Name: Histolojik Muayene ve İmmünohistokimya için İntegral Göz Yüzey Dokusu Elde Etmek Için Bozulmamış Göz Küresinin İzolasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 15 s
Description: Keşfedin, fare göz küresini göz kapağı ve oküler yüzey dokusu bozulmadan izole etme yöntemini. Histolojik muayene ve immünohistokimya için oküler yüzey epitelyal tabakasının bütünlüğünü koruyan bu teknik, oftalmologlar için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar makalenin eleştirel okuma için Prof Rong Ju teşekkür ve teknik yardım için tüm laboratuvar üyeleri. Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'nın (NSFC: 31571077; Pekin, Çin), Guangzhou Şehir Bilimleri ve Teknolojileri Yenilik Projesi (201707020009; Guangzhou, Guangdong Eyaleti, Çin), Sun Yat-sen Üniversitesi'nden "100 Kişi Planı"(8300-18821104; Guangzhou, Guangdong Eyaleti, Çin) ve Zhongshan Oftalmoloji Devlet Anahtar Laboratuvarı araştırma finansmanı (303060202400339; Guangzhou, Guangdong Eyaleti, Çin).

Farelerin kullanımı ile ilgili tüm prosedürler Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi, Zhongshan Oftalmic Merkezi tarafından onaylandı ve Oftalmik ve Vizyon Araştırma Hayvanların Kullanımı için ARVO Bildirimi'ne bağlı.
1. Göz küresinin sağlam göz yüzeyi ve göz kapakları ile diseksiyonu
<ol><li>Kafasını kes.<ol>
<li>Ötanazi sonrası gün 10 (P10) ve P28 fareler (fare suşları için Malzemeler Tablosu bakınız) servikal çıkış tarafından, keskin makas bir çift tarafından boyun kapalı baş kesti.</li>
		<li>Buruna interparietal kemik rostrally başlayan sagittal orta hat boyunca düz makas bir çift ile bisect baş (Şekil 1A,B). NOT: Kafatası kemiği fare yaşlanma ile sertleşir, mümkün olduğunca orta hat boyunca kesme makas tutmak için dikkatli olun.</li>
		<li>Temiz bir Petri kabına ikiye bölünmüş baş Her yarısı yerleştirin, çene ve dil ilk keskin makas kullanarak kesti. Optik kiazma yeri önce beyin keserek optik sinir serbest, ve kafatası duvarına bağlı koku ampul dahil olmak üzere tüm beyin dokuları kaldırın.</li>
		<li>Şimdi kalan dokular göz küresi ile ilişkili tüm kafatası / orbital kemikler e sahip olacaktır (Şekil 1C,D). Kan ve saç enkaz temizlemek için PBS ile kalan kısmı yıkayın.</li>
		<li>Oda sıcaklığında (RT) 50 mL konik tüpte %4 paraformaldehit (PFA, fosfat tamponlu salin [PBS], pH 7.4) ile önek dokular. Yaklaşık fiksasyon süresi aşağıdaki gibidir: ~10 dk P0 için P7; ~ 20 dk P8 p28 için; ve ~ 30 min P29 ve daha büyük için. NOT: Önekasyon, doku sertliği sunarak sonraki diseksiyonu kolaylaştırır. Ayrıca, önekasyon diseksiyon tamamlanmadan önce çok uzun süre taze doku unfixed bırakarak önler. DİkKAT: PFA tehlikelidir ve dikkatli kullanılmalıdır.</li>
	</ol></li>
	<li>Kafatası/orbital kemikleri çıkarın.<ol>
<li>Önekasyondan sonra, daha fazla diseksiyona devam etmek için kırık kılları ve fiksatifleri ortadan kaldırmak için pbs'de parçalanmış başı üç kez hızlıca yıkayın. DİkKAT: Diseksiyon sırasında fiksatiflere maruz kalmak sağlığa zararlı olabilir.</li>
		<li>10 cm Petri çanak doku yerleştirin, Şekil 1D, Ebelirtilen düzlemler boyunca üç parçaya kafatası kesti. Soketteki göz küresi etmoid, frontal ve maksiller kemiklerin altında kafatasının orta kısmında gizlidir(Şekil 1D,E).</li>
		<li>Frontal ve maksiller kemikleri tamamen ortaya çıkarmak için etmoid kemiği soymak için 4 numaralı düz forceps iki çift kullanın(Şekil 1F).</li>
		<li>Coğrafi olarak kafatası yüzeyini (maksiller ve frontal kemikler dahil) 4 alana(Şekil 1F)bölün. Maksiller ve frontal kemikleri sırayla çıkarmak için eğri forceps ucunu yatay olarak her alana yerleştirin (Şekil 1F). NOT: Maksiller kemiklerin hepsi aynı anda çıkarılamaz. Sabırla parça parça inceleyin. Frontal kemik doğrudan yumuşak bağ dokuları aracılığıyla göz küresine bağlıdır. Göz küresini germeve konjonktivaya zarar vermesini önlemek için göz küresinden çıkarırken dikkatli olun.</li>
		<li>Kısmi maksiller kemik ve tüm frontal kemik çıkarıldıktan sonra altta yatan lakrimal ve jugal kemikler ortaya çıkar (Şekil 1G). İki kemiği ve göz küresini çevreleyen ilişkili deri altı kasları ve yağları çıkarın, doku hacmini azaltmak ve katıştırma yaparken dokuyu yönlendirmeyi kolaylaştırmak için ekli göz kapakları ve deri ile göz küresini küçük bir kare şeklinde ki bloğa bökmek (Şekil 1 H).</li>
		<li>Göz küresini ve ilişkili dokuları %4 PFA'ya geri yerleştirin ve gece boyunca 4 °C'de düzeltmeye devam edin. Sabit doku% 0.02 NaN3ilave si ile PBS 4 ° C en az bir ay boyunca korunabilir. Alternatif olarak, hemen histolojik analize geçin. NOT: Doku daha uzun süre saklanması gerekiyorsa, kolayca% 70 etanol saklanabilir.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Histolojik analiz
<ol><li>Parafin kesiti ve hematoksilin ve eozin (H&E) boyama<ol>
<li>Parafin katıştırma ve kesit yapmak için başka bir yerde9 açıklanan standart protokolü izleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>İmmünohistokimya (IHC)<ol>
<li>Parafin kesitlerini ksilen ile dewax ve alkol serileri ile rehidrat (100%, %95, %80) distile suya (dH2O).</li>
		<li>0,01 M sitrik asit tampon (trisodyum sitrat 3 g, 0.4 g sitrik asit 1 L çift distile H2O) düşük güç (120 W) ile bir cam slayt kavanozda doku slaytları mikrodalga tedavi ile antijen alma gerçekleştirin. Enerji aralıklı olarak toplam 5-10 dakika boyunca her aralıkta yaklaşık 2 dakika sürmelidir. NOT: Yüksek güçlü mikrodalga veya tutarlı ısıtma slayt doku bölümlerinin ayrılmasına yol açacaktır.</li>
		<li>Cam kavanozdan slaytları seçin, yüz dokularını kullanarak her bölümü çevreleyen artık sıvıyı dikkatlice silin ve bir histoloji kutusundaki slayt rafına yerleştirin. Su geçirmez histolojik kalem ile her bölümün etrafında bir kare çizin. Her bir karenin üzerine 100 μL bloke tamponu (1x PBS'de %0,1 triton X-100 ve %10 eşek serumu) yerleştirin ve RT'de 30 dakika kuluçkaya yatırın.</li>
		<li>Engelleme çözeltisini vakumla dikkatlice çıkarın, tamponu bloke ederek istenilen seyreltme ile birincil antikor (Malzemeler Tablosu'nabakın) ekleyin ve slaytları 4 °C'de 24 saat veya daha uzun süre kuluçkaya yatırmaya devam edin. NOT: IHC için kullanılan her birincil antikor için konsantrasyon değişir ve pilot deneylerde test edilmesi gerekir.</li>
		<li>Doku slaytlarını PBST ile yıkayın (PBS'de %0.1 Triton) her biri 10 dakika boyunca üç kez. İkincil antikor kullanarak adım 2.2.4 tekrarlayın (Malzeme Tablosubakınız) ile birlikte 4',6-diamidino-2-fenilindole (DAPI) engelleme tampon yerine. Oda sıcaklığında (RT) en az 4 saat veya daha uzun süre kuluçkaya yatın.</li>
		<li>Sekonder antikor çıkarın, PBST çözeltisi ile doku bölümleri üç kez yıkayın, her biri için 10 dakika, sonra başka bir 5 dakika için temiz PBS ile yıkayın.</li>
		<li>Doku kesitlerini çevreleyen pbs artıklarını silin, montaj ortamına sahip bölümlere kapak lar monte edin. Görüntü elde etmek için floresan mikroskopi yapın (Bkz. Malzemeler Tablosu).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Swamynathan, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+surface+development+and+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Ocular surface development and gene expression.</a> Journal of Ophthalmology. 2013, (2013).</li>
<li>Arita, R., Fukuoka, S., Morishige, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+Morphology+of+the+Lipid+Layer+of+the+Tear+Film%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Functional Morphology of the Lipid Layer of the Tear Film.</a> Cornea. 36 Suppl 1, S60-S66 (2017).</li>
<li>Guo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+surface+pathogenesis+associated+with+precocious+eyelid+opening+and+necrotic+autologous+tissue+in+mouse+with+disruption+of+Prickle+1+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Ocular surface pathogenesis associated with precocious eyelid opening and necrotic autologous tissue in mouse with disruption of Prickle 1 gene.</a> Experimental Eye Research. 180, 208-225 (2018).</li>
<li>Knop, E., Knop, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+immunology+of+the+ocular+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Immunology+and+Allergy%22%5BJournal%5D)">Anatomy and immunology of the ocular surface.</a> Chemical Immunology and Allergy. 92, 36-49 (2007).</li>
<li>Mizoguchi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+surface+alkali+injury+damages+meibomian+glands+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">Ocular surface alkali injury damages meibomian glands in mice.</a> The Ocular Surface. 15 (4), 713-722 (2017).</li>
<li>Gipson, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Goblet+cells+of+the+conjunctiva%3A+A+review+of+recent+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Goblet cells of the conjunctiva: A review of recent findings.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 54, 49-63 (2016).</li>
<li>Nowell, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+inflammation+imposes+aberrant+cell+fate+in+regenerating+epithelia+through+mechanotransduction%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Chronic inflammation imposes aberrant cell fate in regenerating epithelia through mechanotransduction.</a> Nature Cell Biology. 18 (2), 168-180 (2016).</li>
<li>Nagata, M., Ohashi, Y., Ozawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+histochemical+study+of+the+development+of+premaxilla+and+maxilla+during+secondary+palate+formation+in+the+mouse+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Histology+and+Cytology%22%5BJournal%5D)">A histochemical study of the development of premaxilla and maxilla during secondary palate formation in the mouse embryo.</a> Archives of Histology and Cytology. 54 (3), 267-278 (1991).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+MEK+kinase+1+in+TGF-beta%2Factivin-induced+epithelium+movement+and+embryonic+eyelid+closure%5BTitle%5D)+AND+%22The+Embo+Journal%22%5BJournal%5D)">A role for MEK kinase 1 in TGF-beta/activin-induced epithelium movement and embryonic eyelid closure.</a> The Embo Journal. 22 (17), 4443-4454 (2003).</li>
<li>Sharov, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noggin+overexpression+inhibits+eyelid+opening+by+altering+epidermal+apoptosis+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Embo+Journal%22%5BJournal%5D)">Noggin overexpression inhibits eyelid opening by altering epidermal apoptosis and differentiation.</a> The Embo Journal. 22 (12), 2992-3003 (2003).</li>
<li>Setala, N. L., Metso, J., Jauhiainen, M., Sajantila, A., Holopainen, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye+symptoms+are+increased+in+mice+deficient+in+phospholipid+transfer+protein+%28PLTP%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Dry eye symptoms are increased in mice deficient in phospholipid transfer protein (PLTP).</a> The American Journal of Pathology. 178 (5), 2058-2065 (2011).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mastermind-like+transcriptional+co-activator-mediated+Notch+signaling+is+indispensable+for+maintaining+conjunctival+epithelial+identity%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mastermind-like transcriptional co-activator-mediated Notch signaling is indispensable for maintaining conjunctival epithelial identity.</a> Development. 140 (3), 594-605 (2013).</li>
<li>McCauley, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGFbeta+signaling+inhibits+goblet+cell+differentiation+via+SPDEF+in+conjunctival+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">TGFbeta signaling inhibits goblet cell differentiation via SPDEF in conjunctival epithelium.</a> Development. 141 (23), 4628-4639 (2014).</li>
<li>Guo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+surface+pathogenesis+associated+with+precocious+eyelid+opening+and+necrotic+autologous+tissue+in+mouse+with+disruption+of+Prickle+1+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Ocular surface pathogenesis associated with precocious eyelid opening and necrotic autologous tissue in mouse with disruption of Prickle 1 gene.</a> Experimental Eye Research. 180, 208-225 (2019).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Bozulmamış göz küresi hazırlanması için önemli bir hatırlatma tüm orbital kemiklertamamen kaldırılması gerektiğini, özellikle juga ve gözyaşı kemikleri, hangi küçük ve göz soketi alt yakınında bulunan. Geriye kalan kemikler, takip eden histolojiyi zorlaştırabilir. Küçük bir kemik parçasının kazara diseksiyondan tamamen çıkarılmaması durumunda, bir çift sharptweezers kullanılarak gömme parafin bloğundan seçilebilir. Geride kalan delik bu işlemden sonra erimiş parafin ile doldurulmalıdır.
Lensi ...

Oküler yüzey palpebral konjonktiva, bulbar konjonktiva ve kornea1dahil olmak üzere bölgesel epitel sürekli bir levha oluşur. Birçok glandüler yapılar oküler yüzey epitel ile ilişkilidir ve birlikte kuruyan ve çevresel istilalar kornea yüzeyini koruyan gözyaşı film bir tabaka oluşturmak2. OS bozulması keratit yol açacak, konjonktivit veya her ikisi (keratokonjonktivit). Hem genetik faktörler hem de çevresel tahriş edici maddeler ya da etkileşimleri OS3,4'ünpatolojik değişikliklerine katkıda bulunur. Buna göre, insan işletim sistemi hastalık süreçlerini incelemek için çeşitli genetiği değiştirilmiş ve fiziksel veya kimyasal kaynaklı hayvan modelleri kullanılmıştır.
Fare işletim sistemi yapısı ve işlevi birçok yönden insanların ki benzer. Göz bezleri tarafından salgılanan gözyaşı filmi bileşenleri de fareler ve insanlar arasında benzer. Çalışmalar zenginliği insan işletim sistemihastalıklarınınmekanizmaları açıklığa kavuşturucu için fare modelleri kullanılarak yapılmıştır 5,6,7. Birçok durumda, aynı deneysel tedavi altında kapsamlı bilgi elde etmek için işletim sistemi yerel moleküler değişiklikler yerine küresel analiz etmek önemlidir. Bu nedenle, işletim sistemi her parçası aynı anda analiz edilmesini sağlamak için iyi bir bütünlük ile örnek hazırlanması gereklidir.
Fare OS sıkıca göz çukuru / yörünge (birkaç farklı kafatası kemikleri yapılmış kemikli bir fincan) gömülü ve ince bağ dokuları ile bağlanır göz küresi ile ilişkilendirir. Palpebral veya bulbar konjonktiva zarar vermeden tüm oküler yüzeyi diseksiyon için büyük zorluklar var. Bu zorluklar aşağıdakilerden kaynaklanır: (i) işletim sistemi yumuşak ve incedir ve fiziksel olarak ayrı ama taşınabilir göz kapakları ve göz küresi için yapıştırılmış, bu nedenle bozulma ve hasara karşı savunmasızdır; ve (ii) orbital kemikler ve göz küresi arasındaki sınırlı boşluk diseksiyon operasyonlarını kısıtlar. Zorluklar yetişkin fare için çok daha büyüktür. Embriyonik farede orbital kemik kemikleşme tamamlanmaz ve çevre dokular göreceli gevşek8. Baş çıkarılabilir ve ikiye bölünebilir ve daha sonra doğrudan paraformaldehit (PFA) fiksasyona tabi tutulabilir ve9. Buna karşılık, postnatal ve yetişkin fare orbital kemikleri tamamen kalın çevre dokuları ile kemiklenir, fiksatifpene daha az verimli hale. Ayrıca, orbital / kafatası kemikleri sert ve kırılgan, kolayca parafin gibi yumuşak katıştırma bileşikleri onları kesit zaman kırık. Kırık kemik parçaları oybirliğiyle inferior doku morfolojisi ile sonuçlanan yakındaki dokuları gözyaşı olacaktır.
Birçok yayınlanan çalışmalar genellikle kısmi oküler yüzey gösterdi, hangi kendi özel araştırma amaçları için yeterli olabilir10,11. Literatür brüt bir inceleme diseksiyon protokolleri12,13ayrıntılı açıklaması olmadan gösterilen tüm bozulmamış oküler yüzey gösteren sadece birkaç çalışma bulundu . Bu protokolde, orbital ve kafatası kemiklerinin düzenli olarak çıkarıldığı, göz küresi ve göz kapakları ile birlikte el değmemiş göz yüzeyinin bırakılarak fiziksel hasarları en aza indirdiği integral postnatal göz yüzeyini elde etmek için bir diseksiyon yöntemi ayrıntılı olarak incelenmiştir. Os histolojisini daha detaylı olarak inceledik ve bu protokol ile hazırlanan doku kesitlerini kullanarak immünohistokimya uyguladık.

<table><tbody><tr><td>1&kez; Fosfat tamponlu salin (PBS)</td><td>Transgen Biotech</td><td>FG701-01</td><td></td></tr><tr><td>50ml santrifüj tüpü</td><td>Corning</td><td>430829</td><td></td></tr><tr><td>Yapıştırıcı mikroskop slaytları</td><td>Çeşitli</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Phalloidin</td><td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>A12379</td><td>Önerilen konsantrasyon 1:500 - 1.000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 Phalloidin</td><td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>A12380</td><td>Önerilen konsantrasyon 1:500 - 1.000</td></tr><tr><td>Anti-K12 antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab124975</td><td>Önerilen konsantrasyon 1:1.000</td></tr><tr><td>Anti-K14 antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab7800</td><td>Önerilen konsantrasyon 1:800</td></tr><tr><td>Sitrik asit</td><td>Çeşitli</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kapak sürgüsü</td><td>Çeşitli</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kavisli forseps</td><td>Dünya Hassas Aletleri</td><td>14127</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu.</td><td>Olmpus</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>Etil alkol</td><td>Çeşitli</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Floresan Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>AxioImager.Z2</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount-G Montaj ortamı</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Mikro diseksiyon makası-düz bıçak</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>503242</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodalga fırınlar</td><td>Galanz</td><td>P70D20TL-D4</td><td></td></tr><tr><td>Fare suşları</td><td>C57 / BL6 ve Sv129 karışık</td><td></td><td></td></tr><tr><td>No.4 düz forseps</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>501978-6</td><td></td></tr><tr><td>Normal Keçi Serumu</td><td>Çeşitli</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit (PFA)</td> <td>Çeşitli</td><td></td><td>1 kez% 4'lük bir çözelti hazırlayın; PBS ve 0.45&mu ile filtre; m filtre</td></tr><tr><td>membranı Doku kültürü kabı</td><td>Çeşitli</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trisodyum sitrat</td><td>Çeşitli</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SLBW6818</td><td></td></tr></tbody></table>

histolojik muayene ve İmmünohistokimya için İntegral göz yüzey dokusu elde etmek için bozulmamış göz küresinin İzolasyon

Isolation of Intact Eyeball to Obtain Integral Ocular Surface Tissue for Histological Examination and Immunohistochemistry

Oküler yüzey (OS) üç bağlı parçadan oluşan bir epitel levhaoluşur: palpebral konjonktiva, bulbar konjonktiva ve kornea epitel. OS bozulması keratit yol açacak, konjonktivit veya her ikisi (keratokonjonktivit). Belirli genetik modifikasyonlara veya yapay operasyonlara sahip deneysel hayvan modellerinde, her bir parçanın göreceli patogenetik değişikliklerini paralel olarak değerlendirmek için OS epitel sayfasının tüm bölümlerini incelemek yararlıdır. Ancak, distorsiyon veya hasar olmadan bir bütün olarak OS doku diseksiyon, öncelikle yumuşaklık ve os incelik nedeniyle fiziksel olarak ayrı henüz hareketli göz kapakları ve göz küresi yapıştırılmış nedeniyle zor olmuştur. Ayrıca, sert kafatası / orbital kemikler tarafından oluşturulan derin göz soketi tamamen çalışma diseksiyonları için sınırlı alan bırakarak göz küresi tarafından işgal edilir. Sonuç olarak, yüz tarafında ilişkili OS dokuları ile göz küresi doğrudan diseksiyon genellikle doku hasarlarına yol açacak, özellikle palpebral ve bulbar konjonktiva. Bu protokolde, kafatası ve yörünge kemiklerini iki parçalı fare başından sırayla çıkarmak için bir yöntem tanımlanmış, göz kapakları, göz yüzeyi, lens ve retinayı tek parça halinde bırakılmıştır. OS sayfasının bütünlüğü iyi korunmuştur ve histoloji veya immünboyama ile tek bir bölümde incelenebilir.

Farklı bakış açılarından görüntülenen ana kafatası kemikleri Şekil 1A-E'de,farklı kemikleri gösteren renklerle gösterilmiştir. Diseksiyon süreçlerini göstermek için dört haftalık bir hayvan kullandık. Diseksiyon basamakları 1.1.1-1.1.3 ve kısa bir önekasyon (adım 1.1.4) sonra, ilişkili yüz kemikleri ile göz küresi Şekil 1E'degösterilmiştir. Anterior (nazal ve premaxillary) ve posterior (örneğin, ...

Bu protokol, fare göz küresinin göz kapağı, göz yüzeyi, anterior ve posterior segmentleri ile nispeten sağlam konumda izolasyonu için bir yöntem açıklanmaktadır.

Histolojik Muayene ve İmmünohistokimya için İntegral Göz Yüzey Dokusu Elde Etmek Için Bozulmamış Göz Küresinin İzolasyon

Ocular surface (OS) consists of an epithelial sheet with three connected parts: palpebral conjunctiva, bulbar conjunctiva and corneal epithelium. ...

Laboratuvarımız göz gelişimi ve hastalıklar ağını ele alıyor. Bu protokol, kafatasını ve orbital kemikleri parçalanmış fare kafasından sırayla çıkarmak için bir yöntem tanımlar. Göz kapakları, göz yüzeyi, lens ve retinayı tek parça halinde bir arada bırakmak. Protokol, oküler yüzey didaktikleri ile ilgilenen göz doktorları için faydalı olacak. Ben Dianlel Guo, yüz kemikleri incelerken, göz küresinin zarar önlemek için çalışırken olası bir mücadele ile tekniği anlatmak için. Bu diseksiyon maddesinin en büyük avantajı, oküler yüzey epitel tabakasının bütünlüğünün iyi korunmuş olması ve oküler yüzeyin farklı kısımlarının histoloji veya immünboyama ile tek bir bölümde incelenebilmiş olmasıdır. Yumuşak dokuların tüm küçük kemikleri ve enkaz kesmek için emin olun. Sebep, aksi takdirde doku bölümünde yara izi neden olacaktır. Fare ötenazi sonra, baş kesmek için düz makas bir çift kullanın ve burun için intraparietal kemik rostrally başlayan sagittal orta hat boyunca ikiye bölün. Temiz bir petri kabına ikiye bölünmüş baş her yarısı yerleştirin ve çene ve dil kesmek için keskin makas kullanın. Optik kiazma yerinden önce beyni keserek optik siniri serbest bırak. Ve kafatası duvarına bağlı ko

isolation-intact-eyeball-to-obtain-integral-ocular-surface-tissue-for

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video, siliyer epitelden fare gözün retina kök hücreleri izole kültür ve klonal retina küreler oluşturacak şekilde büyümeye nasıl göstereceğiz. Izole edilmiş kök hücre küre kardinal özelliklere sahip: kendini yenileme ve multipotentiality.

Fare Göz Retina Kök Hücre İzolasyonu

Kağıt kadavra donör oküler Dünya'dan retina dokuları içini temizlemek için basitleştirilmiş bir tüketim kornea tekniği ve açıklar. Tekniği oküler dünyanın diğer dokulara zarar vermeden nakli, cerrahi veya araştırma amaçlı kullanılmak üzere özel tüketim kaliteli dokular için yardımcı olacaktır Burada anlatılan.

Için Basitleştirilmiş Tekniği<em&gt; Yerinde</emİnsan Oküler Globe gelen Kornea ve Retina Doku Eviserasyon of&gt; eksizyonu

Bu video, bir murin modelinde oküler yüzey iltihabını ve meibomian bezi disfonksiyonunu indüklemek için bir yöntem göstermektedir. Farenin bağışıklık sisteminin bir immünojen kullanılarak uyarılması ve daha sonra aynı immünojen ile yeniden uyarılması, nötrofil tarafından üretilen aggNET'ler yoluyla meibomian bezi salgısının tıkanmasına neden olan oküler yüzey iltihabını teşvik eder ve kuru göz hastalığına yol açar.

Bir Murin Modelinde Oküler Yüzey Iltihabını İndüklemek İçin Bir Yöntem

Bu protokolün amacı, post mortem enükleasyonlu domuz gözlerinden bütün, sağlam vitreus çekirdeği ve korteksi izole etmek için etkili bir teknik göstermektir.

Vitreodynamic Analiz Tüm Vitreus Mizah Diseksiyon

Maruz kalan normal oküler yüzey kornea ve konjonktivadan oluşur. Konjunktiva içerisinde epitel hücreleri, goblet hücreleri ve immün hücreler bulunur. Burada, non-invaziv bir izlenim sitolojisi yöntemi, konjonktivadaki bağışıklık hücrelerini analiz etmek için bir impresyon sitolojisi cihazı ve akış sitometrisi kullanılarak tarif edilmiştir.

Conjunktiva&#39;dan Hücreleri İzole Etmek ve Fenotip Hedeflemek İçin İnvaziv Olmayan Bir Yöntem

Bu protokolün amacı, subakut oküler hipertansiyonu indükleyen limbal vasküler pleksusun 360° termik koterizasyonuna dayanan yeni bir glokomatöz nörodejenerasyon modelini karakterize etmektir.

Kemirgenlerde Cerrahi Olarak İndüklenen Glokom için Limbal Vasküler Pleksusun Tam Daire Koterizasyonu

Bu yazıda kemirgenlerde oküler mikrodiseksiyon için bir protokol sunulmaktadır. İşlem, göz küresinin niktitasyon zarı (yani üçüncü göz kapağı) ile birlikte enükleasyonunu içerir. Bunu daha sonra arka ve ön göz kapaklarının ayrılması izler.

Kemirgen Gözün Mikrodiseksiyonu

Bu protokol, lokal kaynaklı domuz gözlerinden primer retinal pigment epitel (RPE) hücrelerinin elde edilmesi ve kültürlenmesi prosedürünü özetlemektedir. Bu hücreler, kök hücrelere yüksek kaliteli bir alternatif olarak hizmet eder ve in vitro retinal araştırmalar için uygundur.

İn Vitro Modelleme için Primer Domuz Retinal Pigment Epitel Hücrelerinin İzolasyonu

Bu el yazması, fare gözlerinden retinal glial Müller hücrelerini izole etmek için ayrıntılı bir protokolü açıklamaktadır. Protokol, fare gözlerinin enükleasyonu ve diseksiyonu ile başlar, ardından Müller hücrelerinin izolasyonu, tohumlanması ve kültürlenmesi ile devam eder.

Primer Fare Retinal Glial Müller Hücrelerinin İzolasyonu

Neoplastik olmayan globların kapsamlı bir şekilde brütleştirilmesi ve standardize edilmiş kesitleri, yüksek kaliteli tekrarlanabilir histopatolojik kesitler elde etmek için önemlidir. Yetişkin ve fetal neoplastik olmayan kürelerin standartlaştırılmış bir brütleştirilmesi için yönergeler burada verilmiştir. Duruma dayalı karar verme kriterleri de dahil olmak üzere, küre kesiti için farklı seçenekler gösterilmiş ve tartışılmıştır.

Fetal Gözler de dahil olmak üzere neoplastik olmayan kürelerin iğrençleştirilmesi

Bu çalışma, terapötiklerin yetişkin sıçanın retina ve optik sinirlerine verilmesi için bir metodoloji sunmaktadır. Ek olarak, yetişkin bir sıçanda optik sinir ve retinanın yukarıdan aşağıya blok koleksiyonu için benzersiz bir doku elde etme yöntemi tanıtılmıştır.

Erişkin Sıçanlarda Oküler Terapötik Uygulama ve İleri Doku Alımı

Keşfedin, fare göz küresini göz kapağı ve oküler yüzey dokusu bozulmadan izole etme yöntemini. Histolojik muayene ve immünohistokimya için oküler yüzey epitelyal tabakasının bütünlüğünü koruyan bu teknik, oftalmologlar için değerlidir.

Histolojik Muayene ve İmmünohistokimya için İntegral Göz Yüzey Dokusu Elde Etmek Için Bozulmamış Göz Küresinin İzolasyon

Daha fazla video keşfet