Name: Aplysia californica Odontofor Kaslar Için Minimal İnvaziv Lezyon Tekniği (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 38 s
Description: Keşfedin Aplysia californica'da minimal invaziv cerrahi tekniğiyle odontofor kaslarına erişimi. Bu yöntem beslenme davranışı sırasında derin kasların işlevlerini in vivo araştırmaya olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Sherry Niggel, Sisi Lu ve Joey Wu'nun bu protokolleri iyileştirmek ve doğrulamak için ne kadar çok çalıştıklarını kabul etmek istiyoruz. Bu çalışma NSF Grant IOS 1754869 tarafından desteklenmiştir.

Aplysia omurgasızlar ve bu nedenle IAUC onayına tabi değildir. Hayvanlara rahatsızlık en aza indirmek için, aşağıda açıklanan cerrahi teknikleri uygulamadan önce tamamen anestezi olduğundan emin olun.
1. Hayvan Seçimi ve Anestezi
<ol><li>Yosun sunarak ve ısırık aralıklarının 3 ile 5 s arasında olmadığını onaylayarak aktif bir hayvan seçin.</li>
	<li>
Hayvanı 0,333 molar magnezyum klorür ile anestezi edin (bkz. Tablo 1), başın yakınına 60 mL şırınga üzerine 18 G iğne enjekte ederek böylece en yüksek anestezi konsantrasyonu bukkal kütlenin etrafında olacaktır.
	<ol>
<li>İğne ile hem dış epitel hem de iç doku tabakasını delmeye özen. Enjeksiyonun kabaca gergedanın altında olduğundan, gergedan ve ayak arasında yarı yolda olduğundan emin olun ve iğne oblik olarak, çene yönüne işaret etmelidir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>10 dakika sonra, yavaşça solungaç ve gergedan içine bir iğne takmaya çalışır, bu geri çekilmez doğrulama, yeterli anestezi sağlamak için.</li>
	<li>Sümüklüböceğin dudaklarının ve çenesinin rahat olduğundan emin olun, böylece odontofor açığa çıkabilir. NOT: Şekil 2A'nın dudaklarındaki kırışıklık, cerrahi işlemin zarar vermeden yapIlebilmek için hayvanın dudaklarının ve çenesinin yeterince gevşemediğini gösterir. Şekil 2B'nin pürüzsüz ve rahat dudakları çenelerin tamamen rahatladığını gösterir.</li>
</ol><img alt="Bitki anatomisinin kesit diyagramı, iç yapı karşılaştırmasını gösteren; eğitici illüstrasyon." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60030/60030fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> Şekil 2: Anesteziapli Ağızlarda Gerginlik ve Gevşeme. (A) Aplysia dudaklar etrafında kas gerginliği yüksek derecede gösteren. Bu çene gerginliği ile ilişkilidir ve kontraten cerrahi ile devam gösterir. (B) Rahat dudaklar ile Aplysia, çene (açık gri) iç gösteren. Renkler yine hayvanda gözlenenlere karşılık gelir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60030/60030fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol start="5"><li>Bir hayvanın dudakları rahat değilse, magnezyum klorür ek bir 30 mL enjekte ve başka bir 5 dakika bekleyin. Bu dudak gevşemesi ile sonuçlanmaz, onları kurtarmak için izin vermek için iyi bir su akışı ile izole bir konteyner onları iade (adım 4 bakınız) ve farklı bir hayvan ile devam.</li>
</ol>2. Radular Yüzeyin Açığa Çıkarılması
<ol><li>Sümüklüböceği baş aşağı doğru sallanır, böylece bukkal kütlenin çenelere yerleşmesini bekleyin.</li>
	<li>Bukkal kütleyi yerinde tutarak bukkal kütleyi çenelere doğru itmek için başparmak ve işaret parmağıyla basınç uygulayın.</li>
	<li>Çeneleri görünür olacak şekilde döndürün. Aynı zamanda, bukkal kütlenin prow çeneler aracılığıyla görünür böylece bukkal kütle üzerindeki basıncı korumak. (Şekil 3).</li>
</ol><img alt="Bir hagfish çenesini tutan el; pruva ucu ve çeneleri gösteren etiketli diyagram; anatomik çalışma." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60030/60030fig3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> Şekil 3: Buccal Kütlesinin Çenelerin İçine Karşı Desteklenmesi. Parmaklar, çenenin iç kenarına doğru itilen bukkal kütleyi, prow'un ucu görülene kadar destekler. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60030/60030fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol start="4"><li>Odontoforun yarık içine künt forseps uçlarını yavaşça çalıştırın ve radular yüzeyi çenelerden geçirmek için kullanın. Çeneler yeterince rahat değilse, bu işleme yardımcı olmak için yarık kenarını nazikçe kavramak için forceps kullanın. DİkKAT: Bu basınç hayvana daha fazla zarar verebilir.</li>
	<li>Yüzey açığa çıktıktan sonra, çeneleri radular yüzeyin ön kısmından temiz leyin. Bu da odontoforun geri çekilme olasılığını azaltıyor (Şekil4). Odontofor duvarlarının en fazla yarısından fazlasının maruz kaldığından emin olun.</li>
</ol><img alt="Radular yüzey muayenesinin elle gösterilmesi; Araştırma çalışması için biyolojik anatomi diyagramı." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60030/60030fig4.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> Şekil 4: Odontoforun Kısmi Eversiyon. Radular yüzey tamamen maruz kalmaktadır, ancak odontoforun kenarları ortaya çıkarılmaz, bu da sadece kısmi bir eversiyon durmaktadır. Daha fazla eversion büyük olasılıkla hayvan hasara neden olacaktır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60030/60030fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
NOT: Odontoforun tam bir eversion hangi hayvanların kurtarmak için çok yavaş olan büyük kas hasarına neden olacaktır.
3. Cerrahi Kesiler
<ol><li>
Radular yüzey tamamen maruz kaldığında, ameliyat için bir diseksiyon kapsamı altında sümüklüböcek düzenlemek.
	<ol>
<li>Alternatif olarak, özellikle öğrenirken, cerrahi için çene ve radular yüzey stabilize etmek için geniş bir lastik bant ve üçüncü bir el kullanın. Bu, ancak, prosedüre zaman ve artan doku hasarı ekler, hangi uzun vadede daha az ideal hale getirir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Rakun yüzeyini yarık tarafın araştırmacıya dönük olması için yerleştirin.</li>
	<li>Yavaşça radular yüzeyi kavramak, radular baz yakın, böylece yatay bir kıvrım anatomik kırışık dik oluşur. Anatomik kırışıklık boyunca bir kesi yaparak, bu kat ile kesmek için ince makas kullanın (Şekil 5).</li>
</ol><img alt="Kas bağlanma diyagramı, anatomik bölümde işaretlenmiş iç I7 kas noktaları, eğitim amaçlı kullanım." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60030/60030fig5.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> Şekil 5: Radular Yüzeyine Kesinin yeri. (A) Radular yüzey, bir kesi ile. (B) Radular yüzey, bilateral I7 kas iplikçiklerinin nereye bağlı olduğunu gösteren daireler; noktalı çizgiler radular yüzeyin altında azalan kasların yerini gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60030/60030fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol start="4"><li>Bukkal kütlenin iç erişim sağlamak için 3-5 cm bu ilk kesi uzatın.</li>
	<li>Işığı, doğrudan bu kesiden geçecek şekilde ayarlayın.</li>
	<li>Kesinin kenarlarını ayırın, böylece odontoforun lümeninin arkası ve I7 kasının ince dikey iplikçikleri görülebilir. (Şekil 6)</li>
</ol><img alt="Eğitim araştırmalarında kullanım için uygun yapı ve katmanları gösteren kas anatomisi diyagramı." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60030/60030fig6.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> Şekil 6: Radular Yüzey Kesisi ile I7'nin konumu. Kesiye bakıldığında, I7'nin her iki iplikçikleri I4'ün iç yüzeyleri arasında görülebilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60030/60030fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol start="7"><li>Kesiden ulaşın, I7'nin her iki ipini de kavrayın ve kasın pratik olduğu kadar kesilebildiği kesiğe doğru çekin (Şekil 7).</li>
</ol><img alt="Bir tohum kabuğunun, katmanlarını ve yapısını ayrıntılı olarak gösteren kesit diyagramı." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60030/60030fig7.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> Şekil 7: I7 Kas İpliğini Kesiden Çekme. I7 kas son derece elastik ve kaldırılması için kesi yoluyla yukarı çekilebilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60030/60030fig7large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
NOT: Uygulama ile, genellikle daha fazla görme daha hissediyorum i7 bulmak için etkilidir.
4. Ameliyat Sonrası Bakım
<ol><li>Lezyonlar yapıldıktan sonra, ön dokunaçları kavrayın ve sümüklüböceği orijinal konfigürasyonuna döndürmek için radular yüzeye bastırın.</li>
	<li>Ameliyat sonrası hayvanları iyi su akışı olan korunan bir ortama yerleştirin. Artan oksijenlenme iyileşmeyi hızlandırıyor. Hayvanların ameliyattan sonraki gün tetikte ve duyarlı olduğundan emin olun. Bu durumda değilse, onlar kurtarmak değil varsayılabilir. NOT: Hayvanlar genellikle ameliyattan sonraki birinci veya ikinci gün beslenmeye başlarlar. Isıtmakta zorlanan hayvanlara bile yosun ikram edilmelidir, çünkü bir hayvanın iyileşmesinin yeme girişimleri yle iyileştiği anekdotgözlemimizdir.</li>
</ol>5. Sub-radular Fiber Lezyon için
<ol><li>1.1'den 3.5'e kadar olan adımları izleyin</li>
	<li>Küçük bir düz neşter bıçağının ucunu (#11 veya benzeri) keskin kenarı yukarı doğru açılı kesiden geçirin. Hafifçe radular yüzeyinin alt tarafından ince kas lifleri kazımak. (Şekil 8).</li>
</ol><img alt="Tıp eğitimi için neşter kesi dokusu ile cerrahi prosedür şeması." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60030/60030fig8.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 8"> Şekil 8: Subradular Liflerle lezyon. Neşter bıçağının kenarı, radular yüzeyin alt tarafına kesiden yukarı doğru doğru açılır, böylece alt radular lifleri hafifçe kazıyabilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60030/60030fig8large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol start="3"><li>Adım 4.1'e dön.</li>
</ol>

<ol><li>Pinsker, H., Kupfermann, I., Castellucci, V., Kandel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Habituation+and+Dishabituation+of+the+GM-Withdrawal+Reflex+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Habituation and Dishabituation of the GM-Withdrawal Reflex in Aplysia.</a> Science. 167, 1740-1742 (1970).</li>
<li>Kupfermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+Behavior+in+Aplysia%3A+A+Simple+System+for+the+Study+of+Motivation%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Biology%22%5BJournal%5D)">Feeding Behavior in Aplysia: A Simple System for the Study of Motivation.</a> Behavioral Biology. 10, 1-26 (1974).</li>
<li>Susswein, A. J., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+as+a+regulator+of+behavior%3A+New+ideas+from+Aplysia+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide as a regulator of behavior: New ideas from Aplysia feeding.</a> Progress in Neurobiology. 97, 304-317 (2012).</li>
<li>Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aplysia+feeding+biomechanics%5BTitle%5D)+AND+%22Scholarpedia%22%5BJournal%5D)">Aplysia feeding biomechanics.</a> Scholarpedia. 2, 4165(2007).</li>
<li>Neustadter, D. M., Drushel, R. F., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinematics+of+the+buccal+mass+during+swallowing+based+on+magnetic+resonance+imaging+in+intact%2C+behaving+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Kinematics of the buccal mass during swallowing based on magnetic resonance imaging in intact, behaving Aplysia californica.</a> Journal of Experimental Biology. 205, 939-958 (2002).</li>
<li>Neustadter, D. M., Herman, R. L., Drushel, R. F., Chestek, D. W., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinematics+of+multifunctionality%3A+comparisons+of+biting+and+swallowing+in+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The kinematics of multifunctionality: comparisons of biting and swallowing in Aplysia californica.</a> Journal of Experimental Biology. 210, 238-260 (2007).</li>
<li>Brezina, V., Evans, C. G., Weiss, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+membrane+ion+currents+of+a+model+molluscan+muscle%2C+the+accessory+radula+closer+muscle+of+Aplysia+california.+I.+Hyperpolarization-activated+currents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Characterization of the membrane ion currents of a model molluscan muscle, the accessory radula closer muscle of Aplysia california. I. Hyperpolarization-activated currents.</a> Journal of Neurophysiology. 71, 2093-2112 (1994).</li>
<li>Evans, C. G., Rosen, S., Kupfermann, I., Weiss, K. R., Cropper, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+Radula+Opener+Neuromuscular+System+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Characterization of a Radula Opener Neuromuscular System in Aplysia.</a> Journal of Neurophysiology. 76 (2), 1267-1281 (1996).</li>
<li>Cullins, M. J., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrode+Fabrication+and+Implantation+in+Aplysia+californica+for+Multi-channel+Neural+and+Muscular+Recordings+in+Intact%2C+Freely+Behaving+Animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiment%22%5BJournal%5D)">Electrode Fabrication and Implantation in Aplysia californica for Multi-channel Neural and Muscular Recordings in Intact, Freely Behaving Animals.</a> Journal of Visualized Experiment. (40), 1791(2010).</li>
<li>Dudek, F. E., Cobbs, J. S., Pinsker, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bag+cell+electrical+activity+underlying+spontaneous+egg+laying+in+freely+behaving+Aplysia+brasiliana%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Bag cell electrical activity underlying spontaneous egg laying in freely behaving Aplysia brasiliana.</a> Journal of Neurophysiology. 42, 804-817 (1979).</li>
<li>Hermann, P., Maat, A., Jansen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Neural+Control+of+Egg-Laying+Behaviour+in+the+Pond+Snail+Lymnaea+Stagnalis%3A+Motor+Control+of+Shell+Turning%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The Neural Control of Egg-Laying Behaviour in the Pond Snail Lymnaea Stagnalis: Motor Control of Shell Turning.</a> Journal of Experimental Biology. 197, 79-99 (1994).</li>
<li>Jansen, R. F., Pieneman, A. W., Ater Maat, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pattern+Generation+in+the+Buccal+System+of+Freely+Behaving+Lymnaea+stagnalis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Pattern Generation in the Buccal System of Freely Behaving Lymnaea stagnalis.</a> Journal of Neurophysiology. 82, 3378-3391 (1999).</li>
<li>Kupfermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissociation+of+the+appetitive+and+consummatory+phases+of+feeding+behavior+in+Aplysia%3A+a+lesion+study%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Biology%22%5BJournal%5D)">Dissociation of the appetitive and consummatory phases of feeding behavior in Aplysia: a lesion study.</a> Behavioral Biology. 10, 89-97 (1974).</li>
<li>Scott, M. L., Kirk, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+of+consummatory+feeding+behavior+after+bilateral+lesions+of+the+cerebral-buccal+connectives+in+Aplysia+california%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Recovery of consummatory feeding behavior after bilateral lesions of the cerebral-buccal connectives in Aplysia california.</a> Brain Research. 585, 272-274 (1992).</li>
<li>de Boer, P. A., Jansen, R. F., ter Maat, A., van Straalen, N. M., Koene, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+distinction+between+retractor+and+protractor+muscles+of+the+freshwater+snail%E2%80%99s+male+organ+has+no+physiological+basis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The distinction between retractor and protractor muscles of the freshwater snail’s male organ has no physiological basis.</a> Journal of Experimental Biology. 213, 40-44 (2010).</li>
<li>Chiel, H. J., Weiss, K. R., Kupfermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+identified+histaminergic+neuron+modulates+feeding+motor+circuitry+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">An identified histaminergic neuron modulates feeding motor circuitry in Aplysia.</a> Journal of Neuroscience. 6, 2427-2450 (1986).</li>
<li>Hurwitz, I., Neustadter, D., Morton, D. W., Chiel, H. J., Susswein, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+patterns+of+the+B31%2FB32+pattern+initiators+innervating+the+I2+muscle+of+the+buccal+mass+during+normal+feeding+movements+in+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Activity patterns of the B31/B32 pattern initiators innervating the I2 muscle of the buccal mass during normal feeding movements in Aplysia californica.</a> Journal of Neurophysiology. 75, 1309-1326 (1996).</li>
<li>Kier, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+diversity+of+hydrostatic+skeletons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The diversity of hydrostatic skeletons.</a> Journal of Experimental Biology. 215, 1247-1257 (2012).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Protokol deki en kritik adımlar, hayvanın tamamen anestezi altında olduğundan ve bukkal kütlenin eversiyon unun altta yatan kaslara erişmek için yeterli olduğundan emin olmak için gereken ihtiyaçtır. Bu adımları mükemmelleştirmek için bazı pratik gerektirebilir, ancak bir kez onlar hakim, ameliyatları verim yapılan tüm deneylerin% 85'ten daha fazla olması muhtemeldir. Protokolü düzgün bir şekilde değiştirmenin ve sorun gidermenin en önemli yolu, iç kasların konumlarının araştırmacıya tamamen açık olması için bukkal kütlenin diseksiyonu yaparak zaman geçirmektir. Radular yüzeyden önerilen kesi kaçınılmaz olarak altta yatan alt radular liflerde bazı hasarlara neden olduğundan, bu liflerin belirli bölgelerinden kaçınmak için kesi kesin yerini değiştirmek için uygun olabilir.
Cerrahi tekniğin bir sınırlaması, protraksiyon gücü gibi beslenme yanıtları üzerinde spesifik olmayan etkileri olabilir. Bu sınırlamayı aşmanın bir yolu hayvanların kendi kontrolleri olarak hizmet etmesidir. Buna ek olarak, belirli kas (yani, I7 veya SRFs) kaldırılması dışında tüm cerrahi protokoltabi bir sahte lezyon grubu olması önemlidir. Bu önerileri izleyerek, bir araştırmacı hayvanlar arasındaki değişkenlik etkilerini azaltacak ve cerrahi non-spesifik etkileri içsel bir ölçüye sahip olacaktır.
Önceki çalışma da lezyon veya kayıt sinirler13,14veya kaslar15,16,17vücut duvarı ile yaklaşımlar kullandı. Laboratuvarımızda, anekdotsal olarak vücut duvarı kesilerinin genellikle önemli bir hemolenf kaybı ve dolayısıyla vücut hacminin eşlik ettiğini gözlemledik. Hayvanlar genellikle bu kurtarmak için birkaç gün gerektirir, ve vücut duvar lezyonu dikkatle dikilmiş değilse, hayvanlar kurtarmak olmayabilir. Buna ek olarak, hayvanların post-mortem muayene kesi etrafında önemli yara izi ve güçlü bir bağışıklık yanıtı ortaya koymaktadır (anekdot gözlemler). Buna karşılık, hayvanlar burada açıklanan protokolden sonra (96 hayvandaki gözlemlere dayanarak) hemolenf kaybı veya vücut hacminde bir değişiklik göstermezler.
Tekniğin gelecekteki uygulamaları Aplysia besleme cihazları içinde diğer kaslar için genişletebilir, ve diğer hayvanlariçin. Biz I7 kas ve sub-radular liflerin kaldırılması üzerinde duruldu. Bu aynı genel cerrahi teknikler de odontophore diğer kasların çoğuna erişim sağlar. Bunlardan bazıları, I5 kas iç kısmı gibi, en iyi radular yüzeyden erişilir. Diğerleri, I4 iç broşürler gibi, daha iyi odontophore dış epitel yoluyla ulaşılabilir olabilir. Biz kısmen everted odontofor radular yarık altında bir kesi daha sonra odontophore içinde başka bir kas lezyon için kullanılabilir eklenecek bir keskinleştirilmiş kanca için erişim izin ön çalışmalar yaptık, kas I88. Burada açıklanan cerrahi protokol ana vücut boşluğunu açmadığından dikiş gerektirmez.
Tanımladığımız protokol, diğer yumuşakçaların beslenme cihazları gibi manipüle edilmesi zor olan yumuşak doku yapıları üzerinde çalışan diğer araştırmacıların genel ilgisini çekebilir. Daha genel olarak, bu protokol diller, gövdeler veya dokunaçlar18gibi yumuşak yapıların analizi için diğer yeni cerrahi yaklaşımlar önerebilir.

Aplysia californica beslenme sistemi öğrenme ve bellek anlamak için bir model sistemi olarak kullanım uzun bir geçmişi vardır1, motive davranışları2,3, ve davranış arasındaki etkileşim, biyomekanik ve besleme sırasında nöral kontrol4. Bu büyük, tanımlanabilir nöronlar nispeten az sayıda, son derece erişilebilir nöral devre vardır. Hayvanın yarı açık bir dolaşım sistemi vardır, bu da önemli hasara yol açmadan iç yapılarına erişebilmeyi mümkün kılar. Aynı zamanda in vivo ve in vitro birçok manipülasyonlar için sağlam, davranış ve nöral devre analizi için son derece çekilebilir bir model yapma.
Beslenme davranışlarına yol açan nöral desenleri anlamak için, beslenme organını oluşturan yumuşak yapının altında yatan mekaniği tanımlamak önemlidir, bukkal kütle4. Bukkal kitle oluşturan dış kasları karakterize etmek için yapılan çalışmalar yapılmış olsa da5,6, kavrayıcı yüzeyini kontrol bukkal kitle içinde altta yatan yapının iç kasları, odontofor, olmuştur in vivo deney için büyük ölçüde erişilemez. Bu kasların bazı fonksiyonları üzerinde in vitro çalışmalar yapılmış olmasına rağmen7,8, Bu kaslara doğrudan erişim eksikliği zor bozulmamış rollerini incelemek için yaptı, hayvanlar gibi davranan.
Elektrot implantasyonu veya Aplyscan veya benzeri yumuşakça türlerinde lezyonlar içinen teknikleri vücut duvarı 9,10,11,12açılmasını gerektirir. Vücut duvarının açılması epitel yaralanmasına neden olur ve kesi hemolenf inmesini önlemek için güvenli bir şekilde kapatılmalıdır. Aplysia'nın iç kaslarına ulaşmaya çalışırken (radular yüzeyin altında yatan kaslar veya odontofor içinde): ana vücut boşluğundan girerek, daha da ciddi zorluklar ortaya çıkar. iç yapılara erişmek için bukkal kütlenin kas duvarının bir kısmı (Şekil1A). Bu birikmiş yaralanma ve erişim zorluğu geleneksel yollarla yaklaşımı sorunlu hale getirmiştir, çünkü hayvanlar bu ameliyatlardan iyi kurtulamaz (tam eversiyonları olan hayvanların sadece 'si herhangi bir beslenme yeteneğini yeniden kazanmıştır, N = 12. Everted olmayan hayvanların yaklaşık% 85 beslenme yeteneğini yeniden kazandı, N = 84).
Bir radular açıcıolarakkarakterize edilmiştir I7 kas 8, odontofor kendisi içinde derin, daha fazla erişim karmaşık. Radular sapın tabanı (Şekil 1C)ile radular yüzeyin alt kısmı arasında, odontofordaki bir lümen aracılığıyla uzanır ( Şekil1C). I7 kasların üç tarafında kas duvarları, dördüncü duvar radular sap oluşur. Biyomekanik bir çalışmanın amaçları için, bu yapıların herhangi birinde büyük bozulma besleme cihazının normal işlevini tehlikeye olacaktır. Odontofor'u çenelerden dışarı çıkararak ve ameliyatı ince, kıkırdak radular yüzeye bir kesi ile yapmak gibi yeni bir yaklaşım geliştirdik. alt radular lifler olarak adlandırdığımız radular yüzeyin hemen altında nitre (Şekil 1C).
<img alt="Yumuşakça bukkal kütle anatomisi diyagramı; radular yüzey ve odontofor detayları dahildir." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60030/60030fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Şekil 1: Anatomik Genel Bakış. (A) Bukkal kütlenin Aplysia içindeki yeri. (B) Odontoforun dış anatomisi. Radula ve radular kese yüzeyi sarıdır; odontofor oluşturan kaslar gerçek renklerine göre kırmızı renkte gösterilir. (C) Odontoforun sagital bölümü, sub-radular liflerin yerini gösteren (kavisli pembe çizgi) ve I7 kas (düz pembe çizgi). I6 kasının kesiti koyu kırmızı renkte gösterilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60030/60030fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<table><tbody><tr><td>Künt forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11210-10</td><td>2 çift</td></tr><tr><td>Neşter bıçağı (#11)</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Web kamerası</td><td>Veri kaydetmek için</td> <td>Logitech</td><td>c920</td></tr></tbody></table>

aplysia californica odontofor kaslar için minimal İnvaziv lezyon tekniği

A Minimally Invasive Lesion Technique for Muscles Intrinsic to the Odontophore of Aplysia californica

Aplysia californica öğrenme ve davranış nöral kontrolü incelemek için bir model sistemidir. Bu hayvanın yarı açık bir dolaşım sistemi vardır, bu da önemli bir hasara yol açmadan iç yapılarına erişebilmeyi mümkün kılar. Birçok manipülasyon lar hem in vivo hem de in vitro olarak kolayca yapılabilir, bu da davranış ve nöral devreanalizi için son derece kolay bir model haline getirilebilir. Besleme tutucuiçindeki kasların işlevlerini daha iyi anlamak için, hayvanın ana vücut boşluğunu açmadan veya beslenme organının dış katmanlarına (yani bukkal kütleye) zarar vermeden onları lezyonlamak için bir teknik geliştirdik. Bu teknikte, kavrayıcı kısmen everted, kas doğrudan erişim sağlayan. Bu prosedür hayvanların hızlı ve güvenilir bir şekilde iyileşmesini sağlar. Bu mümkün I7 kasları ve sub-radular liflerle lezyon için, bize her iki kas önemli ölçüde in vivo açılış katkıda göstermek için izin yaptı.

Önceki çalışma, I7 kas kavrayıcı8açılmasına katkıda bulunduğunu ileri sürmüştü. Kendi anatomik çalışmalarımız, alt radüler liflerin de kavrayıcı nın açılmasına katkıda bulunabileceğini ileri sürmüştür. Bu hipotezleri test etmek için, hayvanlar hem önce ve bir cerrahi işlem aldıktan sonra ısırıklar oluşturmak için indüklendi. Şam hayvanları radular yüzeydeki kesi de dahil olmak üzere tüm cerrahi adımlara maruz kaldı, ancak iç kaslar çıkarılmadı. I7 lezyonuna maruz kalan hayvanların her iki I7 kası da alındı. Sub-radular lif lezyonuna maruz kalan hayvanlar, kesinin hemen altından çıkarılan sub-radular liflerin ~%'ine sahipti. Şam lezyonları ısırma nın doruğunda açılış Genişliği üzerinde anlamlı bir etkiye sahip değildi, oysa hem I7 hemde sub-radular lifler lezyonları ısırık genişliğini önemli ölçüde azalttı (Şekil 9).
<img alt="Sham, I7, SRF lezyonlarında delta ortalama normalize açıklık genişliğini gösteren çubuk grafik; İstatistiksel analiz." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60030/60030fig9.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 9"> Şekil 9: Pik ısırma Sırasında Açıklık Genişliğindeki Lezyonların Sonuçları. Gösterilen veriler, her bir hayvanın kendi kontrolü olarak hizmet verdiği 3 grubun her birinde (sahte, I7 lezyon veya SRF lezyonu) 5 hayvan için cerrahi işlem öncesi ve sonrası radulanın ortalama normalleştirilmiş açılış genişliği arasındaki farklardır. Ortalamalar daha önce 5 ısırık, cerrahi işlemden sonra ise ortalama normale doğru olan farkı belirlemek için 5 ısırık alınmıştır. Açılış genişliği radula merkezinden en yüksek protrasyonda radular kenarına olan uzaklıktı ve radular tabanın iç yüzeyinden radular yüzeyin yarık kenarlarına kadar olan uzaklık normalleştirildi. Farklar, standart sapma artı veya eksi araç olarak gösterilir. Fark verilerinin normal olarak dağıtıldığı belirlendikten sonra, lezyonun hiçbir etkisi nin olmaması olasılığı belirlendi (yani, null hipotezi cerrahi prosedürlerin etkilerinin ortalama sıfır olacağı test edildi) eşleştirilmiş bir her bağımsız gruba t-testi yapın. Veriler sahte lezyonun önemli bir etkisi olmadığını, I7 kaslarının bir lezyonunun veya sub-radular liflerin lezyonunun radüler açıklık üzerinde önemli bir etkiye sahip olduğunu göstermektedir (p &lt; I7 lezyon grubu için 0.031, tek bir yıldız işareti ile gösterilir , veya p &lt; 0.002 SRF lezyon grubu için, bir çift yıldız ile gösterilir). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60030/60030fig9large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Vücut Ağırlığı</td>
			<td>Magnezyum Klorür Dozu</td>
		</tr>
<tr>
<td>&lt;200 g</td>
			<td>1/2 vücut ağırlığı</td>
		</tr>
<tr>
<td>200-350 g</td>
			<td>1/3 vücut ağırlığı</td>
		</tr>
<tr>
<td>350-450 g</td>
			<td>1/4 vücut ağırlığı</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Vücut ağırlığı ile Magnezyum Klorür dozajı.

Burada, bu kasların beslenme davranışı sırasındaki rollerini anlamak için deniz yumuşakçaaplikası kalinonik kalinonik besleyici cihaza kasların minimal invaziv cerrahi lezyoniçin bir protokol sıyoruz.

Aplysia californica Odontofor Kaslar Için Minimal İnvaziv Lezyon Tekniği

Aplysia californica is a model system for studying the neural control of learning and behavior. This animal has a semi-open circulatory system, making it ...

Aplysia besleme sistemi uzun motor kontrol ve yumuşak vücut biyomekaniği çalışmaları için bir model sistemi olarak kullanılmıştır. Ancak, besleme tutucu derin kaslar in vivo manipülasyon için erişilemez olmuştur. Bu ameliyat, bozulmamış hayvanlarda bu kaslara erişmemizi sağlıyor.Bu sadece ilk kez vivo erişim sağlar, ama teknik bir sümüklüböcek tek bir parçası için tek bir kesi içerir, diğer bölgelere zarar nispeten küçük olduğu anlamına gelir. En iyi hazırlık bukkal kitle dikkatli diseksiyonu yapmak ve iyice anatomi ile kendini tanımaktır. Yosun sunarak ve ısırık aralıklarının beş saniyeden fazla olmadığını onaylayarak aktif bir hayvan seçin.Anesteziden 10 dakika sonra, yavaşça solungaç ve rinofor içine bir iğne takmaya çalışarak, bunların yeterli anestezi sağlamak için geri çekilmediğini doğrulayın. Sümüklüböceğin dudaklarının pürüzsüz olduğundan emin olun, bu da çenelerin tamamen rahatladığını gösterir. Bu şekilde, odontofor maruz kalır.Dudaklarda kırışıklıkların belirdiği durumlarda, cerrahi işlem için hayvanın dudakları ve çenesi yeterince rahat değildir. Dudak gevşemesi indükleyen ipuçları için el yazmasıbakın. Sümüklüböceği baş aşağı doğru sallanır, böylece bukkal kütlenin çenelere yerleşmesini bekleyin.Bukkal kütleyi yerinde tutarak bukkal kütleyi çenelere doğru itmek için başparmak ve işaret parmağıyla basınç uygulayın. Çeneyi görünür olacak şekilde döndürün. Aynı zamanda, bukkal kütlenin prow çeneler aracılığıyla görünür böylece bukkal kütle üzerindeki basıncı korumak.Odontoforun yarık içine künt forseps uçlarını yavaşça çalıştırın ve radular yüzeyi çenelerden geçirmek için kullanın. Çeneler yeterince rahat değilse, bu işleme yardımcı olmak için yarık kenarını nazikçe kavramak için forceps kullanın. Yüzey açığa çıktıktan sonra, çeneleri radular yüzeyin ön kısmından temiz leyin.Bu da odontoforun geri çekilme olasılığını azaltıyor. Odontofor duvarlarının en fazla yarısından fazlasının maruz kaldığından emin olun. Radular yüzey tamamen maruz kaldığında, ameliyat için bir diseksiyon mikroskobu altında sümüklüböcek düzenleyin.Daha az deneyime sahip bilim adamları için, ameliyat için çene ve radular yüzeystabilize etmek için geniş bir lastik bant ve üçüncü bir el kullanın. Rakun yüzeyini yarık tarafın araştırmacıya dönük olması için yerleştirin. Yavaşça radular taban yakınındaki radular yüzeyi kavramak böylece yatay bir kıvrım anatomik kırışık dik oluşturulur.Anatomik kırışıklık boyunca bir kesi yaparak, bu kat kesmek için ince makas kullanın. Bukkal kütlenin iç erişim sağlamak için üç ila beş santimetre bu ilk kesi uzatın. Işığı, doğrudan bu kesiden geçecek şekilde ayarlayın.Kesinin kenarlarını ayırın, böylece odontoforun lümeninin arkası ve I7 kasının ince dikey iplikçikleri görülebilir. Kesite uzan. I7'nin her iki ipliğini de kavrayın ve kasların çoğunun pratik olduğu kadar kesilebildiği kesiden yukarı çekin.Lezyonlar yapıldıktan sonra ön dokunaçları kavrayın ve sümüklüböceği orijinal konfigürasyonuna döndürmek için radular yüzeye bastırın. Ameliyat sonrası hayvanları iyi su akışı olan korunan bir ortama yerleştirin. Hayvanların ameliyattan sonraki gün tetikte ve duyarlı olduğundan emin olun.Ameliyattan sonraki ilk veya ikinci gün hayvanlar beslenmeye başlar. Cerrahi kesiden sonra sub-radular fiber lezyon gerçekleştirmek için, keskin kenar yukarı doğru açılı ile kesi ile küçük, düz neşter bıçak ucu yerleştirin. Hafifçe radular yüzeyinin alt tarafından ince kas lifleri kazımak.Daha sonra, daha önce olduğu gibi postoperatif bakım gerçekleştirin. Bu anatomik çalışmada, sham lezyonlar ısırma zirvesinde açılış genişliği üzerinde önemli bir etkisi yoktu. I7 ve sub-radular fibröz lezyonlar Ise ısırık genişliğini önemli ölçüde azalttı.Hatırlanması gereken en önemli şey, hayvanın dudakları nın ve çenelerinin kavrayıcıyı çeneden dışarı itmeye çalışmadan önce tamamen rahatlamış olmasıdır. Büyük olasılıkla, hem I7 hem de sub-radular lifler çok fonksiyonlu kaslar ve biz sadece onlar katkıda bulunduğu davranışın bazı yönlerini tespit ettik. Buna ek olarak, odontofor uzaması bu tekniği daha önce ulaşılmaz olan anatomi nin tüm bölümlerine erişim sağlar.Anatomik bölgeler ve yumuşak vücut biyomekaniği açılmasının yanı sıra, bunun başka türlü araştırılması zor olabilecek yumuşak yapılarla çalışan diğer araştırmacılar için bir temel görevi görebileceklerini umuyoruz.

a-minimally-invasive-lesion-technique-for-muscles-intrinsic-to

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Elektrot İmalat ve İmplantasyon Aplysia californica Bozulmamış, Serbestçe Behaving Hayvanlar Çok kanallı Sinir ve Kas Kayıtlar

Biz intrasellüler serbest kalsiyum konsantrasyonu ve sinaptik etkinliği değişiklikleri eşzamanlı bir ganglion hazırlanmasında nasıl takip edilebileceğini...

Mollusk içinde hücre içi kalsiyum konsantrasyonu ve Synaptic Etkinliği İzlenmesi Değişiklikler<em&gt; Aplysia&#39;nın</em

Biz ekstraselüler kayıt ve sinirler, kaslar ve bireysel tespit nöronlardan uyarmak için bir teknik...

An<em&gt; In Vitro</emFizyolojik Hareketleri Besleme Motor Programlar ortaya çıkartılması ve kayıt için&gt; Hazırlık<em&gt; Aplysia&#39;nın californica</em

Bu videoda, duyusal dendritik arborizasyon (da) nöronlarını ve bunlarla ilişkili epidermal hücreleri görselleştirmek için kullanılan larva filetolarının nasıl hazırlanacağı açıklanmaktadır. Öne çıkan protokol, hücrelerin morfolojisini korurken kas dokusunun vücut duvarından nasıl çıkarılacağını ayrıntılı olarak gösterir, bu da aksi takdirde gizlenmiş da nöronlarının ve epidermal hücrelerin immün boyamayı ve görselleştirilmesini geliştirir.

Larva Fileto Hazırlama: Sağlam Duyusal Nöronları ve İlişkili Epidermal Hücreleri Görselleştirmek İçin Bir Yöntem

Ekstraselüler bir kas Motor Pool için motor nöronlar belirlenmesi<em&gt; Aplysia&#39;nın californica</em

Biz deniz deniz tavşan sinir sisteminin diseksiyonu...

Duyusal nöronlar izolasyonu<em&gt; Aplysia californica</em&gt; Glutamaterjik Akımlar Patch Kelepçe Kayıtlar için

Deniz salyangozu Aplysia californica, davranışın hücresel ve moleküler temelleri üzerine yapılan çalışmalar için nörobiyoloji modeli olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Burada, tanımlanan sinir devrelerinin tek nöronlarının elektrofizyolojik ve moleküler analizleri için Aplysia'nın sinir sistemini keşfetmek için bir metodoloji açıklanmaktadır.

Aplysia Tek Nöronların Elektrofizyolojik ve Moleküler Analizleri için Gangliyon Hazırlama

Moleküllerin intramüsküler alımının ve karşılık gelen motor nöronlara retrograd taşınmasının etkinliği, enjeksiyon bölgelerinin motor uç plakalarına (MEP'ler) göre konumuna bağlıdır. Burada, izleyicilerin motor nöronlara retrograd taşınmasını optimize etmek için MEP'lerin iskelet kaslarına nasıl yerleştirileceğini açıklıyoruz.

Motor End Plates boyunca İntramüsküler Enjeksiyonlar: Doğrudan Motor Nöronlar içine Servis Tarayıcıları Bir Minimal İnvaziv Yaklaşım

Drosophila larva dendritik arborization (da) nöronları kullanarak nöronal morfolojilerinden Çalışmaları Immünofloresan nöronal ve epidermal proteinlerin in situ görselleştirme yarar. Larva vücut duvarı kas dokusu kaldırarak da nöronlar ve çevresindeki epidermal hücrelerin immünoflüoresans analizi artıran bir prosedür açıklanmaktadır.

Kaldırılması<em&gt; Drosophila</emDuyu Nöronlar ve Epidermal Hücre İmmünofloresan Analizi Larvaların Fileto dan&gt; Kas Dokusu

Minimal invaziv kas katıştırma (iskelet kas dokusu içine implante zaman donör-Hücre-aracılı myogenesis kolaylaştıran myogenic hücrelerin içerir kanıtlara dayalı MIME), dediğimiz yeni bir deneysel teknik tarif bir ana bilgisayar kas.

Minimal invaziv kas (MIME) katıştırma - donör-Hücre-aracılı Myogenesis kolaylaştırmak için yeni bir deneysel teknik

Bu protokol, transgenik olmayan omurgasız türlerde, absorbans voltajı duyarlı boyalar ve bir fotodiyot dizisi kullanılarak nöronal popülasyon aktivitesini tek hücreli çözünürlükle görüntüleme için bir yöntem sunar. Bu yaklaşım, görüntüleme ve analizin tek bir gün boyunca takip edilebildiği hızlı bir iş akışı sağlar.

Transgenik Olmayan Omurgasızlarda Tek Nöron Çözünürlüğü ile Ağ Dinamiklerini Kaydetmek için Fotodiyot Tabanlı Optik Görüntüleme

Keşfedin Aplysia californica'da minimal invaziv cerrahi tekniğiyle odontofor kaslarına erişimi. Bu yöntem beslenme davranışı sırasında derin kasların işlevlerini in vivo araştırmaya olanak tanır.

Aplysia californica Odontofor Kaslar Için Minimal İnvaziv Lezyon Tekniği

Daha fazla video keşfet