Name: Glukoz-6-Fosfat İzomazlarında (G6PI)-Indüklenen RA Farelerde iNKT Hücrelerinin Benimseyici İmmünoterapisi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-31T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Öğrenin, farelerde romatoid artrit modeli oluşturma ve iNKT hücreleriyle benimseyici immünoterapi uygulama yöntemini. Bu protokol, immünoloji ve hücre tedavisi araştırmaları için temel oluşturur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çalışmamız Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (NSFC) (81771755), Kolejler ve Hebei eyaleti (ZD2017009) kolejleri ve üniversitenin bilim ve teknoloji anahtar araştırma projesi ve Hebei Üniversitesi Hayvan Laboratuvarı Tıbbi Deney Merkezi tarafından desteklenmiştir. Desteklerinden dolayı minnettarız.

Tüm deneysel fareler (toplam 150) sağlıklı erkek DBA/1 fareler, 6-8 haftalık (20.0 ± 1.5 g), belirli bir patojen içermeyen (SPF) ortamda yetiştirilen edildi. Modellemeden önce özel bir işlem yoktur. Deney sağlıklı bir kontrol grubu (15 fare), bir model kontrol grubu (15 fare) ve bir hücre terapi grubuna (55 fare) ayrılmıştır. Bu çalışma Hebei Üniversitesi Hayvan Refahı ve Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. Hastalık Modelinin Oluşturulması
<ol><li>RA hayvan modelinin çoğaltılmı<ol>
<li>HG6PI 325-339 ve hG6PI 469-483 parçalarının 1,75 mg'ını tartın ve 4 °C üçlü distile suyun 5,25 mL'sinde çözün.</li>
		<li>Freund'un adjuvan (CFA) hazırlayışı 50 °C'lik bir su banyosunda çözün, 5,25 mL'lik başka bir 10 mL santrifüj tüpüne çekin ve kullanım için soğutun.</li>
		<li>HG6PI çözeltisi ve CFA çözeltisinin karışımını iki cam şırıngabağlı yapay bir emülsifikasyon ünitesine koyun.</li>
		<li>Karışık peptit solüsyonu ve CFA çözeltisini tamamen emülsifiye etmek için şırıngayı sabit bir hız ve dakikada 10-20x sıklıkta itin. Bir buz banyosunda işlemi gerçekleştirin ve emülsiyon damlacıklarını dağılmadan emülsifikasyon tamamlandıktan sonra 10 dakika suda tutun.</li>
		<li>Farenin kuyruk köküne 150 μL emülsifiye hG6PI enjekte edin.</li>
		<li>HG6PI enjeksiyonundan sonra 0 saat ve 48 h'de fare intraperitoneally içine 200 mg Pertussis toksini enjekte edin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>RA modelinin deneysel doğrulaması<ol>
<li>Farenin pençesinin kalınlığını vernier kaliper (günde 2 x) ile ölçün.</li>
		<li>Gözlemlemek ve ayak kızarıklık ve şişlik derecesini işaretleyin. Aşağıdaki puanlama kriterlerini kullanın: 1) hafif şişlik ile ayak; 2) dorsum pedis ve açık kırmızı şişme ile ayak pedi; 3) kırmızı şişme ile ayak bileği.</li>
		<li>Modellemeden 14 gün sonra %1 sodyum pentobarbital (50 mg/kg vücut ağırlığı) intraperitoneal enjeksiyon ile derin anestezi altındaki fareleri ötenazi edin ve HE boyama için pençeleri çıkarın.</li>
		<li>Üreticiprotokolüne göre ticari bir sitometrik boncuk dizisi (CBA) kullanarak serum IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, TNF-α ve IFN-γ'ın salgı düzeylerini belirleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Benimseyen Hücresel Tedavi ile iNKT Hücrelerinin Elde Edilmesi
<ol><li>iNKT hücrelerinin yönlü indüksiyonu<ol>
<li>Normal farelere intraperitoneal α-GalCer enjekte edin (0.1 mg/kg vücut ağırlığı).</li>
	</ol></li>
	<li>iNKT hücrelerinin yalıtımı<ol>
<li>Modellemeden üç gün sonra, anestezi için farelere intraperitoneal %1 sodyum pentobarbital (50 mg/kg vücut ağırlığı) enjekte edin. Yeterince anestezili fareler bir parmak çimdik bir arka pençe çekilmesi yanıt göstermez.</li>
		<li>DBA/1 farenin dalağını α-GalCer ile intraperitoneal olarak enjekte ettikten sonra izole edin. 200 örgü elekteki dalağını kesip öğüterek tek bir hücreli süspansiyon hazırlayın.</li>
		<li>Hücre süspansiyonuna PBS ile yıkayın, 200 x g'de 5 dk santrifüj edin ve süpernatantı atın. Tekrar.</li>
		<li>Tam kan ve doku seyreltme çözeltisi 1 mL ile hücreleri resuspend. Fare lenfosit ayırma orta 3 mL ekleyin ve sonra oda sıcaklığında 300 x g 20 dakika hücreleri santrifüj.</li>
		<li>Sütlü beyaz lenfositler (yani, üstten ikinci tabaka) tabakası toplamak, PBS ile 2x yıkayın ve otomatik bir hücre sayacı ile saymak.</li>
	</ol></li>
	<li>iNKT hücrelerinin saflaştırılması için manyetik aktif hücre sıralama (MACS) pozitif seçim stratejisi NOT: CD1d tetramerlerinin ön işlemesi için 1 mg/mL α-Galcer 200 μg/mL'ye seyreltildi ve %0.5'i Tween-20 ve NaCl'nin %0.9'u ile ve elde edilen çözeltinin 5 000'i CD1d tetramer çözeltisinin 100 μL'sine eklendi. Karışım oda sıcaklığında 12 saat kuluçkaya yatırıldı ve kullanım için 4 °C'ye yerleştirildi. TCR β deiyonize su ile 80x seyreltildi. Diğer tüm antikorlar stok çözeltisi olarak kullanıldı.<ol>
<li>100 μL 4 °C PBS ile 100°C PBS ile 10 7 hücreyi yeniden askıya alın, 10 μL α-GalCer yüklü CD1d Tetramer-PE ekleyin ve karanlıkta 15 dakika boyunca 4 °C'de kuluçkaya yatırın.</li>
		<li>Hücreleri 2 kat PBS ile yıkayın ve 80 μL PBS'de yeniden askıya alın.</li>
		<li>20 μL anti-PE-MicroBeads ekleyin ve karanlıkta 20 dakika boyunca 4 °C'de kuluçkaya yatırın.</li>
		<li>2 x PBS ile yıkayın ve hücreleri 500 μL PBS ile yeniden askıya alın.</li>
		<li>Sıralama sütununu MACS ayırıcısının manyetik alanına yerleştirin ve 500 μL PBS ile durulayın.</li>
		<li>Hücre süspansiyonu 2.3.4 adımdan ayırma sütununa ekleyin, akışı toplayın ve PBS arabelleğiyle 3x durulayın.</li>
		<li>Manyetik alanı kaldırın ve sıralama sütunundaki hücreleri toplayın. Bu noktada, sıralama sütununa 1 mL PBS arabelleği ekleyin ve etiketli hücreleri toplama tüpüne götürmek ve saflaştırılmış iNKT hücreleri elde etmek için sürekli bir basınçta pistonu hızlı bir şekilde itin. Otomatik bir hücre sayacı ile say.</li>
	</ol></li>
	<li>iNKT hücre fenotipinin tanımlanması<ol>
<li>Sırasıyla 2.2.5 ve 2.3.7 adımlarından 1 x 106 hücre alın ve 50 μL PBS'de yeniden askıya alın.</li>
		<li>Antikor kuluçka: Negatif kontrol tüpüne antikor eklemeyin, tek pozitif kontrol tüpüne 0,5 μL α-GalCer-PE-CD1d Tetramer veya 10 μL FITC-TCR β ekleyin. Örnek tüpe 0,5 l α-GalCer-PE-CD1d tetramer ve 10 μL FITC-TCR β ekleyin. Karanlıkta 30 dakika boyunca 4 °C'de kuluçkaya yatırın.</li>
		<li>5 dakika boyunca 200 x g'de PBS'deki hücreleri yıkayın ve santrifüj edin.</li>
		<li>Supernatant atın, Foxp3 Foxation / Permeabilization çalışma çözeltisi 1 mL ekleyin ve karanlıkta 4 ° C'de 45 dakika için hücreleri kuluçka.</li>
		<li>1 mL 1x Permeabilizasyon Tampon çalışma çözeltisi ekleyin ve 5 dk oda sıcaklığında 500 x g oda sıcaklığında hücreleri santrifüj.</li>
		<li>Supernatant atın. Karanlıkta oda sıcaklığında 30 dakika boyunca 1 000 Alexa Fluor 647 fare Anti-PLZF ve 1 000 PerCP-Cy 5,5 fare anti-T-bet (veya 1 μL PerCP-Cy 5,5 fare anti-RORΥt) ekleyin.</li>
		<li>Temizlik için 2 mL Permeabilizasyon Tampon çalışma çözeltisi ekleyin.</li>
		<li>Supernatant atın, PBS 500 μL hücreleri resuspend ve akış sitometri ile ölçün.</li>
	</ol></li>
	<li>iNKT hücrelerinin fonksiyonel tanımlanması<ol>
<li>Adım 2.3.7'den 3 x 106 iNKT hücreleri alın ve 1.5 mL RPMI-1640 eksik orta (yani, serum olmadan) ile 12 kuyu plakaları onları yeniden askıya alın.</li>
		<li>Phorbol ester (PMA, 50 ng/mL) ve iyonomisin kalsiyum (IO, 1 μg/mL) ekleyin ve 24 saat boyunca CO2 kuluçka makinesine yerleştirin.</li>
		<li>Hücre supernatant toplamak ve IL-2, IL-17A, TNF-α, IL-6, IL-4, IFN-γ ve IL-10 salgı düzeylerini üreticinin protokolüne göre ticari bir CBA tsay kullanarak tespit.</li>
	</ol></li>
	<li>RA farelerinde iNKT hücrelerinin göç yolu üzerine deneysel çalışma<ol>
<li>DMSO'da DiR boyayı (2.5 mg/mL) çözün.</li>
		<li>RPMI-1640 eksik orta ile 6 iyi plakalar içinde iNKT hücreleri resuspend. Yoğunluk 1 × 106 hücre/mL'dir.</li>
		<li>DiR (5 g/mL) çözeltisi ekleyin ve 25 dakika boyunca CO2 kuluçka makinesinde kuluçkaya yatırın.</li>
		<li>DiR etiketli iNKT hücreleri (DiR-iNKT) elde etmek için PBS ile yıkayın ve hücreleri (3 x 106/300 μL) yeniden askıya alın.</li>
		<li>Fareleri anestezik etmek için %1 sodyum pentobarbital (50 mg/kg vücut ağırlığı) intraperitoneal enjekte edin. Yeterince anestezili fareler parmak çimdik bir arka pençe çekilmesi göstermez. Görüntüleme için anestezi altında kuruluk önlemek için fare gözlerine veteriner merhem uygulayın.</li>
		<li>8 gün boyunca RA modeli ile fare başına 3 x 106 diR-iNKT hücreleri enjekte edin. İnjeks sonrası farelerdeki iNKT hücrelerini 0 dk, 10 dk, 30 dk, 60 dk ve gün 0 (3 saat sonra), 1, 3, 6, 12, 26, 34, 38 ve 42 gün boyunca in vivo görüntüleme sistemindeki (IVIS) küçük bir hayvanı kullanarak izleyin. Kullanılan uyarma dalga boyu 748 nm, emisyon dalga boyu 780 nm ve pozlama süresi otomatikti.</li>
		<li>Her gözlemden sonra her fareyi ayrı bir kafese yerleştirin ve sert bir recumbency koruyun. Anesteziden iyileşene kadar gözlemleyin.</li>
	</ol></li>
</ol>3. INKT Hücreleri ile RA Farelerin Evlat edinici İmmünoterapisinin Değerlendirilmesi
<ol><li>RA fareler için iNKT hücre benimseyen immünoterapi<ol>
<li>Kuyruk damarına fare başına 3 x 106 hücre iNKT hücresi enjekte edin. 8 gün önce modellenmiş 15 fareyi rastgele seçin ve kuyruk damar infüzyonu ile 2.3.7 adımından DiR etiketi olmadan iNKT hücreleri edinin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>iNKT hücreleri için evlat edinen immünoterapinin etkinliğini değerlendirin.<ol>
<li>Farenin pençe kalınlığını ölçün, ayak bileği ekleminin şişmesini ölçün ve 1.2.1-1.2.2 adımlarında açıklandığı gibi iNKT hücrelerinin infüzyonundan sonra sistematik olarak puan alın.</li>
		<li>Adım 1.2.3'te açıklandığı gibi fare eklemlerinin inflamatuar hücre infiltrasyonlarını ve eklem değişikliklerini gözlemleyin.</li>
		<li>Adım 1.2.4'te açıklandığı gibi IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, TNF-α ve IFN-γ salgı düzeylerini belirleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>iNKT hücrelerinin ve alt kümelerinin sıklığını belirleyin.<ol>
<li>Fare timusu izole ve tek bir hücre süspansiyon hazırlamak.</li>
		<li>Lenfositleri lenfosit ayırma sıvısı ile ayırın.</li>
		<li>Adım 2.4'te açıklandığı gibi iNKT hücre frekansını ve alt grup sıklığını belirleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>İstatistiksel analiz NOT: Tüm veriler ortalama ± SD. P < 0.05 değerleri istatistiksel olarak anlamlı olarak değerlendirildi.<ol>
<li>Varyans (ANOVA) tek faktörlü analizini kullanın. Varyans tatmin olduysa, daha fazla karşılaştırma için LSD testini kullanın.</li>
		<li>Varyans düzgün değilse, parametrik olmayan testi kullanın. Daha fazla karşılaştırma31için Kruskal-Wallis H testini kullanın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Tobón, G. J., Youinou, P., Saraux, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+environment%2C+geo-epidemiology%2C+and+autoimmune+disease%3A+Rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Autoimmunity+Reviews%22%5BJournal%5D)">The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis.</a> Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0-14 (2010).</li>
<li>Cross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+burden+of+rheumatoid+arthritis%3A+estimates+from+the+Global+Burden+of+Disease+2010+study%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+Rheumatic+Diseases%22%5BJournal%5D)">The global burden of rheumatoid arthritis: estimates from the Global Burden of Disease 2010 study.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 73 (7), 1316-1322 (2014).</li>
<li>Kanashiro, A., Bassi, G. S., Queiróz Cunha, F. D., Ulloa, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+neuroimunomodulation+to+bioelectronic+treatment+of+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Bioelectronics+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">From neuroimunomodulation to bioelectronic treatment of rheumatoid arthritis.</a> Bioelectronics in Medicine. 1 (2), 151-165 (2018).</li>
<li>Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invariant+natural+killer+T+cells%3A+an+innate+activation+scheme+linked+to+diverse+effector+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).</li>
<li>Bianca, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+Natural+Killer+T-Cells+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Unraveling Natural Killer T-Cells Development.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1950(2018).</li>
<li>Mitsuo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+CD161%2BCD8%2B+T+cells+in+the+peripheral+blood+of+patients+suffering+from+rheumatic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Decreased CD161+CD8+ T cells in the peripheral blood of patients suffering from rheumatic diseases.</a> Rheumatology. 45 (12), 1477-1484 (2006).</li>
<li>Miellot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+invariant+NK+T+cells+protects+against+experimental+rheumatoid+arthritis+by+an+IL-10-dependent+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Activation of invariant NK T cells protects against experimental rheumatoid arthritis by an IL-10-dependent pathway.</a> European Journal of Immunology. 35 (12), 3704-3713 (2005).</li>
<li>Miellot-Gafsou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+activation+of+invariant+natural+killer+T+cells+in+a+rheumatoid+arthritis+model+and+application+to+disease+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Early activation of invariant natural killer T cells in a rheumatoid arthritis model and application to disease treatment.</a> Immunology. 130 (2), 296-306 (2010).</li>
<li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+Rheumatic+Diseases%22%5BJournal%5D)">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li>
<li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+on+immunoregulation+of+iNKT+cells+in+RA+by+novel+synthetic+immunostimulator+CH1b%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Effects on immunoregulation of iNKT cells in RA by novel synthetic immunostimulator CH1b.</a> Chinese Journal of Immunology. 32 (02), 218-222 (2016).</li>
<li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+the+correlation+between+the+percentage+of+iNKT+cells+and+the+ratio+of+IFN-%CE%B3%2FIL-4+in+patients+with+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Microbiology+Immunology%22%5BJournal%5D)">Study of the correlation between the percentage of iNKT cells and the ratio of IFN-γ/IL-4 in patients with rheumatoid arthritis.</a> Chinese Journal of Microbiology Immunology. 35 (3), 213-218 (2015).</li>
<li>Sharif, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+natural+killer+T+cells+by+%CE%B1-galactosylceramide+treatment+prevents+the+onset+and+recurrence+of+autoimmune+Type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Activation of natural killer T cells by α-galactosylceramide treatment prevents the onset and recurrence of autoimmune Type 1 diabetes.</a> Nature Medicine. 7, 1057-1062 (2010).</li>
<li>Gapin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+invariant+natural+killer+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Development of invariant natural killer T cells.</a> Current Opinion in Immunology. 39, 68-74 (2016).</li>
<li>Kwon, D. I., Lee, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+Differentiation+Program+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immune+Network%22%5BJournal%5D)">Lineage Differentiation Program of Invariant Natural Killer T Cells.</a> Immune Network. 17 (6), (2017).</li>
<li>Thapa, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+differentiation+of+ROR-%CE%B3t+expressing+iNKT17+cells+is+orchestrated+by+Runx1%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The differentiation of ROR-γt expressing iNKT17 cells is orchestrated by Runx1.</a> Scientific Reports. 7 (1), 7018(2017).</li>
<li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis%3A+focuson+interferon-%CE%B3%5BTitle%5D)+AND+%22Interferon+Cytokine+Research%22%5BJournal%5D)">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focuson interferon-γ.</a> Interferon Cytokine Research. 31 (12), 917-926 (2011).</li>
<li>Van Haalen, H. G. M., Severens, J. L., Tran-Duy, A., Boonen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+cost-effectiveness+A+systematic+review+and+stepwise+approach+for+selecting+a+transferable+health+economic+evaluation+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacoeconomics%22%5BJournal%5D)">How cost-effectiveness A systematic review and stepwise approach for selecting a transferable health economic evaluation rheumatoid arthritis.</a> Pharmacoeconomics. 32 (5), 429-442 (2014).</li>
<li>Schubert, D., Maier, B., Morawietz, L., Krenn, V., Kamradt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunization+with+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+T+cell-dependent+peripheral+polyarthritis+in+genetically+unaltered+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunization with glucose-6-phosphate isomerase induces T cell-dependent peripheral polyarthritis in genetically unaltered mice.</a> Journal of Immunology. 172, 4503-4509 (2004).</li>
<li>Bockermann, R., Schubert, D., Kamradt, T., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+a+B-cell-dependent+chronic+arthritis+with+glucose-6-phosphate+isomerase%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Research%2C+Therapy%22%5BJournal%5D)">Induction of a B-cell-dependent chronic arthritis with glucose-6-phosphate isomerase.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 131613-131624 (2005).</li>
<li>Kamradt, T., Schubert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+and+clinical+implications+of+G6PI+in+experimental+models+of+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Research%2C+Therapy%22%5BJournal%5D)">The role and clinical implications of G6PI in experimental models of rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 20-28 (2005).</li>
<li>Horikoshi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Invariant+NKT+Cells+with+Glycolipid+Ligand+%CE%B1-Galactosylceramide+Ameliorates+Glucose-6-Phosphate+Isomerase+Peptide-Induced+Arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22PlosOne%22%5BJournal%5D)">Activation of Invariant NKT Cells with Glycolipid Ligand α-Galactosylceramide Ameliorates Glucose-6-Phosphate Isomerase Peptide-Induced Arthritis.</a> PlosOne. 7 (12), 51215(2012).</li>
<li>Zhang, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunization+with+mixed+peptides+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+rheumatoid+arthritis+in+DBA+%2F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Pathophysiology%22%5BJournal%5D)">Immunization with mixed peptides derived from glucose-6-phosphate isomerase induces rheumatoid arthritis in DBA /1 mice.</a> Chinese Journal of Pathophysiology. 32 (3), 569-576 (2016).</li>
<li>Motohashi, S., Nakayama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invariant+natural+killer+T+cell-based+immunotherapy+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Invariant natural killer T cell-based immunotherapy for cancer.</a> Immunotherapy. 1 (1), 73(2017).</li>
<li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+requirement+of+natural+killer+T-cells+in+tolerogenic+APCs-mediated+suppression+of+collagen-induced+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">The requirement of natural killer T-cells in tolerogenic APCs-mediated suppression of collagen-induced arthritis.</a> Experimental and Molecular Medicine. 42 (8), 547-554 (2010).</li>
<li>Luc, V. K., Lan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+Potential+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells+in+Autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Therapeutic Potential of Invariant Natural Killer T Cells in Autoimmunity.</a> Frontiers in Immunology. 9, 519-526 (2018).</li>
<li>Chiba, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+collagen-induced+arthritis+by+natural+killer+T+cell+activation+with+OCH%2C+a+sphingosine-truncated+analog+of+%CE%B1-galactosylceramide%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis%2C+Rheumatism%22%5BJournal%5D)">Suppression of collagen-induced arthritis by natural killer T cell activation with OCH, a sphingosine-truncated analog of α-galactosylceramide.</a> Arthritis, Rheumatism. 50 (1), 305-313 (2004).</li>
<li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+Rheumatic+Diseases%22%5BJournal%5D)">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li>
<li>Bruns, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunization+with+an+immunodominant+self-peptide+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+arthritis+in+DBA%2F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Research%2C+Therapy%22%5BJournal%5D)">Immunization with an immunodominant self-peptide derived from glucose-6-phosphate isomerase induces arthritis in DBA/1 mice.</a> Arthritis Research, Therapy. 11 (4), (2009).</li>
<li>Parietti, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rituximab+treatment+overcomes+reduction+of+regulatory+iNKT+cells+in+patients+with+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Rituximab treatment overcomes reduction of regulatory iNKT cells in patients with rheumatoid arthritis.</a> Clinical Immunology. 134 (3), 331-339 (2010).</li>
<li>Yoshida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+mechanism%28s%29+of+the+inhibition+of+disease+progression+by+combination+treatment+with+fingolimod+plus+pathogenic+antigen+in+a+glucose-6-phosphate+isomerase+peptide-induced+arthritis+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biological%2C+Pharmaceutical+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Functional mechanism(s) of the inhibition of disease progression by combination treatment with fingolimod plus pathogenic antigen in a glucose-6-phosphate isomerase peptide-induced arthritis mouse model.</a> Biological, Pharmaceutical Bulletin. 38 (8), 1120-1125 (2015).</li>
<li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+the+adoptive+immunotherapy+on+rheumatoid+arthritis+with+Thymus-derived+invariant+natural+killer+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Study of the adoptive immunotherapy on rheumatoid arthritis with Thymus-derived invariant natural killer T cells.</a> International Immunopharmacology. 67, 427-440 (2019).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir finansman veya çıkar çatışması beyan.

iNKT hücreleri doğuştan gelen ve adaptif bağışıklığı kapatan özel T hücreleridir ve esas olarak CD4++/CD8+ timositlerden geliştirilmiştir. iNKT hücreleri farklı immündüzenleyici fonksiyonlara sahiptir ve farklı sitokinlerin doğrudan temas ve salgılanması ile diğer bağışıklık hücreleri ile etkileşim23, dendritik hücreleri etkileyen (DC), makrofajlar, nötrofiller, B hücreleri, T hücreleri, ve NK hücre farklılaşması ve gelişimi 24<...

Romatoid artrit (RA) kronik, progresif invazivlik ile karakterize otoimmün bir hastalıktır 0.5-1% insidansı1,2. Altta yatan patogenez, CD4+IFN-γ+ ve CD4+IL-17A+ T hücrelerinin oranında ki artış ve CD4 + IL-4+ve CD4 +CD25+FoxP3+ T hücrelerinin azalması ile kendini gösteren otoreaktif CD4+ ve CD8+ T hücrelerinin anormal çoğalmasına bağlanır. Bu nedenle, inflamatuar sitokinlerin salgıları artar, ve aşırı inflamatuar reaksiyon vücudun bağışıklık sisteminin doğal denge ve tolerans fonksiyonu yok. Ayrıca, yardımcı T lenfosit (Th) 1 eklem nüfuz hücreleri inflamatuar yanıt ve eklem hasarı ağırlaştırmak. Bu nedenle, aşırı inflamatuar yanıt ın inhibisyonu ve bağışıklık toleransı ve bağışıklık dengesinin restorasyonu RAtedavisiiçinanahtar dır3 ,4.
iNKT hücreleri hem NK hücre li hem de T hücre fonksiyonlarına ve özelliklerine sahiptir. iNKT hücreleri sınırlı TCR β-zincir repertuvarları5 ile farklı, değişmez T hücre reseptörü (TCR) α-zincir barındırır ve büyük histokompatibilite kompleksi (MHC) sınıf I molekülü CD1d tarafından sunulan glikolipid antijeni tanır. Mitsuo ve ark.6 RA dahil olmak üzere birçok otoimmün hastalıkta çok sayıda iNKT hücresi ve fonksiyonel defekt saptandı. Aurore ve ark.7, iNKT hücrelerinin otoimmün toleransı korumada olumlu bir etkisi olduğunu ve iNKT hücrelerinin sayısı ve işlevi geri yüklendiğinde hastalığın hafiflediğini göstermiştir. Buna ek olarak, Miellot-Gafsou ve ark.8 iNKT hücrelerinin sadece hastalığı ortadan kılmış değil, aynı zamanda hastalığın ilerlemesini artırdığını bulundu. Bu çelişkili sonuçlar, iNKT hücrelerinin heterojen T hücreleri olduğunu ve farklı alt kümelerin işlevinin tersine çevrilebileceğini düşündürmektedir. RA bir klinik çalışmada, iNKT hücrelerinin sıklığı hastalık aktivitesi nin skoru ile ilişkili9. Sonuçlar ayrıca RA hastalarında iNKT sıklığının azaldığını, CD4+IFN-γ+ T hücre alt kümelerinin sayısının arttığını ve inflamatuar sitokinlerin IFN-γ ve TNF-α salgı düzeylerinin10,11arttığını doğruladı. Buna ek olarak, Şerif ve ark.12 tip 1 diyabet (T1D) araştırılmış ve inflamatuar sitokin IL-4 ekspresyonu upregulated iNKT hücrelerinin seçici infüzyon, bağışıklık toleransı muhafaza ve tip 1 diyabet gelişimini engelledi bulundu. Bu nedenle, spesifik iNKT hücrelerinin benimseyen infüzyonu veya iNKT hücrelerinin hedefli aktivasyonu RA hastalarında iNKT hücrelerinin düzeyini artırır, ra tedavisinde bir atılım olabilir.
Hücresel immünoterapi şu anda büyük ilgi ve yaygın kanser tedavisinde kullanılmaktadır. Ancak, iNKT hücreleri nadir, heterojen immünodüzenleyici hücrelerdir (toplam PBMC sayısının sadece %0.3'ü)13, bu da potansiyel klinik uygulamaları sınırlar. Bu hücreler esas olarak üç alt popülasyona ayrılır: 1) promiyelositik lösemi çinko-parmak proteini (PLZF) ve T-box transkripsiyon faktörü (T-bet) yüksek bir ekspresyona ya da iNKT1 hücreleri; 2) PLZF ve GATA bağlayıcı protein 3 (GATA3) ara ekspresyonu ile iNKT2 hücreleri; 3) PLZF ve retinoid ile ilgili yetim nükleer reseptör düşük ekspresyonu ile iNKT17 hücreleri (ROR)-γt bu salgıif IFN-γ, IL-4, ve IL-1714. Aktive iNKT hücreleri th1 salgılar, Th2, ve Th17 benzeri sitokinler, hangi iNKT hücrelerinin farklı immünomodülatör etkilerini belirlemek15. iNKT hücrelerinin çeşitli alt popülasyonlarının spesifik aktivasyonunun immünomodülatör ve immünoterapötik etkileri farklıdır. Bu nedenle, vücudun bağışıklık yanıtını düzenleyen anti-inflamatuar fonksiyonlar ile iNKT hücrelerinin belirli fenotiplerin seçimi (özellikle iNKT2) RA bağışıklık dengesizliği ve bağışıklık bozuklukları düzeltebilirsiniz.
İdeal bir hayvan modelinin oluşturulması RA patogenezinin tedavisi ve incelenmesi açısından büyük önem eve sahiptir. Şu anda, en sık kullanılan ve olgun hayvan modelleri kollajen kaynaklı artrit dahil, adjuvan artrit, zimozan kaynaklı artrit, ve polisakkarit kaynaklı artrit16–17. Ancak, tamamen insan RA tüm özelliklerini simüle edebilirsiniz hiçbir model yoktur. Tip II kollajen kaynaklı artrit (CIA) klasik artrit modelidir. CIA tip II kollajen spesifik monoklonal antikorlar ile farelerin aşılanması ile indüklenen, Bu hastalık modelinin antikor bağımlılığı yansıtan. Benurs ve ark. duyarlı fare suşlarında periferik simetrik poliartrit indükler glukoz-6-fosfat izopir (G6PI), sistemik bağışıklık yanıtı olan bir model tarif18,19. Bu modelde, artrit gelişimi T hücrelerine bağlıdır, B hücreleri, ve doğuştan bağışıklık18,19,20. Horikoshi21, DBA/1 farelerinin G6PI polipeptid parçaları ile bağışıklanması sonucu ortaya çıkan RA modellerinin, CIA modellerine göre CD4+ T hücreleri ve sitokinler (yani IL-6 ve TNF-α) açısından insan RA'sına daha çok benzediğini buldu. TCR tanıma yerinde uyarıcı etkiyi artırmak için, Ra fare modelini oluşturmak için DBA/1 fareleri aşılamak için G6PI'nin (hGPI325-339 ve hGPI469-483) karışık polipeptit parçaları kullanıldı. HGPI325-339 ve hGPI469-483 I-A q-kısıtlı T hücre yanıtları için immündominant olduğu için bu yaklaşımın başarı oranı yüksek olabilir. Bu nedenle, bu model RA hastalarında CD4+ T hücrelerinin aşırı çoğalmasını ve iNKT hücre defektlerini simüle edebilir22. RA immünpatolojisinin temel araştırmaları daha derinlemesine araştırmamızın temelini attı.

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 647 Fare Anti-PLZF</td><td>BD</td><td>563490</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>Anti-PE Mikro Boncuklar</td><td>Miltenyi</td><td>130-048-801</td><td>Almanya</td></tr><tr><td>Sütunları</td><td>Miltenyi</td><td>MS</td><td>Almanya</td></tr><tr><td>Kriyojenik Santrifüj</td><td>Beckman</td><td>Allegra&reg; X-15R</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>DiR</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D12731</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>Gömme Merkezi</td><td>Tianjin Havacılık Elektromekanik Co., Ltd.</td><td>BMJ-1</td><td>Çin</td></tr>: <tr><td>FITC, Hamster, Anti-Fare, TCR ve beta; Zincir</td><td>BD</td><td>553170</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>Akış sitometresi</td><td>BD</td><td>Accuri C6</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>Freund'un tam adjuvanı</td><td>Sigma</td><td>F5881</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML)</td><td>Karebay Biochem</td><td>18062202</td><td>Çin</td></tr><tr><td>hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT)</td><td>Karebay Biochem</td><td>18062203</td><td>Çin</td></tr><tr><td>In Vivo Görüntüleme Sistemi</td><td>PerkinElmer</td><td>kumpas IVIS lumina II</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>İyonomisin Kalsiyum</td><td>Cayman</td><td>10004974</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>KRN7000</td><td>AdipoGen</td><td>AG-CN2-0013</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>Fare CD1d Tetramer-PE</td><td>MBL</td><td>TS-MCD-1</td><td>Japonya</td></tr><tr><td>Fare percoll</td><td>Solarbio</td><td>P8620</td><td>Çin</td></tr><tr><td>Optik Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>Olympus-II</td><td>Japonya</td></tr><tr><td>PerCP-CyTM5.5 Fare anti-ROR-&upsih; t</td><td>BD</td><td>562683</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>PerCP-CyTM5.5 Fare anti-T-bet</td><td>BD</td><td>561316</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>Boğmaca toksini</td><td>Sigma</td><td>P7208</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>forbol esterleri</td><td>Cayman</td><td>10008014</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>Kırmızı Kan Hücresi Lizis Tamponu</td><td>BD</td><td>555899</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Biyolojik Endüstriler</td><td>01-100-1ACS</td><td>İsrail</td></tr><tr><td>Th1 / Th2 / Th17 sitokin kiti</td><td>BD</td><td>560485</td><td>Amerika</td></tr><tr><td>Ultramikrotom</td><td>Leica Leica</td><td>EM UC6</td><td>Almanya</td></tr></tbody></table>

glukoz-6-fosfat İzomazlarında (g6pi)-indüklenen ra farelerde inkt hücrelerinin benimseyici İmmünoterapisi

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Romatoid artrit (RA) karmaşık kronik inflamatuar otoimmün bir hastalıktır. Hastalığın patogenezi değişmez doğal katil T (iNKT) hücreleri ile ilişkilidir. Aktif RA'lı hastalarda daha az iNKT hücresi, kusurlu hücre fonksiyonu ve Th1'in aşırı polarizasyonu mevcuttur. Bu çalışmada hGPI325-339 ve hGPI469-483 peptidlerinin karışımı kullanılarak RA hayvan modeli oluşturulmuştur. in vivo indüksiyon ve in vitro saflaştırma ile elde edilen iNKT hücreleri, evlat edinen immünoterapi için RA farelere infüzyon uymaktadır. In vivo görüntüleme sistemi (IVIS) takibi, iNKT hücrelerinin esas olarak dalak ve karaciğerde dağıtıldığını ortaya çıkardı. Hücre tedavisinden sonraki 12 gün, hastalığın ilerlemesi önemli ölçüde yavaşladı, klinik semptomlar hafifletildi, timustaki iNKT hücrelerinin bolluğu arttı, timustaki iNKT1 oranı azaldı ve TNF-α, IFN-γ ve IL-6 düzeyleri serum azalmış. iNKT hücrelerinin benimseyen immünoterapi bağışıklık hücrelerinin dengesini geri ve vücudun aşırı iltihabı düzeltti.

Modelleme sonrası artrit indeks skoru ve pençe kalınlığı artmıştır. Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, RA model grubunun ayak başları modellemeden 6 gün sonra, kademeli şiddetlenme ile kırmızı şişlik göstermeye başladı. 14 gün sonra, ayak bileği ekleminde kırmızı şişlik doruğa ulaştı, ardından kademeli rahatlama. Pençenin kalınlığı benzer şekilde değişmiştir (P &lt; 0.05) (Şekil 1).
Modelleme sonrası inflamatuar hücre infiltrasyonu önemli ölçüde artm...

Bu protokol, CD4+ T hücreleri ve sitokinlerde insan romatoid artritine daha yakın romatoid artrit modelleri oluşturmak için G6PI karışık peptidler kullanır. Yüksek saflıkta değişmez doğal katil T hücreleri (özellikle iNKT2) belirli fenotip ler ve fonksiyonlar ile in vivo indüksiyon ve in vitro saflaştırma ile benimseyici immünoterapi elde edildi.

Glukoz-6-Fosfat İzomazlarında (G6PI)-Indüklenen RA Farelerde iNKT Hücrelerinin Benimseyici İmmünoterapisi

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Protokolümüz bir RA modeli oluşturmak için bir yöntem açıklar. Başarı oranı yüzde 93'ün üzerindedir ve patogenezi T hücrelerine, B hücrelerine ve doğuştan gelen bağışıklığa bağlıdır, bu da araştırmacıların RA patogenezini küresel immün perspektiften daha iyi incelemelerine olanak sağlar. Daha sonra tedavi için immünomodülatör etkileri olan INKT hücreleri kullanırız.INKT hücreleri INKT hücrelerinin klinik uygulaması için temel veri desteği sağlayan ve INKT hücrelerinin klinik uygulama değerini gerçekten patlatan in vivo giriş ile tedavi üzerinde iyi bir etkiye sahiptir. Bu teknolojinin en büyük avantajı, kullanımı kolay ve kolay kopyalama olmasıdır. Prosedürü gösteren Chen Shengde, Gao Xiang ve Zhang Jingnan, benim laboratuvar dan yüksek lisans öğrencisi olacaktır.Başlamak için, hem HGPI325 339 ve HGPI469 483 parçaları 1,75 miligram ağırlığında ve 4 santigrat derece üçlü distile su 5,25 mililitre onları eritin. Komple Freund'un Adjuvan'ına 50 derecelik su banyosunda çözün. Başka bir 10 mililitre santrifüj tüp içine 5,25 mililitre çizin ve kullanım için soğutun.HG6PI çözeltisi ve Komple Freund'un Adjuvan çözeltisinin karışımını iki cam şırıngalı yapay bir emülsifikasyon ünitesine bağ

adoptive-immunotherapy-inkt-cells-glucose-6-phosphate-isomerase-g6pi

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) CCR7-efektör bellek T (TEM) lenfositlerin aracılık ettiği inflamatuar bir reaksiyon. Burada, antijen spesifik TEM hücreleri aktive Lewis sıçanlarda evlatlık DTH neden ve inflamatuar yanıt izlemek nasıl göstermektedir.

Sıçanlarda Kabul edilmiş Gecikmeli-Tipi aşırı duyarlılık indüksiyonu ve İzleme

Indüklenmiş pluripotent kök (iPS) hücrelerden T lenfositlerin Nesil T hücre tabanlı immünoterapi için embriyonik kök hücreler kullanarak alternatif bir yaklaşım verir. Yöntem kullanılarak ya da...

T Lenfositler doğru İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Yönetmen Farklılaşma

Bu videoda, iNKT hücreleri olarak da bilinen değişmez doğal öldürücü T hücrelerinin izole edilmesi için bir yöntem gösterilmektedir. Prosedür, dalaktaki iNKT hücrelerinin aktivasyonunu ve çoğalmasını uyarmak için bir fareye sentetik bir glikolipid enjekte edilmesiyle başlar. Daha sonra, dalaktan tek hücreli süspansiyonlar hazırlanır ve floroforlarla etiketlenmiş iNKT hücre tanıyan komplekslerle inkübe edilir, ardından iNKT hücrelerini izole etmek için manyetik boncuk bazlı ayırma yapılır.

Bir Fare Modelinden Değişmez Doğal Öldürücü T Hücrelerinin İzole Edilmesi

Bu video, farelerde otoimmün artrit için hücre bazlı bir tedaviyi göstermektedir. Ovalbümin spesifik reseptörlerini eksprese eden iPSC'den türetilmiş T düzenleyici hücrelere, bir adjuvan içinde emülsifiye edilmiş metillenmiş sığır serum albümini (mBSA) enjekte edilir. Murin antijen sunan hücreler (APC'ler) mBSA'yı işler ve T hücrelerine sunar, bu da T hücresi aktivasyonunu ve diz ekleminin sinovyal zarına göçü tetikler. Sonraki enjeksiyonlar sol dizde tek başına mBSA'yı ve sağ dizde mBSA ve...

Bir Murin Modelinde Otoimmün Artrit için Hücre Bazlı Bir Tedavi

Bu videoda, obez olmayan diyabetik immün yetmezliği olan bir fareye nakledilen lusiferaz eksprese eden beta hücrelerini görselleştirmek için görüntüleme tabanlı bir yöntem gösterilmektedir. Diyabetik bir fareden splenositlerin eklenmesi, substrat girişinden sonra azalan lüminesans ile görsel olarak doğrulanan ilerleyici beta hücre yıkımına yol açar.

Diyabetik Splenositlerle Mücadele Edilen İmmün Yetmezliği Olan Bir Farede Transgenik Beta Hücrelerinin Görüntülenmesi

Biz adacık antigen spesifik primer CD4 + T-hücrelerinin adoptif transfer yoluyla, iki hafta içinde farenin tip 1 diyabet (tip 1 diyabetin) ikna etmek için tekrarlanabilir bir yöntem sağlar.

Diyabetojenik CD4 Kabul edilmiş Transfer ile Farelerde Hızlandırılmış Tip 1 Diyabet İndüksiyon + T Hücreleri

Burada, bir murin modelinde otoimmün artritin immünoterapisi için indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden (iPSC'ler) fonksiyonel antijene (Ag) özgü düzenleyici T hücreleri (Treg'ler) geliştirmek için bir yöntem sunuyoruz.

Otoimmünite karşı Kök Hücre türetilmiş antijen-özgü düzenleyici T hücrelerinin gelişimini

Burada, orthotopic insan birincil beyin tümörü taşıyan immünyetmezligi farelerde hazırlık ve allojenik insan lenfosit stereotaksik yönetim için bir iletişim kuralı mevcut. Bu çalışmada bir kanıtı-of-concept fizibilite ve hücresel immunotherapies intrabrain teslim antitümör etkinliği için sağlar.

Orthotopic insan Glioblastoma Multiforme Xenografts fare modelleri sitotoksik bağışıklık hücrelerinin stereotaksik evlat edinen Transfer

İnsan olmayan primat (NHP), anatomik ve genetik benzerlikler nedeniyle insan retina hücresel terapötiklerini incelemek için ideal bir modeldir. Bu makalede, NHP gözündeki retina pigment epitel hücrelerinin submaküler nakli için bir yöntem ve makula manipülasyonu ile ilişkili intraoperatif komplikasyonları önleme stratejileri açıklanmaktadır.

Dejeneratif Retina Hastalıkları için İnsan Dışı Primat Modelinde Retina Pigment Epitel Transplantasyonu

Bu protokol, spontan diyabetik NOD farelerinden saflaştırılmış splenositlerle mücadele eden obez olmayan diyabetik (NOD)-şiddetli kombine immün yetmezlikli farelerde NIT-1 hücrelerinin nakli ve görüntülenmesi için basit ve minimal invaziv bir yöntemi tanımlamaktadır.

Farelerde Otoimmün Diyabetin Evlat Edinilen Transfer Modelinde Greft Sağkalımının Biyolüminesan İzlenmesi

Burada, SKG farelerinden CD4 + T hücrelerinin evlat edinilmiş transferi yoluyla bir romatoid artrit (RA) fare modeli oluşturan, immünolojik mekanizmaları, patolojik ilerlemeyi ve RA için yeni tedavilerin geliştirilmesini araştırmak için hızlı ve güvenilir bir deneysel araç sağlayan bir protokol sunuyoruz.

Farelerde Romatoid Artritin Evlat Edinen Bir Transfer Modeli

Öğrenin, farelerde romatoid artrit modeli oluşturma ve iNKT hücreleriyle benimseyici immünoterapi uygulama yöntemini. Bu protokol, immünoloji ve hücre tedavisi araştırmaları için temel oluşturur.

Glukoz-6-Fosfat İzomazlarında (G6PI)-Indüklenen RA Farelerde iNKT Hücrelerinin Benimseyici İmmünoterapisi

Daha fazla video keşfet