Name: Medial Vestibüler Nükleus Nöron Duyarlılığının Değerlendirilmesi İçin Stokaştik Gürültü Uygulaması In Vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 s
Description: Öğrenin, stokaştik gürültü uygulaması ile C57BL/6 farelerinden izole edilen medial vestibüler nükleus nöronlarının duyarlılığını nasıl değerlendirebilirsiniz. Bu yöntem, denge bozuklukları için tedavi geliştirmede nöronal uyarılabilirliği modüle etme yeteneğini gösterir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

SPS Sydney Üniversitesi lisansüstü araştırma bursu tarafından desteklendi.

Açıklanan tüm deneysel protokoller Sydney Üniversitesi Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır (onayprotokol numarası: 2018/1308).
1. Hayvanlar
NOT: Fareler Avustralya Kemirgen Merkezi'nden (ARC; Perth, Avustralya) ve Sydney Üniversitesi'ndeki Tıbbi Vakıf Binası Hayvan Tesisi'nde düzenlendi.
<ol><li>Fareleri çevresel zenginleştirme ile normal 12 saat açık/karanlık bir döngüde koruyun.</li>
	<li>Tüm deneyler için erkek ve dişi C57BL/6 farelerini (3-5 haftalık) kullanın.</li>
</ol>2. Çözümlerin Hazırlanması
<ol><li>29 mM NaHCO3,11 mM glukoz, 120 mM NaCl, 3.3 mM KCl, 1.4 mM NaH2PO4, 2.2 mM MgCl2, 2.77 mM CaCl 2'den oluşan yapay beyin omurilik sıvısı (ACSF) 1 L hazırlayın.</li>
	<li>29 mM NaHCO 3, 11 mM glikoz, 241,5mM sakkaroz, 3,3 mM KCl, 1,4 mM NaH2PO4, 2,2 mM MgCl2, 2,77 mM CaCl2içeren 200 mL sakaroz-ACSF (sACSF) hazırlayın. CaCl 2'nin</li><li> </li></ol><ol><li><li><li><li><li> </li><li><li> </li><li><li> </li><li></ol><ol><li></li><li> </li></ol><ol><li></li><li><li> </li><li><li><li><li></li></ol><ol><li><li></li><li></li><li></li></ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60044/60044fig1.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60044/60044fig1large.jpg" target="_blank"></a>

<ol><li>Amiridis, I. G., Hatzitaki, V., Arabatzi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-induced+modifications+of+static+postural+control+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Age-induced modifications of static postural control in humans.</a> Neuroscience Letters. 350 (3), 137-140 (2003).</li>
<li>Iwasaki, S., Yamasoba, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dizziness+and+imbalance+in+the+elderly%3A+age-related+decline+in+the+vestibular+system%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+and+disease%22%5BJournal%5D)">Dizziness and imbalance in the elderly: age-related decline in the vestibular system.</a> Aging and disease. 6 (1), (2015).</li>
<li>Fujimoto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noisy+galvanic+vestibular+stimulation+induces+a+sustained+improvement+in+body+balance+in+elderly+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Noisy galvanic vestibular stimulation induces a sustained improvement in body balance in elderly adults.</a> Scientific Reports. 6, 37575(2016).</li>
<li>Breen, P. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+tactile+sensory+perception+of+older+adults+improved+using+subsensory+electrical+noise+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Engineering+%26+Physics%22%5BJournal%5D)">Peripheral tactile sensory perception of older adults improved using subsensory electrical noise stimulation.</a> Medical Engineering & Physics. 38 (8), 822-825 (2016).</li>
<li>Yamamoto, Y., Struzik, Z. R., Soma, R., Ohashi, K., Kwak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noisy+vestibular+stimulation+improves+autonomic+and+motor+responsiveness+in+central+neurodegenerative+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Noisy vestibular stimulation improves autonomic and motor responsiveness in central neurodegenerative disorders.</a> Annals of Neurology. 58 (2), 175-181 (2005).</li>
<li>Soma, R., Nozaki, D., Kwak, S., Yamamoto, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1%2Ff+noise+outperforms+white+noise+in+sensitizing+baroreflex+function+in+the+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Review+Letters%22%5BJournal%5D)">1/f noise outperforms white noise in sensitizing baroreflex function in the human brain.</a> Physical Review Letters. 91 (7), 078101(2003).</li>
<li>Wiesenfeld, K., Moss, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stochastic+resonance+and+the+benefits+of+noise%3A+from+ice+ages+to+crayfish+and+SQUIDs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Stochastic resonance and the benefits of noise: from ice ages to crayfish and SQUIDs.</a> Nature. 373 (6509), 33-36 (1995).</li>
<li>Moss, F., Ward, L. M., Sannita, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stochastic+resonance+and+sensory+information+processing%3A+a+tutorial+and+review+of+application%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Stochastic resonance and sensory information processing: a tutorial and review of application.</a> Clinical Neurophysiology. 115 (2), 267-281 (2004).</li>
<li>Goel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+low+levels+of+stochastic+vestibular+stimulation+to+improve+balance+function%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Using low levels of stochastic vestibular stimulation to improve balance function.</a> PloS one. 10 (8), e0136335(2015).</li>
<li>Inukai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+noisy+galvanic+vestibular+stimulation+on+center+of+pressure+sway+of+static+standing+posture%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Stimulation%3A+Basic%2C+Translational%2C+and+Clinical+Research+in+Neuromodulation%22%5BJournal%5D)">Effect of noisy galvanic vestibular stimulation on center of pressure sway of static standing posture.</a> Brain Stimulation: Basic, Translational, and Clinical Research in Neuromodulation. 11 (1), 85-93 (2018).</li>
<li>Mulavara, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+low+levels+of+stochastic+vestibular+stimulation+to+improve+locomotor+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Systems+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Using low levels of stochastic vestibular stimulation to improve locomotor stability.</a> Frontiers in Systems Neuroscience. 9, 117(2015).</li>
<li>Iwasaki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noisy+vestibular+stimulation+increases+gait+speed+in+normals+and+in+bilateral+vestibulopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+stimulation%22%5BJournal%5D)">Noisy vestibular stimulation increases gait speed in normals and in bilateral vestibulopathy.</a> Brain stimulation. 11 (4), 709-715 (2018).</li>
<li>Serrador, J. M., Deegan, B. M., Geraghty, M. C., Wood, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+vestibular+function+in+the+elderly+with+imperceptible+electrical+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Enhancing vestibular function in the elderly with imperceptible electrical stimulation.</a> Scientific Reports. 8 (1), 336(2018).</li>
<li>Kim, J., Curthoys, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+primary+vestibular+neurons+to+galvanic+vestibular+stimulation+%28GVS%29+in+the+anaesthetised+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Responses of primary vestibular neurons to galvanic vestibular stimulation (GVS) in the anaesthetised guinea pig.</a> Brain Research Bulletin. 64 (3), 265-271 (2004).</li>
<li>Flores, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stochastic+resonance+in+the+synaptic+transmission+between+hair+cells+and+vestibular+primary+afferents+in+development%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Stochastic resonance in the synaptic transmission between hair cells and vestibular primary afferents in development.</a> Neuroscience. 322, 416-429 (2016).</li>
<li>Huidobro, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brownian+Optogenetic-Noise-Photostimulation+on+the+Brain+Amplifies+Somatosensory-Evoked+Field+Potentials%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Brownian Optogenetic-Noise-Photostimulation on the Brain Amplifies Somatosensory-Evoked Field Potentials.</a> Frontiers in Neuroscience. 11, 464-464 (2017).</li>
<li>Goldberg, J., Ferna, C., Smith, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+vestibular-nerve+afferents+in+the+squirrel+monkey+to+externally+applied+galvanic+currents%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Responses of vestibular-nerve afferents in the squirrel monkey to externally applied galvanic currents.</a> Brain Research. 252 (1), 156-160 (1982).</li>
<li>Baird, R., Desmadryl, G., Fernandez, C., Goldberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vestibular+nerve+of+the+chinchilla.+II.+Relation+between+afferent+response+properties+and+peripheral+innervation+patterns+in+the+semicircular+canals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">The vestibular nerve of the chinchilla. II. Relation between afferent response properties and peripheral innervation patterns in the semicircular canals.</a> Journal of Neurophysiology. 60 (1), 182-203 (1988).</li>
<li>Remedios, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Short-Term+Random+Noise+Electrical+Stimulation+on+Dissociated+Pyramidal+Neurons+from+the+Cerebral+Cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effects of Short-Term Random Noise Electrical Stimulation on Dissociated Pyramidal Neurons from the Cerebral Cortex.</a> Neuroscience. 404, 371-386 (2019).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+mouse+brain+in+stereotaxic+coordinates%22">The mouse brain in stereotaxic coordinates</a>. , Gulf professional publishing. (2004).</li>
<li>Camp, A. J., Callister, R. J., Brichta, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+synaptic+transmission+differs+in+mouse+type+A+and+B+medial+vestibular+nucleus+neurons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Inhibitory synaptic transmission differs in mouse type A and B medial vestibular nucleus neurons in vitro.</a> Journal of Neurophysiology. 95 (5), 3208-3218 (2006).</li>
<li>Camp, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+glycine+receptor+function+reduces+excitability+of+mouse+medial+vestibular+nucleus+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Attenuated glycine receptor function reduces excitability of mouse medial vestibular nucleus neurons.</a> Neuroscience. 170 (1), 348-360 (2010).</li>
<li>Iwasaki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Noisy+Galvanic+Vestibular+Stimulation+on+Ocular+Vestibular-Evoked+Myogenic+Potentials+to+Bone-Conducted+Vibration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+in+Neurology%22%5BJournal%5D)">Effect of Noisy Galvanic Vestibular Stimulation on Ocular Vestibular-Evoked Myogenic Potentials to Bone-Conducted Vibration.</a> Front in Neurology. 8, 26(2017).</li>
<li>Goldberg, J., Smith, C. E., Fernandez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+between+discharge+regularity+and+responses+to+externally+applied+galvanic+currents+in+vestibular+nerve+afferents+of+the+squirrel+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Relation between discharge regularity and responses to externally applied galvanic currents in vestibular nerve afferents of the squirrel monkey.</a> Journal of Neurophysiology. 51 (6), 1236-1256 (1984).</li>
</ol>

Yazarlar çıkar çatışması beyan etmezler.

Galvanik vestibüler stimülasyonun (GVS) vestibüler sistem üzerindeki etkileri insanlarda in vivo vurgulanmıştır3,13,23, kobay14, kemirgenler18 ve insan olmayan primatlar24. Ancak, Bu çalışmaların hiçbiri vestibüler sistemde bireysel nöronların duyarlılığı üzerinde elektriksel gürültü doğrudan etkisini değerlendirilmiştir. Burada stokstik gürültünün ilk in vi...

Vestibüler (veya denge) sistemi işitsel, proprioseptif, somatosensoriyel ve görsel bilgileri entegre ederek denge duygumuzu kontrol eder. Vestibüler sistemin bozulması yaş bir fonksiyonu olarak meydana geldiği gösterilmiştir ve denge açıkları neden olabilir1,2. Ancak vestibüler sistemin işleyişini hedefleyen tedaviler azdır.
Galvanik Vestibüler Stimülasyon (GVS) denge önlemleri geliştirmek için gösterilmiştir, otonom işleyişi ve insanlar içinde diğer duyusal yöntemler3,4,5,6. Bu iyileştirmeler Stochastic Rezonans nedeniyle olduğu söyleniyor (SR) fenomen, hangi subeşik gürültü uygulaması ile doğrusal olmayan sistemlerde zayıf sinyallerin tespit artıştır7,8. Bu çalışmalar statik9,10 ve dinamik11,12 dengesi ve Oküler Sayaç Rulosu (OCR)13 gibi vestibüler çıkış testlerinde iyileşmeler göstermiştir. Ancak, bu çalışmaların çoğu beyaz gürültü9, renkli gürültü13, farklı uyarıcı frekans aralıkları ve eşik teknikleri gibi uyarıcı parametrelerin farklı kombinasyonları kullandık. Bu nedenle, optimal uyarıcı parametreleri bilinmemektedir ve bu protokol en etkili parametrelerin belirlenmesinde yardımcı olabilir. Uyarıcı parametrelerin yanı sıra, uyarıcı türü de terapötik ve deneysel etkinlik önemlidir. İnsanlarda yukarıdaki çalışma elektriksel gürültü uyaranları kullanılarak gerçekleştirilirken, in vivo hayvan çalışmalarının çoğu mekanik14,15 veya optogenetik16 gürültü uyaranları kullanmıştır. Bu protokol vestibüler çekirdekler üzerindeki etkilerini incelemek için elektriksel gürültü kullanacaktır.
Daha önce, birincil vestibüler afferents uyarmak için GVS uygulaması sincap maymunlar17, chinchillas18, tavuk embriyoları15 ve kobay14in vivo yapıldı . Ancak, bu çalışmalardan sadece iki gvs birincil vestibüler afferents14,15kazanımı üzerindeki etkisi incelenmiştir. Bu deneyler vestibüler çekirdekler üzerinde uygulanan stimülasyon kesin desenleri belirlenemez anlamına in vivo yapılmıştır. Bilgimiz için, sadece bir başka çalışmada merkezi sinir sisteminde bireysel enzimatik ayrıştırılmış nöronlar için stochastic gürültü uygulanmıştır19. Ancak, uygun uyarıcı parametreleri ve eşik tekniklerini değerlendirmek için merkezi vestibüler çekirdeklerde hiçbir deney yapılmamış, bu protokol vestibüler içindeki tek tek nöronlar üzerindeki uyarıcı etkilerin belirlenmesinde daha kesin hale getirilmiştir. Çekirdek.
Burada, medial vestibüler çekirdekteki (MVN) tek tek nöronlara doğrudan sinüzoidal ve stokhastik (elektriksel) gürültünün nasıl uygulanacağı, nöronal eşiği nasıl belirleyeceğimiz ve kazanç/duyarlılıktaki değişiklikleri nasıl ölçtükleri açıklıyoruz.

<table><tbody><tr><td>CaCl</td><td>Scharlau</td><td>CA01951000</td><td>ACSF ve sACSF için kullanılır</td></tr><tr><td>D-(+)-Glikoz</td><td>Sigma</td><td>G8270</td><td>ACSF ve sACSF için kullanılır</td></tr><tr><td></td><td>EGTA Sigma</td><td>E0396-25G</td><td>K bazlı hücre içi çözelti için kullanılır</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>H3375-25G</td><td>K bazlı hücre içi çözelti için kullanılır</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Chem-supply</td><td>PA054-500G</td><td>ACSF, sACSF ve hücre içi çözelti için kullanılır</td></tr><tr><td>K-glukonat</td><td>Sigma</td><td>P1847-100G</td><td>K bazlı hücre içi çözelti için kullanılır</td></tr><tr><td>Mg-ATP</td><td>Sigma</td><td>A9187-500MG</td><td>K bazlı hücre içi çözelti için kullanılır</td></tr><tr><td>MgCl</td><td>Kimyasal tedarik</td><td>MA00360500</td><td>ACSF ve sACSF için kullanılır</td></tr><tr><td>Na3-GTP</td><td>Sigma</td><td>G8877-100MG</td><td>K bazlı hücre içi çözelti için kullanılır</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Kimyasal tedarik</td><td>SO02270500</td><td>ACSF ve hücre içi çözelti NaH için kullanın</td></tr><tr><td>2PO 4&#8226; 2H2O</td><td>Ajax</td><td>AJA471-500G</td><td>ACSF ve sACSF için kullanılır</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S5761-1KG</td><td>ACSF ve sACSF için kullanılır</td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Kimyasal kaynağı</td><td>SA030-500G</td><td>sACSF</td></tr><tr><td>Isofluran</td> için kullanılır <td>Henry Schein</td><td>1169567762</td><td>Fareleri uyuşturmak için kullanılır</td></tr><tr><td>EKİPMAN</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Borosilikat cam kılcal damarlar</td><td>Warner instruments</td><td>GC150T-7.5</td><td>1,5 mm Dış çap, 1,16 mm İç çap, 7,5 cm uzunluk</td></tr><tr><td>Veri toplama yazılımı</td><td>Axograph</td><td></td><td>Elektrofizyoloji ve analiz için kullanılır</td></tr><tr><td>Friedmen-Pearson Rongeurs</td><td>World hassas aletler</td><td>14089</td><td>Diseksiyon için kullanılır</td></tr><tr><td>Mikropipet çektirme</td><td>Narishige</td><td>PP-830</td><td>Mikropipet için kullanılır</td></tr><tr><td>Multiclamp amplifikatör</td><td>Akson aletleri</td><td>700B</td><td>Elektrofizyoloji için kullanılır</td></tr><tr><td>pH metre</td><td>Sper scientific</td><td>860033</td><td>Dahili çözüm için kullanılır</td></tr><tr><td>Standart desen makası</td><td>FST</td><td>14028-10</td><td>Diseksiyon için kullanılır</td></tr><tr><td>Sutter mikromanipülatörü</td><td>Sutter</td><td>MP-225/M</td><td>Elektrofizyoloji için kullanılır</td></tr><tr><td>Dik mikroskop</td><td>Olympus</td><td>BX51WI</td><td>Elektrofizyoloji için kullanılan</td></tr><tr><td>Vibratom</td><td>Leica</td><td>VT1200</td><td>Beyin dokusunu dilimlemek için kullanılır</td></tr></tbody></table>

medial vestibüler nükleus nöron duyarlılığının değerlendirilmesi İçin stokaştik gürültü uygulaması in vitro

Stochastic Noise Application for the Assessment of Medial Vestibular Nucleus Neuron Sensitivity In Vitro

Galvanik vestibüler stimülasyon (GVS) denge veya vestibüler bozuklukları olan bireylerde denge önlemleri geliştirmek için gösterilmiştir. Bunun, zayıf sinyallerin algılanmasını artırmak için doğrusal olmayan bir sisteme düşük seviyeli/alt eşikli bir uyarıcının uygulanması olarak tanımlanan stokastik rezonans (SR) fenomeninden kaynaklandığı öne sürülebilir. Ancak, SR'nin insan dengesi üzerindeki olumlu etkilerini nasıl sergilediği hala bilinmemektedir. Bu bireysel nöronlar üzerinde sinüzoidal ve stochastic gürültü etkilerinin ilk gösterilerinden biridir. Tüm hücreyon kıskaç elektrofizyolojisi kullanılarak, sinüzoidal ve stochastic gürültü doğrudan c57BL/6 farelerin medial vestibüler çekirdeğinde (MVN) bireysel nöronlara uygulanabilir. Burada sinüzoidal ve stokhastik uyaranların alt eşik olmasını sağlamak için MVN nöronların eşiğini nasıl belirleyebileceğimizi ve bunun için de her gürültü türünün MVN nöronal kazanç üzerindeki etkilerini nasıl belirleyebileceğimizi gösteriyoruz. Alt eşik sinüzoidal ve stokhastik gürültünün bazal ateşleme oranlarını etkilemeden MVN'deki tek tek nöronların hassasiyetini modüle edebildiğimizi gösterdik.

İlk kayıtlar sinüzoidal ve stochastic gürültü bireysel MVN nöronların bazal ateşleme oranları ve nasıl uyaranların nöronların kazanç etkisi üzerindeki etkileri hakkında bilgi sağlayabilir. Şekil 2, kontrol (gürültüsüz) kayıtlara kıyasla MVN nöronların ne sinüzoidal ne de stokhastic gürültü değişimi bazal ateşleme oranları olduğunu göstermektedir. Bu bilgi bireysel nöronların eşiğini belirlemek için çok önemlidir. Galvanik vestibüler stimülasyonun insanlara uygulanması sır...

İnsanlarda galvanik vestibüler stibüler stibüler stibüler stibüler stimülasyonu vestibüler fonksiyonda iyileşmeler sergiler. Ancak, bu etkilerin nasıl oluştuğu bilinmemektedir. Burada, C57BL/6 farede sinüzoidal ve stokstik elektriksel gürültünün nasıl uygulanacağı ve tek tek medial vestibüler nükleus nöronlarda uygun uyarıcı genliklerinin nasıl değerlendirildiği açıklanmıştır.

Medial Vestibüler Nükleus Nöron Duyarlılığının Değerlendirilmesi İçin Stokaştik Gürültü Uygulaması In Vitro

Galvanic vestibular stimulation (GVS) has been shown to improve balance measures in individuals with balance or vestibular impairments. This is proposed ...

Bu protokol doku dilimlerinde bireysel nöronlar elektriksel gürültü doğrudan uygulama ilk gösterilerinden biridir. Elektriksel uyaranlara verilen nöronal tepkileri gözlemlemek için. Bu tekniğin en büyük avantajı, bireysel nöronlar üzerinde belirli bir dizi uyarıcı parametreleri değerlendirebiliyor olmamızdır.Bu teknik, uyarıcı parametrelerin optimizasyonunun belirli, fonksiyonel nöronal tipleri hedeflemesine olanak sağlar. Bu denge disfunction için daha iyi terapötik gelişimi için etkileri vardır. Beyin sapı ekstraksiyonbaşlamadana başlamadan önce, CarpoGEN ile Equilibry s-ACSF ve bir buz bulamaç oluşana kadar 25 dakika boyunca eksi 80 santigrat derece çözelti soğutun.Çözelti soğuduktan sonra, üç ila beş haftalık C-57 siyah altı farekafatasında sagittal deri kesi yapmak için bir sayı 22 yuvarlak jilet kullanın ve standart desen makas sivri ucunu kullanarak küçük bir kesi yapmak için, lambda başlayarak, sagittal sütür boyunca. Pierson von Jours'un sığ bir kıvrımını kullanarak, tamir edilmiş parietal ve exoccipital kemikleri dikkatlice yansıtır ve beyni buz gibi s-ACSF ile yıkar. Sonra, parietal exoccipital sulkus kesmek için bir sayı 11 düz jilet kullanarak ön beyin ve kemikli encasing beyin sapı izole ve kaudal negula.Mount izole beyin kök ventral ve aşağı perviously kesilmiş trapez polistiren blok, ve parçalanmış doku çevresinde herhangi bir fazla sıvı kaldırmak için kağıt mendil kullanın. Bağlı beyin sapı rostral ve aşağı ile kesme aşamasına polistiren blok düzeltmek için siyanoakrilat tutkal kullanın. MVN'nin 200 mikrometrelik enine dilimlerini elde etmek için saniyede 0,16 milimetre lik gelişmiş bir hız ve üç milimetrelik titreşim genliği kullanın.Daha sonra doku dilimlerini en az 30 dakika boyunca 25 santigrat derecede hapsedilmiş acsf'ye aktarmak için plastik kesilmiş pipet kullanın. Tüm hücreli yama kıskaç elektrofizyolojisi için, potasyum bazlı bir iç solüsyon ile doldurulup banyoya yerleştirildiğinde üç ila beş mega Om arasında değişen son bir dirençle mikro pipetleri çekin. MVN'deki tek tek nöronlardan tüm hücre yama kelepçesi kayıtlarını elde etmek için, kuluçka odasından standart bir elektrofizyolojik kurulumun kayıt odasına tek bir doku dilimi aktarın ve dilimi sabitlemek için U şeklindebir ağırlık üzerinde naylon iplik kullanın.Kayıt odasını dakikada üç mililitre lik bir akış hızıyla 25 santigrat derecede karbonginated ACSF ile sürekli olarak aşındırın ve mikro pipeti dahili solüsyonlarla doldurun. Enkazı pipet ucundan uzaklaştırmak için pipet kullanarak az miktarda pozitif basınç uygulayın. Daha düşük bir güç hedefi kullanarak, MVN içinde bireysel nöronlar bulmak için yüksek bir güç geçmeden önce MVN bulmak.Pipetle dokuyu aşmadan önce, enkazı pipet ucundan uzaklaştırmak için az miktarda pozitif basınç uygulayın ve pipeti seçilen nörona doğru hareket ettirebilmek için mikro manipülatörü kullanın. Nöronal zarda küçük bir gamze oluşmalıdır. Pozitif basıncı bırakın ve az miktarda negatif basınç uygulayın.Bir giga Om mührü elde edildikten sonra, membranı yırtmak ve tüm hücre yapılandırması oluşturmak için emme portu aracılığıyla pipet tutucuya hafif kısa ve keskin negatif basınç uygulayın. Daha sonra standart protokollere göre tam hücre akım kelepçe kayıtları elde edin. Bireysel medial vestibüler çekirdek nöronlara stoksatik ve sinüzoidal gürültü uygulamak için, nöronal eşik ve atış hızını belirlemek ve grup duyusal eşik belirlemek için üç ila 24 piko amper genliklerin aralığı ayarlayın.Ardından, depolarizasyon akımı adımının her bir akım düzeyi için enjekte edildiği 10 saniyelik dönemdeki ortalama atış hızını hesaplayın. Geçerli çizime karşı bir atış hızı oluşturmak için ortalama atış hızı değerlerini kullanın. Sonra nöronal kazancı belirlemek için en iyi uyum çizgisinin degrade belirlemek için doğrusal bir regresyon analizi gerçekleştirin.Ne sinüzoidal ne de stokhastik gürültü mvn nöronların fesleğen ateşleme oranlarını değiştirir kontrol hiçbir gürültü kayıtları ile karşılaştırıldığında. Bu deneyde, 6 piko amperin seçilen gürültü seviyesi alt eşiktir, çünkü ortalama ateşleme hızının 12 piko amperin deneysel eşiğinin artmaya başladığı görülmektedir. Bu eşik, deneysel eşiğin üstündeki ve altındaki uyarıcı düzeylerinin gruplandırılarak objektif olarak belirlenmiştir.Nöronal kazanç, nöronları gürültülü ve gürültüsüz 10 piko amper de sıfırdan 50 piko amper ekadar depolarize akım basamaklarına maruz kalarak değerlendirildi. Gerçekten de, altı piko amperin alt eşik genliklerinde uygulanan sinüzoidal ve stokhastik gürültü MVN nöronların kazancını değiştirebilir. Kurulan uyarıcı parametrelerdaha doğal bir uyaran sağlamak için bireysel nöronlar yenilik sinir uygulanabilir.

stochastic-noise-application-for-assessment-medial-vestibular-nucleus

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bir yöntem özgürlük altı derece (6DF) hareket simülatörü kullanarak insanlarda üç boyutlu vestibulo göz refleksleri (3D VOR) ölçmek için açıklanmıştır. 3D açısal VOR kazanç ve kaymalar vestibüler fonksiyon kalitesinin doğrudan bir ölçüsü. Sağlıklı konularda Temsilcisi veri...

Özgürlük Hareket Platformu Six Degrees kullanarak Üç Boyutlu Vestibüler Oküler Refleks Testi

Bu video, bir fare yavrusunun iç kulağından vestibüler nöronları izole etmek için bir yöntem göstermektedir. İç kulağın diseksiyonu, vestibüler ganglionun toplanması ve ardından ganglionun tek hücrelere ayrılması ile ilgili adımları titizlikle ana hatlarıyla belirtir. Bu hücreler daha sonra bir vestibüler nöron kültürü oluşturmak için cam tabanlı tabaklar üzerinde kültürlenir.

Vestibüler Ganglion Nöronlarının Bir Fare İç Kulağından İzole Edilmesi

Bu video, gürültü akımlarının elektriksel uyaranlara nöronal duyarlılık üzerindeki etkisini incelemek için tüm hücre yama-kelepçe tekniğini kullanarak eşik altı gürültü akımlarının medial vestibüler çekirdek nöronlarına uygulanmasını içeren bir protokolü göstermektedir.

Tüm Hücre Yama-Kelepçe Tekniği Kullanılarak Medial Vestibüler Çekirdek Nöronlarına Gürültü Akımlarının Uygulanması

Vestibüler saç hücre fonksiyonu analizi kafatası, petröz temporal kemiğin en zor kısmı içinde derin konumlarına göre karmaşıktır. En işlevsel saç hücre çalışmaları akut izole saç hücrelerinin kullandık. Burada elektrofizyolojik ve iki-fotonlu mikroskop çalışmaları için fare vestibüler epitelyum bir yarı sağlam hazırlanması açıklanmaktadır.

Elektrofizyoloji ve yüksek çözünürlüklü İki foton Mikroskopi için Fare Vestibüler Duyu epiteli bir İzole Yarı sağlam Hazırlık

Motor kontrol ve denge performansı yaşla birlikte bozulmaya bilinmektedir. Bu kağıt yaşlanmanın bir fare modelinde denge performans vestibüler sistem ve gösteri değişiklikleri meydan basit bir döner uyarıcının eklenmesi ile standart noninvaziv davranış testleri bir dizi sunuyor.

Yaşlanma Fare Vestibüler Sistemi Davranışsal Değerlendirme

Bu iletişim kuralı cerrahi labyrinthectomy vestibüler sistem çalışmak için kullanışlı bir yöntemdir bir farenin açıklar.

Vestibüler sistem çalışmaya farenin cerrahi Labyrinthectomy

Protokoller asansör dikey hareket ve dönme dolap rotasyonu kullanarak kemirgenlerde pasif hareketin otonom ve davranışsal etkilerini değerlendirmek için sunulmaktadır.

Asansör Dikey Hareketi ve Dönme Dolap Rotasyonu Kullanarak Sıçanlarda Pasif Hareketin Otonom ve Davranışsal Etkilerinin Değerlendirilmesi

Bu makalede, altı serbestlik dereceli bir hareket platformu kullanarak vestibüler algısal eşikleri tahmin etmek için gereken yöntemleri, prosedürleri ve teknolojileri açıklıyoruz.

Altı Serbestlik Dereceli Hareket Platformu Kullanarak Vestibüler Algısal Eşiklerin Tahmin Edilmesi

Bu makalede, manyetik vestibüler stimülasyon altında refleksif göz hareketlerini, kendi kendine hareket algısını ve bilişsel görevleri ve vestibüler organların anatomik yönelimini değerlendirmek için deneysel kurulum, materyal ve prosedürleri 7 Tesla Manyetik rezonans tomografi (7T-MRT) tarayıcısında açıklayacağız.

7T MRT'de Manyetik Vestibüler Stimülasyonun Nistagmus, Kendi Kendine Hareket Algısı ve Bilişsel Performans Üzerindeki Etkisinin Ölçülmesi

Burada, iç kulağın vestibüler ganglion ve spiral ganglion nöronlarından diseksiyon, ayrıştırma, kültürleme ve yama-klemp kaydı için ayrıntılı talimatlar sağlayan yöntemler sunulmaktadır.

Patch-Clamp Kayıtları için Yenidoğan Kemirgenlerinden Vestibüler ve Spiral Ganglion Somata'nın İzole Edilmesi ve Kültürlenmesi

Öğrenin, stokaştik gürültü uygulaması ile C57BL/6 farelerinden izole edilen medial vestibüler nükleus nöronlarının duyarlılığını nasıl değerlendirebilirsiniz. Bu yöntem, denge bozuklukları için tedavi geliştirmede nöronal uyarılabilirliği modüle etme yeteneğini gösterir.

Medial Vestibüler Nükleus Nöron Duyarlılığının Değerlendirilmesi İçin Stokaştik Gürültü Uygulaması In Vitro

Daha fazla video keşfet