Name: Perakende Gıda Numunelerinde Clostridium Perfringens Toxinotypes Zenginleştirme ve Algılama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: Keşfedin, perakende gıda numunelerinde Clostridium perfringens toksinotiplerini zenginleştirme ve algılama yöntemini. Bu protokol, anaerobik odalar kullanmadan epsilon toksini üreten B ve D suşlarını tespit etmeyi kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma kamu, ticari veya kar için olmayan sektörlerden herhangi bir özel fon almadı.

NOT: C. perfringens bir biyogüvenlik tehlike düzeyi 2 (BSL2) organizma olarak kabul edilir. Tüm gıda örnekleri C. perfringensiçermese de, tüm kültürlü numuneler bu şekilde ele alınmalıdır. Tüm uygun önlemler ve personel koruyucu ekipman (PPE) her zaman giyilmelidir. Bertaraf edilmeden önce tüm malzemeyi dezenfekte edin.
1. Değiştirilmiş RPM4,15 hazırlayın
<ol><li>30 g/L sıvı tiyogliserin orta, 60 g/L jelatin, 5 g/L pepton, 5 g/L glukoz, 5 g/L potasyum fosfat dibasic, 3 g/L maya ekstresi, 1,5 g/L sodyum klorür, 0,5 g/L tuzlu suda eşit olarak dağılana kadar karıştırın. Biz genellikle 1 L toplu olun.</li>
	<li>15 dk için 121 °C'de otoklav.</li>
	<li>Yaklaşık 40 °C'ye kadar soğumasını bekleyin.</li>
	<li>RPM soğuduktan sonra, 440 mg/L'lik son konsantrasyona D-sikloserin ekleyin. NOT: Steril suda 50 mg/mL'de çözünmüş D-sikloserin stok konsantrasyonları ileride kullanılmak üzere -20 °C'de saklanabilir.</li>
	<li>Aseptik olarak 10 mL RPM'yi 15 mL konik tüplere aktarın. RPM toplu olarak hazırlanabilir ve 4 °C'de bir aya kadar saklanabilir.</li>
	<li>Kullanmadan önce 37 °C'ye kadar Sıcak RPM.</li>
</ol>2. Örnek toplama ve RPM kuluçka
<ol><li>1 saat içinde ortam sıcaklığında laboratuvara gıda taşıma orijinal ambalaj veya steril kaplarda taşınabilir. Hemen test edilmezse, gıdalar kullanıma kadar -20 °C'de saklanabilir. Varsa, ambalaj etiketine ve diğer ilgili bilgilere göre gıda nın türüne ve menşe ülkesine dikkat edin.</li>
	<li>Yaklaşık 1,0-2,0 g gıda yıkın ve steril Petri kabına veya eşdeğerine aktarın. Steril bir jilet veya neşter ile ince kıyılmış.</li>
	<li>15 mL konik tüpte 10 mL fosfat tamponlu salin (PBS) içine inoküle. İyi bir şekilde karıştırın.<ol>
<li>Vektetif hücreler için seçim yapmak için, PBS-gıda karışımının 5 mL'sini 10 mL RPM içeren 15 mL konik tüpe aktarın. Kapağı sıkıca sabitle.</li>
		<li>Sporlar için seçmek için, kalan 5 mL PBS-gıda karışımını 85 °C'de 15 dakika ısıtın ve ardından 10 mL RPM içeren 15 mL konik tüpe aktarın. Kapağı sıkıca sabitle.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Girdap ve gıda-RPM kültürleri tam karıştırma sağlamak için ters.</li>
	<li>Sıkıca konik tüpler mühür ve parafin film veya plastik şal ile kapaklar sarmak anaerobik bir ortam sağlamak için.</li>
	<li>Gece (ON) 37 °C'de kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>Ertesi sabah RPM tüpleri herhangi bir bulanıklık veya fermantasyon unutmayın.</li>
</ol>3. TSC "sandviç" kaplama
<ol><li>Aşağıda açıklanan "sandviç" tekniği(Şekil 2)kullanarak On RPM kültürlerini TSC agar'a aşılamak.</li>
	<li>Üreticinin talimatlarına göre TSC agar hazırlayın.<ol>
<li>10 mL erimiş TSC agar'ı steril Petri kaplarına aktararak TSC plakalarının taban tabakasını hazırlayın ve katılaşmaya izin verin. Bunlar ileri derecede hazırlanabilir ve 4 °C'de saklanabilir. Plakaların kullanımdan önce oda sıcaklığına Kadar ısıtılmış olduğundan emin olun.</li>
		<li>TSC plakasının üst tabakası için kalan erimiş TSC agarını 40 °C'de muhafaza edin. NOT: Agar'ın erime noktası 85 °C'nin üzerinde olmasına rağmen erimiş agar 32-45 °C civarında katılaşmaya neden olur.</li>
	</ol>
</li>
	<li>ON RPM kültürlerini dikkatlice alın ve 100 μL'yi TSC agar üssüne aktarın. Fermantasyon nedeniyle, bazı kültürler baskı altında olabilir. Tüm uygun PPE giymek emin olun.</li>
	<li>Steril cam boncukveya hücre yayılımı kullanarak RPM inoculum spread.</li>
	<li>RPM oda sıcaklığında 5-10 dakika için TSC agar içine "emilir" izin verin.</li>
	<li>Serolojik pipet kullanarak 20 mL erimiş, 40 °C TSC agar'ı plakaya dikkatlice aktarın.</li>
	<li>Petri kabının kapağını değiştirin ve TSC agar'ın oda sıcaklığında tamamen katılamasını bekleyin.</li>
	<li>Petri kabını ters çevirin ve 37 °C A.Ş.'de kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>Seri seyreltmeler isteniyorsa, On RPM kültürlerinin seyreltmelerini TSC agar'a aşılamadan önce taze, önceden ısıtılmış RPM'ye dönüştürün.</li>
</ol>4. Sülfit azaltıcı kolonilerin alt culturing
<ol><li>Ertesi sabah, kuvözden plakaları çıkarın ve bakteri üremesi için inceleyin. Aerobik bakteriler agar yüzeyinde mevcut olabilir. Anaerobik bakteriler agar içinde gömülü büyüyen bulunacaktır. Sülfit azaltıcı bakteriler agar siyahçevreleyen dönecek. Olası C. perfringens kolonileri siyah ve agar gömülü olacaktır.</li>
	<li>
C. perfringens şüpheli koloniler sülfit azaltma için pozitif olacak ve siyah görünecektir, agar içinde gömülü. Steril, tek kullanımlık bir göz damlası kullanarak, siyah kolonileri agardan "koparın" ve 15 mL konik tüpte 10 mL taze RPM'ye aktarın. Agar piercing önce göz damlası gelen hava dışarı atılması önemlidir.</li>
	<li>Plaka yüzeyinde aerobik bakteri büyüme yoğun miktarda varsa, seçilen alanlardan kolonileri kaldırmak için steril bir hücre kazıyıcı kullanın. Birden fazla C. perfringens şüpheli koloniler ayrı RPM kültürleri içine aynı TSC plaka örneklenebilir.</li>
	<li>Sıkıca güvenli konik tüp kapakları ve parafin film veya plastik şal sarın. 37 °C'de A.C.</li>
</ol>5. DNA Çıkarma
<ol><li>ON RPM kültürlerini çıkarın ve bulanıklık ve fermantasyon gibi büyüme belirtilerini inceleyin.</li>
	<li>Yavaşça herhangi bir yerleşmiş bakteri dağıtmak ve dikkatlice açık RPM kültürü ters. Kültürün 1 mL'sini mikrosantrifüj tüpüne aktarın.</li>
	<li>En yüksek hızda santrifüj (yaklaşık 15.000 x g) pelet bakterileriçin 10 dakika.</li>
	<li>1 mL steril PBS ile pelet yıkayın.<ol>
<li>Bazı durumlarda, sindirilmemiş jelatin peletli bakterilerin üstüne yerleşecektir. Jelatinkaldırmak için, bir mikropipet kullanarak PBS ile hafifçe ajitasyon tarafından jelatin kapalı "kabartma". Bu bakteri pelet bozulmadan bırakarak jelatin "kabartmak" olacaktır.</li>
		<li>PBS-jelatin karışımını nazik aspirasyonla çıkarın. 1 mL taze PBS ile kalan bakteriyel peleti yeniden askıya alın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Santrifüj 10 dakika boyunca en yüksek hızda resuspended bakteriyel pelet ve dikkatle supernatant aspire.</li>
	<li>Hemen bir DNA çıkarma kiti ve gram-pozitif bakterilerden DNA çıkarma için özel olarak oluşturulan bir protokol kullanarak DNA çıkarma gerçekleştirmek (Malzemeler Tablosubakınız).</li>
	<li>Çıkarılan DNA'yı hemen kullanın veya PCR analizine kadar -20 °C'de saklayın.</li>
</ol>6. PCR genotipleme yoluyla C. perfringens tespiti
<ol><li>Kültürlerin C. perfringens toxinotypes için pozitif olup olmadığını belirlemek için, PCR ile farklı toksin genleri için çıkarılan DNA inceleyin. NOT: Biz en çok epsilon toksin üreten suşları tip B ve D C. perfringensilgilendiğiiçin, alfa, beta ve epsilon toksin genlerinin varlığını değerlendirmek. Astarlar Tablo 2'delistelenmiştir. 16'lı ribozomal DNA için astarlar DNA çıkarma kontrolü olarak kullanılır. Ek astarlar g ile toksinotipler A için test etmek için kullanılabilir ve yayınlananliteratürdebulunabilir 2,12,13.</li>
	<li>Pozitif kontrol olarak daha önce çıkarılan C. perfringens DNA kullanın. Bu denetim, PCR reaksiyonlarının tüm bileşenlerinin çalışmasını sağlar. Pozitif kontrol olarak C. perfringens tip B (ATCC 3626) den elde edilen DNA'yı kullanıyoruz. ATCC 3636 ON'u RPM'de 37 °C'de büyütün ve 5.1-5.7 adımlarında açıklanan yöntemlerle DNA ayıklayın. Çıkarılan DNA'yı kullanıma kadar -20 °C'de saklayın.</li>
	<li>PCR koşullarını aşağıdaki şekilde ayarlayın: 3 dk için 94.0 °C; 30 s için 94.0 °C; 30 s için 47.9 °C, 1 dk için 72.0 °C (35 döngü için 2-4 adımları tekrarlayın); 10 dk için 72.0 °C.</li>
	<li>PCR ürünlerini onaylamak için, standart teknikler kullanarak 1.8 g/100 mL agarose jel üzerinde PCR reaksiyonları çalıştırın. Beklenen PCR ürün boyutları Tablo 2'delistelenmiştir. Tipik PCR sonuçları Şekil 3'tegörüntülenir.</li>
</ol>

<ol><li>Petit, L., Gibert, M., Popoff, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+perfringens%3A+toxinotype+and+genotype%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Clostridium perfringens: toxinotype and genotype.</a> Trends in Microbiology. 7, 104-110 (1999).</li>
<li>Rood, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+of+the+Clostridium+perfringens+toxin-based+typing+scheme%5BTitle%5D)+AND+%22Anaerobe%22%5BJournal%5D)">Expansion of the Clostridium perfringens toxin-based typing scheme.</a> Anaerobe. , (2018).</li>
<li>Murrell, T. G., O'Donoghue, P. J., Ellis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+the+sheep-multiple+sclerosis+connection%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Hypotheses%22%5BJournal%5D)">A review of the sheep-multiple sclerosis connection.</a> Medical Hypotheses. 19, 27-39 (1986).</li>
<li>Rumah, K. R., Linden, J., Fischetti, V. A., Vartanian, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Clostridium+perfringens+type+B+in+an+individual+at+first+clinical+presentation+of+multiple+sclerosis+provides+clues+for+environmental+triggers+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Isolation of Clostridium perfringens type B in an individual at first clinical presentation of multiple sclerosis provides clues for environmental triggers of the disease.</a> PLoS One. 8, 76359(2013).</li>
<li>Wagley, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+Clostridium+perfringens+epsilon+toxin+associated+with+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis%22%5BJournal%5D)">Evidence of Clostridium perfringens epsilon toxin associated with multiple sclerosis.</a> Multiple Sclerosis. , 1352458518767327 (2018).</li>
<li>Linden, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+perfringens+Epsilon+Toxin+Causes+Selective+Death+of+Mature+Oligodendrocytes+and+Central+Nervous+System+Demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22MBio%22%5BJournal%5D)">Clostridium perfringens Epsilon Toxin Causes Selective Death of Mature Oligodendrocytes and Central Nervous System Demyelination.</a> MBio. 6, 02513(2015).</li>
<li>Popoff, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epsilon+toxin%3A+a+fascinating+pore-forming+toxin%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Journal%22%5BJournal%5D)">Epsilon toxin: a fascinating pore-forming toxin.</a> FEBS Journal. 278, 4602-4615 (2011).</li>
<li>Lee, C. A., Labbe, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+Enterotoxin-+and+Epsilon-Positive+Clostridium+perfringens+Spores+in+U.S.+Retail+Spices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+Protection%22%5BJournal%5D)">Distribution of Enterotoxin- and Epsilon-Positive Clostridium perfringens Spores in U.S. Retail Spices.</a> Journal of Food Protection. 81, 394-399 (2018).</li>
<li>Wen, Q., McClane, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+enterotoxigenic+Clostridium+perfringens+type+A+isolates+in+American+retail+foods%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Detection of enterotoxigenic Clostridium perfringens type A isolates in American retail foods.</a> Applied and Environmental Microbiology. 70, 2685-2691 (2004).</li>
<li>Cooper, K. K., Bueschel, D. M., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+Clostridium+perfringens+in+retail+chicken+livers%5BTitle%5D)+AND+%22Anaerobe%22%5BJournal%5D)">Presence of Clostridium perfringens in retail chicken livers.</a> Anaerobe. 21, 67-68 (2013).</li>
<li>Strong, D. H., Canada, J. C., Griffiths, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+Clostridium+perfringens+in+American+foods%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Incidence of Clostridium perfringens in American foods.</a> Applied and Environmental Microbiology. 11, 42-44 (1963).</li>
<li>Buogo, C., Capaul, S., Hani, H., Frey, J., Nicolet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+Clostridium+perfringens+type+C+enteritis+in+pigs+using+a+DNA+amplification+technique+%28PCR%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Medicine%2C+Series+B%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of Clostridium perfringens type C enteritis in pigs using a DNA amplification technique (PCR).</a> Journal of Veterinary Medicine, Series B. 42, 51-58 (1995).</li>
<li>Yamagishi, T., Sugitani, K., Tanishima, K., Nakamura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymerase+chain+reaction+test+for+differentiation+of+five+toxin+types+of+Clostridium+perfringens%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Polymerase chain reaction test for differentiation of five toxin types of Clostridium perfringens.</a> Microbiology and Immunology. 41, 295-299 (1997).</li>
<li>Johansson, A., Engstrom, B. E., Frey, J., Johansson, K. E., Baverud, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+clostridium+perfringens+during+simulated+transport+and+stability+of+some+plasmid-borne+toxin+genes+under+aerobic+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Veterinaria+Scandinavica%22%5BJournal%5D)">Survival of clostridium perfringens during simulated transport and stability of some plasmid-borne toxin genes under aerobic conditions.</a> Acta Veterinaria Scandinavica. 46, 241-247 (2005).</li>
<li>Erickson, J. E., Deibel, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+medium+for+rapid+screening+and+enumeration+of+Clostridium+perfringens+in+foods%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">New medium for rapid screening and enumeration of Clostridium perfringens in foods.</a> Applied and Environmental Microbiology. 36, 567-571 (1978).</li>
<li>Regan, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+epsilon+toxin-producing+Clostridium+perfringens+strains+in+American+retail+food%5BTitle%5D)+AND+%22Anaerobe%22%5BJournal%5D)">Identification of epsilon toxin-producing Clostridium perfringens strains in American retail food.</a> Anaerobe. 54, 124-127 (2018).</li>
</ol>

Açıklama yok.

Burada, sınırlı subculturing ve anaerobik oda sistemi kullanmadan perakende gıda örneklerinde C. perfringens yaygınlığını belirlemek için bir yöntem açıklıyoruz. Bu yöntem, gıda numunelerinden C. perfringens belirlenmesini artırmak için tekniklerin bir kombinasyonunu kullanır. RPM ortamının değiştirilmiş bir sürümünü kullanarak, C. perfringensseçici büyüme için izin verir. TSC agar katmanları arasında aşılanmış RPM sandviç olarak, tespit etmek ve C. perfringensanaerobik, sülfit azaltıcı bakteri karakteristik izole edebiliyoruz. C. perfringensvarlığını onaylamak için, sülfit azaltıcı koloniler taze RPM içine alt kültürlü. Modifiye edilmiş sürüm veya RPM, belirli toksin genlerinin PCR teyidini sağlayarak kültürlerden kolayca DNA çıkarmamızı sağlar. C. perfringens kontamine gıda örnekleri onayı üç gün içinde elde edilebilir.
İlk deneylerde, gıda örnekleri sadece RPM ve DNA ON kültürleri çıkarılan içine aşılanmış edildi. Bu yöntem, sınırlı sayıda örnekte (veriler gösterilmez) C. perfringens'in algılanmasıyla sonuçlandı. RPM C. perfringens büyüme için seçici olmasına rağmen, C. perfringens büyüme için özel değildir. Diğer, gram-pozitif, D-cycolserine dirençli bakteriler hala RPM büyüyebilir. Diğer bakteri türlerinin kontaminasyonunun, ilk ON RPM kültürümüzde PCR analizimizin hassasiyetini azaltarak C. perfringens suşlarının tespitini azaltmış olabileceğini varsaverdik. C. perfringens tespitini artırmada kritik bir adım TSC agar "sandviç" tekniğinin dahil edilmesioldu. Bu bize ayırt etmek ve anaerobik, sülfit azaltıcı koloniler, C. perfringens karakteristik seçmek için izin verdi. Bu süreçte önemli bir adım erimiş TSC agar üst tabakası 40 ° C olmasını sağlamaktır. Bazı C. perfringens suşları artan sıcaklıklarda büyüyebilir rağmen (46-48 °C)15,16, artan sıcaklıklarda erimiş agar eklenmesi büyük ölçüde kurtarılan kültürlerin miktarını azaltır, büyük olasılıkla hücre ölümü nedeniyle .
Bu yöntemiçin çeşitli olası sınırlamalar vardır. Daha önce de belirtildiği gibi, ne RPM ne de TSC agar seçer veya C. perfringens için sadece farklılaştırır, gıda örneklerinde mevcut diğer bakteri türlerinin büyümesine izin. Bu, yalnızca C. perfringens için seçmek için tsay duyarlılığını azaltabilir. Ancak, bu hemen hemen tüm kültür teknikleri ortak bir sınırlamadır. Saflaştırılmış izole lerin genotipleme onayı C. perfringens ve diğer bakteri türlerini kesin olarak tanımlamak için en iyi yöntemdir. Bu çalışmanın bir diğer sınırlaması da saflaştırılmış izolasyonları test etmememizdir. Bunu, plazmid kaybına neden olacak şekilde tekrarlanan subküle atma lardan korktuğu için, subküle etme miktarını sınırlamak için kasıtlı olarak yaptık. Saflığı izole etmediğimiz için, aynı örnek veya alt kültürde birden fazla C. perfringens toxinotypes'un bulunması mümkündür. Araştırmacılar saflaştırılmış izole elde etmek istiyorsanız, standart arıtma yöntemleri bu yöntemde açıklanan son RPM kültürü üzerinde kullanılabilir; bu genellikle anaerobik odaların kullanımını gerektirir. Başlangıçta C. perfringens gıda izole etmek için kullanılan rağmen, bu yöntem tanımlamak ve c. perfringens çok sayıda kaynaktan izole etmek için kullanılabilir. Özellikle, bu yöntemin bu tür bir uygulama daha iyi enfeksiyon kaynağını anlamak için C. perfringens ile enfekte olduğundan şüphelenilen insanlar (veya hayvanlar) dışkı örnekleri test etmek ve toxinotype bakteri.

Clostridium perfringens (C. perfringens)bir Gram pozitif, anaerobik, spor oluşturan, çevrede her yerde bulunan çubuk şeklinde bakteridir. Bu bakteri türü 17 toksinüzerinde kodlayan genler taşır ve tarihsel olarak, dört farklı toksin geninin varlığına dayanan beş toksin (A-E) olarak karakterize edilmiştir: alfa, beta, epsilon ve iota toksin (Tablo 1)1. Son zamanlarda, bu yazım düzeni C. perfringens enterotoksin (CPE) ve NetB toksin, sırasıyla2liman F ve G, türleri içerecek şekilde genişletilmesi gerektiği ileri sürülmüştür . Ancak, bu entrika sistemi resmen kabul edilmeden önce daha fazla araştırma gereklidir. Alfa toksin geni kesinlikle kromozomal olarak bulunurken, CPE geni hem kromozomda hem de plazmidlerde bulunabilir. Buna karşılık, kalan toksinlerin genleri çeşitli farklı boyutlu plazmidler bulunur. Bu suşlar insanlarda multipl sklerozun (MS) tetiklemede rol oynadığı öne sürülen son derece güçlü, gözenek oluşturan bir toksin olan epsilon toksini ürettiği için C. perfringens tip B ve D'nin yaygınlığı ile özellikle ilgileniyoruz3 ,4,5,6,7. İnsanların bu suşlar tarafından nasıl enfekte veya kolonize hale olduğu bilinmemektedir. Olası bir açıklama kontamine gıda ürünlerinin tüketimi ile. Bu soruyu yanıtlamaya yardımcı olmak için, Amerikan gıda örneklerinde farklı C. perfringens toxinotypes yaygınlığını belirlemek için çalıştı.
Amerikan gıda örneklerinde C. perfringens toxinotypes varlığı az çalışılmıştır ve genellikle anaerobik konteyner sistemleri ve çok sayıda alt culturing adımları8,9,10,11 kullanımını gerektirir . Saflaştırılmış izole elde etmek için çok sayıda alt culturing adım gerekli olmasına rağmen, Bu yöntem zamanla plazmid kaybına yol açabilir12,13,14, muhtemelen plazmid kaynaklı toksin genlerinin tespitini etkileyen epsilon toksin geni de dahil olmak üzere. Biz anaerobik odaları, kavanoz veya çanta kullanmadan seçici kültür C. perfringens için, daha az alt culturing adımları ile kolay bir yöntem geliştirmeye çalıştı. Kısaca, gıda örnekleri Rapid Perfringens Media (RPM) gecede (ON) içine aşılanır, sonra "sandviç" TSC agar içine ve ON inkübe. C. perfringens olduğundan şüphelenilen koloniler daha sonra RPM'ye alt kültürlenir ve tekrar ON'a kuluçkaya yatırılır. DNA çıkarılır ve genotipi belirlemek için PCR yapılır (Şekil 1). Biz diğer daha standart medya15ile karşılaştırıldığında gıda numuneleri C. perfringens suşların kurtarma artırmak için gösterilmiştir olarak RPM kullanmayı seçti. Buna ek olarak, RPM başarıyla bir MS hasta dan tip B suşu üreten bir epsilon toksin izole etmek için kullanılmıştır4. Kolay DNA çıkarma sağlamak için orijinal sürüm yerine RPM değiştirilmiş bir sürümünü kullanın. Bu yöntem, numuneler içinde toksin genlerinin kolayca tanımlanmasını sağlarken, tek bir numunenin birden fazla C. perfringens toxinotype içermesi mümkündür. Yöntemimiz birden fazla saflaştırma turunun kullanılmasıyla saflaştırılmış suşları izole etmediğinden, bir örnekten birden fazla toxinotipin tanımlanması mümkün değildir. Ancak, standart arıtma teknikleri (genellikle TSC plakaları veya kan agar plakaları üzerine streaking) saflaştırılmış kültürleri elde etmek için protokolümüzün sonunda uygulanabilir.

<table><tbody><tr><td>D-Sikloserin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6880</td><td></td></tr><tr><td>Dekstroz</td><td>Sigma Yaşam Bilimleri</td><td>D9434-250G</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Transfer Pipetleri</td><td>herhangi bir marka</td><td></td><td>Thermo Scientific Tek Kullanımlık Transfer Pipetleri 137116M/EMD</td></tr><tr><td>DNeasy Blood & Doku Kitleri</td><td>Qiagen</td><td>69504</td><td>Not: çok sayıda DNA ve plazmit ekstraksiyon kiti değerlendirildi, bu kit en çok arzu edilen sonuçları verdi.</td></tr><tr><td>Kuru İnkübatör</td><td>herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sıvı tiyoglikolat ortamı</td><td>Remel</td><td>R453452</td><td></td></tr><tr><td>Domuz derisinden elde edilen jelatin</td><td>Sigma Life Science</td><td>G1890-500G</td><td></td></tr><tr><td>Bireysel Primerler</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Demir (II) sülfat heptahidrat</td><td>Sigma Life Science</td><td>F8633-250 G</td><td></td></tr><tr><td>Tavuk yumurtası beyazından lizozim</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L6876</td><td>DNA ekstraksiyonu için gereklidir, kit mikrosantrifüj tüpünde sağlanmaz,</td></tr><tr><td></td><td>herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>parafilm veya plastik sargı</td>, kazein ve diğer hayvansal proteinlerden <td>herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pepton</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70173-100G</td><td></td></tr><tr><td>Perfringens Agar Tabanı (TSC + SFP)</td> <td>Oxoid</td><td>CM0587</td><td>TSC agarını talimatlara göre yapın</td></tr><tr><td>Potasyum fosfat dibazik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2222-100G</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-7653</td><td></td></tr><tr><td>Steril Hücre Sıyırıcı</td><td>herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steril hücre Yayıcı</td><td>herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steril petri kapları</td><td>herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Jel elektroforezi için malzeme ve ekipman</td><td>herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>masa üstü santrifüj</td><td>herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Taq&nbsp; PCR Master Mix Kiti</td><td>Qiagen</td><td>201443</td><td></td></tr><tr><td>PCR reaksiyonu için termodöngüleyici</td><td>herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>su banyosu</td><td>herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Maya özü</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70161-100G</td><td></td></tr></tbody></table>

perakende gıda numunelerinde clostridium perfringens toxinotypes zenginleştirme ve algılama

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

Clostridium perfringens (C. perfringens)üretken bir toksin üreticisidir ve çeşitli konaklarda çok çeşitli hastalıklara neden olur. C. perfringens beş farklı toksin genleri taşıma dayalı beş farklı toksin tipleri, A ile E, ayrılır. Bu çeşitli toksinotiplerin yaygınlığı ve dağılımı, özellikle Amerikan perakende gıda yaygınlığı, az çalışılmıştır. Bizi özellikle ilgilendiren tip B ve D suşları, epsilon toksin üretmek, son derece ölümcül toksin insanlarda multipl skleroz çevresel tetikleyici olduğu öne sürüldü. Çeşitli gıda örneklerinde farklı C. perfringens toxinotypes varlığını değerlendirmek için, biz seçici sadece üç culturing adımları içeren bir anaerobik konteyner sistemi kullanmadan bu bakterileri kültür için kolay bir yöntem geliştirdi. Gıda yerel bakkallardan satın alınır ve ortam koşullarında laboratuvara taşınır. Numuneler modifiye hızlı perfringens ortama (RPM) doğrlanır ve bir gecede 37 °C'de kapalı, hava geçirmez konik bir tüpiçinde kuluçkaya yatırılır. Gece kültürleri katı Triptose Sülfit Cycloserine bir alt tabaka üzerine aşılanmış (TSC) agar, ve sonra erimiş TSC agar bir üst tabaka ile kaplanmış, bir "sandviç", anaerobik bir ortam yaratmak. Agar plakaları bir gecede 37 °C'de kuluçkaya yatırılır ve daha sonra siyah, sülfit azaltıcı kolonilerin görünümü için değerlendirilir. C. perfringens-şüpheli koloniler steril göz damlalıkları kullanılarak TSC agar kaldırılır ve RPM içine aşılanmış ve hava geçirmez konik bir tüp içinde 37 °C'de bir gecede alt kültürlü. DNA RPM alt kültüründen çıkarılır ve polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yoluyla C. perfringens toksin genlerinin varlığı için analiz edilir. Örnekalınan gıdanın türüne bağlı olarak, numunelerin tipik olarak %15-20'si C. perfringensiçin pozitif test eder.

Bu yöntemi kullanarak, örneklenmiş gıdalarımızın -20'si C. perfringenspozitif tir. Çoğu suş toksinotip A pozitif olmakla birlikte, gıda örneklerinde hem Tip B hem de D'yi başarıyla tespit ettik. Daha önce yayınlanmış bir makalede, New York perakende mağazalarından satın alınan toplam 216 gıda numunesini test ettik16 (Tablo 3). Bu örnekler arasında çeşitli et örnekleri (sığır eti, kuzu, domuz eti ve kuzu eti), kümes hayvanları örnekleri (tavuk ve hindi) ve deniz ürünleri örnekleri (morina, somon, kabuklu deniz ürünleri, snapper, pisi balığı, kalamar, tilapia, ton balığı ve diğer çeşitli balıklar) yer aldı. Ürün ve süt ürünleri de test edildi. 216 örnekte 34 () C. perfringensiçin pozitif ti. 34 C. pozitif numunelerin<img alt="Isı şoku yöntemiyle hücrelerden/sporlardan DNA ekstraksiyonu için gıda numunesi PCR analizi iş akışı şeması." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59931/59931fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59931/59931fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Katmanlı jel elektroforez diyagramı; Petri kabında DNA ayrımı için TSC ve RPM katmanları." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59931/59931fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59931/59931fig02large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Elektroforez sonuçları; DNA bantları; tür tanımlaması; jel diyagramı; 250-750bp merdiven." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59931/59931fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59931/59931fig03large.jpg" target="_blank"></a><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td colspan="2"></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="5"></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="2"></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="8"></td></tr><tr><td colspan="8"> </td></tr></tbody></table><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> </td><td></td></tr><tr><td></td><td> </td><td></td></tr><tr><td></td><td> </td><td></td></tr><tr><td></td><td> </td><td></td></tr></tbody></table><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td colspan="3" rowspan="2"></td><td colspan="2"></td><td colspan="2"></td><td colspan="2"></td><td colspan="2"></td><td colspan="2"></td></tr><tr><td colspan="2"></td><td colspan="2"></td><td colspan="2"></td><td colspan="2"></td><td colspan="2"></td></tr><tr><td colspan="2"></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="5"></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="3"></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="11"></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="4"></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="4"></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Bu protokolün amacı, anaerobik odacıklar kullanılmadan, özellikle b ve D gerinim tipleri üreten epsilon toksini olmak üzere, yerel olarak satın alınan gıdalarda farklı Clostridium perfringens toksinlerini tespit etmektir.

Perakende Gıda Numunelerinde Clostridium Perfringens Toxinotypes Zenginleştirme ve Algılama

Clostridium perfringens (C. perfringens) is a prolific toxin producer and causes a wide range of diseases in various hosts. C. perfringens is categorized ...

Farklı C perfringens toxinotypes için gıda örnekleri test etmek için kolay bir yöntem geliştirdik. Epsilon toksini üreten toksinotip B ve D'nin yaygınlığı ile özellikle ilgileniyoruz. Protokolümüz, anaerobik odacıklar veya sınırlı alt culturing ile kuvözler kullanmadan çeşitli C perfringens toxinotypes kolay zenginleşme ve algılama sağlar.Bu yöntem aynı zamanda toprak, su, dışkı örnekleri ve daha fazla sınamak için kullanılabilir. Prosedürü gösteren Zuha Anwar ve Samantha Regan, laboratuvar teknisyenleri olacaktır. Modifiye hızlı perfringens orta veya RPM hazırlayarak başlayın.El yazması talimatlara göre malzemeyi birleştirin ve karışımı 121 derecede 15 dakika otoklavlayın. Orta yaklaşık 40 santigrat derece soğumasını bekleyin, sonra litre başına 440 miligram son konsantrasyona D-sikloserin ekleyin. Aseptik 15 mililitrekonik tüpler için RPM aktarmak ve bir aya kadar dört derece santigrat de saklayın.Kullanmadan önce ortayı 37 dereceye Kadar ısıtın. Test edilecek numuneleri toplarken, yiyecekleri el yazması talimatlara göre laboratuvara aktarın. Hemen test edilmezse, gıda eksi 20 santigrat derece saklanabilir.Gıda türü ve menşe ülke yanı sıra diğer ilgili bilgileri not olun. Gıda test etmek için, steril bir Petri kabına yaklaşık bir ila iki gram aktarın ve steril bir jilet veya neşter ile ince ince kıyın. 15 mililitrelik konik bir tüpiçinde 10 mililitre PBS içine aşılayın ve iyice karıştırın.PBS gıda karışımının beş mililitresini 10 mililitre RPM ile 15 mililitrelik konik bir tüpe aktararak ve kapağı sıkıca kapatarak bitkisel hücreler için seçin. 15 dakika boyunca 85 santigrat derece karışımıkalan beş mililitre ısıtarak sporlar için seçin. Ve sonra RPM ile bir tüp e nakletmek ve sıkıca kapağı nı kapatArak.Tam karıştırma sağlamak için, girdap ve gıda RPM kültürleri ters. Daha sonra, sıkıca konik tüpler mühür ve anaerobik bir ortam yaratmak için parafin film ile kapakları sarın. Tüpleri bir gecede 37 santigrat derecede kuluçkaya yatırın ve ertesi sabah herhangi bir bulanıklık veya fermantasyona dikkat edin.Tryptose Sulfite Cycloserine veya TSC Agar üreticinin yönüne göre hazırlamak ve daha sonra gece RPM kültürleri ile aşılamak için sandviç tekniğini kullanın. Erimiş Agar'ın 10 mililitresini steril Petrie yemeklerine aktararak ve katılaşmasını sağlayarak tabakların taban tabakasını hazırlayın. Kalan TSC Agar'ı üst tabaka için 40 santigrat derecede koruyun ve bir gecede RPM kültürünün 100 mikrolitresini dikkatlice Agar üssüne aktarın.Bazı kültürler fermantasyon nedeniyle baskı altında olabilir, bu nedenle tüm uygun kişisel koruyucu ekipman giymek emin olun. Steril cam boncuklar veya bir hücre yayıcı ile inoculine spread ve RPM 5 ila 10 dakika boyunca Agar içine emilir sağlar. Daha sonra, erimiş TSC Agar'ın 20 mililitresini dikkatlice plakaya aktarmak için serolojik bir pipet kullanın.Petrie çanak kapağını değiştirin ve TSC Agar'ın oda sıcaklığında tamamen katılamasını bekleyin, sonra yemeği ters çevirin ve bir gecede 37 santigrat derecede kuluçkaya yatırın. Gerekirse, TSC Agar'a aşılamadan önce RPM kültürünün seri seyreltmelerini gerçekleştirin. Kuluçkadan sonra, bakteri üremesi için plakaları inceleyin.Aerobik bakteriler Agar yüzeyinde mevcut olabilir, anaerobik bakteriler Agar gömülü olacak iken. Sülfit azaltıcı bakteriler çevredeki Agar'ı siyaha çevirecek ve olası C perfringens kolonileri siyah ve Agar'a gömülmüş olacak. Plaka yüzeyinde aerobik bakteri büyüme yoğun miktarda varsa, seçilen alanlardan kolonileri kaldırmak için bir hücre kazıyıcı kullanın.Şüpheli C perfringens kolonileri Agar koparmak için steril tek kullanımlık göz damlalığı kullanın, Önce Agar piercing hava çıkarmak için emin olun. 15 mililitrelik konik bir tüp içinde 10 mililitre taze RPM kolonileri aktarın. Aynı plakadan ayrı RPM kültürleri içine birden fazla koloni örneklenebilir.Konik tüp kapaklarını sıkıca sabitleyin, parafin filmine sarın ve bir gecede 37 santigrat derecede kuluçkaya yatırın. C perfringens bir BSL iki organizmadır. Özellikle gecelik RPM kültürleri açarken her zaman uygun güvenlik önlemlerinin kullanılması ve kullanılmış ortamların dikkatlice dekontamine edilmesi ve bertaraf edilmesi önemlidir.Ertesi gün, bir gecede kültürleri çıkarın ve bulanıklık ve fermantasyon için onları incelemek, sonra DNA çıkarma ile devam edin. Yavaşça herhangi bir yerleşmiş bakteri dağıtmak ve dikkatle tüp açmak için RPM kültürü ters. Bir mililitreyi mikrosentrifüj tüpüne aktarın ve bakterileri santrifüj le peletlayın.Bir mililitre steril PBS ile peletyı yıkayın. Sindirilmemiş jelatin bakterilerin üstüne yerleşmiş ise, PBS ile ajitasyon tarafından kabartmak. Jelatin ve PBS'yi yavaşça aspire edin ve kalan bakteriyel peleti bir mililitre taze PBS ile yeniden askıya alın.Bu hücre pelet sınırlı rahatsızlık ile herhangi bir peletli jelatin kaldırmak için önemlidir. Jelatinin çıkarılamaması DNA ekstraksiyonu ve PCR'yi inhibe edebilir. 10 dakika boyunca bakteri santrifüj ve dikkatle supernatant aspire.Daha sonra gram pozitif bakteriler için özel olarak tasarlanmış bir kit kullanarak DNA ekstraksiyongerçekleştirin. DNA'yı hemen kullanın veya eksi 20 derecede saklayın. Kültürlerin C perfringens toxinotypes için pozitif olup olmadığını belirlemek için çıkarılan DNA PCR gerçekleştirin.Tüm PCR reaktiflerinin çalıştığından emin olmak için C perfringens DNA'yı pozitif kontrol olarak kullanın. PCR'yi el yazması talimatlara göre çalıştırın ve agarose jel elektroforezile ürünleri analiz edin. Bu protokol, New York perakende mağazalarından satın alınan toplam 216 gıda numunesini test etmek için kullanılmıştır.Örnekler arasında çeşitli et örnekleri, kümes hayvanları örnekleri ve deniz ürünleri örnekleri yer almaktadır. C perfringens Tip B pozitif kontrol olarak kullanılmıştır. Örneklenmiş gıdaların %15-20'sinin C perfringens testipozitif olduğu saptanmıştır.34 pozitif örnekten 31'inde alfa toksin, bir örnekalfa, beta ve epsilon toksini içeriyordu. Ve iki örnek alfa ve epsilon toksini içeriyordu. Farklı C perfringens toxinotypes için gıda örnekleri test etmek için kolay bir yöntem geliştirdik.Epsilon toksini üreten toksinotip B ve D'nin yaygınlığı ile özellikle ilgileniyoruz.

enrichment-detection-clostridium-perfringens-toxinotypes-retail-food

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Trichothecenes (insan sağlığı için endişe mikotoksinler) rekabetçi bir immünokimyasal yöntemi ve bir final elektrokimyasal algılama dayalı yeni geliştirilen bir tarama yöntemi kullanılarak tespit etmek için bir protokol olduğunu göstermiştir.

Mikotoksin Algılama ELIME (Enzim İmmüno Manyetik Elektrokimyasal Bağlantılı) Yöntem

Bu protokol, ardından hızlı bir şekilde tüm hücre algılama, domates ve diğer taze ürün yüzeyler örnekleme için basit bir yapışkan bant tabanlı yaklaşım,...

Yapışkan bant tabanlı Örnekleme ve Floresans kombinasyonu In situ</emHızlı Algılama> Hibridizasyon Salmonella Taze üretin

Biz son zamanlarda basit bir bakteriyel tespiti için floresan assay "mix-ve-okuma" kurmak için uygulanabilir Flourogenik DNAzyme probları üretmek için yeni bir yaklaşım bildirdin. Bu özel DNA sondaları böylece floresans sinyali kuşağa bakteriyel algılama çevirme belirli bakteri tarafından üretilen ham hücre dışı karışımı (CEM) varlığında, bir kromofor-değiştirilmiş-DNA RNA kimerik substratın bölünme katalize. Bu yazıda, "RFD-EC1" ifade belirli bir DNAzyme prob modeli bakterinin tespiti için...

Flourogenik DNAzymes kullanarak Bakterilerin Tespiti

Kaynak: Anwar, Z., ve diğerleri. Perakende Gıda Örneklerinde Clostridium perfringens Toksinotiplerinin Zenginleştirilmesi ve Tespiti. J. Vis. Uzm. (2019).Bu videoda, sülfit indirgeyen bakteriler, sülfit içeren bir agar ortamında kültürlenir, burada anaerobik olarak büyürler ve sülfiti hidrojen sülfüre indirgeyerek demir iyonları ile siyah çökeltiler oluştururlar. Siyah koloniler, aseptik teknikler kullanılarak agar derinliğinden izole edilir ve sürekli anaerobik inkübasyon için taze ortama...

Bir Agar Kültüründen Sülfit İndirgeyen Anaerobik Bakterilerin Alt Kültürlenmesi

Kaynak: Pava-Ripoll ve diğerleri. Bireysel pislik sineklerinden gıda kaynaklı bakteriyel patojenlerin tespiti. J. Vis. Exp. (2015)Bu video, patojenlere özgü tabletler kullanarak zenginleştirilmiş sinek örneklerinden hedef bakteriyel DNA'yı amplit eden PCR tabanlı bir yöntemi gösteriyor; bu yöntem, bireysel böceklerde gıda kaynaklı patojenlerin varlığını doğrulamak için gerçek zamanlı floresans tespiti ve erime eğrisi analizini mümkün kılar.

Zenginleştirilmiş Sinek Örneklerinden Gıda Kaynaklı Patojenlerin PCR Tabanlı Tespiti

H7 benzersiz bir genetik işaretleyici, Z3276 hedefleme: A QPCR tahlil Escherichia coli O157 tespiti için geliştirilmiştir. QPCR canlı hücre algılaması için propidyum monoazide (PMA), tedavi ile kombine edilmiştir. Bu protokol, çok sayıda numune, kolay ve uygun kullanım için bir 96 oyuklu plaka formatı değiştirilmiş ve uyarlanmıştır...

Live Algılama<em&gt; Escherichia coli</em&gt; O157: PMA-qPCR H7 Hücreler

Bu çalışmanın genel amacı, bir perakende deli bir ortamda gıda kaynaklı patojen Listeria monocytogenes potansiyel çapraz kontaminasyon mekanizmasını göstermekti. Bu metodoloji, patojen kirlenme izlemek için farklı ortamlarda çeşitli tatbik edilebilir.

Floresan Tozu Kullanımı Perakende Ortamlarda Mikrobiyal Bulaşma Takip - Bir Perakende Deniz Çevre Örneği

Büyük hacimli tarımsal sularda gıda kaynaklı patojenlerin entegre konsantrasyon, zenginleştirme ve son nokta kolorimetrik tespitini içeren bir protokol burada sunulmaktadır.  Su, seçici veya seçici olmayan ortamlarla zenginleştirilmiş Modifiye Moore Swablarından (MMS) süzülür ve algılama, bakteriyel-gösterge kolorimetrik substratlarla gömülü kağıt bazlı analitik cihazlar (μPAD) kullanılarak gerçekleştirilir.

Kolorimetrik Algılama Paper-based<em&gt; Escherichia coli</em&gt;<em&gt; Salmonella</em&gt; Spp. Ve<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Tarım Su geniş hacimli

Hızlı algılama özellikle patojenik bakterilerin manyetik gevşeme ve floresan emisyon modaliteleri kombinasyonu ile hedef ve bu protokol genel amacı, düşük maliyetli, taşınabilir için fonksiyonel nanosensors sentez etmektir.

Gıda kaynaklı patojen tarama kullanarak Manyeto-floresan Nanosensor: E. Coli O157: H7 hızlı tespiti

Vibrio parahaemolyticus algılamak için polylactic asit-sağlamlık, altın nano tanecikleri değiştirilme tarihi, Serigrafi karbon elektrot oluşan bir elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı geliştirilmesi için bir protokol sunulmuştur.

Gıda kaynaklı patojen tespit etmek için bir elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı gelişimi

Campylobacter , dünya çapında bakteriyel gıda kaynaklı gastroenteritin önde gelen nedenidir. Kuruluşların tesislerinde yaygınlığı azaltmak için önlemler almasına rağmen, kontamine ürünler sürekli olarak tüketicilere ulaşmaktadır. Son on iki yılda geliştirilen teknik, Campylobacter spp.'yi çiğ etten izole etmek ve tespit etmek için mevcut yöntemlerin sınırlamalarını ele almaktadır.

Campylobacter spp.'nin Çiğ Etten Tespiti ve İzolasyonu

Keşfedin, perakende gıda numunelerinde Clostridium perfringens toksinotiplerini zenginleştirme ve algılama yöntemini. Bu protokol, anaerobik odalar kullanmadan epsilon toksini üreten B ve D suşlarını tespit etmeyi kolaylaştırır.

Perakende Gıda Numunelerinde Clostridium Perfringens Toxinotypes Zenginleştirme ve Algılama

Daha fazla video keşfet