Tek Taraflı Bronşiyal Asit İnstillasyonu ile Kendi Kendine Sınırlı Akut Akciğer Hasarı Modeli

Selektif intra-bronşiyal yöntem, araştırmacılara insanlarda akut solunum sıkıntısı sendromunun önemli bir nedeni olan akut akciğer hasarının incelenmesi için tekrarlanabilir ve öldürücü olmayan bir model sunduğu için önemlidir. Selektif bronşiyal tekniğin avantajı, sağ akciğeri yaralanmamış bir kontrol olarak sunan sol akciğere verilen inflamatuar yanıtın lokalizasyonu ve hayvan sıkıntısını en aza indirmesidir. Bu prosedürü gösteren Alexander Tavares, bir teknisyen ve bizim laboratuvarda ön lisans öğrencisi olacaktır.

0.1 normal hidroklorik asit hazırlamak için, bir kehribar cam şişe ye 11 mililitre çift distile su ekleyin ve ardından %37 12 normal asit mililitresinin yavaş ilavesini ekleyin. Sonra, yavaş yavaş 50 mililitrelik konik tüp içinde 35 mililitre çift distile su içine normal bir asit çalışma stok dört mililitre ekleyin. Daha sonra, 40 mililitrelik son bir hacim için gerektiğinde sodyum hidroksit veya asit stok çözeltisi kullanarak 1,1 pH'a kadar titre eden 0,1 normal stok çözeltisinin pH'ını ölçmek için elektronik bir pH prob kullanın.

İşleme başlamadan önce, steril bir mikrosentrifuge tüpüiçine steril 0,22 mikrolitre filtre ile asit çözeltisinin bir ila iki mililitre filtre ve anestezili bir fare ağrı refleks yanıt eksikliği onaylamak. Yavaş aşağı vuruşlarda elektrikli makasları kullanarak yavaşça boğazın servikal bölgesinde çene altında farenin ventral yüzeyinde cerrahi alanı tıraş. Herhangi bir gevşek saç çıkarın ve üç ardışık% 10 povison-iyot çözeltisi ve% 70 isopropil alkol bezleri ile maruz kalan cilt bezi.

Deri hazırlandığında, fareyi temiz bir cerrahi tahtanın üzerine supine pozisyonuna yerleştirin ve hayvanı steril bir cerrahi perdeyle örtün. Trakea ve tükürük bezleriüzerinde deride boylamsal 0,5 santimetre lik bir açıklık yapın ve deriyi dikkatlice geri çekmek için hafif kavisli tırtıklı tırtıklı keçeler kullanın. Trakeal kasları ortaya çıkarmak için tükürük bezlerini yavaşça ayırın ve paratrakeal kasları hafifçe ayırmak için hafif kavisli tırtıklı terpler kullanın.

Trakeanın kıkırdak halkaları tamamen açığa çıkana kadar trakeayı çevreleyen fasyayı uzaklaştırın ve retrotrakea ile retrofasya arasındaki bağ dokusunu uzaklaştırmak için tamamen kavisli tırtıklı kirişli çalgılar kullanın. Trakeanın arkasında tam kavisli tırtıklı forseps kaydırın ve nefes borusunu kaldırın. Bir kez çerkea ucu, 4-0 örgülü ipek dikiş bir 10-15 santimetre lik bir parça kavramak ve her iki tarafta eşit bir uzunluk var, böylece trakea arkasında dikiş çekin.

Cerrahi tahta, bir sonraki adımlar için cerrahi alanı baskın ele yaklaştırmak için döndürülebilir. Daha sonra sütürün uçlarını farenin ön yerine doğru yavaşça çekin ve uçları yerinde tutun. Sol mainstem bronş kanülasyonu için, 3/4-inç anjiyokateter tarafından 24-gauge iğne maruz ve birinci ve ikinci trakeal halkalar arasında trakea iç bölgeye kadar iğne eğimli tarafı yerleştirin.

İğne ucu trakeal lümen içinde görselleştirilebildiği zaman, sütü serbest bırakın ve farenin sol arka tarafına doğru nefes borusuna iğne üzerinde kanül ilerletin. Dirençlerle karşılaşıldığında iğneyi geri çekin. Kanül yerleştirildikten sonra, kateterin kaymasını önlemek için enjeksiyon bağlantı noktasını sıkıca tutarak bağlantı noktası içinde bir P-200 mikro pipet ucunu sabitleyin.

Daha sonra katetere 50 mikrolitre süzülen normal asit çözeltisi aşılayın ve ardından eşit miktarda hava aşılayın. Bu adım kanül hassas manipülasyon gerektirir, hava yolu tıkanmış iken, ve hızlı ve sorunsuz uygun hava akışını geri yüklemek ve hava yolu hasarı en aza indirmek için tamamlanmalıdır. Kateteri hızla çekin ve cerrahi tahtayı 60 derecelik bir açıyla yatırın.

30 saniye sonra, cerrahi tahta düz yatıyordu ve trakea arkasından dikiş çıkarın. Sonra 2-3 dikiş ile cilt kesi kapatmak için 4-0 balmumu kaplı örgülü ipek dikiş kullanın. Bronşiyal asit instillasyonundan kaynaklanan akut akciğer hasarı tüm sol akciğeri kapsamaktadır.

Gerçekten de, Evans mavi boya ve akciğer perfüzyoninin intravenöz uygulamasından sonra, boya sadece sol akciğer içinde saptanır. Sol akciğeriçine boya ekstravazasyonu nun nicelleştirilmesi, sahte selektif aşılamaya göre önemli ölçüde artmıştır. İnterstif nötrofiller az sayıda interstisyel nötrofilin görüldüğü sağ akciğerin aksine asit instillasyonundan 24 saat sonra sol akciğerde birikir.

Akciğer histolojisi, sol akciğerde belirgin alveoler ödem ve nötrofil infiltrasyonu ile karakterize olarak yaralanmadan 24 saat sonra eksüdaif inflamasyon ile organ ve hücresel düzeyde doku hasarı ve iltihabı ortaya çıkarır. Yaralanmamış kontrol sağ akciğer içine önemli yaralanma veya lökosit akını eksikliği unutmayın. Yaralanmadan 72 saat sonra ödem ve hücresel infiltrasyonlar önemli ölçüde azalır ve bu da eksüdaevre bir evreyi temsil eder.

Akış sitometrisi tarafından değerlendirildiği gibi, alveoler nötrofiller ilk yaralanmadan 24 saat sonra sol akciğerde artar ve 48 ve 72 saat önemli ölçüde azalır. İlerlemeden önce kateteri trakeada görselleştirmek önemlidir. Ekleme sırasında sol mainstem bronşlarına doğru kanüle açı ve 50 mikrolitre hava ile asit indasını takip edin.

Bronkoalveoler lavaj sıvı analizi, akciğer histolojisi, akış sitometrisi ile immün hücre fenotipmesi, canlı fare görüntüleme ve pulmoner fonksiyon testleri inflamasyon ve çözünürlüğü değerlendirmek için yapılabilir. Akut akciğer hasarı bu kendini sınırlı modelinin geliştirilmesi araştırmacılar çözünürlük biyoloji alanında önemli katkılarda bulunmak için izin verdi. Konsantre hidroklorik asit tehlikeli olduğunu ve uygun kişisel koruyucu ekipman giyen bir kimyasal başlık ele alınması gerektiğini unutmayın.