayna: DM565)</td></tr><tr><td>UPlanFL N 40x</td><td>Olympus</td><td></td><td>Objektif lens (NA 1.3), yağa daldırmalı</td></tr><tr><td>UPlanSApo 20x</td><td>Olympus</td><td></td><td>Objektif lens (NA 0.75), kuru</td></tr></tbody></table>

arabidopsis Çift döllenmede sperm nükleer morfolojisinin İzlenmesi ile döllenme durumunun değerlendirilmesi

Evaluation of Fertilization State by Tracing Sperm Nuclear Morphology in Arabidopsis Double Fertilization

Çiçekli bitkilerin benzersiz bir cinsel üreme sistemi 'çift döllenme' olarak adlandırılan, hangi sperm hücrelerinin her tam bir yumurta hücresi veya merkezi bir hücre ile kaynaşır. Böylece, iki bağımsız döllenme olayları hemen hemen aynı anda gerçekleşir. Döllenmiş yumurta hücresi ve merkezi hücre sırasıyla zigot ve endosperm haline gelişir. Bu nedenle, çift gübreleme nin kesin kontrolü takip eden tohum gelişimi için gereklidir. Çift döllenme kadın gametophyte oluşur (embriyo kesesi), derin gizli ve kalın ovule ve yumurtalık dokuları ile kaplı. Bu pistil doku yapısı, çift döllenmenin gözlem ve analizini oldukça zorlaştırmış ve çift gübreleme mekanizmasıile ilgili birçok sorunun cevapsız kaldığı mevcut durumu yaratmıştır. Döllenme düzenleyicisi için potansiyel bir adayın fonksiyonel değerlendirilmesi için döllenmenin henotibik analizi önemlidir. Arabidopsis thalianadöllenmenin tamamlanmasını yargılamak için, sperm çekirdeklerini etiketleyen floresan sinyallerinin şekilleri gösterge olarak kullanılır. Döllenmeyi başaramayan bir sperm hücresi dişi gametlerin dışında yoğunlaştırılmış floresan sinyali ile gösterilirken, başarılı bir şekilde döllenen bir sperm hücresi, dişi gametlerin çekirdeğiile karyogami nedeniyle yoğunlaştırılmış bir sinyalle gösterilir. Burada açıklanan yöntem in vivo koşullar altında başarılı veya başarısız döllenme belirlemek için bir araç sağlar.

DMP9KD/HTR10-mRFP ile tozlanmış bir pistil ovules 7-8 HAP toplandı ve gözlendi.
Ovulların çoğunda yumurta hücresi (mikropylar yan) ve merkezi hücre (charazal end side) çekirdek pozisyonlarında sırasıyla (Şekil3A)iki adet yoğuşmalı mRFP etiketli sperm çekirdeği bulunurve bu da başarılı çift döllenmeyi gösterir. Buna ek olarak, merkezi hücre çekirdeğinde dekontosi mRFP etiketli sp...

Arabidopsis çift döllenmede sperm nükleer morfolojisi temelinde epifloresan mikroskobu kullanılarak başarılı veya başarısız döllenmeyi belirlemek için bir yöntem gösterilmektedir.

Arabidopsis Çift Döllenmede Sperm Nükleer Morfolojisinin İzlenmesi ile Döllenme Durumunun Değerlendirilmesi

Flowering plants have a unique sexual reproduction system called &#8216;double fertilization&#39;,&#160;in which each of the sperm cells precisely fuses ...

Bu protokol Arabidopsis çift döllenme belirli bir faktör katılımını değerlendirmek için bir yol sağlar. Döllenme durumu bir bakışta sperm çekirdeklerinin morfolojisi ile değerlendirilebilir, bu nedenle istatistiksel analiz için verilerin hızlı bir şekilde elde edilmesi mümkündür. Bu yöntem Arabidopsis'te döllenme fenotipinin değerlendirilmesine özgüdür.Arabidopsis'te bile hala bilinmeyen döllenme düzenleyicileri vardır. Bu yöntem, gelecekteki bilinmeyen döllenme faktörlerinin fonksiyonel analizi için yararlı olacaktır. Ovules hızlı ve bozulmamış işleme beceri master için bu analizin başarısı için önemlidir.Başlamak için, bir büyüme odasında 16 saatlik ışık ve sekiz saatlik karanlık döngüsü altında 22 santigrat derece Arabidopsis thaliana büyümek. Kes ve aksiller tomurcukları gelişimini teşvik etmek makas ile ilk geliştirilen çiçek sapı kaldırın. İlk sapı kestikten 2-3 hafta sonra bitki nin yüksekliğini ölçün.Yüksekliği 25 santimetrenin üzerinde olan bitkiler, güçlü bir şekilde büyüyen bitkiler olarak kabul edilir ve analiz için uygundur. Emasculate için, üst te görülen yaprakları bit ile evre 11 tomurcukları arayın. Sepal, yaprakları ve çiçek tomurcukları stamen kaldırmak için bir numara beş forceps kullanın.Emasculation sonra 15 ila 18 saat, forceps ile filament pinching tarafından evre 13 HTR10-mRFP çiçek arka plan ile bir DMP9-knockdown hattının stamen almak. Tozlaşmak için, hafifçe bir dehiscent anther ile bir hadım pistil birkaç kez stigma pat. Tozlaşmadan 7-8 saat sonra pistil'i toplayın ve çift taraflı bandın üzerine yerleştirin.Daha sonra, banttaki pisti düzeltmek için forceps ile hafifçe bastırın. Bir diseksiyon mikroskop altında, bir enjeksiyon iğnesi kullanarak yumurtalık üst ve alt uçları kesti. Enjeksiyon iğnesinin ucunu hareket ettirin ve yumurtalık duvarını replum'un her iki tarafı boyunca yarık için hareket ettirin.Funiculus ve iletim yollarını ayırmamak için dikkatlice kesin. Evert yumurtalık duvarı. Ovules bağlı olduğu septum tabanı çimdik ve forseps ile dikkatlice yukarı kaldırın.Bir slayt cam üzerinde su damlası içine ovules aktarın ve yavaşça bir floresan mikroskop altında gözlem için bir coverglass ile kaplayın. Floresan filtre küpü ile donatılmış bir epifloresan mikroskobunda objektif lensi 20x veya 40x olarak ayarlayın. mRFP ile etiketlenmiş sperm çekirdekleri içeren ovules görüntüleri elde edin.Bir embriyo kesesinde mRFP etiketli sperm çekirdeklerinin sayısını doğrulayın. Bir embriyo kesesinde mRFP etiketli her sperm çekirdeğinin şeklini ve konumunu doğrulayın. Bu çalışmada, ovule sperm nükleer sinyal morfolojisi ile döllenme fenotipleri değerlendirildi.Ovulların çoğunda yumurta hücresi mikropylar tarafında ve merkezi hücreli charazal uç tarafında iki adet yoğuşmalı mRFP etiketli sperm çekirdeği bulunurdu. Bu başarılı çift döllenme gösterir. Buna ek olarak, merkezi hücre çekirdeğinde dekontosi mRFP etiketli sperm çekirdeği ve yumurta hücresi dışında yoğunlaştırılmış mRFP etiketli sperm çekirdeği içeren ovulesler gözlendi ve bu da tek bir döllenme yi gösteriyordu.Çift döllenmenin başarısız olması durumunda yumurta hücresi ve merkezi hücre sınırında iki adet yoğuşmalı mRFP etiketli sperm çekirdeği gözlendi. HTR10-mRFP polen arka plan ile DMP9-knockdown hattı kullanılarak yapılan analizde, tek bir yoğunlaştırılmış mRFP etiketli sperm çekirdeği veya üç veya daha fazla mRFP etiketli sperm çekirdeği içeren ovules nadiren gözlendi. Kadın marker hatlarının kullanımı ile birleştirerek daha doğru döllenme durumu analiz edilebilir.Örneğin, gamet füzyon sonra ve karyogami önce döllenme durumu değerlendirilebilir. Evet, döllenme işlemi birkaç adıma ayrılmıştır. Her döllenme regülatörü hangi adımları bu geliştirilmiş yöntem ile cevaplanabilir dahil sorular.Bu bitkinin eşeyli üreme içine daha derin bir fikir sağlayacaktır.

evaluation-fertilization-state-tracing-sperm-nuclear-morphology

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Basma, bitki ve memeli üreme bir olgudur. DNA metilasyon, imprinting mekanizmaları önemli bir rol oynar. Endosperm Yalıtımlı ve baskılı genlerinin metilasyon durumunun...

Baskılı Genler DNA metilasyon Belirlenmesi Arabidopsis Endosperm

Hücre biyolojisinde temel bir arayış ökaryotik hücrelerin yapmak organellerin kimliği altında yatan mekanizmaları belirlemektir. Burada floresan mikroskobu ve yeni nesil dizileme araçlarını kullanarak bitki organel morfolojik ve fonksiyonel bütünlüğü sorumlu genleri tanımlamak için bir yöntem öneriyoruz.

Floresans-mikroskopi Tarama ve nesil Sekanslama: organel Bütünlüğü ile ilgilendim Genlerin belirlenmesi için Faydalı Araçlar

Biz gelen geliştirmenin erken aşamalarında embriyo izole için etkili ve basit bir yöntem...

Erken evre Embriyolar verimli ve hızlı İzolasyon<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Tohumlar

Biz İmmunosteyn, floresan in situ hibridizasyon, tüm montaj Arabidopsis thaliana ovüllerindeki kantitatif, yüksek çözünürlüklü görüntüleme ile takip DNA boyama için burada etkin ve güvenilir bir protokol sağlar. Bu yöntem başarıyla kromatin modifikasyonları ve nükleer mimarisi kullanılarak analiz edildi.

Tüm montaj ovüllerindeki in Kromatin Modifikasyonu ve Nükleer Mimarlık Kantitatif, Tek hücreli Analizi için Etkin Bir Yöntem<em&gt; Arabidopsis</em

Bu iletişim kuralı Arabidopsis içinde embriyogenez embriyo Desen oluşumu bir mikroskop altında incelenmesi ve ardından ovule izni ile gözlemlemek için bir yöntem özetliyor.

Embriyogenez Arabidopsis olarak karakterize bir yöntem

Bu el yazması Arabidopsis zigotları ve embriyo canlı hücre görüntüleme sağlar bir vitro ovule yetiştirme yöntemini açıklar. Bu yöntem sırasında zigot polarizasyon hücre içi dinamikleri ve gelişmekte olan embriyo hücre kader belirtimi görselleştirmek için kullanılmaktadır.

Vitro Zigot polarizasyon, Live-hücre görüntüleme ve Arabidopsis thaliana embriyo desenlendirme için ovule ekimi

Bu iletişim kuralı, biz teknikleri için uygun diseksiyon Arabidopsis çiçek ve siliques, bazı temel Temizleme teknikleri tarif ve yordamlar yapılar gözlemleri bütün-mount için boyama seçili.

Bütün Dağı takas ve Arabidopsis çiçek organ ve Siliques boyama

Burada, Arabidopsis thaliana'da polen tüpü rehberliğini ve alımını gözlemlemek için ovüllerin alıcılığını artıran yarı in vitro (SIV) yöntemin geliştirilmesini açıklıyoruz. Yüksek verimli SIV cum septum yöntemi, dinamik döllenme sürecini izlemek için gametofit işaretleyici çizgileri ve genetik olarak kodlanmış biyosensörlerle birleştirilebilir.

Arabidopsis Polen Tüpü Alımı ve Çift Döllenmenin Semi-In Vitro Cum Septum Yöntemi Kullanılarak Canlı Görüntülenmesi

Arabidopsis thaliana'da polen hidrasyon profillerini ölçmek için geliştirilmiş bir yöntem burada açıklanmaktadır. Yeni yöntem daha yüksek çözünürlük sunar, invaziv değildir ve yüksek oranda tekrarlanabilir. Protokol, tozlaşmanın erken aşamalarını düzenleyen süreçlerin daha ince bir diseksiyonu için yeni bir aracı temsil etmektedir.

Arabidopsis thaliana için Yüksek Çözünürlüklü, Tek Taneli, In Vivo Polen Hidrasyon Biyotahlili

Bu protokol, Arabidopsis thaliana tohumlarında endosperm hücre tabakasının sağlam örneklerinin hazırlanmasını açıklar. Yöntem, yalnızca enjeksiyon iğnesi ve hassas forseps gibi yaygın laboratuvar ekipmanı gerektirir ve hem gelişmekte olan hem de olgun tohumlardaki endosperm hücrelerinin yüksek çözünürlüklü floresan canlı hücre görüntülemesini sağlar.

Gelişmekte Olan ve Olgun Arabidopsis Tohumlarında Endosperm Hücre Tabakasının Mikroskobik Analizi için Sağlam Dokunun Hazırlanması

Mayoz fazı sırasında kromozom hareketi, spor oluşumu için temel olan, yeterince anlaşılmamış bir olgudur. Bu protokol, Arabidopsis thaliana erkek mayositlerinde mayotik faz sırasında sentromer hareketlerini elde etmek, analiz etmek ve ölçmek için bir yöntemi açıklar.

Arabidopsis thaliana'da Erkek Mayoz Fazı Sırasında Sentromer Hareketlerinin Canlı Görüntüleme Karakterizasyonu

Öğrenin, Arabidopsis çift döllenmesinde sperm nükleer morfolojisini değerlendirerek döllenme durumunu hızlıca belirleme yöntemini. Bu teknik, bilinmeyen döllenme düzenleyicilerinin fonksiyonel analizi için istatistiksel veri toplamayı kolaylaştırır.

Arabidopsis Çift Döllenmede Sperm Nükleer Morfolojisinin İzlenmesi ile Döllenme Durumunun Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet