Histolojik Muayene ve İmmünohistokimya için İntegral Göz Yüzey Dokusu Elde Etmek Için Bozulmamış Göz Küresinin İzolasyon
20 Ekim 2019
Bu protokol, fare göz küresinin göz kapağı, göz yüzeyi, anterior ve posterior segmentleri ile nispeten sağlam konumda izolasyonu için bir yöntem açıklanmaktadır.
Laboratuvarımız göz gelişimi ve hastalıklar ağını ele alıyor. Bu protokol, kafatasını ve orbital kemikleri parçalanmış fare kafasından sırayla çıkarmak için bir yöntem tanımlar. Göz kapakları, göz yüzeyi, lens ve retinayı tek parça halinde bir arada bırakmak. Protokol, oküler yüzey didaktikleri ile ilgilenen göz doktorları için faydalı olacak. Ben Dianlel Guo, yüz kemikleri incelerken, göz küresinin zarar önlemek için çalışırken olası bir mücadele ile tekniği anlatmak için. Bu diseksiyon maddesinin en büyük avantajı, oküler yüzey epitel tabakasının bütünlüğünün iyi korunmuş olması ve oküler yüzeyin farklı kısımlarının histoloji veya immünboyama ile tek bir bölümde incelenebilmiş olmasıdır. Yumuşak dokuların tüm küçük kemikleri ve enkaz kesmek için emin olun. Sebep, aksi takdirde doku bölümünde yara izi neden olacaktır. Fare ötenazi sonra, baş kesmek için düz makas bir çift kullanın ve burun için intraparietal kemik rostrally başlayan sagittal orta hat boyunca ikiye bölün. Temiz bir petri kabına ikiye bölünmüş baş her yarısı yerleştirin ve çene ve dil kesmek için keskin makas kullanın. Optik kiazma yerinden önce beyni keserek optik siniri serbest bırak. Ve kafatası duvarına bağlı koku ampulü de dahil olmak üzere tüm beyin dokularını çıkarın. Şimdi kalan tüm dokular tüm kafatası ve orbital kemikler göz küresi ile ilişkili olacaktır. Herhangi bir kan ve saç enkaz temizlemek için PBS ile kalan parçaları yıkayın. %4 paraformaldehit içeren 50 mililitrelik bir tüpe yerleştirerek ve oda sıcaklığında döndürerek dokuları önceden düzeltin. Önekasyon tamamlandıktan sonra, kırık kılları ve fiksatifleri ortadan kaldırmak için pbs'de parçalanmış başı üç kez hızlı bir şekilde yıkayın. 10 santimetre petri kabına doku yerleştirin ve metin protokolü şekil bir belirtilen düzlemler boyunca üç parçaya kafatası kesti. Göz küresi ve soket etmoid altında kafatasının orta kısmında gizlidir, frontal, ve maksiller kemikler. Etmoid kemik soymak ve tamamen frontal ve maksiller kemikleri ortaya çıkarmak için dört numaralı düz forceps iki çift kullanın. Sonra, coğrafi olarak kafatası yüzeyini dört alana bölün. Maksiller ve frontal kemikleri sırayla çıkarmak için her alana yatay olarak kavisli forceps ucu ekleyin. Bundan sonra altta yatan gözyaşı ve şah damarı açığa çıkacaktır. Göz küresi çevreleyen iki kemik ve ilişkili deri altı kasları ve yağları çıkarın. Doku hacmini azaltmak ve katıştırma yaparken doku yönlendirmekolaylaştırmak için küçük, kare şeklinde blok içine bağlı göz kapakları ve deri ile göz küresi kırpın. Göz küresini ve ilişkili dokuları %4 paraformaldehite geri yerleştirin ve gece boyunca 4'te düzeltmeye devam edin
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu protokol, anatomik çalışmalar için anatomi koruyarak, mouse göz küresini göz kapağı ve oküler yüzeyi bozulmamış bir şekilde izole etme yöntemine odaklanmaktadır. Bu teknik, özellikle hassas dokulara zarar vermeden oküler yüzeyleri incelemek isteyen oftalmologlar için faydalıdır.
Temel Çalışma Bileşenleri
Araştırma Alanı
- Oküler Gelişim
- Oküler Hastalıklar
- Histoloji ve İmmün boyama
Arka Plan
- Oküler yüzey bütünlüğünü korumanın önemi
- Fare göz kürelerinin hasar vermeden diseke edilmesindeki zorluklar
- Oftalmoloji eğitimindeki uygulamalar
Kullanılan Yöntemler
- Kafatası ve orbital kemiklerin ardışık olarak çıkarılması
- Fare modeli
- Doku fiksasyonu için paraformaldehit kullanımı
Temel Sonuçlar
- Protokol, daha sonraki incelemeler için oküler yüzey epitel tabakasını korur
- Histolojik veya immün boyama analizine olanak tanır
- Oküler diseksiyon için etkili teknikleri gösterir
Sonuçlar
- Çalışma, bitişik yapılarıyla birlikte fare göz küresinin izole edilmesi için güvenilir bir yöntemi sergilemektedir
- Oküler sağlık ve hastalıklarla ilgili çalışmalar için önemlidir
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama Alanları
Oküler yüzey epitelyal tabakasının bütünlüğünün korunması; palpebral konjonktiva, bulbar konjonktiva ve kornea epitelyumunun hastalık modellerinde paralel olarak değerlendirilmesine olanak tanır. Bu yaklaşım, birbirine bağlı dokulardaki patojenik değişikliklerin eş zamanlı değerlendirilmesine izin vererek mekanistik risklerin azaltılmasını destekler. Histolojik ve immün boyama analizleri için bozulmamış doku mimarisi gerektiren preklinik çalışmalarda öngörü güvenilirliğini artırır.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Oküler yüzey epitel tabakası içindeki uzamsal ilişkileri koruyarak terapötik hipotezlerin sorgulanmasına olanak tanır.
- Operasyonel Değer: Hastalıkla ilişkili değişikliklerin paralel histolojik incelemesi için bozulmamış doku hazırlığı sağlayarak biyolojik risklerin azaltılmasını kolaylaştırır.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Bilimsel Değer: Alt aşamadaki immünboyama ve histolojik analizler için oküler yüzey mimarisi korunmuş, valide edilmiş biyolojik sistemler hazırlar.
- Operasyonel Değer: Diseksiyon sırasında doku distorsiyonunu minimize ederek analiz standardizasyonunu destekler ve kesitler arasındaki tekrarlanabilirliği artırır.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Bilimsel Değer: Hastalıkla ilişkili sistem bütünlüğünü koruyarak, birbirine bağlı oküler yüzey bölgeleri arasında translasyonel biyobelirteç uyumunu sağlar.
- Operasyonel Değer: Tutarlı kesit alma ve analiz için doku morfolojisini koruyarak, keşif aşamasından preklinik doğrulamaya kadar sürekliliği sağlar.
İşleme Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu yöntem, hipotez testlerini ve yolak açıklığının netleştirilmesini destekleyen histolojik ve immün boyama çıktıları için sağlam doku hazırlığına olanak tanıyarak keşif biyolojisi iş akışlarına entegre olur.
- Keşif Biyolojisi: Konjunktiva ve kornea bölgelerinin paralel incelemesi için epitel tabaka bütünlüğünü koruyarak hipotez testlerini destekler.
- Tarama: Histolojik kesitlerdeki değişkenliği azaltan tekrarlanabilir doku izolasyonu aracılığıyla assay hazırlık sürecini iyileştirir.
- Analitikler: Bozulmamış doku kesitleri üzerinde immünboyama ve histoloji yoluyla kantitatif bağımlı değişken ölçümlerine olanak tanır.
- Translasyonel Araştırma: Tutarlı patolojik değerlendirme için oküler yüzey mimarisini koruyarak, keşif aşamasını preklinik sürekliliğe bağlar.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Birden fazla hastalık modeli ve tarama kampanyası genelinde oküler yüzey hazırlığı için yeniden kullanılabilir bir yetkinlik oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Çoklu oküler yüzey kompartmanlarının eş zamanlı analizine olanak tanıyan korunmuş doku mimarisi sayesinde öngörücü güvenilirlik.
- Operasyonel Değer: Doku hasarını ve kesit artefaktlarını minimize eden tutarlı bir diseksiyon protokolü aracılığıyla standardizasyon ve tekrarlanabilirlik.
- Stratejik Değer: Bozulmamış doku değerlendirmesi yoluyla oküler hastalık modellerindeki mekanistik belirsizliği azaltarak iyileştirilmiş karar verme süreçleri.
- Portföy Etkisi: Bozulmamış oküler yüzey preparatlarından elde edilen güvenilir histolojik ve immünboyama verileri ile riskten arındırılmış önceliklendirme.
Uygulama Hususları
- Kemik çıkarma sırasında doku hasarını önlemek için mikrocerrahi diseksiyon tekniklerinde uzmanlık gerektirir.
- Kafatası ve orbital kemiklerin yumuşak dokulardan hassas bir şekilde ayrılması için keskin makaslara ve ince forseplere bağımlıdır.
- Kesit alma işlemi için doku bütünlüğünü korumak amacıyla paraformaldehit kullanan standardize fiksasyon protokollerini gerektirir.
- Farklı model sistemlere veya gelişim aşamalarına uygulandığında adaptasyon değerlendirmeleri gerektirir.
- Pratik sınırlama: prosedürün etkinliği, kesit alma artefaktlarını önlemek için kemik kalıntılarının tamamen temizlenmesine bağlıdır.
