Name: Anti-sıtma Primaquine UV-Vis ve Çıplak Göz Tayini için Optimize Griess Reaksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 31 s
Description: Keşfedin, sentetik idrar ve insan serumunda antimalaryal primaquine tespiti için optimize Griess reaksiyon yöntemini. Bu basit ve maliyet etkin yöntem, farmakokinetik çalışmalarda HPLC'ye hızlı bir alternatif sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar Çin Tıbbı Guangzhou Üniversitesi'nden Start-Up Hibe ve GZUCM gençlik bilimsel araştırma eğitim projesi (2019QNPY06) kabul. Ayrıca tesisleri desteklemek için Guangzhou Çin Tıbbı Üniversitesi Lingnan Tıbbi Araştırma Merkezi kabul ediyoruz.

1. Renkli Azos Sentezi
<ol><li>25 mL yuvarlak alt şişede (RBF), anilin (0.1 mmol) ve primaquine bifosfatı (45.5 mg, 0.1 mmol) 10 mL H3PO4 çözeltisine (%5 v/v) çözünür. Bir buz banyosu Üzerinde RBF koyun, çözelti içine uygun boyutta bir karıştırma çubuğu ekleyin ve bir karıştırma plakası üzerinde RBF koyun. NOT: Azo 3g sentezi için(Şekil 2),primaquine bifosfat 0.2 mmol kullanın.</li>
	<li>NaNO2 (6.9 mg, 0.1 mmol) 1 mL soğutulmuş su çözün ve daha sonra damla reaksiyon karışımı içine ekleyin. Buz banyosunu çıkarın ve reaksiyon karışımını oda sıcaklığında karıştırın.</li>
	<li>Reaksiyonu silika jel kaplı ince tabaka kromatografi (TLC) plakası ile izleyin. TLC için elüent olarak bir diklorotan (DCM)/metanol (MeOH) karışımı (vol/vol = 5:1) kullanın. Azo ürün çıplak gözlerle ayırt etmek kolaydır TLC plaka, renkli noktalar sergiler. TLC'de PMQ noktaları kaybolduğunda reaksiyonu durdurun.</li>
	<li>Reaksiyon karışımını bir buz banyosunda NaOH (2 M) ile pH >10'a ayarlayın. Her biri için 20 mL etil asetat ile karışımı 3 kez çıkarmak için 50 mL ayırma hunisi kullanın, birleştirmek ve bir döner buharlaştırıcı kullanarak vakum altında organik faz konsantre. NOT: Çıkarmadan önce, reaksiyon çözeltilerinin pH değerini 10'un üzerinde ayarlayın. Bu, birincil aminin iyonize olmayan formu olarak koruyabilir, böylece ekstraksiyonu kolaylaştırabilir.</li>
	<li>MeOH/H2O'yu elüent olarak kullanarak, normal basınç altında ters faz silika jeli ile flaş kromatografisi ile artıkları arındırın. İstenilen azo ürünlerini vermek için ürün çözeltisini lyophilization ile kurulayın. NOT: Aynı reaksiyon seyreltilmiş HCl çözeltilerinde de (0,2 M) yapılabilir.</li>
</ol>2. UV-Vis Ölçümleri ve Teorik Hesaplama
<ol><li>Saf azo (50 μM) distile suda veya sırasıyla %5 H3PO4 çözeltisinde (pH 1.1) çözün. Oda sıcaklığında (25 °C) bir spektrofotometrede UV-vis emilim spektrumlarını (250-700 nm) kaydedin. Daha fazla analiz için verileri .xls/.xlsx dosyaları olarak dışa aktarın.</li>
	<li>
Gaussian 16 programını kullanarak PMQ kendisi ve azo ürünleri için tüm teorik hesaplamaları gerçekleştirin. 6-31G temel ilerli kalarak zamana bağımlı yoğunluk fonksiyonel teorisini (TD-DFT) kullanın. Su kullanarak polarize continuum modeli (PCM) formalizmi ile çözücü etkileri içerir.
	<ol>
<li>Yapıları çizmek ve sonra yapıyı Gaussian giriş dosyası (.gif) olarak kaydetmek için yazılımı (örn. Chemdraw Office) kullanın.</li>
		<li>Gauss View ile gif dosyasını açın ve Hesapladüğmesine tıklayın. Gaussian Hesaplama Kurulumu, Opt+Freqve zemin durumu-DFT-B3LYP-6-31G'yiseçin; sonra Gönder'itıklatın. Geometri optimizasyonu bir .log dosyası oluşturur.</li>
		<li>Yukarıdaki yordamı izleyerek, bu günlük dosyasını açmak için Gauss View'ı kullanın. Hesapla-Gaussian Hesaplama Kurulumu'na tıklayın ve yalnızca enerji ve TD-SCF-DFT-B3LYP-6-31G-Singlet'ıseçin. Sonra Gönder. Enerji hesaplaması başka bir günlük dosyası ve bir küp dosyası oluşturur.</li>
		<li>Enerji hesaplamasından günlük dosyasını açmak için Gauss Görünümü'ni kullanın. Öngörülen emilimi görmek için Sonuçlar-UV/Vis'i tıklatın.</li>
		<li>Küp dosyasını açmak için Gauss Görünümü'ni kullanın. Yörüngelerigörmek için Sonuç'u tıklatın ve yüzey ve kontur-yüzey hareketlerini ve yeni yüzeyi seçin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Hem deneysel ölçüm hem de Gaussian hesaplamasonuçlarını karşılaştırın. Aşağıdaki denkleme göre hesaplanan ve ölçülen değerler arasındaki yüzde hatasını hesaplayın.               Hata = | (Wmax cal.-Wmaxexper.) / Wmaxexper. | × %100 Wmax cal. teorik hesaplama ve Wmax exper maksimum emici dalga boyu temsil eder. deneysel sonuç dalga boyunu temsil eder.</li>
</ol>3. PMQ Tayini
<ol><li>96 kuyulu bir plaka kullanılarak PMQ ölçümü (Şekil 5)
	<ol>
<li>200 mM aniline çözeltisi, R1 için 0,2 M HCl içinde 4-methoxyaniline çözünür. 5 mM çözelti, R2 elde etmek için distile suda sodyum nitrit çözünür. Kullanmadan önce tüm çözümleri buzdolabında 4 °C'de saklayın.</li>
		<li>96 kuyulu bir tabağa 100 μL R1 ekleyin ve R1 ile karıştırmak için plakaya numune içeren 50 μL PMQ ekleyin. Ardından, plakaya 50°L R2 ekleyin. Tekrarlanan pipetleme ile çözeltileri karıştırın.</li>
		<li>Tabağı oda sıcaklığında 15 dakika bekletin ve ardından UV-vis emicisini 504 nm olarak kaydedin. Her test için 3x'i tekrarlayın.  Azo ürün oda ışık maruziyeti ile istikrarlı; plakayı karanlık altında tutmak gerekli değildir.</li>
		<li>Daha fazla analiz için verileri .xls/.xlsx dosyaları olarak dışa aktarın.</li>
	</ol></li>
	<li>İdrar örneğinde doğrudan PMQ ölçümü için kalibrasyon eğrisi
	<ol>
<li>Sırasıyla 0, 1, 2, 5, 10, 20, 50, 100, 200 μM'de sentetik idrar kullanarak PMQ çözeltileri hazırlayın.</li>
		<li>96 kuyulu bir tabağa 100 μL R1 ekleyin ve R1 ile karıştırmak için 50 μL PMQ idrar çözeltisi ekleyin. Daha sonra yukarıdaki karışıma 50 μL R2 ekleyin. Tekrarlanan pipetleme ile çözeltileri karıştırın. Tabağı oda sıcaklığında 15 dakika bekletin ve ardından UV-vis emicisini 504 nm olarak kaydedin.</li>
		<li> EmiciI504 ve PMQ konsantrasyonlarına göre bir kalibrasyon eğrisi oluşturun. PMQ'suz kuyulardan gelen değerleri boş olarak kullanın ve veri işlemeden önce tüm testlerdeki boş değerleri çıkarın.</li>
		<li>Y = aX+bolarak doğrusal denklemler oluşturmak için doğrusal bir uyum gerçekleştirin, Y 504 nm de absorbans yoğunluğu, X PMQ konsantrasyonu, a eğim, ve b doğrusal çizginin y-kesme olduğunu.</li>
	</ol></li>
	<li>İnsan serum örneğinde doğrudan PMQ ölçümü için kalibrasyon eğrisi
	<ol>
<li>0, 1, 2, 5, 10, 20, 50, 100, 200, μM'de INSAN serumu kullanarak PMQ çözeltileri hazırlayın.</li>
		<li>96 kuyulu bir tabağa 100 μL R1 ekleyin ve R1 ile karıştırmak için 50 μL PMQ serum çözeltisi ekleyin. Yukarıdaki karışıma 50 μL R2 ekleyin ve tekrarlanan pipetleme ile çözeltileri karıştırın. Tabağı 15 dakika oda sıcaklığında tutun ve uv-vis emicisini 504 nm'de kaydedin. Daha fazla analiz için verileri .xls/.xlsx dosyası olarak dışa aktarın.</li>
		<li> EmiciI504 ve PMQ konsantrasyonlarına göre bir kalibrasyon eğrisi oluşturun. PMQ'suz kuyulardan gelen değerleri boş olarak kullanın ve veri işlemeden önce tüm testlerdeki boş değerleri çıkarın.</li>
		<li>Y = aX+bolarak doğrusal denklemler oluşturmak için doğrusal bir uyum gerçekleştirin, Y 504 nm de absorbans yoğunluğu, X PMQ konsantrasyonu, a eğim, ve b doğrusal çizginin y-kesme olduğunu.</li>
	</ol></li>
	<li>Serumdan PMQ ekstraksiyonu
	<ol>
<li>PMQ içeren serumu simüle etmek için insan serumuna belirli bir miktar PMQ ekleyin. PMQ ekstraksiyonu için, 15 mL'lik bir santrifüj tüpe 2 mL PMQ içeren seruma 6 mL etil asetat/heksan (7:1 v/v) karışımı ekleyin.</li>
		<li>Ekstraksiyon sistemine 100 μL sodyum hidroksit (2 M) çözeltisi ekleyin. Şiddetle 30 s. organik tabaka toplamak ve vakum altında bir döner buharlaştırıcı kullanarak konsantre bir girdap karıştırıcı kullanarak tüp sallamak.</li>
		<li>200 μL distile su ile kalıntıyı yeniden çözün ve 220 nm gözenek boyutunda disk şeklindeki bir membrandan sızarak çözünmez lipid bileşenlerini çıkarın. Test için son çözümü kullanın.</li>
	</ol></li>
	<li>Ekstraksiyon ile serumdan PMQ'yu belirleyin
	<ol>
<li>Distile suda PMQ için kalibrasyon eğrisi oluşturmak için 3.2 veya 3.3 adımlarını izleyin. Adım 3.4'e göre PMQ içeren serumlardan PMQ ayıklayın.</li>
		<li>96 kuyulu bir tabağa 100 μL R1 ve 50 μL PMQ çözeltisi ekleyin. Karışıma 50 μL R2 ekleyin ve tekrarlanan pipetleme ile çözeltileri karıştırın.</li>
		<li>Tabağı 15 dakika oda sıcaklığında tutun ve UV-vis emicisini 504 nm'de kaydedin. Kontrol olarak PMQ olmadan R1 ve R2 ile kuyukullanın. Daha fazla analiz için verileri .xls/.xlsx dosyaları olarak dışa aktarın.</li>
		<li>Her test için I504 emici değerlerinden kontrol değerlerini çıkarın ve ardından kalibrasyon eğrisinden astar denklemine göre konsantrasyon hesaplamaları için sonucu kullanın. NOT: Her durumda PMQ için algılama sınırı (LOD) standart biryöntem22göre hesaplanabilir. Hesaplama kalibrasyon fonksiyonuna dayanıyordu: LOD = 3.3 × SD/b, SD boş standart sapma ve b regresyon hattının eğimi</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Fernando, D., Rodrigo, C., Rajapakse, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primaquine+in+vivax+malaria%3A+an+update+and+review+on+management+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Malar+Journal%22%5BJournal%5D)">Primaquine in vivax malaria: an update and review on management issues.</a> Malar Journal. 10, 351(2011).</li>
<li>Deng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+Artemisinin-Piperaquine+Mass+Drug+Administration+With+or+Without+Primaquine+Dramatically+Reduces+Malaria+in+a+Highly+Endemic+Region+of+Africa%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Large-scale Artemisinin-Piperaquine Mass Drug Administration With or Without Primaquine Dramatically Reduces Malaria in a Highly Endemic Region of Africa.</a> Clinical Infectious Diseases. 67 (11), 1670-1676 (2018).</li>
<li>Pavic, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primaquine+hybrids+as+promising+antimycobacterial+and+antimalarial+agents%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Medical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Primaquine hybrids as promising antimycobacterial and antimalarial agents.</a> European Journal of Medical Chemistry. 143, 769-779 (2018).</li>
<li>McQueen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis%2C+characterization%2C+and+cellular+localization+of+a+fluorescent+probe+of+the+antimalarial+8-aminoquinoline+primaquine%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorganic+%26+Medicinal+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Synthesis, characterization, and cellular localization of a fluorescent probe of the antimalarial 8-aminoquinoline primaquine.</a> Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 27 (20), 4597-4600 (2017).</li>
<li>Ashley, E. A., Recht, J., White, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primaquine%3A+the+risks+and+the+benefits%5BTitle%5D)+AND+%22Malaria+Journal%22%5BJournal%5D)">Primaquine: the risks and the benefits.</a> Malaria Journal. 13 (1), 418(2014).</li>
<li>Watson, J., Taylor, W. R., Menard, D., Kheng, S., White, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+primaquine-induced+haemolysis+in+G6PD+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Modelling primaquine-induced haemolysis in G6PD deficiency.</a> Elife. 6, (2017).</li>
<li>Beutler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose-6-phosphate+dehydrogenase+deficiency%3A+a+historical+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency: a historical perspective.</a> Blood. 111 (1), 16-24 (2008).</li>
<li>Endoh, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-performance+liquid+chromatographic+determination+of+pamaquine%2C+primaquine+and+carboxy+primaquine+in+calf+plasma+using+electrochemical+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%3A+Biomedical+Sciences+and+Applications%22%5BJournal%5D)">High-performance liquid chromatographic determination of pamaquine, primaquine and carboxy primaquine in calf plasma using electrochemical detection.</a> Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 579 (1), 123-129 (1992).</li>
<li>Dua, V. K., Kar, P. K., Sarin, R., Sharma, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-performance+liquid+chromatographic+determination+of+primaquine+and+carboxyprimaquine+concentrations+in+plasma+and+blood+cells+in+Plasmodium+vivax+malaria+cases+following+chronic+dosage+with+primaquine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%3A+Biomedical+Applications%22%5BJournal%5D)">High-performance liquid chromatographic determination of primaquine and carboxyprimaquine concentrations in plasma and blood cells in Plasmodium vivax malaria cases following chronic dosage with primaquine.</a> Journal of Chromatography B: Biomedical Applications. 675 (1), 93-98 (1996).</li>
<li>Miranda, T. A., Silva, P. H. R., Pianetti, G. A., César, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+quantitation+of+chloroquine+and+primaquine+by+UPLC-DAD+and+comparison+with+a+HPLC-DAD+method%5BTitle%5D)+AND+%22Malaria+Journal%22%5BJournal%5D)">Simultaneous quantitation of chloroquine and primaquine by UPLC-DAD and comparison with a HPLC-DAD method.</a> Malaria Journal. 14, 29(2015).</li>
<li>Tatsuno, M., Nishikawa, M., Katagi, M., Tsuchihashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+determination+of+illicit+drugs+in+human+urine+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Analytical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Simultaneous determination of illicit drugs in human urine by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Journal of Analytical Toxicology. 20 (5), 281-286 (1996).</li>
<li>Erni, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+high-performance+liquid+chromatography+in+the+pharmaceutical+industry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+A%22%5BJournal%5D)">Use of high-performance liquid chromatography in the pharmaceutical industry.</a> Journal of Chromatography A. 507, 141-149 (1990).</li>
<li>Tsikas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+nitrite+and+nitrate+in+biological+fluids+by+assays+based+on+the+Griess+reaction%3A+Appraisal+of+the+Griess+reaction+in+the+l-arginine%2Fnitric+oxide+area+of+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%22%5BJournal%5D)">Analysis of nitrite and nitrate in biological fluids by assays based on the Griess reaction: Appraisal of the Griess reaction in the l-arginine/nitric oxide area of research.</a> Journal of Chromatography B. 851 (1), 51-70 (2007).</li>
<li>Zurcher, D. M., Adhia, Y. J., Romero, J. D., McNeil, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modifying+a+known+gelator+scaffold+for+nitrite+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Communications%22%5BJournal%5D)">Modifying a known gelator scaffold for nitrite detection.</a> Chemical Communications. 50 (58), 7813-7816 (2014).</li>
<li>Kunduru, K. R., Basu, A., Tsah, T., Domb, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer+with+pendant+diazo-coupling+functionality+for+colorimetric+detection+of+nitrates%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+and+Actuators+B%3A+Chemical%22%5BJournal%5D)">Polymer with pendant diazo-coupling functionality for colorimetric detection of nitrates.</a> Sensors and Actuators B: Chemical. 251, 21-26 (2017).</li>
<li>Li, D., Ma, Y., Duan, H., Deng, W., Li, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Griess+reaction-based+paper+strip+for+colorimetric%2Ffluorescent%2FSERS+triple+sensing+of+nitrite%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+and+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Griess reaction-based paper strip for colorimetric/fluorescent/SERS triple sensing of nitrite.</a> Biosensors and Bioelectronics. 99, 389-398 (2018).</li>
<li>Deng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+strategy+for+colorimetric+detection+of+hydroxyl+radicals+based+on+a+modified+Griess+test%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">A novel strategy for colorimetric detection of hydroxyl radicals based on a modified Griess test.</a> Talanta. 195, 152-157 (2019).</li>
<li>Pang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+photo-responsive+macroscopic+switch+constructed+using+a+chiral+azo-calix%5B4%5Darene+functionalized+silicon+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Communications+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">A photo-responsive macroscopic switch constructed using a chiral azo-calix[4]arene functionalized silicon surface.</a> Chemical Communications (Camb). 54 (24), 2978-2981 (2018).</li>
<li>Kaur, N., Dhaka, G., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+naked-eye+ratiometric+and+colorimetric+receptor+for+anions+based+on+azo+dye+featuring+with+benzimidazole+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Tetrahedron+Letters%22%5BJournal%5D)">Simple naked-eye ratiometric and colorimetric receptor for anions based on azo dye featuring with benzimidazole unit.</a> Tetrahedron Letters. 56 (9), 1162-1165 (2015).</li>
<li>Liu, F., Lou, J., Hristov, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-Ray+responsive+nanoparticles+with+triggered+release+of+nitrite%2C+a+precursor+of+reactive+nitrogen+species%2C+for+enhanced+cancer+radiosensitization%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">X-Ray responsive nanoparticles with triggered release of nitrite, a precursor of reactive nitrogen species, for enhanced cancer radiosensitization.</a> Nanoscale. 9 (38), 14627-14634 (2017).</li>
<li>Deng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+unexpected+Griess+reaction+on+the+important+anti-malarial+drug+primaquine+and+its+application+for+drug+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">An unexpected Griess reaction on the important anti-malarial drug primaquine and its application for drug determination.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 171, 8-14 (2019).</li>
<li>Shrivastava, A., Gupta, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+determination+of+limit+of+detection+and+limit+of+quantitation+of+the+analytical+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Chronicles+of+Young+Scientists%22%5BJournal%5D)">Methods for the determination of limit of detection and limit of quantitation of the analytical methods.</a> Chronicles of Young Scientists. 2 (1), 21-25 (2011).</li>
</ol>

Yazarların beyan etmek için hiçbir şeyi yok.

Uygun PMQ ölçümü için kolorimetrik bir yöntem tanımladık. Potansiyel olarak en basit ve uygun maliyetli akım yöntemidir. Daha da önemlisi, bu yöntem herhangi bir ekipman kullanmadan çıplak gözle respq ölçümü sağlar.
PMQ algılama için optimize edilmiş Griess reaksiyonu 504 nm maksimum emilimi ile kırmızı renk azo üretebilir. Endojen biyomoleküllerin UV-vis emiliminin potansiyel etkisi sınırlıdır, böylece biyolojik sıvılarda PMQ'nun doğrudan ölçümü için söz veren yöntem dir. Sonuç olarak,0-...

PMQ en önemli sıtma ilaçları biridir, bu nüks önlemek için bir doku şizontosit olarak değil, aynı zamanda hastalıkiletimikesmek için bir gametositocide olarak sadece çalışır 1,2,3,4. İntravasküler hemoliz PMQ ilgili yan etkilerinden biridir, G6PD bu eksik son derece ciddi hale gelir. Sıtma endemik bölgelerinde G6PD genetik bozukluğunun %3-30 arasında bir gen frekansı ile dünya çapında dağıtıldığı bilinmektedir. PMQ zayıflığının şiddeti G6PD eksikliğinin derecesine ve pmq maruziyetinin dozuna ve süresine bağlıdır5,6. Riski azaltmak için, WHO sıtma tedavisi için PMQ tek bir düşük doz (0.25 mg baz/ kg) tavsiye etti. Ancak, bu hala hasta ilaç duyarlılığı varyasyonları tarafından meydan5,7. Doz izleme PMQ uygulamadan sonra farmakokinetiği değerlendirmek için gereklidir, sınırlı toksisite ile başarılı bir tedavi için doz ayarlaması etkisi olabilir.
Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) PMQ klinik tayini için en yaygın olarak kullanılan tekniktir. Endoh ve ark. bir C-18 polimer jel sütun8kullanarak serum PMQ quantification için bir UV dedektörü ile bir HPLC sistemi bildirdi. Onların sisteminde, serum proteinleri ilk asetonitril ile çöktürüldü, ve daha sonra supernatant PMQ HPLC için ayrıldı. Kalibrasyon eğrisi 0.01-1.0 μg/mLarasındakonsantrasyon aralığında doğrusal dı. 254 nm UV tespiti ile ters faz HPLC dayalı başka bir yöntem PMQ ve büyükmetabolitleri9 nicelliği için bildirilmiştir. PMQ için kalibrasyon eğrisi 0.025-100 μg/mL aralığında doğrusal dı. Organik faz olarak karışık heksane ve etil asetat ile ek bir sıvı-sıvı ekstraksiyon yüzde kurtarma% 899ulaştı PMQ ayırma için kullanılmıştır. Daha yakın zamanda, Miranda ve ark 3 μg/mL10bir algılama sınırı ile tablet formülasyonlarında PMQ analizi için 260 nm UV algılama ile bir UPLC yöntemi geliştirdi.
HPLC yöntemleri ilaç tayini nde umut verici bir duyarlılık sergilese de ve HPLC kütle spektrometresi ile donatılmışsa hassasiyet ilerlenebilse de, hala bazı dezavantajları vardır. Biyolojik sıvılarda doğrudan ilaç ölçümlerine genellikle HPLC tarafından erişilemez, çünkü birçok biyomolekül analizi büyük ölçüde etkileyebilir. Ek ekstraksiyonh plc analizi11,12önce endojen molekülleri kaldırmak için gereklidir. Ayrıca, Bir HPLC-UV dedektörü ile PMQ algılama genellikle maksimum emme dalga boyunda yapılır (260 nm).; ancak, 260 nm (örneğin, amino asitler, vitaminler, nükleik asitler ve ürokrom pigmentler) güçlü bir emicilik ile biyolojik sıvılarda birçok endojen moleküller vardır, böylece PMQ UV tespiti ile müdahale. Makul hassasiyet ve seçicilik ile PMQ belirlenmesi için basit ve uygun maliyetli yöntemler geliştirmek için bir ihtiyaç vardır.
Griess reaksiyonu ilk kez 1879 yılında nitrit tespiti için kolorimetrik test olarak sunuldu13,14,15,16. Son zamanlarda, bu reaksiyon kapsamlı sadece nitrit değil, aynı zamanda diğer biyolojik olarak ilgilimoleküller17,18,19,20tespit etmek için araştırılmıştır. Daha önce PMQ ile beklenmeyen griess reaksiyonunun ilk sistematik çalışmasını bildirmişiz (Şekil 1). Bu sistemde, PMQ asidik koşullar altında nitrit iyonlarının varlığında yerine aniline ile birleştiğinde renkli azos oluşturmak mümkün. Ayrıca azos renginin aniline21'dekiikame elektron bağışı etkisini artırırken sarıdan maviye değiştiğini gördük. 4-methoxyaniline ve PMQ arasında optimize reaksiyon yoluyla PMQ nicelleştirme için UV-vis emilim bazlı kolorimetrik yöntem geliştirilmiştir. Bu yöntem, biyo-ilgili sıvılarda PMQ hassas ve seçici algılama için büyük bir potansiyel göstermiştir. Burada, bu kolorimetrik stratejiye dayalı PMQ belirleme için ayrıntılı prosedürleri açıklamayı hedefliyoruz.

<table><tbody><tr><td>4-Metoksiyanolin</td><td>Aladdin</td><td>K1709027</td><td></td></tr><tr><td>2,4-Dimetoksiyanolin</td><td>Heowns</td><td>10154207</td><td></td></tr><tr><td>3,4-Dimetoksiyanilin</td><td>Bidepharm</td><td>BD21914</td><td></td></tr><tr><td>4-Metilanilin</td><td>Adamas-beta</td><td>P1414526</td><td></td></tr><tr><td>4-Nitroanilin</td><td>Macklin</td><td>C10191447</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyulu, Flat Botton</td><td>Labserv</td><td></td><td></td>310109008</tr><tr><td>Gaussian@16 yazılımı</td><td>Gaussian, Inc</td><td></td><td>Sürüm:x86-64 SSE4_2 etkin/Linux</td></tr><tr><td>Hidroklorik asit</td><td>GCRF</td><td>20180902</td><td></td></tr><tr><td>Marvin eskiz (yazılım)</td><td>CHEMAXON</td><td></td><td>ücretsiz sürüm: 15.6.29</td></tr><tr><td>Fosforik asit</td><td>Macklin</td><td>C10112815</td><td></td></tr><tr><td>Primaquine bisifosfat</td><td>3A Kimyasalları</td><td></td><td></td>CEBK200054</tr><tr><td>Sodyum nitrit</td><td>Alfa Aesar</td><td>5006K18R</td><td></td></tr><tr><td>Sülfonamidler</td><td>TCI (şangay)</td> <td>GCPLO-BP</td><td></td></tr><tr><td>Varioskan LUX Plaka okuyucu</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td>SkanIt Yazılımı 4.1 ile Birlikte Verilir</td></tr></tbody></table>

anti-sıtma primaquine uv-vis ve Çıplak göz tayini için optimize griess reaksiyon

Optimized Griess Reaction for UV-Vis and Naked-eye Determination of Anti-malarial Primaquine

Primaquine (PMQ), önemli bir anti-sıtma ilaç, Dünya Sağlık Örgütü (WHO) tarafından P. vivax ve ovaleneden olduğu hayatı tehdit eden enfeksiyonların tedavisi için tavsiye edilmiştir. Ancak, PMQ glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (G6PD) eksikliği olan hastalarda akut hemoloz yol istenmeyen yan etkileri vardır. Dozaj takibi amacıyla PMQ tayini için basit ve güvenilir yöntemler geliştirilmesi gerekmektedir. 2019'un başlarında, PMQ kolorimetrik nicelleştirme için UV-Vis ve çıplak gözle dayalı bir yaklaşım bildirdik. Algılama, RENKLI azo ürünleri üretebilen PMQ ve aneninler arasındaki Griess benzeri reaksiyona dayanıyordu. Sentetik idrarda PMQ doğrudan ölçümü için algılama sınırı nanomolar aralığındadır. Ayrıca, bu yöntem klinik olarak ilgili konsantrasyonlarda insan serum örneklerinden PMQ nicelliği için büyük bir potansiyel göstermiştir. Bu protokolde, renkli azo ürünlerinin sentezi ve karakterizasyonu, reaktif hazırlığı ve PMQ tayini prosedürleri ile ilgili teknik detayları açıklayacağız.

Tepkime koşullarını optimize etmek için(Şekil 2),Griess reaksiyonu ile PMQ ile çift için çeşitli anilinler kullanıldı. Farklı renklerde bir dizi azos elde ettik. Bu bir elektron bağış ikame ile anisiline UV-vis emilim spektrumunda bir kırmızı kayma neden olabilir bulunmuştur. Kuramsal hesaplamalar zamana bağımlı yoğunluk fonksiyonel teorisi (TD-DFT) ile yapılmıştır. Şekil 2A'dasunulduğu gibi, hesaplama sonucu ortalama %3,1 hata ile optik ölçümlerle iyi bir uyum ...

Bu protokol sentetik idrar ve insan serumlarında sıtma önleyici primaquine (PMQ) tespiti için yeni bir kolorimetrik yöntemi açıklar.

Anti-sıtma Primaquine UV-Vis ve Çıplak Göz Tayini için Optimize Griess Reaksiyon

Primaquine (PMQ), an important anti-malarial drug, has been recommended by the World Health Organization (WHO) for the treatment of life-threatening ...

Primaquine iyi bilinen bir anti-sıtma ilaçtır. Biyolojik sıvılarda primaquine belirlenmesi genellikle farmakokinetiği değerlendirmek için gereklidir. Şu anda, Primaquine tayini için önemli teknikler HPLC dayanmaktadır.HPLC prosedürleri oldukça karmaşık ve zaman alıcı olabilir. Yani bu yöntem Primaquine hızlı algılama için basit bir yol sunuyor. Bu Griess yöntemi potansiyel primaquine nicelleştirme için en basit ve maliyet-etkin yoludur.Ayrıca, bu yöntem herhangi bir ekipman gerek kalmadan çıplak göz Primaquine algılama için olanaklar sunabilir. Serum ve idrar örneklerinin yanı sıra, bu yöntem farmasötik formülasyonlarda Primaquine'i kantitatif olarak belirlemek için de kullanılabilir, örneğin, üretim kalite kontrolü için tabletlerde Primaquine tayini. Prosedürü gösteren Bayan Wu Yalan ve Wu Shengjun, benim laboratuvar iki yüksek lisans öğrencisi olacaktır.25 mililitrelik kahverengi alt şişede %5 fosforik asit çözeltisi olan 10 mililitreye 0.1 milimol aniline ve primaquine bifosfatı eriterek başlayın. Bir buz banyosu üzerine şişe koyun ve bir karıştırma çubuğu ekleyin. Sonra bir karıştırma plakası üzerine buz banyosu koyun.6,9 miligram sodyum nitrat ve bir mililitre soğutulmuş suyu

optimized-griess-reaction-for-uv-vis-naked-eye-determination-anti

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, monositler tarafından etiketlenmiş ve opsonize edilmiş Plasmodium falciparum ile enfekte eritrositleri içeren akış sitometrisi tabanlı bir fagositoz testini göstermektedir. Akış sitometrisi, monositlerdeki floresansı tanımlar ve fagositoz yoluyla opsonize eritrositlerin başarılı bir şekilde tanımlandığını doğrular.

Parazitle Enfekte Eritrositlerin Antikor Aracılı Fagositozunun Ölçülmesi İçin Bir Test

Video, transfekte edilmemiş hücreler ve aquaporin-4 eksprese eden transfekte hücreler içeren bir biyoçip kullanarak anti-aquaporin-4 immünoglobulin G'yi tespit etmek için hücre bazlı bir testi göstermektedir. Bu yöntemin, biyoçip üzerinde güçlü yeşil floresan ile doğrulanan nöromiyelit optika spektrum bozukluklarının teşhisinde uygulamaları vardır.

Serum Anti-aquaporin-4 İmmünoglobulin G'yi Tespit Etmek İçin Bir Test

Antikor fonksiyonu Ölçme Plasmodium falciparum sıtma dokunulmazlık anlamanın anahtarıdır. Bu yöntem, uygun bir merozoit saflaştırılmasını ve akış sitometresi ile opsonizasyon bağımlı fagositoz ölçümünü açıklamaktadır.

Yüksek Kapasiteli saflaştırılması<em&gt; Plasmodium falciparum</emOpsonizing Antikor Analizlerde kullanım için&gt; merozoitler

Hücre temelli sistemlerde sıtma proteinlerin sentezlenmesi zor kalır. Biz HeLa hücrelerinden sıtma rekombinant proteinleri ifade rhoptry için iki adım ve (in vitro çeviri) bir adım IVT hücresi serbest ifade sistemlerini göstermektedir. Biz rhoptry proteinleri saflaştırmak için bir Ni-afinite reçinesi bazlı saflaştırma sistemini kullanır.

İfadesi için HeLa Tabanlı Hücre Özgür İfade Sistemleri<em&gt; Plasmodium</em&gt; Rhoptry Proteinler

Sağlam tespit reaktifleri, yeni sıtma teşhis araçları geliştirmek için giderek artan bir gereklilik göstermektedir. Histidin açısından zengin bir sıtma proteini biyobelirteç varlığında uzun süreli ışıldayan sinyal yayan bir iridyum (III) probu tasarlanmıştır. Proteinin çözelti içinde veya manyetik bir parçacık üzerinde hareketsiz hale getirilerek tespit edilmesi, uygulamada esneklik sağlar.

Malarya Protein Biyomarker Histidin Zengin Protein-II Tespiti için İridyum (III) Lüminesans Probe

İnsan ko-enfeksiyonunun in vitro olarak çoğaltılması zordur. Bununla birlikte, insan sıtma parazitleri, doğal olarak HIV ile enfekte olmuş taze izole edilmiş insan periferik kan mononükleer hücreleri gibi, in vitro olarak kolayca kültürlenebilir. Bu, HIV ko-enfeksiyonu bağlamında sıtma parazitlerine karşı erken bağışıklık tepkilerini incelemek için mükemmel bir model sağlar.

Bir<em&gt; İn Vitro</em&gt; HIV Co-enfeksiyon Bağlamında Sıtma için Bağışıklık Yanıtları Ölçüm Modeli

Bu yazıda, kağıt diskler üzerindeki antikorların kovalent immobilizasyonu için periyodik oksidasyon ve glutaraldehit çapraz bağlama yöntemleri sunulmuştur. İmmobilize antikorların bağlanma aktivitesi değerlendirildi. Bu sonuçlara dayanarak, immünoglobulin G (IgG) tespiti için yeni bir kağıt bazlı immünolojik test geliştirmek için bir glutaraldehit çapraz bağlama yöntemi kullanıldı.

Selüloz Kağıt Diskler ve Çıplak göz Kolorimetrik İmmüno Onların Uygulamaları antikorların bağlama Kovalent

Burada, bir protokol için Plasmodium falciparum miktar virüslü sulu kırmızı kan hücrelerinde bir zayıflatılmış toplam yansıma kızılötesi Spektrometre ve çok değişkenli veri analizi kullanarak ve algılama mevcut.

Algılama ve miktar için Plasmodium falciparum içinde sulu kırmızı kan hücreleri tarafından toplam yansıma kızılötesi spektroskopi zayıflatılmış ve çok değişkenli veri analizi

Bu protokolün genel amacı, plasmodium falciparum enfeksiyonuna doğal olarak maruz kalan bireylerin sera veya plazmasında bulunan antikorların kapasitesinin nasıl ölçüleceklerine, parazit enfekte eritrositlerin (IEs) fagositozunu opsonize etmek ve indüklemek tir.

Akış SitometriSi-Bazlı Bir Test ile Plasmodium falciparum Parazitlerine Doğal Olarak Edinilmiş Fagositoz-Indükleyen Antikorların Ölçülmesi

Biz kitle fotometri (MP) kullanarak antijen-antikor afinite ölçümleri için tek moleküllü bir yaklaşım açıklar. MP tabanlı protokol hızlı, doğru, malzeme çok az miktarda kullanır ve protein modifikasyonu gerektirmez.

Kitle Fotometrisi ile Antikor-Antijen Affinitesinin Hızlı Tayini

Bu protokol, sivrisineklerde tükürük bezi sporozoitlerini tespit etmek için sandviç enzime bağlı bir immünosorbent testini tanımlar. Kolayca bulunabilen monoklonal antikorları kullanan yöntem, Plasmodium falciparum veya Plasmodium vivax taşıyan sivrisineklerin uygun maliyetli, yüksek verimli tespitini sağlar. Yöntem, vektör araştırmaları da dahil olmak üzere sıtma bulaşma araştırmaları için uygundur.

Enzime Bağlı İmmünosorbent Testi Kullanılarak Anofel Sivrisineklerinde Plasmodium Sporozoitlerin Tespiti

Keşfedin, sentetik idrar ve insan serumunda antimalaryal primaquine tespiti için optimize Griess reaksiyon yöntemini. Bu basit ve maliyet etkin yöntem, farmakokinetik çalışmalarda HPLC'ye hızlı bir alternatif sunar.

Anti-sıtma Primaquine UV-Vis ve Çıplak Göz Tayini için Optimize Griess Reaksiyon

Daha fazla video keşfet