Name: Doğrudan Intratracheal Lipopolysaccharide Instilasyon ile farelerde akut akciğer hasarının İndükleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 7 s
Description: Öğrenin, farelerde akut akciğer hasarı oluşturmak için intratrakeal LPS instilasyon yöntemini. Bu minimal invaziv teknik, FACS analizi ile immünolojik mekanizmaları araştırmaya olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar teknik destek sağlamak için Jan Kleiner ve Susanne Schulz teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar Bonn Üniversitesi Tıp Fakültesi akış sitometri çekirdek tesis mükemmel destek kabul. Yazarlar herhangi bir dış kuruluştan hiçbir fon aldı.  Sonuçlar bölümünde verilen ve Şekil 3 ' te tasvir edilen verilerin bir kısmı zaten önceki yayında8' de gösterildi.

Bu hayvan protokolü, yerel hayvan bakımı Komitesi (LANUV, Recklinghausen, Almanya; protokol No. 84-02.04.2015) tarafından onaylandı ve canlı hayvanların kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüleri kurallarına uygun olarak gerçekleştirildi (NıH yayını No. 85-23, revize 1996).
1. ALI indüksiyon
<ol><li>Yaklaşık 10-12 hafta yaşlarda yetişkin C57BL/6 fareler kullanın. Su ve standart kemirgen Chow ücretsiz erişim ile bireysel havalandırılmış kafeslerde hayvanları ev. Ancak, bu yaklaşım genç hayvanlar ve diğer fareler suşları ile gerçekleştirmek mümkündür.</li>
	<li>Depo LPS (Escherichia coli O111: B4)-20 °c ' de 5 mg/ml konsantrasyonlarda plakaya içinde. İntratrakeal instilasyon için, steril fosfat-tampon tuz (PBS) 2.000 μg/ml son konsantrasyonda seyreltildi LPS.</li>
	<li>Fareyi tartın. Ketamin enjekte [120 mg/kg fare vücut ağırlığı (BW)] ve xylazine (16 mg/kg BW) intraperitoneal (alt üçte biri karın, paramedian), ve anestezi başlangıcına kadar bekleyin.</li>
	<li>Bir dokunsal Stimulus inducing tarafından anestezi derinliği kontrol edin. Yetersiz anestezi durumunda, ketamin (30 mg/kg BW) ve xylazine (4 mg/kg BW) ile enjeksiyonu tekrarlayın.</li>
	<li>37 °C ' lik vücut sıcaklığını korumak için fareyi sıcaklık kontrollü bir masaya meyilli pozisyona yerleştirin.</li>
	<li>Anestezi altında korneaların kurutulur önlemek için steril oftalmik yağlayıcı uygulayın.</li>
	<li>Baş ve kanca Kesici taşları masanın yaklaşık 5 cm yukarısında yer alan yatay bir çubuk üzerine çıkarın ve önler masaya yakın temas halinde kalır. Tablo (Şekil 1) göreli olarak 90 ° ' lik bir açı ile boynunun süper uzatın. Daha kolay entübasyon koşulları için boğaz düzeltmek için forseps ile dilini tutun.</li>
	<li>22 ölçer (G) venöz kateteri 20 mm uzunluğa keser. kateteri dilin kökü boyunca dikey yönde hafifçe takın. Ses akorları görselleştirmek ve trakea amacı yardımcı olmak için larinks üzerinde cilde soğuk ışık kaynağı yerleştirin. Larinks direnci oluşursa, tekrar ilerleymeden önce kateter birkaç milimetre geri çekin.</li>
	<li>Kateteri yaklaşık 10 mm trakeaya takın. Bu doğru veya sol ana bronş içine sıvı tek taraflı instilasyon neden olacak gibi ekleme çok derin olmadığından emin olun.</li>
	<li>PBS 'de pipet kullanılarak seyreltilmiş LPS (5 μg/g BW) enjekte edilir [enjekte hacmi fare vücut ağırlığına bağlıdır (örn., 20 g vücut ağırlığı → kullanım 50 μL LPS çözeltisi)]. Not: fare genellikle öksürük veya trakea içine sıvı doğru instilasyon için nefes nefese ile yanıt verecektir.</li>
	<li>Bir şırınga bağlayın ve tam sıvı hacminin akciğerlerde dağıtıldığından emin olmak için 50 mL hava bolus ekleyin. Kateteri yavaşça çıkarın.</li>
	<li>Trakea 'dan sıvının sızıntısını önlemek için farenin üst gövdesini 30 s için dik konumda tutun.</li>
	<li>Sham tarafından işletilen hayvanların, 50 μL steril PBS intratracheally yerine LPS enjekte.</li>
	<li>Buprenorfik hidroklorür enjekte 0,08 mg/kg BW hemen altında gevşek cilt içine subkutan sel indüksiyon ve her 12 saat sonra, ilk 48 h sırasında.</li>
	<li>Fare ısınma yastığı üzerinde tutarak tam farkındalığa kavuşana kadar 37 °C ' lik bir vücut sıcaklığını koruyun.</li>
	<li>Fareyi, yiyecek ve suya ücretsiz erişim ile ayrı olarak havalandırılan bir kafeye aktarın. Fareyi düzenli olarak izleyin. Azalan vücut sıcaklığı ve solunum depresyonu ALI 'nin doğru indüksiyonu gösterir.</li>
</ol>2. kan örnekleme, Bronkoalveoler Lavaj, organ hasat
Not: ötenizasyonun zamanlaması, ele alınan bilimsel soruna bağlıdır. Genellikle, LPS instıtasyon3,4,9,10aşağıdaki 12-72 h gerçekleştirilir. ALI 'nin şiddeti, vücut sıcaklığının ve solunum sıkıntısı semptomlarının düzenli olarak gözlemlenmesi ile klinik olarak tespit edilebilir11.
<ol><li>Isoflurane ile sular altında bir odaya fareyi yerleştirerek anestezi neden. 1 L/dak oksijen debisi ile 3 vol% Isoflurane kullanın. bir dokunsal Stimulus inducing derin narkoz emin olun. Yetersiz anestezi derinliği durumunda,% 5 ' e kadar Isoflurane artırın.</li>
	<li>Atlanto-oksipital dislocation tarafından derin anestezi fare fedakarlık.</li>
	<li>Bir operasyon masasında bantla fareyi düzeltin ve% 70 etanol ile karın üzerindeki kürkü kısa sürede dezenfekte edin. Karın boşluğunu, makas ve cımbız ile Median satırda dikkatlice açın. Omuroz alt ve abdominal aorta doğru Vena Cava inferior (ıVC) erişim elde etmek için bağırsak parçalarını çıkarın.</li>
	<li>Böbrek damarlarını bulun ve 1 mL şırıngaya bağlı bir bükülmüş 23 G canulun doğrudan damarların konfluence altında ıVC içine takın. Aspirate 250 μL kan ve transfer bir 1,5 mL tüp ile dolu 20 μL ile 0,5 M etylenediaminetetraasetic asit (EDTA) solüsyonu. EDTA karıştırma kolaylaştırmak ve buz tüp koymak yavaşça sallayın.</li>
	<li>Bronkoalveoler Lavaj (BAL) için, 0,5 ml steril PBS ve 0,1 mL hava ile üç adet 1 mL şırıngalar hazırlayın. Kısa sürede% 70 etanol ile boğazın kürk dezenfekte ve dikkatle makas ve cımbız ile trakea maruz. Trakeası harekete geçirin ve bir sütür etrafında sarın.</li>
	<li>BAL gerçekleştirin: mikro-makas kullanarak trakea delinmesi ve 20 mm uzunluğunda bir 22 G venöz kateter kesme takın. kateter ile sütür ve instillate 0,5 mL steril PBS ve 0,1 mL hava ile düzeltin. 60 s sonra sıvı Aspire. ek iki şırıngalar ile prosedürü tekrarlayın ve buz üzerinde 15 ml tüp tüm aspirat toplamak.</li>
	<li>Dikkatle akciğer hasat için makas ve cımbız ile toraks açın. Diyaframı, kostal marjı boyunca kesip iki lateral kesiyle kaburgalar arasında keser. Dikkatle akciğerleri delme kaçının. Sternum ' ı kransal olarak kaldırın ve düzeltin veya çıkarın.</li>
	<li>2 10 mL şırıngalar 37 °C sıcak PBS (kalsiyum ve magnezyum olmadan) hazırlayın. Sol ventrikül içine küçük bir kesi olun. 26 G kanula ile sağ ventrikül delinmesi ve prewarmed PBS ile pulmoner dolaşım Flush. Prosedür sırasında soluk dönen akciğerlerin farkında olun.</li>
	<li>Akciğerlerin sağ lob çıkarın ve iki yarıya kesip. Daha fazla gen ifadesi ve protein analizi için uzun süreli depolama-80 °C ' ye kadar sıvı nitrojende onları çırpıda dondurur.</li>
	<li>Tüm Sol akciğer çıkarın ve makas ve cımbız ile doku kıyma tarafından bir 48 iyi plaka homojenize. Dokusunu 2 ml sindirim tamponunda [RPMI 1640% 10 fetal buzağı serumu (FCS) ve 0,1% Nan3, kolajenaz ı (1 mg/ml) ve DNase II (7 mg/ml)], 37 °c ' de 60 dk. daha fazla Homojenleştirme ile akciğer dokusu parçalarını dikkatli bir şekilde pipetleme ile gerçekleştirin ve Aşağı.</li>
</ol>3. FACS analizi için doku hazırlığı
<ol><li>Taze FACS tamponu hazırlayın (Tablo 1): her zaman katır bağımlı hücre-hücre yapışmasını azaltmak ve küme önlemek için kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS kullanın. FCS ile ek (1%) hücre apoptosis korumak için, non-spesifik boyama önlemek ve hücreleri FACS tüpler yapışmasını önlemek. Makrofajlar gibi yapışkan ve yapışkan hücrelerle çalışırken, akma tabanlı hücre-hücre yapışmasını önlemek için EDTA (0,5 mM) içerir. Sodyum azid ekleyin (% 0,1), bakteriyel kontaminasyon ve florokromlarla ve bloklar antikor dökülme fotobleaching önler.</li>
	<li>Kan örneklerini (adım 2,4) 5 mL FACS tüplerine aktarın ve kanı 2 mL kırmızı kan hücresi liziz tamponunu hafifçe karıştırın. Buz üzerinde tüpler koymak ve 2 dk buz-soğuk PBS ekleyerek iki dakika sonra reaksiyonu sonlandırmak. 400 x g 'de 5 dk için numuneleri santrifüjün ve supernatant atın. Daha önce açıklanan protokoller12' ye göre sonraki FACS boyama için 60 μL FACS tampon ve proses ile hücre Pelet resuspend. Not: fare ötenizasyon zamanlaması sistemik inflamasyonun bir parçası olarak lökosit sayısını etkiler. Bu nedenle, akış sitometri analizi için en iyi boyama sonuçlarını elde etmek için bu adımda hücre numarasını 1 x 106 hücreli/60 μL olarak ayarlamanız önerilir.</li>
	<li>Santrifüj BAL sıvı (adım 2,6) için 5 dk 400 x g. Süpernatant aspirate ve sıvı nitrojen içinde dondurmak, uzun süreli depolama sonra-80 °c daha fazla protein analizi için. 2 ml soğuk FACS tampon ile resuspend bal hücre Pelet, daha sonra 5 ml FACS tüp içine bir 100 μm Mesh filtre kılları yeniden uygulamak için süspansiyon transfer.</li>
	<li>Yine, numune Santrifüjü 5 dk 400 x g. Daha önce açıklanan protokoller12' ye göre sonraki FACS boyama için 60 μL FACS tampon ve proses ile Pelet resuspend. Not: fareye ait ötenizasyon zamanlaması, inflamasyonun bir parçası olarak BAL 'da lökosit sayısını etkiler. Bu nedenle, akış sitometri analizi için en iyi boyama sonuçlarını elde etmek için bu adımda hücre numarasını 1 x 106 hücreli/60 μL olarak ayarlamanız önerilir.</li>
	<li>Ekleme sindirilmiş Sol akciğer dokusu (adım 2,10) bir 5 mL FACS tüp içine bir 100 μL Mesh filtre kullanarak kümeleri ayıklamak ve sindirim sürecini sonlandırmak için ekleyerek 2 mL buz-soğuk FACS tampon. Numuneyi 5 dakika 400 x g 'de santrifüjün. Süpernatant atın ve daha önce açıklanan protokoller göre sonraki FACS boyama için 60 μL FACS tampon ve süreç ile Pelet pelletini12. Not: Farenizin ötenizasyonunun zamanlaması, inflamasyonun bir parçası olarak akciğer dokusunda lökosit sayısını etkiler. Bu nedenle, akış sitometri analizi için en iyi boyama sonuçlarını elde etmek için hücre numarasını 1 x 106 hücreli/60 μL olarak ayarlamanız önerilir.</li>
	<li>FACS analizi için, CD16/CD32 antikor ile hücreleri 4 °C ' de 15 dakika boyunca, immünoglobulinin FC reseptörlerine spesifik olmayan bağlayıcılığı engellemek için inkük et. 5 mL 'Lik bir tüpte 60 μL 'de 1 x 106 hücreye 20 μl engelleme çözümü ekleyin.</li>
	<li>Bu arada, Tablo 2' de açıklandığı gibi FACS tampon ve antikorlar ile bir Master Mix hazırlayın.</li>
	<li>Engelleme işleminden sonra hücreleri yıkayınız. 100 en son hacmi elde etmek için numune başına 20 μL antikor ana karışımı ekleyin. örnekleri 4 °C ' de karanlıkta 20 dakika boyunca Kulyattır.</li>
	<li>Her numuneyi 1 mL FACS tampon ile yıkayın ve 400 x g'de 5 dakika santrifüjün. Süpernatant atın ve FACS ölçümleri için uygun hücre konsantrasyonu için FACS tampon ile Pelet pelletini. Not: Bu protokol ile FACS analizinde en iyi bağışıklık fenotipleme sonuçlarını elde etmek için 1 x 106 hücreli/500 μL hücre sayısı önerilir. Ancak, antikorların bireysel titoy olması önerilir.</li>
	<li>Gerekirse, ticari olarak mevcut özel kitleri kullanarak yüzey boyama öncesinde canlı/ölü boyama ekleyin8.</li>
	<li>Son olarak, mutlak hücre numaraları12belirlemek için her örnek için ticari olarak kullanılabilen fluorokrom bağlantılı kalibrasyon boncuk (3 x 105 boncuk 20 μl FACS tampon) sabit sayıda ekleyin. Kan, BAL ve doku hücreleri için gating stratejisi Şekil 2' de gösterilir.</li>
</ol>

<ol><li>Fink, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis.</a> Virulence. 5 (1), 143-153 (2014).</li>
<li>Lu, Y. -C., Yeh, W. -C., Ohashi, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LPS%2FTLR4+signal+transduction+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">LPS/TLR4 signal transduction pathway.</a> Cytokine. 42 (2), 145-151 (2008).</li>
<li>Matute-Bello, G., Frevert, C. W., Martin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of acute lung injury.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 295 (3), 379-399 (2008).</li>
<li>Rabelo, M. A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Lung+Injury+in+Response+to+Intratracheal+Instillation+of+Lipopolysaccharide+in+an+Animal+Model+of+Emphysema+Induced+by+Elastase%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">Acute Lung Injury in Response to Intratracheal Instillation of Lipopolysaccharide in an Animal Model of Emphysema Induced by Elastase.</a> Inflammation. 41 (1), 174-182 (2018).</li>
<li>Liu, F., Li, W., Pauluhn, J., Trübel, H., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury+in+rats%3A+comparative+assessment+of+intratracheal+instillation+and+aerosol+inhalation%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide-induced acute lung injury in rats: comparative assessment of intratracheal instillation and aerosol inhalation.</a> Toxicology. 304, 158-166 (2013).</li>
<li>Rittirsch, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Lung+Injury+Induced+by+Lipopolysaccharide+Is+Independent+of+Complement+Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Acute Lung Injury Induced by Lipopolysaccharide Is Independent of Complement Activation.</a> Journal of Immunology. 180 (11), Baltimore, Md. 7664-7672 (2008).</li>
<li>D'Alessio, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+Tregs+resolve+experimental+lung+injury+in+mice+and+are+present+in+humans+with+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">CD4+CD25+Foxp3+ Tregs resolve experimental lung injury in mice and are present in humans with acute lung injury.</a> The Journal of Clinical Investigation. 119 (10), 2898-2913 (2009).</li>
<li>Ehrentraut, H., Weisheit, C., Scheck, M., Frede, S., Hilbert, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+murine+acute+lung+injury+induces+increase+of+pulmonary+TIE2-expressing+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Inflammation%22%5BJournal%5D)">Experimental murine acute lung injury induces increase of pulmonary TIE2-expressing macrophages.</a> Journal of Inflammation. 15, 12(2018).</li>
<li>Szarka, R. J., Wang, N., Gordon, L., Nation, P. N., Smith, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+pulmonary+damage+induced+by+lipopolysaccharide+via+intranasal+instillation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">A murine model of pulmonary damage induced by lipopolysaccharide via intranasal instillation.</a> Journal of Immunological Methods. 202 (1), 49-57 (1997).</li>
<li>Reutershan, J., Basit, A., Galkina, E. V., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+recruitment+of+neutrophils+into+lung+and+bronchoalveolar+lavage+fluid+in+LPS-induced+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Sequential recruitment of neutrophils into lung and bronchoalveolar lavage fluid in LPS-induced acute lung injury.</a> American Journal of Physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 289 (5), 807-815 (2005).</li>
<li>Hoegl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capturing+the+multifactorial+nature+of+ARDS+-+approach+to+model+murine+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reports%22%5BJournal%5D)">Capturing the multifactorial nature of ARDS - approach to model murine acute lung injury.</a> Physiological Reports. 6 (6), (2018).</li>
<li>Weisheit, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ly6Clow+and+Not+Ly6Chigh+Macrophages+Accumulate+First+in+the+Heart+in+a+Model+of+Murine+Pressure-Overload%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Ly6Clow and Not Ly6Chigh Macrophages Accumulate First in the Heart in a Model of Murine Pressure-Overload.</a> PLoS ONE. 9 (11), (2014).</li>
<li>Grommes, J., Soehnlein, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+Neutrophils+to+Acute+Lung+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Contribution of Neutrophils to Acute Lung Injury.</a> Molecular Medicine. 17 (3-4), 293-307 (2011).</li>
<li>Müller-Redetzky, H. C., Suttorp, N., Witzenrath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+pulmonary+endothelial+barrier+function+in+acute+inflammation%3A+mechanisms+and+therapeutic+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Dynamics of pulmonary endothelial barrier function in acute inflammation: mechanisms and therapeutic perspectives.</a> Cell and Tissue Research. 355 (3), 657-673 (2014).</li>
<li>Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+apoptosis+in+lipopolysaccharide-induced+lung+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell apoptosis in lipopolysaccharide-induced lung injury in mice.</a> International Archives of Allergy and Immunology. 117 (3), 202-208 (1998).</li>
<li>Doyen, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+induced+by+inhaled+lipopolysaccharide+depends+on+particle+size+in+healthy+volunteers%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Clinical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Inflammation induced by inhaled lipopolysaccharide depends on particle size in healthy volunteers.</a> British Journal of Clinical Pharmacology. 82 (5), 1371-1381 (2016).</li>
<li>Stephens, R. S., Johnston, L., Servinsky, L., Kim, B. S., Damarla, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tyrosine+kinase+inhibitor+imatinib+prevents+lung+injury+and+death+after+intravenous+LPS+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reports%22%5BJournal%5D)">The tyrosine kinase inhibitor imatinib prevents lung injury and death after intravenous LPS in mice.</a> Physiological Reports. 3 (11), (2015).</li>
<li>Yu, Y., Jing, L., Zhang, X., Gao, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simvastatin+Attenuates+Acute+Lung+Injury+via+Regulating+CDC42-PAK4+and+Endothelial+Microparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Simvastatin Attenuates Acute Lung Injury via Regulating CDC42-PAK4 and Endothelial Microparticles.</a> Shock. 47 (3), Augusta, Ga. 378-384 (2017).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Minimal invasiveness, basit elleçleme ve iyi yeniden Üretilebilirlik, küçük bir kemirgen modelde ALI 'yi teşvik etmek için sunulan yaklaşımın temel özellikleridir. Hayvan modellerinde tüm bakterilerin yerine LPS kullanımı avantajları vardır. İstikrarlı ve saf bir bileşiktir ve kullanımına kadar liyofilize formda depolanabilir. Bu TLR4 yolu ile doğuştan gelen immün tepkiler için güçlü bir uyarıcı olduğunu, ve biyolojik aktivite kolayca nicelik olabilir, iyi reproducibility ile hastalığın şiddetinin titrasyon kolaylaştırıl...

Deneysel hayvan modelleri temel bağışıklık araştırmalarında vazgeçilmez. Tüm bakterilerin veya mikrobiyal bileşenlerin yönetilmesi, yerel veya sistemik inflamasyona yol açan küçük hayvan modellerinde sıklıkla kullanılmıştır1. Lipopolysaccharide (LPS veya bakteriyel endotoksin) bir hücre duvar bileşeni ve gram-negatif bakterilerin yüzey antijeni (örn., Enterobacteriaceae, Pseudomonas spp., veya Legionella spp.). Termostabil ve büyük molekül (Moleküler Ağırlık 1-4 x 106 kDa) bir lipid kısım (lipid a), çekirdek bölge (oligosaccharide) ve bir o polisakkarit (veya o antijen) oluşur. Lipid A, hidrofobik yağ asidi zincirleri ile, molekül bir bakteriyel membran ve arabulucuları (bakterilerin bozulması üzerine) immünolojik aktivite ve LPS toksisitesi ile çapa. LPS bağlama proteini (LBP), LPS: LBP kompleksleri, birçok hücre türlerinin yüzeyinde bulunan CD14/TLR4/MD2 reseptör kompleksine bağlanarak, NF-κB nükleer translokasyon ve sonraki upregülasyonu ile güçlü bir proinflamatuar reaksiyon inducing sitokin ifadesi2.
Akut akciğer hasarı (ALI) kalp yetmezliği yokluğunda bilateral pulmoner ödem ile akut hipoxemik solunum yetmezliği olarak tanımlanır3. LPS Airway yönetimi pulmoner inflamasyon ve alı4,5,6,7teşvik etmek için yaygın bir yoldur. Steril madde bulaşıcı hastalıklarda farmakolojik müdahaleler çalışmak için uygun olmasa da, mekanik immünolojik sorular yeterli hassasiyetle cevaplanabilir. LPS 'in trakeanın içine ınbrilasyonu, lökosit invazyonu ile sağlam bir enflamatuar reaksiyon, proinflamatuar sitokinlerin updüzenleme, ve alveolo-kapiller bariyerinin saatler içinde gün içinde bozulması, LPS dozajı3' e bağlı olarak, 6,7.
Sunulan protokol, intratrakeal LPS instıtasyon tarafından farelerde alı 'yi teşvik etmek için ayrıntılı bir adım adım prosedür açıklar. Model, sitokin ifadesi, nötrofil granülosit invazyonu ve intra alveoler albümin kaçağı olarak önceden açıklandığı gibi değerlendirilerek doğrulandı8.

<table><tbody><tr><td>1 ml şırınga</td><td>BD, Franklin Lakes, NJ, ABD</td><td>300013</td><td></td></tr><tr><td>10 ml şırınga</td><td>BD, Franklin Lakes, NJ, ABD</td><td>309110</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD115 (c-fms) APC</td><td>Thermo Fisher, Waltham, MA, ABD</td><td>17-1152-80</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD11b (M1 / 70) - FITC</td><td>Thermo Fisher, Waltham, MA, ABD</td><td>11-0112-81</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD45 (30-F11) - eF450</td><td>Termo Balıkçı, Waltham, MA, ABD</td><td>48-0451-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-F4 / 80 (BM-8) - PE Cy7</td><td>Thermo Fisher, Waltham, MA, ABD</td><td>25-4801-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Gr1 (RB6-8C5)</td> <td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, ABD</td><td>552093</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Ly6C (HK1.4) PerCP-Cy5.5</td><td>Thermo Fisher, Waltham, MA, ABD</td><td>45-5932-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Ly6G (1A8) APC / Cy7</td><td>Bio Legend, San Diego, CA</td><td>127623</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin hidroklorür</td><td>Indivior UK Limited, Berkshire, UK</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57BL / 6 fareler, dişi, 10 - 12 haftalık</td><td>Charles River, Wilmongton, MA, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CaliBRITE APC-boncukları (6 ve mikro; m)</td> <td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, ABD</td><td>340487</td><td></td></tr><tr><td>Canula 23 gauge 1''</td><td>BD, Franklin Lakes, NJ, ABD</td><td>300800</td><td></td></tr><tr><td>Canula 26 gauge 1/2''</td><td>BD, Franklin Lakes, NJ, ABD</td><td>303800</td><td></td></tr><tr><td>Hücre süzgeci 70 & mikro; m</td><td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, ABD</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz Tip I</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD</td><td>1148089</td><td></td></tr><tr><td>Deoksiribonükleaz II</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD</td><td>D8764 ve nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salin (PBS), steril</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD</td><td>D8662</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Fosfat Tamponlu Salin (PBS), kalsiyum klorür ve magnezyum klorür içermeyen, steril</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Etilendiamintetraasetik asit (EDTA) çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD</td><td>E7889</td><td></td></tr><tr><td>FACS tüpleri, 5 ml</td><td>Sarstedt, N&uuml; mbrecht, Almanya</td><td>551579</td><td></td></tr><tr><td>Fetal buzağı serumu (FCS)</td> <td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD</td><td>F2442</td><td></td></tr><tr><td>Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları, Heidelberg, Almanya</td><td>11049-10</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Baxter, Unterschlei ve szlig; heim, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamin hidroklorür</td><td>Serumwerk Bernburg, Bernburg, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli O111:B4'ten lipopolisakkaritler (LPS</td>) <td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD</td><td>L2630</td><td></td></tr><tr><td>CANLI/ÖLÜ Sabitlenebilir Ölü Hücre Yeşil Kiti</td><td>Thermo Fisher, Waltham, MA, ABD</td><td>L23101</td><td></td></tr><tr><td>Saflaştırılmış Sıçan Anti-Fare CD16/CD32 (Fare BD Fc Blok ve ticaret;), Klon 2.4G2</td><td>BD, Franklin Lakes, NJ, ABD</td><td>553141</td><td></td></tr><tr><td>Kırmızı kan hücresi lizis tamponu</td><td>Thermo Fisher, Waltham, MA, ABD</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640, L-glutamin ve sodyum bikarbonat ile</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD</td><td>R8758</td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları, Heidelberg, Almanya</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum azid (NaN3)</td> <td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı makas</td><td>Güzel Bilim Aletleri, Heidelberg, Almanya</td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>Doku forseps</td><td>Güzel Bilim Aletleri, Heidelberg, Almanya</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>Tüpler</td><td>Eppendorf, Hamburg, Almanya</td><td>30125150</td><td></td></tr><tr><td>Venöz kateter, 22 gauge</td><td>B.Braun, Melsungen, Almanya</td><td>4268091B</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin hidroklorür</td><td>Serumwerk Bernburg, Bernburg, Almanya</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

doğrudan intratracheal lipopolysaccharide instilasyon ile farelerde akut akciğer hasarının İndükleme

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Lipopolisakkarid (LPS) Airway yönetimi küçük hayvan modellerinde pulmoner inflamasyon ve akut akciğer hasarı (alı) incelemek için yaygın bir yoldur. Aerosolize LPS inhalasyonu ve burun ya da intratrakeal instilasyon gibi çeşitli yaklaşımlar tanımlanmıştır. Sunulan protokol, doğrudan intratrakeal LPS instıtasyon tarafından farelerde alı 'yi teşvik etmek ve kan örnekleri, Bronkoalveoler Lavaj (bal) sıvısı ve akciğer dokusu FACS analizi gerçekleştirmek için ayrıntılı bir adım adım prosedür açıklanmaktadır. İntraperitoneal sedasyon sonrasında trakea maruz kalır ve LPS 22 G venöz kateter üzerinden uygulanır. Lökosit invazyonu ile sağlam ve tekrarlanabilir bir inflamatuar reaksiyon, proenflamatuar sitokinlerin updüzenleme ve alveolo-kapiller bariyerinin bozulması, kullanılan LPS dozaja bağlı olarak saatlerce gün içinde indüklenir. Kan numunelerinin toplanması, BAL sıvısı, ve akciğer hasat, hem de FACS analizi için işleme, protokolde ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Steril LPS kullanımı bulaşıcı hastalıklarda farmakolojik müdahaleleri incelemek için uygun olmasa da, açıklanan yaklaşım, mekanik immünolojik sorulara cevap vermek için minimal invasiveness, basit kullanım ve iyi yeniden Üretilebilirlik sunar. Ayrıca, doz titrasyonu yanı sıra alternatif LPS preparatları veya fare suşları kullanımı klinik etkilerinin modülasyon izin, hangi ALI şiddeti farklı derecelerde gösterebilir veya erken vs hastalık belirtileri geç başlangıcı.

Farelerde ALI 'yi teşvik etmek için açıklanan yaklaşım, sitokin ifadesi, nötrofil granülosit infiltrasyonu, ve alveolo-kapiller bariyer bozulması 24 h ve 72 h sonra LPS instıtasyon değerlendirilerek doğrulandı. PBS enjekte hayvanlar kontrol olarak görev yaptı. İntratracheal LPS yönetimi sağlam bir pulmoner proinflamatuar tepkiye sebep oldu. Akciğer dokusunda TNF-α ifadesi, kontrol hayvanları [RQ (TNF-α/18s); 24 h: 53,7 (SD = 11,6); 72 h: 55,0 (SD = 20,6); p &lt; 0,05)] (Şekil 3a</str...

Burada sunulan bir adım-adım prosedür doğrudan intratrakeal lipopolisakkarid instilasyon tarafından fareler akut akciğer hasarı neden ve kan örnekleri, Bronkoalveoler Lavaj sıvısı ve akciğer dokusu FACS analizi gerçekleştirmek için. Minimal invasiveness, basit kullanım, iyi reproducibility, ve hastalık şiddeti titrasyon bu yaklaşımın avantajlarıdır.

Doğrudan Intratracheal Lipopolysaccharide Instilasyon ile farelerde akut akciğer hasarının İndükleme

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Güvenilir hayvan modelleri temel araştırmanın önemli bileşenleridir. Bizim mürin yaklaşımımemelilerde akut akciğer hasarı gelişimi mekanistik ve kinetik immünolojik sorulara cevap sağlar. Minimal invazivlik, basit kullanım ve iyi tekrarlanabilirlik bu tekniğin başlıca avantajlarıdır.Buna ek olarak, doz titrasyonu ile, biz klinik etkisi modüle edebilirsiniz. Bu teknik, ciddi akciğer hasarı olan hastaların klinik durumunu yansıtarak altta yatan mekanizmaların araştırılmasını sağlar. Lipopolisakkarit veya LPS'yi mililitrebaşına beş miligramlık bir konsantrasyonda eksi 20 santigrat derecede saklayın.İntratrakeal aşılama için, steril fosfat tamponlu tuzlu da çözülmüş LPS'yi mililitrede 2,000 mikrogramlık son konsantrasyona seyreltin. 22-gauge venöz kateter20 milimetre uzunluğunda kesin. 37 santigrat derece lik bir vücut sıcaklığıkorumak için fareyi Sıcaklık kontrollü bir masaya yatkın konuma yerleştirin.Metin protokolünde açıklandığı gibi anesteziyi takiben, anestezi altında korneaların kurumasını önlemek için steril oftalmik yağ layıcı uygulayın. Ön patiler masayla yakın temas halinde kalırken, masanın yaklaşık beş santimetre yukarısında konumlandırılmış yatay bir çubuktaki baş ve kanca kesici leri kaldırın. Boynu masaya göre 90 derecelik açıyla süper genişletin.Ses tellerini görselleştirmeye ve trakeayı hedeflemeye yardımcı olmak için gırtlanın üzerindeki cilde soğuk bir ışık kaynağı yerleştirin. Daha kolay entübasyon koşulları için boğaz düzeltmek için forseps ile dil tutun. Gırtlanın doğru görüntülenmesi ve tanımlanması kateterin doğru intratrakeal yerleşimini sağlamak için önemlidir.Harici bir soğuk ışık kaynağı bu adımda yardımcı olur. Kateteri yaklaşık 10 milimetretlik bir trakeaya yerleştirin. Bu sağ veya sol ana bronş içine sıvı tek taraflı aşılama neden olacağı gibi ekleme, çok derin olmadığından emin olun.Gırtlağın direnci oluşursa, tekrar ilerlemeden önce kateteri birkaç milimetre geri çekin. Şimdi, lps seyreltilmiş MPBS bir pipet kullanarak enjekte edin. Enjekte edilen hacim farenin vücut ağırlığına bağlıdır.Bir şırınga bağlayın ve tam sıvı hacmi akciğerlerde dağıtılan sağlamak için hava 50 mikrolitre bir bolus ekleyin. Kateteri yavaşça çıkarın. Trakeadan sıvı sızıntısını önlemek için farenin üst gövdesini 30 saniye boyunca dik bir pozisyonda tutun.Bir operasyon masasında bant ile ötenazi fare düzeltmek ve kısa bir süre% 70 etanol ile karın üzerinde kürk dezenfekte. Karın boşluğunu makas ve cımbızla ortanca çizgide dikkatlice açın. Karın aort vertebral sütuna vena kava inferior sağ erişim elde etmek için bağırsak parçaları çıkarın.Böbrek damarları bulmak ve vena kava inferior içine bir mililitreşşile bağlı bir bükülmüş, 23-gauge kanül eklemek, doğrudan damarların birleşimi altında. 250 mikrolitre kan aspirat ve 0,5 molar EDTA çözeltisi 20 mikrolitre ile dolu 1,5 mililitrelik bir tüpe aktarın. EDTA karıştırma kolaylaştırmak ve buz üzerine tüp koymak için hafifçe çalkalayın.Bronkoalveoler lavaj için, her biri 0,5 mililitre steril PBS ve 0,1 mililitre hava içeren üç adet mililitre şırınga hazırlayın. % 70 etanol ile boğaz kürk dezenfekte ve dikkatle makas ve cımbız ile trakea maruz. Nefes borusunu harekete geçirin ve etrafına bir dikiş sarın.Trakeayı mikro makas kullanarak delin ve 20 milimetre uzunluğa kadar kesilmiş 22 kalibrelik venöz kateter takın. Kateteri bir dikişle düzeltin ve 0,5 mililitre steril PBS ve 0,1 mililitre hava aşıla. 60 saniye sonra sıvı aspire.Ek iki şırınga ile prosedürü tekrarlayın ve buz üzerinde 15 mililitrelik bir tüp içinde tüm aspire toplamak. Dikkatle akciğerleri hasat makas ve cımbız ile göğüs açık. Costal marjı boyunca diyafram kesin ve iki lateral kesiler ile kaburga kesti.Akciğerleri dikkatlice delmekten kaçının. Sternum kranially kaldırın ve düzeltmek veya çıkarın. Sıcak, 37 derece Santigrat PBS ile iki 10 mililitreşli şırınga hazırlayın.Sol ventriküliçine küçük bir kesi yapın. 26-gauge kanül ile sağ ventrikül delinme. Sonra, önceden ısıtılmış bir PBS ile pulmoner dolaşımı floş.İşlem sırasında akciğerlerin solukla döndüğünü unutmayın. Akciğerlerin sağ lobu çıkarın ve yarıya kesin. Snap sıvı nitrojen onları dondurma eksi 80 santigrat derece daha fazla gen ekspresyonu ve protein analizi için uzun vadeli depolama izledi.Tüm sol akciğer çıkarın ve makas ve cımbız ile doku kıyma tarafından 48-iyi plaka içinde homojenize. Dokuyu 2 mililitre sindirim tamponuna 37 derecede 60 dakika kuluçkaya yatırın. Akciğer dokusu parçalarını dikkatlice yukarı ve aşağı boruile tutarak daha fazla homojenizasyon gerçekleştirin.Kan örneklerini beş mililitrelik FACS tüpüne aktarın ve kanı iki mililitre kırmızı kan hücresi lisis tamponuyla hafifçe karıştırın. Tüpleri buza koyun ve iki mililitre buz gibi pbs ekleyerek iki dakika sonra reaksiyonu sonlandırın. Numuneyi 400 kez g'de beş dakika santrifüj edin ve süpernatant'ı atın.Daha önce açıklanan protokollere göre sonraki FACS boyama için 60 mikrolitre FACS tampon ve süreç ile hücre pelet resuspend. 400 kez g beş dakika santrifüj BAL sıvı. Supernatant aspire ve sıvı nitrojen daha fazla protein analizi için eksi 80 santigrat derece uzun süreli depolama ardından dondurmak.Bal hücreli peleti iki mililitre soğuk FACS tamponuyla yeniden askıya aldıktan sonra, süspansiyonu kılları dizginlemek için 100 mikron örgü filtre kullanarak beş mililitrelik bir FACS tüpüne aktarın. Numuneyi tekrar santrifüj ettikten sonra, 60 mikrolitre FACS tamponu ile peleti yeniden askıya alın ve daha önce açıklanan protokollere göre sonraki FACS boyama işlemi için. Şimdi, sindirilmiş sol akciğer dokusunu kümeleri çıkarmak için 100 mikronluk bir örgü filtre kullanarak beş mililitrelik bir FACS tüpüne aktarın.400 kez g beş dakika için örnek santrifüj önce buz gibi FACS tampon iki mililitre ekleyerek sindirim sürecini sonlandırın. Supernatant atın ve daha önce açıklanan protokollere göre sonraki FACS boyama için FACS tampon ve süreç 60 mikrolitre ile pelet resuspend. BIR FACS analizi için, beş mililitrelik bir tüpteki 60 mikrolitre hücreye 20 mikrolitre CD16/CD32 antikor engelleme çözeltisi ekleyin.Fc reseptörlerine immünglobulin nonspesifik bağlanmasını engellemek için 15 dakika boyunca dört santigrat derecede hücreleri kuluçkaya yatırın. Bu arada, metin protokolünde açıklandığı gibi, FACS arabellek ve antikorlar ile bir ana karışımı hazırlamak. Bloke ettikten sonra hücreleri yıkamayın.100 mikrolitrelik son hacmi elde etmek için numune başına 20 mikrolitre antikor ana karışımı ekleyin. Numuneleri karanlıkta 20 dakika boyunca 4 santigrat derecede kuluçkaya yatırın. Her numuneyi bir mililitre FACS tamponu ve santrifüjile yıkayın.Supernatant atın ve FACS tampon ucs ölçümleri için uygun hücre konsantrasyonu ile pelet resuspend. Son olarak, mutlak hücre numaralarını belirlemek için her örneğe ticari olarak kullanılabilen florokrom çiftli kalibrasyon boncuklarının sabit numaralarını ekleyin. Kan, BAL ve doku hücreleri için metin protokolünde gösterilen gating stratejisini kullanarak akış sitometrisi yapın.İntratrakeal instillasyondan sonra 24 ve 72 saat sonra, akciğer dokusunda TNF-alfa ekspresyonu önemli ölçüde upregulated edildi, kontrol hayvanlara göre sürekli ve 50 kat daha fazla artış ulaştı. Doku ve alveoler alana lökosit invazyonu akut akciğer hasarı gelişimi için bir özellik ve karakteristiktir. FACS analizi, 24 saat sonra kontrollere göre mutlak hücre sayısının neredeyse dokuz kat arttığı, nötrofil granülositlerin akciğer interstisyumuna önemli ölçüde infiltrasyon unu saptandı.Mutlak nötrofil granülosit sayısı 72 saat sonra biraz azalmış, ancak kontrollere göre faktör artışı devam etti. Interstisyel nötrofil granülosit infiltrasyonu ile tutarlı olarak, tüm akciğer dokusunda MMP-9 ekspresyonu da toplam gözlem süresi boyunca anlamlı olarak artmıştır. Nötrofil granülositler sadece akciğer dokusunda değil, BAL sıvısında da artmıştır.Kontrol hayvanlarına göre kat artışı akciğer dokusuna göre daha belirgindi. Alveolokapiller bariyerin ciddi bozulmasına bağlı akciğer ödemi akut akciğer hasarı gelişimi için patoognomoniktir. ELISA tarafından BAL sıvısındaki albumen içeriğinin analizi, LPS instillasyonundan 24 saat ve 72 saat sonra önemli bir bariyer fonksiyonu kaybı olduğunu ortaya koymuştur.Uygun kateter yerleşimi LPS'nin ikili aşılanması için çok önemlidir. Genellikle, öksürük veya nefes alma gibi solunum alışkanlıklarındaki değişiklikler, sıvının doğru intratrakeal aşısını gösterir. Akut akciğer hasarının indüksiyonundan sonra, ilgili araştırma sorularını yanıtlamak için FACS analizi, PCR, protein tespiti gibi sonraki adımlar yapılabilir.

inducing-acute-lung-injury-mice-direct-intratracheal

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Intratrakeal instilasyonlar doğrudan ciğerlerine çözünenlerin sağlar. Bu prosedür, akciğer distal bölgeye instillate teslim hedefler ve bu nedenle sık sık alveoller okuyan yönelik çalışmalar dahil edilmiştir. Biz farelerde intratrakeal instilasyonlar gerçekleştirmek için ayrıntılı bir yaşam protokolü sağlar.

Fare Akciğer içine çözünenlerin Doğrudan Trakeal damlatma

Ventilatöre bağlı akciğer hasarı için bir fare modeli akut akciğer hasarı incelemek için önemli bir...

Farelerde Akut Akciğer Hasarı tetikleyebilecek Basınç Kontrollü Havalandırma

Kaynak: Radulovic, K. ve diğerleri. Bağırsak bariyerinin aşılması sonrası mikrobiyal türevli ürünlerin girişini taklit etmek için farelere lipopolisakkarit enjeksiyonları. J. Vis. Exp. (2018)Bu video, sistemik iltihabı indüklemek için farelere intraperitoneal olarak lipopolisakkarit (LPS) enjekte edilmesinin adım adım bir prosedürünü göstermektedir.

Sistemik Bağışıklık Yanıtlarını İncelemek İçin Farelerde Bakteriyel Lipopolisakkarit Enjeksiyonu

Source: Yuan, Z., et al. Bronchoalveolar Lavage Exosomes in Lipopolysaccharide-induced Septic Lung Injury. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates an in vivo mouse model for inducing and analyzing acute lung injury (ALI) using intraperitoneal administration of bacterial lipopolysaccharide. The inflammatory cascade triggered by alveolar macrophages and neutrophils leads to epithelial and endothelial barrier disruption, allowing fluid and immune cells to accumulate in the alveoli. Alveolar...

Lipopolysaccharide-Induced Acute Lung Injury in Mice for Exosome and Immune Analysis

Patojen enfeksiyonuna karşı konak bağışıklık tepkisi sıkı bir şekilde düzenlenmiş bir süreçtir. Farelerde bir lipopolisakarit akciğer maruz modeli kullanarak, bu hastalığın patojenezi ile ilgili kompleks mekanizmalar yüksek çözünürlüklü değerlendirme yapmak mümkündür.

Farelerde Host immün yanıtı değerlendirmek için Orofarengeal intratrakeal PAMP İdaresi ve Bronchoalveolar Lavage Kullanımı

Biz akut akciğer hasarı modeli, nebülizasyonu tarafından aerosolleşmiş lipopolisakkaride meydan tarafından nötrofilik akciğer inflamasyonu uyarılması için bir yöntem açıklanmaktadır. Buna ek olarak, akciğer izolasyonu, entübasyon ve bronkoalveoler lavaj temel cerrahi teknikler de tarif edilmiştir.

Aerosolize Lipopolisakarid kullanma Yaratma Pulmoner nötrofilisi için bir yöntem

Reaktiflerin Entübasyon aracılı intratrakeal (IMIT) instilasyon solunum yolu hastalıkları, hem de akciğer içine doğrudan tedavi reaktifler aşılamak için bir yöntem incelenmesi için mükemmel, invazif olmayan bir yöntemdir. Bu klinik öncesi test için uygun bir hızlı ve yüksek oranda çoğaltılabilir bir yöntemdir.

Entübasyon-aracılı intratrakeal (IMIT) damlatma: A Noninvaziv, Lung-özel Dağıtım Sistemi

Farelerde sol akciğere selektif bronşiyal asit instillasyonu, gastrik asit aspirasyonu ile indüklenen insan akut solunum sıkıntısı sendromunu (ARDS) modelleyen tek taraflı ve kendi kendine sınırlı akut akciğer hasarına yol açar.

Tek Taraflı Bronşiyal Asit İnstillasyonu ile Kendi Kendine Sınırlı Akut Akciğer Hasarı Modeli

Kombine ozon ve bakteriyel endotoksin maruz fareler nötrofiller de dahil olmak üzere geniş yayılmış hücre ölümü gösterir. Sitoskeletal lamellipodia'nın bozulması, karmaşık V ATP sintaz alt β birliğinin hücresel ekspresyonunun artması ve bronko-alveoler lavajda anjiyostatin, akciğer immün yanıtının baskılanması ve nötrofil alımının gecikmesi gibi hücresel adaptasyonları gözlemledik.

Kombine Ozon ve LPS kaynaklı Murine Akut Akciğer Hasarı Sırasında Akciğer Hücresel Adaptasyonlarının Görselleştirilmesi

Burada, noninvaziv orofaringeal endotrakeal entübasyon yoluyla intratrakeal lipopolisakkarit (LPS) doğumu için bir protokol öneriyoruz. Bu yöntem, hayvan için cerrahi prosedürün travmasını en aza indirir ve LPS'yi trakeaya ve daha sonra akciğerlere doğru bir şekilde iletir.

Farelerde Noninvaziv İntratrakeal Lipopolisakkarit Damlatma

Bu çalışmada, invaziv olmayan endotrakeal instillasyon tekniğinin, akciğerlere hassas LPS iletimi sağlamak için temel bir laringoskop kullanılarak sıçanlarda ALI geliştirdiği gösterilmiştir. LPS, laringoskop kullanılarak endotrakeal tüp aracılığıyla yerleştirilir. Akciğer yaralanmasının büyüklüğü birden fazla zaman noktasında değerlendirilir.

Kemirgenlerde akut akciğer hasarını indüklemek için lipopolisakkaridin invaziv olmayan endotrakeal uygulaması

Öğrenin, farelerde akut akciğer hasarı oluşturmak için intratrakeal LPS instilasyon yöntemini. Bu minimal invaziv teknik, FACS analizi ile immünolojik mekanizmaları araştırmaya olanak tanır.

Doğrudan Intratracheal Lipopolysaccharide Instilasyon ile farelerde akut akciğer hasarının İndükleme

Daha fazla video keşfet