Name: Affinity Kromatografi Reçiyatlarının Hızlı Gelişimi İçin Aktif Çapraz Bağlantılı Agarose - Örnek Olay Olarak Antikor Yakalama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-16T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Öğrenin, DsRed bazlı afiniteli reçineler kullanarak monoklonal antikorları bitki ekstrelerinden hızlı ve maliyet etkin şekilde saflaştırma yöntemini. Bu teknik Protein A kromatografisine ekonomik alternatif sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

İbrahim Al Amedi'ye transgenik tütün bitkilerini yetiştirdiği için ve Dr. Thomas Rademacher'e tütün ekspresyonu vektörü sağladığı için teşekkür etmek istiyoruz. Yazarlar DFE yakınlık ligand yapısı hakkında verimli tartışmalar için editoryal yardım ve Markus Sack için Dr Richard M. Twyman teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma kısmen Hibe No altında Fraunhofer-Gesellschaft İç Programları tarafından finanse edilmiştir. 125-600164 çekmek ve Leistungszentrum hibe no 423 altında Kuzey-Ren-Vestfalya devlet "Ağ, adaptif üretim". Bu çalışma Deutsche Forschungsgememeinschaft (DFG) tarafından Araştırma Eğitim Grubu "Tümör hedefli İlaç Dağıtımı" hibe 331065168 çerçevesinde desteklenmiştir. GE sağlık bu makalenin açık erişim yayın destekledi.

Yazarların ifşa etmesi gereken çıkar çatışmaları yok.

Roman affinity resin uygulamaları
MAbs'nin yakalanması için özel yakınlık kromatografi reçinelerinin, NHS tarafından aktive edilen çapraz bağlı agarose'a mAb'ye özgü bir epitop içeren bir ligandın immobilize edilerek üretilebildiği gösterilmiştir. Böyle bir rezorin tasarlamak için epitop dizisini bilmek ve lineer bir epitop kullanmak gerekiyordu. Ortaya çıkan rejenler mAbs'nin yakalanması için avantajlıdır, çünkü pahalı Protein A affinity kromatografi adımlarının yerini alabilir. Olgu tetkiklerimizde 2F5 ve DFE arasındaki etkileşim epitop-paratop bağlanması ile aracılık edilebildi, bu nedenle ligandımız protein A'dan daha seçici olmalıdır, bu da çoğu murine ve insan IgG'nin Fc bölgesine bağlanır. Her mAb için bireysel ligandlar gerekli olduğundan, yöntemimiz başlangıçta çok büyük ölçekte üretilen antikorlar için uygun görünebilir. Ancak, hızlı bitki bazlı geçici protein ekspresyonu ile yaklaşımımızı birleştirerek, yeni afinite ligands az 2 hafta içinde hazırlanabilir27 minimal çabaile 28. Bu nedenle, yöntem de küçük ölçekli mAb arıtma için uygundur.
Üretim ve yakınlık ligand potansiyel iyileştirmeler
Bitkiler yakınlık ligandsiçinhızlı ve güvenli bir üretim platformu sunuyoruz 5,29,30, DFE füzyon proteini gibi bizim vaka çalışmasıözellikli. Bitki materyalinin beyazlatma büyük ölçüde tek bir adımda konak hücre proteinlerinin miktarını azalttı ve kolayca standart bir açıklama rutin entegre edildi. Ancak, ligand kurtarma mevcut kurulum düşük, muhtemelen orta termal stabilite ve filtre katmanları bazı non-spesifik bağlama nedeniyle, diğer ürünler için bildirilen31,32,33. Mühendislik taşıyıcı termal istikrarı artırmak için bu nedenle gelecekte ligand verimi artırmak için yardımcı olabilir, sıtma aşısı adayı CCT için açıklandığı gibi, antitümör enzim PpADI veya mezofilik β-glukozidaz34, 35,36. Aynı protein mühendisliği filtre malzemesi37non-spesifik bağlama azaltmaya yardımcı olabilir derinlik filtrasyon adım için geçerlidir. DFE ve benzeri ligandlar için üretim maliyetleri de flocculants veya filtre katkı maddeleri kullanarak açıklama genel verimliliğini artırarak azaltılabilir38,39.
DsRed taşıyıcı olarak kullanıldığında tetramerik bir kompleks oluşturur. Bu, ligand başına epitopsayısı artar, çünkü avantajlıdır, ama aynı zamanda afinite kromatografi sırasında demontaj veya denatürasyon ligand daha duyarlı hale getirebilir. Düşük pH40kararlı olduğu için mCherry gibi monomerik taşıyıcı protein tercih edilebilir, ve epitop tandem tekrarları dahil ligand avidite artacak ve böylece reçine kapasitesini artırmak5, 26.000 , 41. Basit taşıyıcı-epitop proteinler için (yani, disülfür bağı veya çeviri sonrası modifikasyonları olmayanlar) mikrobiyal üretim sistemleri üretim maliyetlerini azaltabilir ve ligandları Protein A ile daha rekabetçi hale getirebilir. Örneğin, yeşil floresan protein ~ 1 g·kg-1 biyokütle verimi ile bakteri hücrelerinde ifade edilmiştir, hangi önemli ölçüde ligand üretim maliyetlerini azaltacak42.
Ne olursa olsun ifade ana bilgisayar, saflaştırılmış bir yakınlık ligand aksi takdirde reçine seçicilik ve kapasitesini azaltabilir konak hücre proteinleri veya medya bileşenlerinin immobilizasyonen en aza indirmek için kaplin sırasında gerekli oldu. IMAC arınma için bir poli-histidin etiketi dahil tek bir adımda ~ 90% saflık arttı, hızlı ve ucuz ligand üretimi kolaylaştırmak5,43,44. Ancak, bu steral epitop bağlanmasını engellemek veya taşıyıcı45veya epitop ya dekolte indüklemek için potansiyele sahiptir çünkü füzyon etiketinin konumu önemlidir 45,46.
NHS-aktive kromatografi kolonlarında afinite ligandın immobilizasyonu
İmmobilizasyon el ile veya kromatografi sistemi kullanılarak gerçekleştirildi. Sütun başına küçük tampon hacimleri manuel kullanımdan yana görünüyordu (örn. minimum atık hacimleri nedeniyle). Ancak, birden fazla/daha büyük sütun gerekiyorsa, kromatografi sistemi bağlantı koşullarını kontrol etmeyi kolaylaştırır (örn. düzenlenmiş akış hızları) ve bu nedenle DBC açısından tekrarlanabilir sonuçlar elde etme olasılığı daha yüksektir. Verilerimiz, bağlantı arabelleği ve pH'ın bağlantı verimliliği ve genel sütun maliyetleri üzerinde önemli bir etkiye sahip olduğunu göstermektedir. Kaplin reaksiyonunu etkileyen tarama faktörleri ve her taşıyıcı protein için ayarlanması (hatta her taşıyıcı-ligand füzyonu için) bu nedenle bağlantı verimliliğini ve reçin performansını artırabilir ve bu yaklaşımı öneriyoruz.
DFE afinite reçiyinkullanarak 2F5 izolasyontest
Ürün verimi ve saflık rekarne performansının önemli yönleridir ve DFE durumunda 105 ± %11 (±SD, n=3) ve %97 ± 3 saflık (±SD, n=3) elde ettik ve bu da kıyaslama Protein A rekarnelerinin performansıyla karşılaştırılabilir25 ,26. Genel olarak rekarneler için bir diğer önemli performans göstergesi (ve özellikle afinite ligands dayalı olanlar için) DBC% 10 ürün atılım, bu parametre belirli bir işlem ve böylece maliyetleri için gerekli rekarin miktarını etkilediği için. DFE ligand için, ilk DBC ~4 g· L-1 rezorin, benzer koşullar altında Protein A için karşılık gelen değerin ~% 13 (sadece 2 dk temas süresi)25,47 ama yaklaşık 15 kat daha yüksek gibi diğer özel afinite recins göre anti-FSH-immünafinite ligand 2 dk48aynı ikamet süresi kullanarak . DFE DBC 25 bind-ve-elute döngüleri sonra başlangıç değerinin% 15'e geriledi, 50'den fazla döngüleri ticari Protein A reisins49DBC aynı kaybı için gerekli ise . Ancak, taşıyıcımızın henüz protein A ile aynı ölçüde optimize edilmemiş olduğunu belirtmek önemlidir, bu da son 40yılda kapsamlı bir şekilde araştırılmış ve geliştirilmiştir 8.
Şimdiye kadar düşük pH elüsyon tampon magnezyum klorür yüksek konsantrasyon (Şekil3),daha önceki çalışmalarda tavsiye 13 geçişyaparak rezorin stabilitesi ve ürün kurtarma geliştirdik. Yakınlık ligand karakteristik kırmızı renk 25 bind-ve-elute döngüleri sırasında önemli ölçüde solmaya vermedi, bu yüzden açıklık bitki özleri endojen bitki proteses31 kesilmiş olabilir ve böylece epitop inaktive ligand. Bu nedenle, taşıyıcı ve epitop bağlamak için proteaz dirençli bağlayıcılar tasarımı döngüleri uzun sayıda üzerinde ilk DBC korumak için yardımcı olabilir. DFE ligandının hızlı ve basit bir şekilde ifade edilip saflaştırılması, ticari kromatografi reçinelerine bağlanması ve mükemmel ürün verimi ve saflığı göz önüne alındığında, yöntemimizin Protein A'ya uygun bir alternatif sunduğuna inanıyoruz. özellikle taşıyıcı ve bağlayıcıdaki iyileştirmeler DBC ve ligand stabilitesini iyileştirebiliyorsa, Protein A'ya bağlanmayan mAb'lerin ve antikor türevlerinin saflaştırılması. Bu varsayım DFE saflaştırılmış ve Protein A-saflaştırılmış 2F5 antikor5dissosilasyon sabitindeki küçük fark tarafından desteklenerek, yeni yakınlık ligand'ımızın yüksek kaliteli mAbs'lerin geri kazanılmasına olanak sağladığını göstermiştir.
Yöntemin yararları ve mevcut sınırlamaları
Taşıyıcı protein ile genetik füzyon olarak yakınlık ligand üretmek sulu tamponlarda çözünürlüğü ve böylece tipik ligand kaplin koşulları ile uyumluluğu artırır. Buna karşılık, katı faz peptid sentezinden elde edilen boş peptidler,mAb tarafından tanınan epitopun amino asit dizisi tarafından dikte edildiği için değiştirilememiştir, 50 sırası nedeniyle bu koşullar altında sınırlı çözünürlüğe sahip olabilir. arındırılabilir. Diğerleri bu nedenle peptit ligands bir on-rekarne sentezi kullanmış51. Elde edilen reçinenin statik bağlama kapasitesi yüksekti (~80 g· L-1), ancak reçine hazırlama süreci uzundur, dinamik bir bağlama kapasitesi rapor edilmemiş ve elde edilen saflık ve geri kazanım yaklaşımımıza göre daha düşüktür. Laboratuvar ölçeğinde bir füzyon protein ligand ek bir avantajı ligand ve bunların varyantları hızla üretilebilir, saflaştırılmış ve kolay kullanımı yüksek ekspresyon sistemi52en az çaba ile test edilebilir.
Burada sunulan yöntemin iki güncel sınırlaması 3 g· düşük dinamik bağlama kapasitesidir. L-1 ve 25 bind-ve-elute döngüleri5boyunca% 90 azalma . Bu sınırlamalar gelecekte daha az sıkı yükleme koşulları uygulanarak ve geçerli DsRed taşıyıcısının sırasıyla tasarlanmış, daha kararlı bir varyantla değiştirilmesiyle giderilebilir. Örneğin, geçerli temas süresini 2 ila 4 dakika arasında iki katına çıkarmak, bazı Protein A reçinekleri26'dagösterildiği gibi dinamik bağlama kapasitesini iki katına çıkarma potansiyeline sahiptir.
Sorun giderme
Aşağıdaki tablo, bu protokol sırasında karşılaşılabilen olası sorunları vurgular ve bunlarınnasıl çözüleceğiniz hakkında ipuçları sağlar (Tablo 1).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="4">Tablo 1: Karşılaşılabilen olası sorunlar ve olası düzeltmeler.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Protokol adımı</td>
			<td>Sorun</td>
			<td>Sebebi</td>
			<td>Düzeltmek</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>Bitkiler yetişmiyor</td>
			<td>Uzlaşmalı büyüme koşulları</td>
			<td>Gübrenin pH'sını ve iletkenliğini kontrol edin</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sıcaklık ve ışık koşullarını kontrol edin</td>
		</tr>
<tr>
<td>2 ve 3</td>
			<td>Ekstraksiyondan sonra büyük miktarlarda konak hücre proteinleri bulunur.</td>
			<td>Eksik yağış</td>
			<td>Beyazlatma sırasında sıcaklığı kontrol edin</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Beyazlatma banyosundaki ajitasyonu kontrol edin</td>
		</tr>
<tr>
<td>2 ve 3</td>
			<td>Bitki ekstresinde ürün bulunamadı</td>
			<td>Beyazlatma sıcaklığı çok yüksek</td>
			<td>Beyazlatma sırasında sıcaklığı ve pH'ı kontrol edin</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td>pH beyazlatma tampon çok düşük</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>3</td>
			<td>Büyük sap veya yaprak parçaları çıkarmadan sonra kalır</td>
			<td>Blender'da eksik karıştırma</td>
			<td>Tesis malzemesinin blender'da fiş oluşturmadığından emin olun</td>
		</tr>
<tr>
<td>3</td>
			<td>Derinlik filtrasyonu sırasında hızlı basınç artışı</td>
			<td>Yanlış filtre seçimi ve/veya yönlendirme</td>
			<td>Filtre türünü ve yönünü kontrol edin</td>
		</tr>
<tr>
<td>4</td>
			<td>Elüzyon sırasında küçük füzyon proteini / akış yoluyla füzyon protein bir sürü</td>
			<td>IMAC reşini metal iyonları ile şarj edilmedi</td>
			<td>IMAC reşinini iyonlarla doğru şekilde şarj edip olmadığını kontrol edin</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td>Füzyon proteini afinite etiketini kaybetti</td>
			<td>Bitki yetiştiriciliği sırasında yoğun güneş ışığından ve yüksek sıcaklıklardan kaçının</td>
		</tr>
<tr>
<td>4</td>
			<td>Konsantrasyon sırasında kaybedilen füzyon proteini</td>
			<td>Membrana bağlı füzyon proteini</td>
			<td>Membran türünü kontrol edin</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Konsantrasyon faktörünün çok yüksek olmadığından emin olun</td>
		</tr>
<tr>
<td>5</td>
			<td>Düşük bağlantı verimi</td>
			<td>Bağlantı reaktifi ekinin yanlış sırası</td>
			<td>Reaktif etiketlerini ve ekleme sırasını kontrol edin</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td>Bağlantıdan önce sütunların yanlış hazırlanması</td>
			<td>Sütun preparaton koşullarını kontrol edin</td>
		</tr>
<tr>
<td>5 ve 6</td>
			<td>Düşük mAb verimi</td>
			<td>Bitki biyokütlesinde düşük mAb ekspresyonu</td>
			<td>Biyokütlede test mAb ekspresyonu</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td>Düşük ligand yoğunluğu</td>
			<td>Füzyon protein preparatının saflığını kontrol edin</td>
		</tr>
<tr>
<td>7</td>
			<td>Bradford satoklarında çok düşük/yüksek protein konsantrasyonları</td>
			<td>Pipetleme sırasında kabarcık oluşumu</td>
			<td>96-iyi palte kabarcıklar için kontrol edin</td>
		</tr>
<tr>
<td>7</td>
			<td>SPR ölçümü sırasında düşük mAb konsantrasyonu</td>
			<td>Tehlikeye Protein Bir çip</td>
			<td>Bilinen konsantrasyon ile standart mAb sonuçları ile karşılaştırın</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td>Yanlış numune seyreltme</td>
			<td>Seyreltme oranını ve tamponu kontrol edin</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Sorun giderme.

Biyofarmasötik ürünler tıbbın hemen hemen her dalında hastalıklarıngeniş bir yelpazede tedavisi için önemlidir 1. Monoklonal antikorlar (mAbs) biyofarmasötik pazarına hakim, dünya çapında satış 20202yılında yaklaşık 110 milyar € ulaşması bekleniyor. mAbs için tercih edilen ifade platformu Çin hamster over hücre hatları, genellikle kültür supernatant3,410 g'L-1 kadar yüksek mAb titreleri üretmek vardır. Ancak, memeli hücre kültürlerinde mAbs üretimi orta yüksek maliyet ve steril fermantasyonihtiyacı nedeniyle pahalı 5. Bitkiler gibi alternatif ifade platformları potansiyel endüstriyel üretim için daha hızlı, basit, daha az pahalı ve daha ölçeklenebilir bir yaklaşım sunuyoruz6,7.
Memeli hücre kültürleri ile ilgili maliyetlere ek olarak, protein a a affinity kromatografisinin ürün yakalamada yaygın kullanımı, mAbs'lerin endüstriyel üretimi için önemli bir maliyet itici gücüdür. Protein A doğal Staphylococcus aureus hücrelerinin yüzeyinde bulunan ve bazı murine ve insan antikorlarının parça kristalize (Fc) bölgeye bağlanır, bu nedenle mizahi bağışıklık sistemi kaçınmak için bir savunma mekanizması olarak hareket8. Protein A hücre kültürü supernatants mAbs yakalamak için sanayi altın standart haline gelmiştir ve aynı zamanda yaygın olarak araştırma topluluğu tarafından son derece seçici olduğu için kullanılır, genellikle tek bir adımda ~ 95% mAb saflıkları elde8. Beklendiği gibi, son yirmi yılda Protein A satışları yakından mAbs satış yansıtmıştır8. Üretim ölçeğine bağlı olarak, Protein A'nın maliyeti toplam proses maliyetlerinin %'inden fazlasına karşılık gelebilir ve bu nedenle 2.000 € g-15,9€'yakadar olabilir terapötik mAbs, piyasa fiyatını etkileyebilir. Bu nedenle, benzer bir arıtma performansına sahip alternatif kromatografi reçinejleri üretim maliyetlerini önemli ölçüde düşürme potansiyeline sahiptir, bu da antikor bazlı tedavileri daha fazla sayıda hasta için erişilebilir hale getirir10,11 ,12. Bu tür alternatifler, düşük pH'daki sert elüsyon koşulları da dahil olmak üzere Protein A kromatografisinin dezavantajlarını da aşabilir (tipik olarak &lt;3.5) mAbs'nin agregasyonu teşvik eden konformasyonel değişikliklere uğramasına neden olabilir13 . Daha da önemlisi, Protein A sadece belirli IgG alt sınıflarının Fc bölgesi için seçicidir, bu nedenle kesilen bağlayıcı etki alanları olan işlevsel olmayan moleküller bozulmamış ürün5ile birlikte arındırılabilir, oysa mAb tek zincirli değişken parçaları gibi türeyen Protein A'ya hiç bağlanmaz.
Burada, doğrusal epitop ELDKWA (bir harf amino asit kodu)5,14kullanarak HIV nötralize mAb 2F5 yakalamak için alternatif bir yakınlık kromatografi reçine açıklar. 2F5 epitopunu, taşıyıcı ve muhabir molekül olarak işlev gören floresan protein DsRed'in C-terminusuna genetik olarak erittin ve transgenik tütünde Ortaya çıkan DsRed-2F5-Epitop (DFE) proteinini ürettik ( Nicotiana tabacum) bitkiler. DFE tek adımlı immobilize metal-iyon afinite kromatografisi (IMAC) ile saflaştırılmıştı. Saflaştırılmış DFE afinite ligand bir çapraz bağlı agarose resin üzerine immobilizasyon n-hidroksisuccinimid kullanılarak kimyasal kaplin elde edildi (NHS)-aktive çapraz bağlı agarose sütunlar. İstatistiksel deneysel tasarımlar daha sonra immobilizasyon prosedürü ve kaplin verimliliği optimize etmek için kullanılmıştır15. mAb 2F5 için arınma stratejisi antikor saflığı, verim ve ligand stabilitesi açısından değerlendirilmiştir. Fc bölgesini bağlayan Protein A'nın aksine, DFE 2F5'in tamamlayıcılık belirleyici bölgesine bağlı karak, moleküllerin sağlam bir paratopla arınmasını sağlar. Konseptimiz herhangi bir mAb'ye doğrusal epitop ile veya mikrodizi çalışmaları ile kolayca tespit edilebilen diğer peptid bazlı afinite ligandlara kolayca adapte edilebilir16.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59933/59933fig01.jpg"> Şekil 1: Ham bitki özlerinden veya hücre kültürü süpernatantlarından mAbs yakalama için kullanılabilecek epitop afinite reçinelerinin hazırlanması için proses akış şeması. (A) Transgenik tütün bitkilerinde ligand DFE yakınlığı ifade edilebistir. Hasat edilenyapraklar homojenize edilmeden önce bir ısı yağış adımı (B) dahil edilmiştir (C). (D) Ham bitki özü torba filtrasyon, derinlik filtrasyon ve 0,2 μm steril filtrasyon ile açıklığa kavuşturulmuştur. (E) DFE daha sonra IMAC tarafından arındırıldı. (F, G) Saflaştırılmış DFE yakınlık ligand EDC / NHS-aktif çapraz bağlı agarose sütunlar üzerinde immobilize edildi. (H) T-DNA kodlayıcı antikor 2F5 taşıyan bakteri kültürleri, fitotronda yetişen N. benthamiana bitkilerindegeçiciifade için kullanılmıştır. (J) N. benthamiana yaprakları hasat edildi ve D. (K) mAb 2F5'te açıklandığı gibi işlendi, DFE yakınlık sütunları (L) kullanılarak açıklık ekstresinden arındırıldı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59933/59933fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<table><tbody><tr><td>10 L / 20 L Kova</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Ağartma ekipmanı</td></tr><tr><td>2100P taşınabilir bulanıklık ölçer</td><td>Hach</td><td>4650000</td><td>Bulanıklık ölçer</td></tr> <tr><td>ve AUML; KTApure</td><td>GE Helthcare</td><td>29018226</td><td>Kromatografi sistemi</td></tr><tr><td>Allegra 25R</td><td>Beckman Coulter</td><td>369434</td><td>Santrifüj</td></tr><tr><td>Amin Birleştirme Kiti</td><td>GE Healthcare</td><td>BR100050</td><td>SPR çip birleştirme kiti</td></tr><tr><td>Amin Birleştirme Kiti</td><td>GE Healthcare</td><td>BR100050</td><td>SPR çip birleştirme kiti</td></tr><tr><td>Antikor 2G12</td><td>Fraunhofer IME</td><td>n/a</td><td>SPR için Standart nicelik belirleme</td></tr><tr><td>Blender</td><td>Waring</td><td>800EG</td><td>Blender</td></tr><tr><td>BP-410</td><td>Fuhr</td><td>2632410001</td><td>Torba filtre</td></tr><tr><td>CanoScan 5600F</td><td>Canon</td><td>2925B009</td><td>Tarayıcı</td></tr><tr><td>Santrifüj tüpü 50 mL kendi kendine duran</td><td>Labomedik</td><td>1110504</td><td>Reaksiyon tüpü</td></tr><tr><td>Şelatlama Sefaroz FF</td><td>GE Helthcare</td><td>17-0575-01</td><td>Kromatografi reçinesi</td></tr><tr><td>Cond 3320</td><td>WTW</td><td>EKA 3338</td><td>İletim Ölçer</td></tr><tr><td>Tasarım Uzmanı (R) 8</td><td>Stat-Ease, Inc.</td><td>n/a</td><td>DoE yazılımı</td></tr><tr><td>Discovery Compfort Gilson</td><td></td><td>F81029</td><td>Çok kanallı pipet</td></tr><tr><td>Disodyum fosfat</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>4984.3</td><td>Medya bileşeni</td></tr><tr><td>Çeşitli şişeler</td><td>Schott Duran</td><td>n/a</td><td>Glas şişeler</td></tr><tr><td>Dri Block DB8</td><td>Techne</td><td>Z381373</td><td>Isı bloğu</td></tr><tr><td>DsRed</td><td>Fraunhofe IME</td><td>n/a</td><td>Standart</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>8043.2</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>EnSpire</td><td>Perkin Elmer</td><td>2390-0000</td><td>Plaka okuyucu</td></tr><tr><td>ETHG-912</td><td>Oregon Scientific</td><td>086L001499-230</td><td>Termometre</td></tr><tr><td>F9-C</td><td>GE Helthcare</td><td>29027743</td><td>Fraksiyon toplayıcı</td></tr><tr><td>Ferty 2 Mega</td><td>Kammlott</td><td>5.220072</td><td>Gübre</td></tr><tr><td>Forma - 86C ULT dondurucu</td><td>ThermoFisher</td><td>88400</td><td>Dondurucu</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>9105.3</td><td>Tampon bileşen</td></tr><tr><td>Hettich Santrifüj Mikro 200</td><td>Hettich</td><td>2400</td><td>Santrifüj</td></tr><tr><td>HiPrep 26/10</td><td>GE Helthcare</td><td>GE17-5087-01</td><td>Kromatografi kolonu</td></tr><tr><td>HiTrap NHS ile aktive edilen Sepharose HP, 1 mL</td><td>GE Helthcare</td><td>17-0716-01</td><td>Kromatografi sütunlar</td></tr><tr><td>Hidroklorik asit</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>4625.1</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>İmidazol</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>3899.2</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>K700</td><td>Pall</td><td>5302305</td><td>Derinlik filtre tabakası</td></tr><tr><td>KM02 basic</td><td>IKA</td><td>n/a</td><td>Manyetik karıştırıcı</td></tr><tr><td>KS50P 60D</td><td>Pall</td><td>B12486</td><td>Derinlik filtre katmanı</td></tr><tr><td>L/S 24</td><td>Masterflex</td><td>SN-06508-24</td><td>Boru</td></tr><tr><td>Lauda E300</td><td>Lauda Dr Wobser GmbH</td><td>Z90010</td><td>Daldırma sirkülatör</td></tr><tr><td>Magnezyum klorür</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>KK36.2</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>Masterflex L/S</td><td>Masterflex</td><td>HV-77921-75</td><td>Peristaltik pompa</td></tr><tr><td>Minisart 0.2 &mikro; m</td><td>Sartorius</td><td>16534K</td><td>Filtre ünitesi</td></tr><tr><td>Nalgene Hızlı Akışlı PES şişe üstü filtre</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>595-4520</td><td>SPR tamponlarının vakumlu filtrasyonu</td></tr><tr><td>Nikel sülfat</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>T111.1</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>Novex NuPAGE %4-12 BisTris LDS jeller</td><td>Invitrogen</td><td>NP0336BOX</td><td>LDS-PAA jelleri</td></tr><tr><td>Novex X-cell Mini Cell</td><td>Invitrogen</td><td>EI0001</td><td>PAGE odası</td></tr><tr><td>NuPAGE 20x çalışan tampon</td><td>Invitrogen</td><td>NP0002</td><td>Tampon konsantresi</td></tr><tr><td>NuPAGE antioksidan</td><td>Invitrogen</td><td>NP0005</td><td>Antioksidan</td></tr><tr><td>PageRuler protein merdiveni (10-180 kDa)</td><td>Invitrogen</td><td>26616</td><td>Protein standart</td></tr><tr><td>Delikli bucked</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Ağartma</td></tr><tr><td>PH 3110</td><td>WTW</td><td>2AA110</td><td>PH metre</td></tr><tr><td>PowerPac HC</td><td>Biorad</td><td>1645052</td><td>Elektroforez modülü</td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7837-5MG'den</td><td>Protein A SPR cipslerinin kaplanması</td></tr><tr><td>Sephadex G-25 ince, çapraz bağlı dekstran</td><td>GE Helthcare</td><td>17003301</td><td>Kromatografi reçinesi</td></tr><tr><td>Silikon kaşık</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Kaşık</td></tr><tr><td>Simply Blue SafeStain</td><td>Invitrogen</td><td>LC6060</td><td>Jel boyama solüsyonu</td></tr><tr><td>Sodyum asetat</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>6773.1</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>Sodyum asetat</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>X891.1</td><td>Medya bileşeni</td></tr><tr><td>Sodyum azit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S2002-100G</td><td>Medya bileşeni</td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>P029.2</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>Sodyum sitrat</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>HN13.2</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>Sodyum bisülfit</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>243973-100G</td><td>Medya bileşeni</td></tr><tr><td>Sodyum fosfat</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>T877.2</td><td>Medya bileşeni</td></tr><tr><td>SPR Afinite Sensörü - Yüksek Kapasiteli Amin</td><td>Sierra Sensors GmbH/Bruker Daltonics</td><td>SPR-AS-HCA</td><td>SPR çip</td></tr><tr><td>SPR-2/4 Yüzey Plazmonu Rezonans Analizörü</td><td>Sierra Sensors GmbH/Bruker Daltonics</td><td>n/a</td><td>SPR cihazı</td></tr><tr><td>SSM3</td><td>Stuart</td><td>10034264</td><td>Mini Gyro-rocker</td></tr><tr><td>Isıtmalı kap, 20 L</td><td>Clatronic</td><td>n/a</td><td>Ağartma haznesi</td></tr><tr><td>Steril şırıngalar, 2 mL</td><td>B. Braun</td><td>4606027V</td><td>Şırıngalar Şırınga</td></tr><tr><td>adpter (Union Luer F)</td><td>GE Helthcare</td><td>181112-51</td><td>Şırınga adaptörü</td></tr><tr><td>TE6101</td><td>Sartorius</td><td>TE6101</td><td>Hassas terazi</td></tr><tr><td>Tween-20 (Polisorbat)</td><td>Merck</td><td>8170721000</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>Unicorn 6.4</td><td>GE Helthcare</td><td>29056102</td><td>Kromatografi yazılımı</td></tr><tr><td>Vakum torbaları</td><td>Ikea</td><td>203.392.84</td><td>Bitki depolama</td></tr><tr><td>VelaPad 60</td><td>Pall</td><td>VP60G03KNH4</td><td>Filtre muhafazası</td></tr><tr><td>Vortex-Genie 2</td><td>Bilimsel endüstriler</td><td>SI-0236</td><td>Vortex</td></tr><tr><td>XK-26/20 sütun muhafazası</td><td>GE Helthcare</td><td>28-9889-48</td><td>Kromotografi sütunu</td></tr></tbody></table>

affinity kromatografi reçiyatlarının hızlı gelişimi İçin aktif Çapraz bağlantılı agarose - Örnek olay olarak antikor yakalama

Activated Cross-linked Agarose for the Rapid Development of Affinity Chromatography Resins - Antibody Capture as a Case Study

Monoklonal antikorların (mAbs) saflaştırılması genellikle protein A affinity kromatografisi ile elde edilir, bu da genel proses maliyetlerinin %25'ini karşılayabilir. Alternatif, uygun maliyetli yakalama adımları bu nedenle, tek bir mAb büyük miktarlarda üretilen endüstriyel ölçekli üretim için değerlidir. Burada, Protein A kullanmadan, HIV nötralize edici antikor 2F5'in ham bitki özlerinden seçici olarak yakalanmasına olanak tanıyan çapraz bağlantılı agarose reçine DsRed tabanlı epitop ligand'ın immobilizasyonu için bir yöntem salıyoruz. Lineer epitop ELDKWA ilk olarak genetik olarak floresan protein DsRed ile kaynaşmış ve füzyon proteini transgenik tütün(Nicotiana tabacum)bitkilerinde immobilize metal-iyon afinite kromatografisi ile saflaştırmadan önce ifade edilmiştir. Ayrıca, aktif çapraz bağlı agarose dayalı bir yöntem yüksek ligand yoğunluğu, verimli bağlantı ve düşük maliyetler için optimize edilmiştir. PH ve tampon bileşimi ve çözünür ligand konsantrasyonu, deneylerin tasarımı yaklaşımı kullanılarak geliştirilmiş olan bağlantı işlemi sırasında ki en önemli parametrelerdi. Ortaya çıkan afinite reşin seçici bir ham bitki ekstresi hedef mAb bağlamak için yeteneği için test edildi ve elüsyon tampon yüksek mAb kurtarma, ürün aktivitesi ve yakınlık reşin istikrar için optimize edilmiştir. Bu yöntem doğrusal epitopslarla diğer antikorlara kolayca adapte edilebilir. Yeni reçinler Protein A'dan daha nazik elüsyon koşullarına izin verir ve aynı zamanda mAb üretimi için ilk yakalama adımının maliyetini azaltabilir.

İfade ve yakınlık ligand arınma
Füzyon proteinI DFE bir serada yetiştirilen transgenik tütün bitkileri ifade edildi. Verim ~ 120 mg·kg-1<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59933/59933fig02.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59933/59933fig02large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59933/59933fig03.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59933/59933fig03large.jpg" target="_blank"></a>

Bu prosedürde, Bir DsRed tabanlı epitop ligand protein A alternatif olarak, ham bitki özleri veya hücre kültürü supernatants monoklonal antikorların yakalanması için son derece seçici afinite reçine üretmek için immobilize edilir.

Affinity Kromatografi Reçiyatlarının Hızlı Gelişimi İçin Aktif Çapraz Bağlantılı Agarose - Örnek Olay Olarak Antikor Yakalama

The purification of monoclonal antibodies (mAbs) is commonly achieved by Protein A affinity chromatography, which can account for up to 25% of the overall ...

Monoklonal antikorlar biyofarmasötik pazara hakimdir ve tipik olarak Protein A kromatografisi ile saflaştırılır. Buna göre reçine antikor bazlı terapötik fiyatını etkileyen üretim sırasında önemli bir maliyet sürücüsüdür. Burada yeni bir yakınlık ligand hiv nötralize antikor 2F5 doğrusal epitop için bir taşıyıcı olarak okunur floresan protein dayalı açıklar.Genel olarak yöntemimiz monoklonal antikorların yakalanmasında kullanılabilecek afinite kromatografi reislerinin hızlı bir şekilde üretilmesine olanak sağlar. Bu yeteneği ham bitki ekstresinden antikor 2F5 yakalayarak gösterdik. Dinamik bağlama kapasitesini ve reçine yeniden kullanılabilirliğini iyileştirmek için yakalama koşullarını ve çözüm arabelleğini optimize ettik.Rezorinimiz Protein A'dan daha genel olarak daha gevşek koşullara izin verir ve monoklonal antikorların saflaştırma maliyetlerini azaltma potansiyeline sahiptir. Ayrıca, rezorin kolayca lineer epitoplar bağlamak diğer antikorlara adapte edilebilir. Bu prosedüre başlamak için, hazırlanan afinite ligand çözeltisinin konsantrasyonuna, deneylerin tasarımında tanımlandığı şekilde litre başına 5 ila 15 gram aralığında olacak şekilde ayarlayın.Bağlantı reaksiyonu hazır olana kadar çözümü buzüzerinde saklayın. Sonra, dfe çözeltisi ile bir iki mililitreşli şırınga doldurun. Ve bir mililitre yatak hacmi ile NHS-aktive çapraz bağlantı agarose sütunlar üzerinde şırıngamonte monte etmek için bir adaptör hazırlayın.Bağlantı için kullanılan her 10 sütun için 30 mililitre devre dışı bırakma çözeltisi, 30 mililitre düşük pH çözeltisi ve bir mililitre depolama çözeltisi hazırlayın. Sonra bir tüp içinde bir milimolar hidroklorik asit 20 mililitre hazırlayın. Ve en az 20 dakika buzda kuluçkaya yatırın.Bağlantı reaksiyonu sırasında ki tüm adımlar için kesirler üzerinden akışını izlemek için hassas bir ölçek hazırlayın. Bundan sonra, mühürlü bir NHS-şifreli crosslinked agarose sütun açın. Havanın sütuna girmesini önlemek için bağdaştırıcı girişine bir damla arabellek uygulayın.Şırınga adaptörlerini sütun girişine monte edin. Altı mililitre buz soğuk bir milimolar hidroklorik asit ile sütun yıkayın, bir akış hızı daha az dakikada bir mililitre. İki mililitrelik şırınga kullanarak, dakikada bir mililitreden daha az bir akış hızında n1,5 mililitre DFE çözeltisi enjekte edin.Ve sonraki analiz için hassas bir ölçekte fraksiyonüzerinden akış toplamak. Her iki ucunda ki kolon mühür ve 22 santigrat derece, 15 ila 45 dakika kuluçka. Sonraki aktivasyon çözeltisi altı mililitre enjekte, düşük pH çözeltisi altı mililitre takip, dakikada bir mililitreden daha az bir akış hızında, reçine olmayan kovalent bağlı ligands kaldırın.Altı mililitre aktivasyon solüsyonu enjekte edin ve kolonda 15 dakika kuluçkaya yatın. Bundan sonra, sütuniçine altı mililitre düşük pH çözeltisi enjekte edin. Ardından altı mililitre aktivasyon çözümü.Sonra sütuna altı mililitre daha düşük pH çözeltisi enjekte edin. Sütuna iki mililitre depolama çözeltisi enjekte edin ve dört santigrat derecede saklayın. İlk 2F5 içeren açıklık bitki ekstresi ya 100 mililitre hazırlamak, ya da tercih edilen hücre tabanlı ifade sistemi için supernatant, aynı zamanda 2F5 içeren.Sonraki eşitlik arabelleği hazırlamak ve yüksek demir X mukavemeti yanılsama tampon, metin protokolünde belirtildiği gibi. Renkbilim sistemini tamponlarla temizle. Kromatografi sistemine bir DFE yakınlık sütunu monte edin.Ve dakikada bir mililitre akış hızında, denge tampon beş CV ile dengeleyin. UV emiciliğini 280 nanometreden izleyin. Daha sonra 80 mililitre ya açıklık bitki ekstresi, ya da dakikada 5 mililitre akış hızında sütun üzerine supernatant yükleyin.İki dakikalık bir temas süresini garanti etmek için. İki mililitrek veya atılım eğrisi rekonstrüksiyonörnekleri üzerinden akış toplamak. Hemen numune analizi mümkün değilse, numuneler üzerinden akışı dört santigrat derecede saklayın.Bu yıkamadan sonra equilibr tampon 6CV ile sütun yıkayın. Yıkamanın başında, ortasında ve sonunda bir örnek toplayın. MAB2F5'i beş cilt yüksek iyonik mukavemet liyasürü tamponuyla seyreltin.280 nanometredeki UV sinyali taban çizgisinin üzerinde beş milimetrelik emici üniteye yükseldiğinde DFE fraksiyonu toplayın. Metin protokolünde belirtildiği gibi, her epitop-antikor çifti için yanılsama arabelleği optimize edin. Füzyon proteinI DFE transgenik tütün bitkileri, bir serada yetiştirilen ifade edilir.DFE'nin toplam toparlanması kilogram başına 23,5 miligramdır. %90'ın üzerinde bir saflıkla reçineüzerinde hareketsiz hale getirilen mutlak DFE miktarı, sütuna enjekte edilen DFE kütlesi ile artar ve litre başına yaklaşık 15 gram olan platolar, daha fazla DFE enjekte edildikçe kaplin verimi sürekli olarak azalır. DFE molekülleri, kaplin sonra bile, kırmızı floresan korumak için görülür.Renk yoğunluğu, hareketsiz DFE'nin toplam miktarına karşılık gelir. Bu nedenle sütun rengi, bağlantı verimliliğini ve sütun kalitesini tahmin etmek için basit bir kalite kontrol parametresi olarak kullanılabilir. Rekombinant 2F5 antikor geçici bir fitotron yetiştirilen Nicotiana benthamiana bitkilerde üretilir.Ham bitki özü 2F5 yakalama, saflaştırılmış DFE yaklaşık yedi miligram ile birleştiğinde, yakınlık sütunları kullanılarak test edilir. Magnezyum klorür konsantrasyonu 1.25 molar bir iyileşme yakın bir iyileşme ile DFE afinite rezorneden 2F5 elute için yeterlidir 100%ve protein A resinile karşılaştırılabilir yaklaşık% 97 saflık. DFE yakınlık resen10%2F5 atılım dbc, ilk değerinin yaklaşık% 15, 25 döngüleri boyunca doğrusal azalır.Yakınlık ligandımızın bağlantı kapasitesini optimize etmek için bir deney tasarımı yaklaşımı kullandık. Bu koşullar gelecekte diğer ligandlar için ince ayarlı olabilir. Yöntemimiz ürüne özgü ligand için bir alt taşıyıcı protein iplik floresan protein kullanır.Aynı zamanda sadece operatöre anında ve sezgisel geribildirim sağlayarak, seferberlik prosedürügörsel bir kalite göstergesi olarak işlevleri ekleyin.

activated-cross-linked-agarose-for-rapid-development-affinity

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Hücre geçirgen çapraz bağlayıcı DSP [dithiobis-(succinimidyl propiyonat)] stabilize geçici ve labil...

Dayanıksız Multi-protein Kompleksleri izolasyonu In vivo Kontrollü Hücresel Çapraz Bağlama ve immuno-manyetik Afinite Kromatografisi

Bu videoda, DsRed-2F5-Epitop veya DFE ligandlarını kullanarak 2F5 monoklonal antikorları saflaştırmak için bir afinite kromatografisi tekniği açıklanmaktadır. Saflaştırılmış 2F5 monoklonal antikorlar, immünoterapide temel ilaçlardır.

DFE Tabanlı Afinite Kromatografisi: Yüksek İyonik Kuvvete Dayalı Elüsyon Koşulları Kullanılarak Ham Bir Numuneden 2F5 Monoklonal Antikorların Saflaştırılması İçin Bir Teknik

Bu video, sandviç enzime bağlı immünosorbent testi veya ELISA tekniği ile kimyasal olarak konjuge antikor-antijen komplekslerinin tespitini göstermektedir. Yakalanan antikor, antikor-antijen konjugatının antijeninin spesifik epitopuna bağlanır ve daha sonra enzime bağlı bir ikincil antikor kullanılarak görselleştirilebilir.

Kimyasal Olarak Bağlanmış Antikor-Antijen Konjugatlarını Doğrulamak için Enzime Bağlı İmmünosorbent Testi

Bu video, antikor üreten bir hücre kültüründen elde edilen kültür süpernatantından monoklonal antikorların saflaştırılması için bir tekniği göstermektedir. İşlem, boncuklar üzerindeki süpernatanttaki antikorları hareketsiz hale getiren ve kirleticilerden etkili bir şekilde ayrılmaya izin veren konjuge Protein A ile çapraz bağlı agaroz boncuklarından oluşan bir matrisin kullanılmasını içerir. Düşük pH'lı bir elüsyon tamponu uygulanarak, protein A-antikor etkileşimi gevşetilir ve antikor içeren...

Monoklonal Antikorların Saflaştırılması için Bir Afinite Kromatografisi Tekniği

Protein A agarose boncuk dolu sütunlar kullanılarak geleneksel benzeşim kromatografisi ile karşılaştırıldığında, protein A membran adsorberleri antikorların ve diğer Fc parça ifade eden proteinlerin laboratuvar ölçeğinde izolasyonunu önemli ölçüde hızlandırabilir. Uygun analiz ve niceleme yöntemleri protein işlemeyi daha da hızlandırarak izolasyonun/karakterizasyonun 20+ iş saati yerine tek bir iş gününde tamamlanmasını sağlayabilir.

Protein A Membran Adsorberleri ve Kolaylaştırılmış bir İş Akışı Kullanarak Kimerik İnsan Fc Ekspresyon Proteinlerinin İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Spesifik kappa (Vκ) hafif zincirlerine sahip insan ve fare IgM antikorları için antijen içeren protein kısımlarını tanımlamak için bir protokol sunuyoruz. Bu protokol IgM sınıfı antikorlarla sınırlı değildir, ancak immünopresipitasyonlar sırasında antijenlerini yeterince yüksek afinite ile hedefleyen tüm immünoglobulin izotipleri için geçerlidir.

Kappa (VK) için Antikor Bağlama Özgünlük Hafif Zincir içeren İnsan (IgM) Antikorlar: Polysialic Asit (PSA) bir Vaka Çalışması olarak NCAM Bağlı

Burada, bir kriyojenik sıcaklıkta katı hal öğütme ile memeli hücrelerin bozulması Elde edilen hücre tozu, bir hücre, ekstrenin üretilmesi ve antikor-bağlı mikron çaplı paramanyetik taneler üzerine afinite yakalama ile ilgili protein kompleksleri izole etmek için protokoller tarif eder.

Cryomilled memeli hücrelerinden protein kompleksi olan ele geçirme kapasitesini

Burada bir etiket bilgilerini kantitatif kütle spektrometresi kullanılarak protein korelasyon profil ardından afinite protein komplekslerinin saflaştırılması ve mavi doğal PAGE ile onların ayrılması için protokoller, mevcut. Bu yöntem, farklı protein kompleksleri halinde interactomes çözmek için yararlıdır.

Mavi Yerli PAGE ve Protein İlişkisi Profil Yöntemi ile Affinity Saf protein Kompleksler çözümleniyor

Biz sadece iki slayt şaklatarak çoğaltılmış sandviç çapraz-reactivity ücretsiz uzun gerçekleştirmek için bir ek çip teknolojisi göstermek. Bir ek aparatı reaktifler Mikroarray Mikroarray güvenilir bir şekilde aktarmak için kullanılır. Ek çip olmadan Çapraz bulaşma farklı reaktifler colocalization gerektiren herhangi bir biyokimyasal reaksiyonlar için kullanılabilir.

Çip için çapraz-reactivity ücretsiz ve gözcü-Alerjik çoğaltılmış sandviç uzun snap

Kanser ilaçlarını tümör bölgelerine yüksek özgüllük ve azaltılmış yan etkilerle ulaştırmak için nanopartiküllere dayalı yeni yöntemler gereklidir. Burada, hidrojen peroksit aracılı oksidasyon ile kolayca hazırlanabilen ve yükleri serbest bırakmak için indirgeyici bir tümör ortamı altında verimli bir şekilde ayrışabilen disülfür çapraz bağlı miselleri açıklıyoruz.

Döner disülfür Çapraz bağlı misellerin Üretimi için basit ve etkin Yaklaşım

Öğrenin, DsRed bazlı afiniteli reçineler kullanarak monoklonal antikorları bitki ekstrelerinden hızlı ve maliyet etkin şekilde saflaştırma yöntemini. Bu teknik Protein A kromatografisine ekonomik alternatif sunar.

Affinity Kromatografi Reçiyatlarının Hızlı Gelişimi İçin Aktif Çapraz Bağlantılı Agarose - Örnek Olay Olarak Antikor Yakalama

Daha fazla video keşfet