Yetişkin zebrafish için In vivo yüzey elektrokardiyografi

In vivo elektrik kardiyografisi kesitsel ve boylamsal çalışmalarda canlı zebra balıklarında elektriksel fenotipleme için tek tanı aracıdır. Yaklaşımımız pratik, minimal invaziv ve uygun maliyetlidir çünkü memeliler için bir veri toplama sistemini yeniden amaçlayız. Veri kalitesinin erken doğrulanması için gerçek zamanlı EKG yorumlama stratejisini vurguluyoruz.

İnsan ve zebra balığı EG'leri benzer olduğundan, in vivo elektrokardiyografi insan kardiyak fizyolojisinin modelilmesinde zebra balığının yanı sıra QT uzaması gibi kardiyotoksisite için yüksek iş kaynağı ilaç taraması kullanımını kolaylaştırır. Doğru müşteri adayı konumlandırma, başarının anahtarıdır. Normal zebra balığı T dalgası en küçük olduğu için, genliğini daha büyük P ve R dalgalarına göre optimize etmek için öncelik verin.

EKG bulgularınızı yorumlamak için normal ve patolojik EKG desenlerini incele. Sadece EKG analiz yazılımının otomatik yorumlanmasına güvenmeyin. Deney günü, zebra balıklarını akvaryumdan laboratuvara taşıyın.

In vivo EKG kayıt sistemini kurmak için, gerekli ekipman parçalarını birbirine bağlayın ve EKG kurşununun üç renk kodlu paslanmaz çelik elektrotlarını amplifikatörün üç renk uyumlu erişim portalına yerleştirin. Seviye 4 anesteziin indüksiyonu için, yetişkin bir zebra balığını, kurumsal hayvan bakım ve kullanım komitesi tarafından onaylanan en düşük önceden belirlenmiş konsantrasyonlarda anestezi çözeltisi içeren bir tabağa batırın. Zebra balığı seviye 4 anestezisini üç saniye boyunca koruduktan sonra, balığı üç EKG elektrotunun yerleştirilmesi için yarık, ventral yüzeyi olan nemli bir süngere aktarmak için bir çift künt forseps kullanın.

Operkülumların iki alt kenarını birbirine bağlayan hayali bir çizginin 1-2 milimetre yukarısındaki bulbus arteriosus seviyesindeki ventral orta hattaki pozitif elektrotu yavaşça yerleştirin. Negatif elektrodu caudally ve 0,5 ila bir milimetre yanal pozitif elektrot için yetişkin zebrafish ventrikül maksimal apikobasal uzunluğu daha büyük bir mesafede sol konumlandırmak, sonra anal bölgeye yakın caudally referans elektrot konumlandırın. EKG kaydı için sistemi başlatın ve EKG veri toplama programını açın.

Aralık, düşük geçiş ve yüksek geçiş için açılır menülerden istenilen ayarı seçin. Bir kilohertz örnekleme hızında sürekli boşluksuz EKG kaydı başlatmak için Başlat'a basın. Maksimal sinyal-gürültü oranı için müşteri adayı konumlandırmayı optimize etmek için, kaydı durdurmak için Dur tuşuna basın ve her kalp için ilk kayıt denemesinden kısa bir süre sonra izi gözden geçirin.

EKG'nin normal olması bekleniyorsa, tüm EKG dalga formlarının farklı ve kolayca görülebilen olduğunu ve P dalgası, net QRS kompleksi ve T dalgasının pozitif olduğunu doğrulayın. Tek en kritik adım, sinyal-gürültü oranını en üst düzeye çıkarmak için kurşun konumlandırmadır. Düzeltici geri bildirim almak için her balık için ilk EKG kayıt denemesinden sonra dört doğrulama kriterimizi uygulayın.

Normal bir EKG bekleniyorsa, bu dört doğrulama kriterinin tümü karşılanıncaya kadar elektrotları gerektiği gibi yeniden konumlandırın. Normal bir T dalgası bekleniyorsa, ancak T dalgası çok küçükse, T dalga genliğini en üst düzeye çıkarmak için elektrotları yeniden konumlandırın. Kurşun konumlandırmayı optimize ettikten sonra EKG kaydına devam edin, sonraki analizler için EKG süpürmelerini kaydedin.

EKG kayıt seansının sonunda, balıkları yaralamadan elektrotları dikkatlice çıkarın. Hayatta kalma çalışmalarında, tricaine içermeyen taze, oksijenli balık suyuna balık transferi. Bu videoda, okuyucuların anesteziden balık ların iyileşmesini kolaylaştırmak için oksijenlenmenin durdurulduğunu lütfen unutmayın.

Hayatta kalma çalışmalarında anestezi kurtarma kolaylaştırmak için, balık düzenli solungaç hareketi veya yüzme devam edene kadar şiddetle solungaçları üzerinde su fışkırtmak için bir Pasteur pipet kullanın, sonra akvaryum balık dönmeden önce anestezi tam iyileşme için balık izlemek. Balık, en az beş saniye boyunca dik yüzebildiği zaman anesteziden tamamen iyileşmiş olarak kabul edilir. Analiz ayarlarını tanımlamak için EKG veri analiz programını açın ve EKG'nin tam ekg izini görüntülemek için ilgili EKG dosyasını açın.

Analiz etmek için EKG izindeki ilgi bölümünü sürüklemek için fareyi kullanın. EKG Analizi menüsünden, yazılım otomatik analizi için çeşitli parametre ayarlarını önceden tanımlamak için bir diyalog kutusu açmak için EKG Ayarları'nı seçin. Kalp ritmini ve hızını analiz edin ve kalp ritminin sinüs olup olmadığını, düzenli mi yoksa düzensiz mi olduğunu belirleyin.

Atriyal ve ventrikül hızı sırasıyla PP ve RR aralığına dayandığından, kalp hızını belirlemek için, yazılımın tüm P ve R dalgalarını doğru bir şekilde tanımladığından emin olun. Yanlış yerleştirilen imleçleri uygun P ve R dalgalarına taşıyarak otomatik tanımlama hatalarını düzeltin. Aralıkları ve dalga sürelerini hesaplamak için, açık EKG analizi ve tek bir ortalama sinyal içine birkaç ardışık kardiyak döngüleri concatenate görünümü ortalama.

Yazılımın P dalgasının, QRS kompleksinin ve T dalgasının başlangıcını ve sonunu doğru şekilde tanımladığından emin olun, ardından yanlış yerleştirilmiş imleçleri otomatik tanımlama hatalarını düzeltmek için uygun konumlara taşıyın. EKG ölçümlerini dışa aktarmak için, Tüm EKG ölçümlerini gözden geçirmek ve ilgi ölçümlerini sonraki analizler için elektronik tabloya kopyalayıp yapıştırmak için Tablo Görünümü'nü seçin. EKG izini dışa aktarmak için büyüteçkullanarak EKG süpürmesinde ilgi çeken bir bölümü vurgulayın ve süpürmeyi istenilen belgeye kopyalayıp yapıştırın.

İki atria ve iki ventriküle sahip olan insan kalbiyle sözleşmeli olarak, zebra balığı kalbinin sadece bir atriyumve bir ventrikül vardır. Belirgin anatomik basitliğine rağmen, zebrabalığı kalbi insan kalbi ile çeşitli EKG özellikleri paylaşır. Uygun kurşun yerleşimi, kurşunun kardiyak ana eksenle hizalanması nı gerektirir.

Elektrotlar dermise çok yüzeysel olarak yerleştirildiğinde, kurşun dolaylı olarak kabul edilir ve voltaj sinyalleri küçüktür. Elektrotlar uygun bir milimetre derinliğe pektoralis kas içine takıldığında, kurşun yarı-doğrudan hale gelir ve voltaj sinyalleri artar. Elektrotlar ventriküliçine bir milimetreden daha derine yerleştirilirse, kurşun doğrudan olur ve voltaj sinyalleri daha da artar, R dalga genliği elektrotların uygun derinlikte yerleştirildiğinde göre dört kat artar.

Çok derine yerleştirilen elektrotlardan gelen EKG izi, yeni bir ST depresyonu ve yeni Bir T dalgası inversiyon gibi ventriküler miyokardiyumda yeni yaralanma belirtileri ortaya çıkarır. Yerleşimlerinde pozitif ve negatif elektrotlar değiştirilirse, Tüm EKG dalga formlarının olağandışı inversiyonları gözlenir. Uygun olmayan bir sedasyon derinliği seviyesi in vivo EKG kaydının kalitesini de bozabilir.

Balığı öldürmeden hareketsiz hale getirebilecek kadar derinden anestezi yapmayı unutmayın. Sinyal-gürültü oranını en üst düzeye çıkarmak ve otomatik yazılım analizine aşırı güvenmekten kaçınmak için elektrotları yerleştirin. Bu minimal invaziv sağkalım prosedürünü takiben, ilaç yanıtlarında veya uzunlamasına çalışmalarda kısmi ablasyon, kalbin rezeksiyonu veya seri EKG araştırmaları gibi diğer işlemlerin yapılması mümkündür.

Sistemik toksisite herhangi bir anestezipotansiyel komplikasyonlar, triain dahil. Bu toksisite ler, birden fazla anestezinin sinerjisi üzerine yararlanılarak tek tek ajanların dozunun düşürülmesi için azaltılabilir.