Name: Sıçanlarda Akut İnme Sonrası Beyin İyileşmesini Değerlendiren Bir Preklinik Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: Keşfedin sıçanlarda akut inme sonrası beyin iyileşmesini değerlendiren MCAO/R preklinik modelini. Bu yöntem, iskemik beyin hasarı ve iyileşme mekanizmalarını incelemek için güvenilir bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81603315, 81603316), Çin'deki Jiangxi eyaletinin Önemli Ar-Ge planı (20171ACH80001), Fujian eyaletinin kolej ve üniversitelerinde endüstriyel ve akademik işbirliği projeleri tarafından desteklenmiştir. Çin (2018Y41010011).

Hayvan deneklerin prosedürü ve kullanımı, laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüsü tarafından onaylanmıştır. Bu protokol özellikle orta serebral arter oklüzyonu/reperfüzyonu (MCAO/R) ve sensorimotor fonksiyon testleri için ayarlanmıştır.
1. Deneysel tasarım ve gruplandırma
<ol><li>Longa skoru ve TTC boyama kullanarak daha ciddi beyin hasarı ve daha fazla model başarı oranı ile bir sıçan beyin iskemik model yöntemi ekran için bir sıçan MCAO / R modeli kullanın.<ol>
<li>7−9 haftalık 260−330 g ağırlığındaki erkek Sprague-Dawley sıçanları üzerinde deney yapın. Gerçek sıçan ağırlığı 275 ± 15 g 275 g, 300 g için 300 ± 10 g ve 320 g için 320 ± 10 g'dır.</li>
		<li>Aşağıdaki yedi gruplandırmayı (ağırlık, iplik cıvata türü, enfarktüs süresi): grup 1'i 15 sıçanla (275 g, 2636, 2 saat); grup 2 ile 15 sıçan (275 g, 2636, 3 saat); grup 3 ile 15 sıçan (275 g, 2838, 2 saat); grup 4 ile 15 sıçan (275 g, 2838, 3 saat); grup 5 ile 13 sıçan (300 g, 3040, 3 saat); grup 6 ile 10 sıçan (320 g, 3040, 3 saat); grup 7 ile 13 sıçan (300 g, 3043, 3 saat).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Beyin kurtarma durumunu TTC boyama ile incele ve 1, 35, 60, 90 gün SONRA çift taraflı asimetri testi, ızgara yürüyüş testi, rotarod testi ve kaldırma ipi testi ile uzun süreli fonksiyonel açıkları belirtmek için uygun sensorimotor fonksiyon testleri kullanın.<ol>
<li>8−9 haftalık 300 ± 10 g ağırlığında erkek Sprague-Dawley sıçanları kullanın.</li>
		<li>Aşağıdaki beş gruplandırmayı kullanın: 20 sıçanlı bir kontrol (normal) grubu; 16 sıçan ile 1 günlük bir grup; 16 sıçanile 35 günlük bir grup; 17 sıçanile 60 günlük bir grup; ve 19 faresi olan 90 günlük bir grup.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Adım 1.1 veya sensorimotor fonksiyonel testlerde Longa skoru sonra adım 1.2, anestezi ve TTC boyama için tüm sıçanların başını kesmek.</li>
</ol>2. Sıçanlarda tek taraflı MCAO/R modelinin oluşturulması9
NOT: Operasyon sırasında, kan damarının kırılmasını önlemek için mikroforceps'u nazikçe kullanın. Damar izole edildiğinde sıçan boynunda sinirler ve diğer kan damarlarızarar kaçının. Tüm sağkalım cerrahisi için uygun aseptik tekniğin sunulması için özen sağlanmalıdır. Videoda daha sonra gösterilen teknik tüm yordam boyunca uygulanmalıdır.
<ol><li>Ameliyat boyunca, küçük bir hayvan termostatında sıçanların vücut ısısını 37.0 ± 0.5 °C'de koruyun. Dört 6 cm 5-0 dikiş hazırlayın.</li>
	<li>Küçük bir hayvan anestezi makinesinin oksijen akış hızını (atık gaz arıtma cihazı ile) 0,4−0,6 L/dk olarak ayarlayın ve isofluran konsantrasyonu %5 olarak ayarlayın. Fareyi anestezi makinesine yerleştirin.</li>
	<li>Hayvan bayıldıktan sonra fareyi cerrahi sabitleme masasına yerleştirin. Sıçanın ağzını anestezi makinesinin maskesine bağlayın (oksijen akış hızı değişmez; isofluran konsantrasyonu %3 olarak ayarlayın. Hayvanın ekstremite gerginliği, kornea refleksleri ve ağrı eksikliğini gözlemleyerek derin anesteziye girdiğini doğrulayın.</li>
	<li>Kağıt bandajları (veya diğer araçlar) ile ameliyat masasına uzanacak şekilde uzuvlarını düzeltin.</li>
	<li>Bir elektrikli tıraş ile boyun kat çıkarın ve% 75 alkol ile sterilize (iodophor daha iyidir). Farenin ağzını kancayla düzelt.</li>
	<li>Oftalmik makas ile boynun merkezi uzunlamasına şekli boyunca 2−3 cm kesin.</li>
	<li>Ortak karotis arteri ayırın. Oftalmik forceps ile deri altı kas ayırın. Tamamen görme alanı ortaya çıkarmak için ev yapımı retraktör kullanın. Oftalmik forceps ile trakea ön kas ayırdıktan sonra, ortak karotis arter görünür olana kadar sağ sternokleidomastoid tendon boyunca ayrı.</li>
	<li>Yaygın karotis arter izole, dış karotis arter ve oftalmik forceps ile iç karotis arter. Yaygın karotis arter ligate (sert düğüm), kalp ucundan uzak dış karotis arter (sert düğüm), ve internal karotis arter (gevşek düğüm) ile 5-0 sütür. 5-0 dikişleri ile kalp ucuna yakın dış karotis arter Hattı.</li>
	<li>Bir iplik cıvatası takın. Oftalmik makas kullanarak dış karotis arter küçük bir açıklık kesin ve yavaşça bir iplik cıvata takın. Gevşek düğüm olmuştur ve dış karotis arter kesilmiş olan dış karotis arter dikiş ligate.<ol>
<li>Internal karotis arter gevşek düğüm gevşetin ve orta serebral arter in başına iplik cıvata eklemeye devam (dikiş işaretli). Sonra maruz kalan iplik cıvatasını kesin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Iskemik zaman açıktıktan sonra (2-3 saat), bir mikroforceps ile dış karotis arter kırığı düzeltmek, ve yavaşça başka bir mikroforceps ile iplik cıvata çekin. İplik cıvatasının ön ucu internal karotis arterden tamamen çekildiğinde, 5-0 dikişle kaplı olan dış karotis arteri inkâr edin ve iplik cıvatasını tamamen çekin.</li>
	<li>Yaygın karotis arter gevşetin, ve daub ~ 50,000 U penisilin sodyum tozu yara yüzeyinde enfeksiyonu önlemek için. Dikiş subkutan kaslar ve cilt ile 4 sütür.</li>
	<li>Fareyi kafese geri yerleştirdikten sonra ameliyat sonrası su sıkıntısını önlemek için 1 mL şırınga (SQ-PEN enjeksiyonu daha iyidir) kullanarak fareye ~0,2 mL steril salin verin.</li>
	<li>Longa puanı10göre reperfüzyon 24 saat sonra hayvanları seçin. Adım 1.1'de bir sonraki TTC boyama için Longa'nın 1−3 puanına sahip hayvanları ve 1.2'de 1, 35, 60, 90 günlük çalışma için 2−3 puan alan hayvanları seçin. NOT: Longa'nın skoru10: 0 skor, nörolojik açık yok; 1 puan, sol önpençe uzatmak için başarısızlık; 2 puan, sola doğru daire çizerek; 3 puan, sola düşüyor; 4 puan, kendiliğinden yürüyemez ve depresif bir bilinç vardır.</li>
	<li>Longa'nın skorunu tek yönlü ANOVA ile analiz edin. Gösterilen değerler ortalama ± S.D. P < 0.05 farkı gösterir.</li>
</ol>3. TTC boyama
NOT: Fare beyin dilimi kalıp ve bıçak büyük bir sıcaklık farkı nedeniyle yapışmasını önlemek için kullanılmadan önce -20 °C buzdolabında önceden soğutulmalıdır. Boyama sırasında, beyin dilimleri ve kültür plakası arasında yapışmayı önlemek, yetersiz boyama neden olabilir.
<ol><li>Adım 1.1 veya sensorimotor fonksiyonel testlerde adım 1.1 veya sensorimotor fonksiyonel testlerde Longa skoru sonra 400 mg / kg kloral hidrat intraperitoneal enjeksiyon ile sıçan anestezi.</li>
	<li>Farenin kafasını cerrahi makasla veya fare decapitation cihazıyla deşin. Cerrahi makas ve hemostatik forceps ile beyin çıkarın.</li>
	<li>Dilimlemesi kolaylaştırmak için beyni -20 °C'de 30 dk buzdolabında bekletin.</li>
	<li>Buzdolabından beyin çıkarın ve önceden soğutulmuş sıçan beyin dilim kalıp yerleştirin. Beyni önceden soğutulmuş bir bıçakla 2 mm kalınlığında altı bölüme kesin.</li>
	<li>6 kuyulu bir kültür plakasında %2 5-triphenyl-2H-tetrazolium klorür (TTC) ile kesitleri lekeleyin.</li>
	<li>Kültür 30−60 dk için bölümleri 37 °C sallayarak yatakta. Beyin iskemi alanı ve normal alan açıkça beyaz ve kırmızı olana kadar her 10 dakikada bir bölümleri çevirin.</li>
	<li>Arkadan beynin önüne doğru sırayla beyin dilimlerini dikey olarak sırayla sırayla sırayla sırayla sırayla yerleştirin. Her satırın toplam uzunluğunun aynı olduğundan emin olmak için bir cetvel kullanın. Dijital fotoğraf makinesiyle fotoğraf çekin.</li>
	<li>Enfarkt hacmini analiz edin.<ol>
<li>Photoshop yazılımı ile fotoğraf ön işlem<ol>
<li>Photoshop CS6 kullanarak fotoğraf alma. 00:00-00:14</li>
			<li>Beyin dilimlerini seçmek için Seç'i tıklatın, Seç'i tıklatın | Ters. 00:15-00:36</li>
			<li>Siyahı seçmek için Foreground'u tıklatın ve Tamam'ıtıklatın. 00:37-00:42</li>
			<li>Arka plan rengini doldurmak için Alt +Sil'e ve select'i seçmek için CTRL +D tuşuna basın. 00:43-00:46</li>
			<li>Dosyayı Tıklatın | Masaüstüne kaydedin. 00:47-01:08</li>
		</ol>
</li>
		<li>Image Pro Plus yazılımı ile fotoğrafın ön muamelesi.<ol>
<li>Image Pro Plus 6.0 yazılımını açın ve fotoğrafı içe aktarın. 01:09-01:24</li>
			<li>Hata değişikliği için, arka planın siyah olması için Kontrast Geliştirme aracıyla parlaklığı ayarlayın. 01:25-01:37</li>
			<li>Vurguları kaldırmak için Filtre'deki Ortanca aracını kullanın. 01:38-01:46</li>
		</ol>
</li>
		<li>Image Pro Plus yazılımı ile sol (normal) beyin alanını hesaplayın<ol>
<li>Segmentasyon kullanarak renk seçin ve H/S/Ideğerini ayarlayın, böylece beyin dilimleri siyah arka plandan ayrılmıştır. 01:47-02:12</li>
			<li>Saymaya Dön | Boyut. 02:13-02:16</li>
			<li>Count'a tıklayın | Beyni orta hattan ayırmak için Nesneleri Düzenle'de bölün. Yazılım otomatik olarak sol ve sağ beyin alanları ayırt edecektir. 02:17-02:49</li>
		</ol>
</li>
		<li>Image Pro Plus yazılımı ile doğru enfarkt beyin alanını hesaplayın<ol>
<li>3.8.1-3.8.2 adımlarını uygulayın. 02:50-03:14</li>
			<li>Say'ı Seçin | Boyut. 03:15-03:21</li>
			<li>Beraberlik için tıklayınız | Nesneleri Düzenlemearacını birleştir. Iskemik alanı el ile seçin ve iskemik alanı hesaplamak için Say'ı tıklatın. 03:16-05:31</li>
		</ol>
</li>
		<li>Image Pro Plus yazılımı ile sağlık beyin alanını hesaplayın<ol>
<li>3.8.1-3.8.2 adımlarını uygulayın. 05:32-06:44</li>
			<li>Segmentasyon kullanarak renk seçin ve H/S/Ideğerini ayarlayın, böylece beyin dilimlerinin normal kısmı siyah arka plandan ayrılmıştır. 06:45-07:10</li>
			<li>Saymaya Dön | Bu alanı hesaplamak için Boyut ve Count'a tıklayın. 07:11-07:21</li>
			<li>Beyni orta hattan ayırmak için Düzenle'deki Nesneleri Böl'e tıklayın. Yazılım otomatik olarak sol ve sağ beyin alanları ayırt edecektir. 07:22-08:08</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Enfarkt hacmini hesaplama (%) ve enfarkt ve küçültme hacmi (%): Enfarkt hacmi (%) = [sağ enfarkt alanı/(2 x sol beyin alanı)] x 100. Enfarktok ve küçültme hacmi (%) = [(sol beyin bölgesi - sağ sağlık beyin alanı) / (2 x sol beyin alanı)] x 100. NOT: Sağ beyin yaralı kısmıdır. Veriler tek yönlü ANOVA tarafından analiz edildi. Gösterilen değerler ortalama ± S.D. P < 0.05 farkı gösterir.</li>
</ol>4. Sensorimotor fonksiyonun değerlendirilmesi
NOT: Longa'nın 2−3 skoru na sahip sıçanlar (300 g, 3040 iplik cıvata, 3 saat beyin enfarktüs süresi) 1-90 gün arasında sensorimotor fonksiyon deneylerini yapmak üzere seçilmiştir. Sessiz olun ve bu çalışma döneminde hayvanları rahatsız etmeyin. Veriler iki yönlü ANOVA tarafından analiz edildi. Gösterilen değerler ortalama ± S.D. P < 0.05 farkı gösterir.
<ol><li>İki taraflı asimetri testi11<ol>
<li>Bir sıçanın her bir ön pençesinin safenöz kısmına eşit basınçla üç kez kağıt bant (5 cm uzunluğunda, 0,8 cm genişliğinde) sarın.</li>
		<li>Her sıçan için, her bir foreclaw temas ve bant etkilenmemiş pençe süreleri ve etkilenen pençe süreleri de dahil olmak üzere kamera ile 5 dakika içinde kaldırılır sayısını kaydedin.</li>
		<li>30 dakika sonra, 4.1.1 ve 4.1.2 adımlarını tekrarlayın.</li>
		<li>Sensorimotor sapmanın ortalama değerini hesaplayın (%): Sensorimotor önyargı (%) = (etkilenmemiş pençe süreleri - etkilenen pençe süreleri)/(etkilenmemiş pençe süreleri + etkilenen pençe süreleri) x 100</li>
	</ol>
</li>
	<li>Izgara yürüyüş testi<ol>
<li>Sıçanı 2,5 cm2'likızgara açıklıkları ile yüksek bir ızgara yüzey platformunun (alan: 1 m2; yükseklik: 90 cm) ortasına yerleştirin.</li>
		<li>Farenin ızgara yüzeyinden geçmesi için fareyi teşvik etmek için farenin kalçalarını hafifçe itin.</li>
		<li>Etkilenmemiş (sağ) ve etkilenen (sol) uzuvlar tarafından yapılan ayak hatalarının sayısını ve 1 dk kamera ile toplam adım numarasını kaydedin.</li>
		<li>Hata sürelerini hesaplayın: Hata süreleri (%) = [etkilenmemiş (sağ) ekstremite - etkilenen (sol) ekstremite]/toplam adım sayısı x 100. NOT: 20 adımlı verilerin altındaki toplam adım sayısı kaldırıldı.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Rotarod testi12,13<ol>
<li>Bilgisayarda 5 dakika süre içinde 13 rpm hıza yardımcı yazılım kullanarak sıçan dönen çubuk yorulma cihazı (çapı 90 mm) ayarlayın.</li>
		<li>Bilgisayar programlarını başlatın ve fareyi aynı anda rotarod basamaklarına yerleştirin.</li>
		<li>Sıçan basamak tan düşerse veya 5 dakika boyunca yürümeye devam ederse denemeyi bitirin ve dönen süreyi kaydedin.</li>
		<li>Fare30 dakika dinlendirin.</li>
		<li>Adımları 4.3.2−4.3.4'ün iki katı daha tekrarlayın ve son dönen zaman olacak maksimum değeri seçin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kaldırma halatı testi14<ol>
<li>Kaldırma halat aletini (70 cm yüksekliğinde; halat 0,2 cm çapında ve 40 cm uzunluğunda) masanın üzerine yerleştirin.</li>
		<li>Farenin ipi ön ayaklarıyla tutup fareyi assın.</li>
		<li>Asılı kalma süresini kaydedin ve puanları hesaplayın. NOT: İpüzerinde 3 puan: 0−2 s; 2 puan: 3−4 s ipüzerinde; 1 puan: 5−6 s ipte; 0 puan: ipüzerinde 7'den fazla s.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Kong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralization+of+chemokine-like+factor+1%2C+a+novel+C-C+chemokine%2C+protects+against+focal+cerebral+ischemia+by+inhibiting+neutrophil+infiltration+via+MAPK+pathways+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Neutralization of chemokine-like factor 1, a novel C-C chemokine, protects against focal cerebral ischemia by inhibiting neutrophil infiltration via MAPK pathways in rats.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 112(2014).</li>
<li>Jiang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+bilobalide+on+cerebral+ischemia+and+reperfusion+injury+are+associated+with+inhibition+of+pro-inflammatory+mediator+production+and+down-regulation+of+JNK1%2F2+and+p38+MAPK+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of bilobalide on cerebral ischemia and reperfusion injury are associated with inhibition of pro-inflammatory mediator production and down-regulation of JNK1/2 and p38 MAPK activation.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 167(2014).</li>
<li>Thomas, A., Detilleux, J., Flecknell, P., Sandersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Stroke+Therapy+Academic+Industry+Roundtable+%28STAIR%29+Guidelines+on+Peri-Anesthesia+Care+for+Rat+Models+of+Stroke%3A+A+Meta-Analysis+Comparing+the+Years+2005+and+2015%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Impact of Stroke Therapy Academic Industry Roundtable (STAIR) Guidelines on Peri-Anesthesia Care for Rat Models of Stroke: A Meta-Analysis Comparing the Years 2005 and 2015.</a> PLoS One. 12, e0170243(2017).</li>
<li>Kumar, A., Aakriti,, Gupta, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+animal+models+of+stroke%3A+An+update%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">A review on animal models of stroke: An update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li>
<li>Tong, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enhanced+model+of+middle+cerebral+artery+occlusion+in+nonhuman+primates+using+an+endovascular+trapping+technique%5BTitle%5D)+AND+%22AJNR+Am.+Journal+of+Neuroradiology%22%5BJournal%5D)">An enhanced model of middle cerebral artery occlusion in nonhuman primates using an endovascular trapping technique.</a> AJNR Am. Journal of Neuroradiology. 36, 2354-2359 (2015).</li>
<li>Li, F., Omae, T., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+hyperthermia+and+its+mechanism+in+the+intraluminal+suture+middle+cerebral+artery+occlusion+model+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Spontaneous hyperthermia and its mechanism in the intraluminal suture middle cerebral artery occlusion model of rats.</a> Stroke. 30, 2464-2470 (1999).</li>
<li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+stroke%3A+translational+potential+at+present+and+in+2050%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Neurology%22%5BJournal%5D)">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9, 541-551 (2014).</li>
<li>Abrahám, H., Somogyvári-Vigh, A., Maderdrut, J. L., Vigh, S., Arimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filament+size+influences+temperature+changes+and+brain+damage+following+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Filament size influences temperature changes and brain damage following middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Exp. Brain Res. 142, 131-138 (2002).</li>
<li>Sun, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coumarin+derivatives+protect+against+ischemic+brain+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Coumarin derivatives protect against ischemic brain injury in rats.</a> European Journal of Medicinal Chemistry. 67, 39-53 (2013).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li>
<li>Smith, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+site+and+lesion+topology+determine+efficacy+of+a+human+neural+stem+cell+line+in+a+rat+model+of+chronic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Implantation site and lesion topology determine efficacy of a human neural stem cell line in a rat model of chronic stroke.</a> Stem Cell. 30, 785-796 (2012).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+Forsythia+suspense+extract+with+antioxidant+and+anti-inflammatory+properties+in+a+model+of+rotenone+induced+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology%22%5BJournal%5D)">Protective effects of Forsythia suspense extract with antioxidant and anti-inflammatory properties in a model of rotenone induced neurotoxicity.</a> Neurotoxicology. 52, 72-83 (2016).</li>
<li>Milani, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly-arginine+peptides+reduce+infarct+volume+in+a+permanent+middle+cerebral+artery+rat+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Poly-arginine peptides reduce infarct volume in a permanent middle cerebral artery rat stroke model.</a> BMC Neuroscience. 17, 19(2016).</li>
<li>DeGraba, T. J., Ostrow, P., Hanson, S., Grotta, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+performance%2C+histologic+damage%2C+and+calcium+influx+in+rats+treated+with+NBQX+after+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Motor performance, histologic damage, and calcium influx in rats treated with NBQX after focal ischemia.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14, 262-268 (1994).</li>
<li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+a+preclinical+animal+model+to+assess+brain+recovery+after+acute+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Validation of a preclinical animal model to assess brain recovery after acute stroke.</a> European Journal of Pharmacology. 835, 75-81 (2018).</li>
<li>Zuo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IMM-H004+prevents+toxicity+induced+by+delayed+treatment+of+tPA+in+a+rat+model+of+focal+cerebral+ischemia+involving+PKA-and+PI3K-dependent+Akt+activation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">IMM-H004 prevents toxicity induced by delayed treatment of tPA in a rat model of focal cerebral ischemia involving PKA-and PI3K-dependent Akt activation.</a> European Journal of Neuroscience. 39, 2107-2118 (2014).</li>
<li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-3-n-butylphthalide+Promotes+Neurogenesis+and+Neuroplasticity+in+Cerebral+Ischemic+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Neuroscience+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">L-3-n-butylphthalide Promotes Neurogenesis and Neuroplasticity in Cerebral Ischemic Rats.</a> CNS Neuroscience & Therapeutics. 21, 733-741 (2015).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Akut serebral iskemide iyi kullanılan yöntem ve davranışsal göstergeleri oluşturan birçok modelde beyin iskemisinin iyileşme ve sekeli evrelerinde önemli değişiklikler olmayabilir16,17. Ancak, iyileşme ve sekel aşamalarında beyin iskemik olan hastaların sayısı en büyüktür. İskemi inmenin iyileşme ve sekel aşamaları için uygun bir hayvan modeli seçmek esastır.
Farelerde MCAO/R modelini farelerin uygun ağırlığını (260−330 g), iplik cıvat...

Beyin iskemi farklı inme sonrası göstergeleri ile üç aşamaya ayrılır: akut evre (içinde 1 hafta), iyileşme aşaması (1 hafta-6 ay), ve sekel evresi (6 aydan fazla). Şu anda, çoğu çalışma beyin iskemi akut aşamasında çünkü önemli etkisi ve çok göreceli araştırma modelleri1,2,3odaklanmak . Ancak, beyin iskemisinin iyileşme ve sekel aşamaları uzun süreli sakatlık komplikasyonları nedeniyle göz ardı edilemez. Bu nedenle, bu çalışmanın amacı beyin iskemi kurtarma ve sekel aşamaları araştırmak için istikrarlı, güvenilir ve nispeten basit bir hayvan modeli keşfetmektir.
Birçok deneysel beyin iskemi modelleri arasında, sağ orta serebral arter içine iplik cıvata ekleme yoluyla orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) kullanın (MCA). Bu model insan inme benzer, hangi büyük enfarktk hacimleri üretebilir, inme ile ilgili birçok davranış bozuklukları neden, ve iplik cıvata kaldırarak kan reperfüzyonu izin verebilir (R) iplik cıvatakaldırarak 4,5,6. MCAO / R da beyin iskemi altın standart hayvan modeli olarak kabul edilir7. Ayrıca, beyin hasarının şiddeti çapı ve iplik cıvata ekleme uzunluğuna bağlıdır, beyin iskemi süresi, ve hayvan ağırlığı (büyük sıçanlar daha büyük beyin ve kalın serebral damarlar var)8. Bu nedenle, iplik cıvata tipi değiştirerek, enfarktüs süresi, ve sıçan ağırlığı, uygun bir model kurtarma ve MCAO / R sıçanlarda beyin iskemi sekeli aşamaları için bulunabilir. Sıçan modelini doğrulamak için, TTC boyama ve sensorimotor fonksiyon deneyleri (ikili asimetri testi, ızgara yürüme testi, rotarod testi ve kaldırma ipi testi) kullanarak MCAO/R modelinin 1 günlük, 35 günlük, 60 günlük ve 90 günlük bir çalışmasını gerçekleştirdik.

<table><tbody><tr><td>Anatomik Mikroskop</td><td>Leica (Almanya)</td> <td>S8</td><td>Mikroskobik ameliyat aleti</td></tr><tr><td>Bıçak</td><td>Gellette</td> <td>/</td> <td>Kesme beyin bölümleri</td></tr><tr><td>Sabit Sıcaklık Sallama Yatağı</td><td>Taicang Deney Ekipmanları Fabrikası</td><td>THZ-C</td><td>Beyin bölümlerini eşit ve sabit bir sıcaklıkta lekeli tutmak için</td></tr><tr><td>Dijital Fotoğraf Makinesi</td><td>Canon</td><td>700D</td><td>Çekmek için TTC boyama</td></tr><tr><td>resimleri Elektrikli Tıraş Makinesi</td><td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td><td>3000 #</td> <td>Sıçanların boynundan kılların alınması</td></tr><tr><td>Forseps Hamostatik</td><td>Şangay Tıbbi cihaz Co., Ltd.</td><td>14 cm</td><td>Beyin kaldırma için kullanma</td></tr><tr><td>Image Pro Plus Software</td><td>Media Cybernetics, Inc.</td><td>6.0</td><td>Enfarktüs hacmini analiz edin</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>RWD Yaşam Bilimleri</td><td>217170702</td><td>Anestezik gaz</td></tr><tr><td>Microforceps</td><td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td><td>10 cm</td><td>Vasküler mikromanipülasyon</td></tr><tr><td>Mikro kesme</td><td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td><td>10 cm</td><td>Vasküler mikromanipülasyon</td></tr><tr><td>Oftalmik Forseps</td><td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td><td>10 cm</td><td>Yardımcı cilt ve kas anatomisi</td></tr><tr><td>Fttalmik Makas</td><td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td><td>10 cm</td><td>Boyun derisini kesmek için kullanma</td></tr><tr><td>Sıçan Beyin Dilimi Kalıbı Şangay</td><td>Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td><td>400 g</td><td>Beyin dokusunun standart, düzgün kesimi için</td></tr><tr><td>Sıçan Döner Çubuk Yorulma Aparatı</td><td>Anhui Zhenghua Biyolojik Alet ve Ekipman Co., Ltd.</td><td>ZH-300B</td><td>Sensorimotor fonksiyonunu test etmek için</td></tr><tr><td>Küçük Hayvan Anestezi Makinesi</td><td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td><td>ABM3000</td><td>Bir gaz anestezik makinesi</td></tr><tr><td>Küçük Hayvan Termostatı</td><td>Pekin Damida Technology Co., Ltd.</td><td>DM.7-YLS-20A</td><td>Çalışma sırasında hayvan vücut ısısını sabit tutmak için</td></tr><tr><td>Cerrahi Makas</td><td>Shanghai Medical device Co., Ltd.</td><td>16 cm</td><td>Dekapitate ve beyin çıkarma için kullanma</td></tr><tr><td>Sütür</td><td>Shanghai Jinhuan Medical Devices Co., Ltd.</td><td>4-0 / 5-0</td><td>Deri ve kas dikişleri için kullanma / Vasküler ligasyonlar için kullanma</td></tr><tr><td>Dişli Cıvata</td><td>Beijing Cinontech Co., Ltd.</td><td>2636/2838/3040/3043-A4</td><td>Sıçanlarda orta serebral arterin tıkanması</td></tr><tr><td>5-trifenil-2H-tetrazolyum klorür (TTC)</td><td>Sigma</td><td>LOT # BCBP3272V</td><td>Beyin bölümü boyama reaktifi</td></tr></tbody></table>

sıçanlarda akut İnme sonrası beyin İyileşmesini değerlendiren bir preklinik model

A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

Bu çalışmanın amacı, kurtarma ve sekel aşamalarında bir hayvan beyin iskemi modeli kurmak ve doğrulamak oldu. Erkek Sprague-Dawley sıçanlarında orta serebral arter oklüzyonu/reperfüzyonu (MCAO/R) modeli seçildi. Farenin ağırlığını (260−330 g) değiştirerek, iplik cıvata tipi (2636/2838/3040/3043) ve beyin enfarktüs süresi (2-3 saat), longa skoru, daha büyük bir enfarkt hacmi ve daha büyük bir model başarı oranı Longa skoru ve TTC boyama kullanılarak tarandı. Optimum model durumu (300 g, 3040 iplik cıvata, 3 saat beyin enfarktüs süresi) duyusal motor fonksiyonları ve enfarktüs hacmi nin değerlendirilmesi ile reperfüzyon sonrası 1-90 günlük bir gözlem döneminde elde edilmiş ve kullanılmıştır. Bu koşullarda, ikili asimetri testi 1 ile 90 gün arasında önemli bir fark vardı ve ızgara yürüyüş testi 1 ila 60 gün arasında önemli bir fark vardı; her iki fark uygun bir sensorimotor fonksiyonel test olabilir. Böylece, beyin iskemi kurtarma ve sekel aşamalarında yeni bir sıçan modelinin en uygun durumu bulundu: 3 h beyin enfarktüs için 3040 iplik cıvata ile MCAO yapıldı 300 g sıçanlar ve daha sonra reperfüzyon. Uygun sensorimotor fonksiyonel testler ikili asimetri testi ve ızgara yürüyüş testi idi.

Longa skoru ve TTC boyama, ortalama ağırlık (275/300/320 g), cıvata tipleri (2636/2838/3040/3043) farklı tedaviler ile bir MCAO / R modeli için yukarıda belirtilen prosedürü kullanarak; Tablo 1) sıçanlarda optimal beyin iskemi modelinin taranması için iskemik (2-3 saat) ve 1 gün reperfüzyon kullanılmıştır. 300 g ağırlık, 3040 iplik cıvata ve 3 saat beyin enfarktüs süresi model parametreleri en büyük serebral enfarktüs, en yüksek Longa skoru ve en büyük model başarı oranı ...

Bu çalışmanın amacı, 1-90 sonrası orta serebral arter oklüzyonu/reperfüzyonu (MCAO/R) sonrası beyin enfarktüsü ve sensorimotor fonksiyonunu test ederek beyin iskemisinin iyileşme ve sekel evrelerinde araştırma için bir hayvan modeli oluşturmak ve doğrulamaktır. farelerde gün.

Sıçanlarda Akut İnme Sonrası Beyin İyileşmesini Değerlendiren Bir Preklinik Model

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

Bu çalışma, beyin iskemisinin iyileşmesini ve sekeli evrelerini araştırmak için yerleşik bir hayvan modeli kullanmaktadır. Bu tekniğin başlıca avantajları istikrarlı, güvenilir ve nispeten basit olmasıdır. Bir cerrahi sabitleme masasına anestezili bir sıçan yerleştirerek başlayın.Ameliyat boyunca, küçük bir hayvan termostatında 37 santigrat derecede sıçanın vücut ısısını koruyun. Anestezi makinesi maskesi ağız bağlayın ve ekstremite gerginlik, kornea refleksleri ve ağrı eksikliği ile derin anestezi onaylamak. Kağıt bandajlar kullanarak farenin uzuvlarını ameliyat masasına sabitle.Elektrikli tıraş ile boyun katını çıkarın ve boynu %75 alkolle sterilize edin. Boynun merkezi uzunlamasına şekli boyunca 2-3 santimetre kesmek için oftalmik makas kullanın. Ve sonra oftalmik büşonlar ile, deri altı kas ayırın.Tamamen görme alanı ortaya çıkarmak için ev yapımı retraktör kullanın. Tüm sağkalım cerrahisi için uygun aseptik tekniğin sunulması için özen sağlanmalıdır. Videoda daha sonra gösterilen teknik tüm yordam boyunca uygulanmalıdır.Ortak karotis arter izole etmek için mikro forceps kullanın, dış karotis arter ve internal karotis arter. Mikroskop altında çalışmak, 8-0 kullanın sert düğüm i

a-preclinical-model-to-assess-brain-recovery-after-acute-stroke

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Sıçan iskemik beyin hasarı Cerrahi indüksiyon inme araştırma için yaygın olarak kullanılan bir model. Burada orta serebral arter oklüzyonu ile fokal serebral iskemi indüksiyon göstermektedir. Histolojik boyama ve manyetik rezonans görüntüleme ile enfarkt Görselleştirme de gösterilir.

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

inme patofizyolojisini anlamak için, güvenilir modeller kullanmak önemlidir. Farelerde en sık kullanılan inme modellerinden birini anlatacağız Bu yazıda, orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli olarak adlandırılan reperfüzyon ile (ayrıca lümen içi filament veya sütür modeli olarak adlandırılır).

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

Burada sunulan tek bir darbe ile elektrikstimülasyon yoluyla bir sıçan modelinde akut pontin enfarktüsü kurmak için bir protokoldür.

Elektrikstimülasyon ile Sıçanlarda Akut Pontin Enfarktüsü Kurulması

Bu protokol, aynı kemirgen beyin örnekleri kümesinde iskemik beyin hasarının en önemli üç parametresini ölçmenin yeni bir tekniğini açıklar. Sadece bir beyin örneği kullanmak etik ve ekonomik maliyetler açısından oldukça avantajlıdır.

Tek Bir Kemirgen Beyin Örneklerinde İnme Sonrası Serebral Ödem, Enfarktüs Bölgesi ve Kan-Beyin Bariyeri Kırılımının Ölçülmesi

Burada açıklanan fototrombotik inme modeli, bir inmenin, ışığa duyarlı bir boyanın kullanılmasından sonra lazer aydınlatma kullanılarak kalıcı mikrovasküler tıkanıklık indüklenerek sağlam kafatasından üretildiği yerdir.

Farelerde Modelleme İnme: Fototomboz ile Fokal Kortikal Lezyonlar

Deneysel inme araştırmalarında orta serebral arter tıkanma (MCAo) farklı modelleri kullanılmaktadır. Burada, serebrovasküler trombüsin spontan pıhtı lizisi veya tedavisi nedeniyle çıkarıldığı insan inmesini taklit etmeyi amaçlayan dış karotis arter (ECA) yoluyla geçici MCAo'nun deneysel bir inme modeli tanımlanmıştır.

Farelerde Modelleme İnme: Dış Karotid Arter yoluyla Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Bu protokol, orta büyüklükte bir enfarktüse ve mükemmel bir hayatta kalma oranına sahip benzersiz bir fare vuruşu modeli gösterir. Bu model, klinik öncesi inme araştırmacılarının iskemi süresini uzatmasına, yaşlı fareleri kullanmasına ve uzun vadeli fonksiyonel sonuçları değerlendirmesine olanak tanır.

Yaşlı Farelerde İnme Sonuçlarını İncelemek için Modifiye Transkraniyal Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Sıçan in vivo modelleri, iskemik inme için patolojik mekanizmaları ve terapötik hedefleri araştırmak için vazgeçilmez araçlardır. Bu çalışma, sıçanlarda orta serebral arter tıkanıklığını (MCAO) takiben enfarktüslü beyin dilimlerinde immünofloresan boyama gerçekleştirmeyi açıklayacaktır.

İskemik İnmenin Sıçan Modelinde İmmünofloresan ile Hücre Ölümü Sinyalinin Değerlendirilmesi

Koku ensheathing hücreleri (OECS), birincil koku nöronların büyümesine izin vermek nöral tepe hücreleri bulunmaktadır. Bu özel özellik, hücresel nakli için de kullanılabilir. Burada bir gırtlak sinir yaralanması modelinde OECS kullanımına göre hücre transplantasyonu bir model mevcut.

Periferik Sinir Hasarı Sonrası Fonksiyonel Kurtarma Değerlendirmesinde Koku Ensheathing Hücre Nakli

Bu iletişim kuralı bir en iyi duruma getirilmiş Nuygulanmasını gösteren-metil-D-glucamine (NMDG) koruyucu kurtarma yöntemi beyin dilim hazırlık. Bir tek medya formülasyon güvenilir bir şekilde sağlıklı beyin dilimleri her yaştan ve çeşitli deneysel uygulamalar için hayvanlardan elde etmek için kullanılır.

En iyi duruma getirilmiş bir Nkullanarak akut beyin dilimleri hazırlanması-metil-D-glucamine koruyucu kurtarma yöntemi

Keşfedin sıçanlarda akut inme sonrası beyin iyileşmesini değerlendiren MCAO/R preklinik modelini. Bu yöntem, iskemik beyin hasarı ve iyileşme mekanizmalarını incelemek için güvenilir bir araç sunar.

Sıçanlarda Akut İnme Sonrası Beyin İyileşmesini Değerlendiren Bir Preklinik Model

Daha fazla video keşfet