Name: El-Tozlaşma, Mikroskopi ve Genetik Analizleri Birleştiren Kayısıda Öz ve İnter-(in)Uyumluluk İlişkilerinin Belirlenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: Öğrenin kayısı çeşitlerinde öz ve inter-uyumluluk ilişkilerini floresan mikroskopi ve PCR analiziyle belirlemeyi. Bu yöntem laboratuvar koşullarında uyumluluk değerlendirmesi yaparak üreme programlarına rehberlik eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades-European Development Fund, Avrupa Birliği (AGL2016-77267-R ve AGL2015-74071-JIN) tarafından finanse edilmiştir; Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria (RFP2015-00015-00, RTA2017-00003-00); Gobierno de Aragón-Avrupa Sosyal Fonu, Avrupa Birliği (Grupo Consolidado A12_17R), Fundación Biodiversidad ve Agroseguro S.A.

1. Kendi kendine uyumluluk tayini
<ol><li>Alandaki çiçekleri tadına var. İstenmeyen önceki tozlaşmayıFigure 1Aönlemek için, kayısı28için BBCH ölçeğinde 58.</li>
	<li>
Laboratuvarda kendi kendine ve çapraz tozlaşmalara
	<ol>
<li>Balon aşamasında çiçek anthers çıkarın ve laboratuvar sıcaklığında kuruması için bir kağıt parçası üzerine yerleştirin.</li>
		<li>24 saat sonra polen tanelerini ince bir örgü (0,26 mm)(Şekil 1B)kullanarak elek.</li>
		<li>Her kendi kendine tozlaşma ve çapraz tozlaşma için aynı balon aşamasında 30 çiçekten oluşan bir grubu hadım edin ve pistilleri laboratuvar sıcaklığında sudaki çiçekçi köpüğüne yerleştirin(Şekil 1C).</li>
		<li>El emasculation sonra aynı çati 24 saat çiçekpolen ile bir boya fırçası yardımıyla pistils tozlaşma. Buna ek olarak, kontrol olarak uyumlu bir tozlaştırıcı çiçeklerinden polen ile her çeşit pistils başka bir dizi tozlaşma (Şekil 1D).</li>
		<li>72 saat sonra, etanol/asetik asit (3:1) fiksatif çözeltisi içinde, 4 °C29'daen az 24 saat boyunca pistilleri düzeltin. Daha sonra fiksatif atın ve örneklertamamen çözelti içinde batırılmış olduğundan emin% 75 etanol ekleyin. Numuneler bu çözeltide 4 °C'de8,17,30,,31,32kullanıma kadar saklanabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
İn vitro polen çimlenmesi ile polen canlılığının değerlendirilmesi
	<ol>
<li>Çimlenme ortamını hazırlamak için, ağırlık 25 g sakaroz, 0.075 g borik asit (H3BO3)ve 0.075 g kalsiyum nitrat (Ca(NO3)2)33.</li>
		<li>250 mL distile su içinde orta bileşenleri ekleyin ve tamamen çözünür.</li>
		<li>2 g agarose ekleyerek ortamı katılatın ve girdap ile karıştırın.</li>
		<li>Bir pH metre kullanarak ortamın pH'ını kontrol edin ve NaOH veya HCl çözeltisi ile değeri 7.0 olarak ayarlayın.</li>
		<li>Otoklav karışımı orta sterilize etmek.</li>
		<li>Otoklavlama sonra, orta soğutun ve steril bir laminar akış başlık Petri yemekleri içine dağıtmak.</li>
		<li>Katılaşmış polen çimlenme ortamında kontrollü polenler için kullanılan aynı çeşitlerin polen tanelerini dağıtır ve 24 saat6'dansonra mikroskop altında gözlemleyin. NOT: Laminar akış başlığını sterilize etmek için yüzeyi %70 etanol ile temizleyin ve 10 dakika boyunca UV lambasını açın.</li>
		<li>Petri yemeklerini kullanıma kadar 4 °C'de buzdolabında saklayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Mikroskopi gözlemleri
	<ol>
<li>Pistilleri 1 saat boyunca distile suyla üç kez yıkayın ve 4 °C'de %5 sodyum sülfit bırakın. 24 saat sonra, 1 kg/cm2 sodyum sülfit 10 dakika boyunca dokuları yumuşatmak için onları otoklav34.</li>
		<li>Bir cam slayt üzerinde otoklavlı pistils yerleştirin ve, bir neşter yardımıyla, polen tüpleri daha iyi bir görselleştirme elde etmek için yumurtalık etrafında trichomes kaldırın. Daha sonra pistibir camla ezin.</li>
		<li>%0.1 (v/v) anilin mavisi lekesini hazırlayın: 0,1 mL'lik anilin mavisinin 0,1 mL'lik 0,1 N potasyum fosfat tribasic karışımını (K3PO4). Polen tüpü büyümesi sırasında kalkoz depozisyonlarını lekelemek için preparatların üzerine bir damla aniline mavisi uygulayın.</li>
		<li>340-380 bandpass ve 425 longpass filtreleri kullanarak UV epifloresans ile bir mikroskop ile tarzı boyunca polen tüpleri gözlemleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. DNA çıkarma
<ol><li>Örnek 2-3 ilkbaharda alanda yaprakları. Elde edilen DNA eski yapraklara göre fenolik bileşiklerin daha yüksek kalite ve daha düşük seviyelerde olduğundan, genç evrelerde yaprakların örnekalınması tavsiye edilir.</li>
	<li>Ticari olarak kullanılabilen bir kitte açıklanan adımları izleyerek Genomik DNA ayıklayın (Bkz. Malzeme Tablosu).</li>
	<li>UV-vis spektrofotometre (260 nm) kullanarak DNA konsantrasyonlarının miktarını ve kalitesini analiz edin.</li>
</ol>3. S-alel tanımlama
<ol><li>
PCR Reaksiyonlarının Ayarlanması
	<ol>
<li>Her DNA çıkarma örneğinin distile suyunda 50 ng/μL seyreltme hazırlayın.</li>
		<li>PCR reaktiflerini yavaşça eritin ve buzda tutun. DNA polimeraz'ı ihtiyaç duyulana kadar dondurucuda bırakın.</li>
		<li>Astarların farklı kombinasyonlarını kullanarak amplifikasyon reaksiyonlarını hazırlayın. Tablo 1'dekibileşenleri birleştirerek PCR reaksiyon karışımıoluşturun. Vortex PCR reaksiyonu iyi karıştırın ve PCR plaka her kuyuya astar farklı kombinasyonları için belirtilen hacmi dağıtmak. Daha sonra, her kuyuda 1 μL DNA seyreltme ekleyin.</li>
		<li>PCR plakasını termocycler'a yerleştirin ve Tablo 1'degösterilen ilgili PCR programını çalıştırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Güçlendirilmiş parçaları analiz edin. PCR amplifiye parçaları analiz etmek için başlıca iki farklı yolu vardır: kapiller elektroforezi (CE) floresan etiketli astarlar ile veya etiketli olmayan astar ile agarose jel elektroforez amfisi görselleştirmek gibi.<ol>
<li>
Kılcal Elektroforez
		<ol>
<li>Yükleme tamponu hazırlamak için 35 μL deiyonize formamid'i 0,45 μL etiketli boyutlandırma standardı ile karıştırın. Girdap reaktif iyi karıştırmak ve daha sonra okuyucu plaka kuyusuna 35,5 μL dağıtmak.</li>
			<li>Kuyuya 1 μL PCR ürün ekleyin. Buna ek olarak, su buharlaşmasını önlemek için mineral yağ bir damla ekleyin.</li>
			<li>Ayırma plakasını ayırma tamponu ekleyerek hazırlayın.</li>
			<li>Gen analizörüyle birlikte verilen ticari yazılımı kullanın (bkz. Malzemeler Tablosu). Yeni bir örnek plaka oluşturun ve örnek adları plakadaki tüm kuyulara kaydedin.</li>
			<li>Çözümleme yöntemini seçin. Bu durumda, numuneleri 120 s için 90 °C'de denatüre, 30 s için 2,0 kV enjekte edin ve 35 dk için 6,0 kV'da ayırın.</li>
			<li>İki plakayı gen analizörüne yerleştirin. Kılcal damar dizisini distile suyla doldurun.</li>
			<li>Patentli lineer poliakrilamid (LPA) jeli yükleyin. Son olarak, Çalıştır'ıtıklatın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Jel Elektroforez
		<ol>
<li>150 mL'lik 1x TAE (Tris-asetat-EDTA) elektroforezinde 150 mL'lik moleküler biyoloji sınıfı agarose 1.5 g ekleyerek %1 agarose jel (40 mM Tris, 20 mM asetik asit ve pH 8.0'da 1 mM EDTA) hazırlayın. 2-3 dk mikrodalga ısıtma ile agarose çözünür.</li>
			<li>DNA'yı görselleştirmek için, bir nükleik asit lekesi 4 μL ekleyin (Bkz. Malzemeler Tablosu) ve hafifçe karıştırın.</li>
			<li>Bir jel tepsiiçine, merdivenler, kontroller ve numuneler için yeterli kuyular ile bir jel tarak ekleyin. Sonra, jel tepsinin ortasına yavaş yavaş karışımı dökün ve kabarcıklar kaçının.</li>
			<li>Jel tamamen katılaşmış kadar oda sıcaklığında 30-45 dakika boyunca jel soğumasını bekleyin. Elektroforez odasında jel tanıtın, jel tarak çıkarın ve jel kapsayacak kadar 1x TAE tampon ile oda doldurun. NOT: Jelin yerleşimini kontrol edin. Negatif yüklü DNA katota doğru göç ettiği için kuyular negatif kutbuna yakın yerleştirilmelidir.</li>
			<li>PCR ürünlerine 5 μL yükleme tamponu (%0,1 (v/v) bromofenol mavisi ekleyin ve iyice karıştırın.</li>
			<li>Bantların boyutunu tahmin etmek için 5 μL DNA moleküler ağırlık merdiveni yükleyin (bkz. Malzeme Tablosu).</li>
			<li>Numuneleri jelin ek kuyularına yükleyin.</li>
			<li>Tüm numuneler ve DNA moleküler ağırlık merdiveni yüklendikten sonra jeli 90 V'de 1-1,5 saat çalıştırın, ta ki mavi boya hattı jelin uzunluğunun yaklaşık %75'ine kadar.</li>
			<li>Nükleik asitler için bir transilluminator bantları görselleştirin.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Geleneksel olarak, en ticari kayısı Avrupa çeşitleri kendi kendine uyumlu36edildi. Bununla birlikte, son yıllarda üreme programlarında ebeveyn olarak Kuzey Amerika kendini uyumsuz çeşitlerin kullanımı bilinmeyen tozlaşma gereksinimleri7ile yeni kendini uyumsuz çeşitlerin artan sayıda serbest bırakılması ile sonuçlandı7 ,8,37. Bu nedenle kayısı çeşitlerinde öz ve inter-(in) uyumluluk ilişkilerinin belirlen...

Kendi kendine uyumsuzluk kendi kendine tozlaşma önlemek ve1outcrossing teşvik çiçekli bitkilerin bir stratejidir. Rosaceae'de bu mekanizma, esas olarak multiallelic locus S2tarafından kontrol edilen Gametofitik Kendi Kendine Uyumsuzluk Sistemi (GSI) tarafından belirlenir. Tarzında, RNase geni S-stylar determinant kodlar, bir RNase3, Bir F-box protein, S-polenbelirleyici belirler, SFB gen4tarafından kodlanmış iken . Kendi kendine uyumsuzluk etkileşimi ovule döllenme engelleyen tarzı boyunca polen tüpü büyüme inhibisyonu yoluyla gerçekleşir5,6.
Kayısı, bir varietal yenileme son yirmi yılda dünya çapında yer almıştır7,8. Yeni çeşitlerin önemli bir sayı bu giriş, farklı kamu ve özel üreme programlarından, bilinmeyen tozlaşma gereksinimleri ile kayısı çeşitlerinin artmasına neden olmuştur8.
Kayısıda tozlaşma gereksinimlerini belirlemek için farklı metodolojiler kullanılmıştır. Alanında, kendini-(in)uyumluluk kafesli ağaçlarda veya hadım edilmiş çiçeklerde kontrollü pollinations tarafından kurulmuş ve daha sonra meyve seti yüzdesi kayıt9,10,11,12. Buna ek olarak, kontrollü pollinations çiçek yarı-in vivo kültür ve floresan mikroskopi8altında polen tüp davranış analizi tarafından laboratuvarda yapılmıştır 8,13,14,15,16,17. Son zamanlarda, pcr analizi ve dizileme gibi moleküler teknikler, RNase ve SFB genlerinin çalışmasına dayalı uyumsuzluk ilişkilerinkarakterizasyonu izin var18,19. Kayısıda, otuz üç S-alel bildirilmiştir (S1 - S20, S22 - S30, S52, S53, Sv, Sx), kendi kendine uyumluluk ile ilgili bir alel dahil (Sc)12,18,20,21,22,23,24. Şimdiye kadar, 26 uyumsuzluk grupları S-genotip8,9,17,,25,26,27göre bu tür bıçaklanmış edilmiştir. Aynı Salellerine sahip çeşitleri birbirine uyumsuz, en az bir farklı S-alel ile ve dolayısıyla farklı uyumsuz gruplara ayrılan çeşitleri birbirine uyumludur.
Kayısı çeşitlerinin tozlaşma gereksinimlerini tanımlamak için, flüoresan mikroskobu ile öz-(in)uyumluluk tayinini, kayısı çeşitlerinde PCR analizi ile S-genotipinin tanımlanması ile birleştiren bir metodoloji yi tanımlıyoruz. Bu yaklaşım uyumsuzluk gruplarının oluşturulmasına ve tarikatlar arasındaki uyumsuzluk ilişkilerinin açıklığa kavuşturulmasına olanak sağlar.

<table><tbody><tr><td>Agarose D1 Düşük EEO</td><td>Conda</td><td>8010.22</td><td></td></tr><tr><td>BIOTAQ DNA Polimeraz kiti</td><td>Bioline</td><td>BIO-21060</td><td></td></tr><tr><td>Parlak alan mikroskobu</td><td>Leica Microsystems</td><td>DM2500</td><td></td></tr><tr><td>CEQ Sistem Yazılımı</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNeasy Plant Mini Kit</td><td>QIAGEN</td><td>69106</td><td></td></tr><tr><td>dNTP Seti, 4 x 25 ve mikro; mol</td><td>Bioline</td><td>BIO-39025</td><td></td></tr><tr><td>GenomeLab DNA Boyutu Standart Kiti - 400</td><td>Beckman Coulter</td><td>608098</td> GenomeLab GeXP Genetik Analiz Sistemi Beckman Coulter GenomeLab <td></td></tr><tr><td>Ayırma Tamponu</td><td>Beckman Coulter</td><td>608012</td><td></td></tr><tr><td>GenomeLab Ayırma Jeli LPA-1</td><td>Beckman Coulter</td><td>391438</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td> HyperLadder <td></td><td></td></tr><tr><td> 100bp</td><td>Bioline</td><td>BIO-33029</td><td></td></tr><tr><td>HyperLadder 1kb</td><td>Bioline</td><td>BIO-33025</td><td></td></tr><tr><td>Görüntü Analiz Sistemi</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Moleküler Görüntüleyici VersaDoc MP 4000 sistemi&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>170-8640</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop Bir Spektrofotometre</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-400-518</td><td></td></tr><tr><td>pH-Metre BASIC 20</td><td>Crison</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phusion&nbsp; Yüksek Kaliteli PCR Kiti</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>F553S</td><td></td></tr><tr><td>Güç Paketi P 25 T</td><td>Biometra</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Primer İleri</td><td>İzojen Yaşam Bilimleri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Astarı Ters</td><td>İzojen Yaşam Bilimleri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Miktar Bir Yazılım</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereoskopik mikroskop</td><td>Leica Microsystems</td><td>MZ-16</td><td></td></tr><tr><td>Alt Hücre GT</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SYBR Güvenli DNA Jel Leke</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S33102</td><td></td></tr><tr><td>T100 Termal Döngüleyici</td><td>Bio-Rad</td><td>1861096</td><td></td></tr><tr><td>Taq DNA Polimeraz</td><td>QIAGEN</td><td>201203</td><td></td></tr><tr><td>Dikey Stand Otoklav</td><td>JP Selecta</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

el-tozlaşma, mikroskopi ve genetik analizleri birleştiren kayısıda Öz ve İnter-(in)uyumluluk İlişkilerinin belirlenmesi

Determination of Self- and Inter-(in)compatibility Relationships in Apricot Combining Hand-Pollination, Microscopy and Genetic Analyses

Rosaceae'de kendi kendine uyumsuzluk, esas olarak multiallelik lokus S tarafından kontrol edilen Gametofitik Kendi Kendine Uyumsuzluk Sistemi (GSI) tarafından belirlenir. Kayısıda, önemli sayıda yeni çeşidinin serbest bırakılması bilinmeyen tozlaşma gereksinimlerine sahip çeşitlerin artmasına yol açtığı ndan, öz ve inter-(in) uyumluluk ilişkilerinin belirlenmesi giderek daha önemlidir. Burada, el-polenler ve mikroskopi ile öz-(in)uyumluluğunun belirlenmesini PCR analizi ile S-genotipinin tanımlanması ile birleştiren bir metodolojiyi açıklıyoruz. Uyumluluk tespiti için, her bir çeşitten balon aşamasında çiçekler toplanmış, laboratuvarda elle tozlaşmış, sabit lenmiş ve floresan mikroskopisi altında polen tüpü davranışlarının gözlemi için anilin mavisi ile boyanmıştır. Çeşitleri arasında uyumsuzluk ilişkilerinin kurulması için, her çeşitdna genç yapraklarından elde edildi ve S-alel PCR tarafından tespit edildi. Bu yaklaşım, yeni meyve bahçeleri tasarımında uygun tozlaştırıcıları seçmek ve Üreme programlarında uygun ebeveynleri seçmek için değerli bilgiler sağlayan çeşitler arasındaki uyumsuzluk ilişkilerini açıklığa kavuşturmaya ve uyumsuzluk ilişkileri ortaya çıkarmasına olanak sağlar.

Kayısıda tozlaşma çalışmaları, antezten bir gün önce geç balon evresinde çiçek kullanılmasını gerektirir (Şekil 1A). Çiçek yapıları neredeyse olgun olduğundan bu aşama hem polen hem de pistil koleksiyon için en uygun evre olarak kabul edilir, ancak anher ayrılması henüz gerçekleşmemiştir. Kapalı yaprakları dış polen taşıyan böceklerin gelişini engellediği için, bu sadece aynı çiçekten değil, diğer çiçeklerden de istenmeyen polenlerin karışmasını önler. Polen taneleri, daha ö...

Flüoresan mikroskopi ile öz-genotiyon un belirlenmesini birleştiren kayısı(Prunus armeniaca L.) çeşitlerinin tozlaşma gereksinimlerini niçin pcr analizi ile s-genotipinin tanımlanması ile biraraya getiren bir metodoloji salıyoruz.

El-Tozlaşma, Mikroskopi ve Genetik Analizleri Birleştiren Kayısıda Öz ve İnter-(in)Uyumluluk İlişkilerinin Belirlenmesi

Self-incompatibility in Rosaceae is determined by a Gametophytic Self-Incompatibility System (GSI) that is mainly controlled by the multiallelic locus S. ...

Bu yöntem, farklı türlerde tozlaşma gereksinimlerini belirlemeye ve çeşitleri arasında uyumsuzluk ilişkileri kurulmasına yardımcı olabilir. Bu yaklaşımın en büyük avantajı, laboratuvar koşullarında çeşitli uyumsuzlukların değerlendirilmesine olanak sağlamasıdır. Alan koşullarında gerçekleştirilen deneylerde oluşabilecek çok sayıda sorundan kaçınmak.Bu, bir dizi çeşidin ilgili uyumsuzluk gruplarına ithafı ile birlikte tanımlamasağlar. Çeşitleri arasındaki uyumluluk ilişkisinin belirlenmesi. Bu yaklaşım aynı zamanda kiraz veya erik gibi diğer meyve ağacı bitkileri kendi kendine uyumsuzluk ve uyumsuzluk ilişkisini belirlemek için yararlı olabilir.Alandaki çiçekleri örnekleyerek başlayın. Önceki tozlaşmaönlemek için kayısı için BBCH ölçeğinde Sahne 58 karşılık gelen balon aşamasında, çiçekleri toplayın. Laboratuvarda, çiçek anthers çıkarın ve oda sıcaklığında kuruması için bir kağıt parçası üzerine yerleştirin.24 saat sonra polen tanelerini 26 milimetrelik ince bir örgü ile elek. Her kendi kendine ve çapraz tozlaşma için aynı balon gelişim aşamasında 30 çiçek bir grup emasculate ve emasculation 24 saat sonra su çiçekçi köpük üzerinde tabanca yerleştirin ve aynı tarikat çiçekpolen ile bir boya fırçası kullanarak tabanca tozlaşma. Bir kontrol olarak uyumlu bir tozlaştırıcı çiçek polen ile her çeşit tabanca başka bir dizi tozlaşma.72 saat sonra, ıslak çiçekçi köpük tabanca kaldırmak ve 4 santigrat derece en az 24 saat asetik asit 3:1 etanol bir fiksatif çözelti tabanca düzeltmek. Daha sonra fiksatif atın ve% 75 etanol ekleyin, örnekleri tamamen çözelti içinde batık olduğundan emin olun. Numuneler kullanıma kadar etanolde 4 santigrat derecede saklanabilir.Katılaşmış polen çimlenme ortamında kontrol polenleri için kullanılan aynı çeşitlerin polen tanelerini dağıtın ve 24 saat sonra mikroskop altında gözlemleyin. Tabancaları her yıkamada bir saat damıtılmış suyla 3 kez yıkayarak mikroskopi için hazırlayın. Son yıkamadan sonra, 24 saat boyunca 4 santigrat derecede %5 sodyum sülfit bırakın.Sonra bir kilogram santimetre kare 10 dakika sodyum sülfit doku yumuşatmak için onları otoklav. Bir cam slayt üzerine otoklavlı tabanca yerleştirin ve yumurtalık etrafında trichomes kaldırmak için bir neşter kullanın. Sonra bir coverglass ile tabanca ezmek.Polen tüpü büyümesi sırasında duyarsız depozeleri lekelemek için preparatların üzerine bir damla aniline mavisi uygulayın ve polen tüplerini el yazması talimatlara göre bir mikroskopla stili boyunca gözlemleyin. İlkbaharda toplanan genç yapraklardan genomik DNA elde etmek için ticari bir kit kullanın. Daha sonra el yazması talimatlara göre reaktifleri birleştirerek PCR'yi ayarlayın.Reaksiyon karışımını girdaplayıp PCR plakasındaki kuyular arasında dağıtın. Her kuyuya 1 mikrolitre DNA seyreltme ekleyin ve el yazmasında özetlenen termo-bisiklet programını kullanarak PCR çalıştırın. Reaksiyon tamamlandıktan sonra, kapiller elektroforez veya agarose jel elektroforez kullanarak sonuçları analiz.Kapiller elektroforez ler için, su buharlaşmasını önlemek için 1 damla mineral yağ ile birlikte okuyucu plakasının kuyusuna 1 mikrolitre PCR ürün ekleyin. Daha sonra ayırma tamponu ekleyerek ayırma plakasını hazırlayın. Yeni bir örnek plaka oluşturmak ve plakaüzerindeki tüm kuyular için örnek adlarını kaydetmek için gen analizörü için ticari yazılımı kullanın.Daha sonra analiz yöntemini seçin ve iki plakayı gen analizörüne yerleştirin. Kılcal damar dizisini distile suyla doldurun. Lineer poliakrilamid jel yük ve çalıştır tıklatın.PCR sonuçlarını jel elektroforez ile analiz ediyorsanız, el yazması yönlere göre tampon çalıştıran elektroforezdeki agarose eriterek %1 agarose jel hazırlayın. Sonra jel için nükleik asit leke 4 mikrolitre ekleyin ve yavaşça karıştırın. Bir tarak ile bir jel tepsi ayarlayın ve kabarcıklar önlemek için özen orta jel dökün yavaşlıyor.Tamamen katılaşmış kadar oda sıcaklığında jel bırakın, yaklaşık 30-45 dakika. Sonra elektroforez odasına koyun. Tarak çıkarın ve 1x TAE tampon ile kaplayın.Jeli DNA merdiveni ile yükleyin ve ardından PCR ürünleri yükleme boyası ile karıştırın. Sonra mavi boya hattı jel şerit yaklaşık% 75 olana kadar 60-90 dakika boyunca 90 volt jel çalıştırın. Çalışma tamamlandıktan sonra, jeli bir transilluminator kullanarak görselleştirin.Floresan mikroskopi ile her bir çeşit için kendi kendine uyumluluğu belirlemek için polen tüpü büyümesi gözlendi. Polen tüpü büyümesi tutuklandığında ve en az bir polen tüpü tarzının tabanına ulaştığında kendi kendine uyumlu olarak kabul edildi. 5 astar çifti kombinasyonları kılcal veya jel elektroforez ile birlikte PCR kullanarak S-alelleri tanımlamak için kullanılmıştır.İlk olarak, S-alelleri SRc primer çifti kullanılarak ilk S-RNase intron amplifikasyonu ile tespit edilmiştir. Daha sonra RNase'nin ikinci intronu, S6, S9, S1 ve S7 alellerini ayırt etmek için üç astar setiyle güçlendirildi. SFB geninin V2 ve HVB değişken bölgeleri, Sc ve S8 alellerini tanımlamak için AprFBC8 astar seti ile güçlendirilmiştir.S-alelleri belirlendikten sonra, uyumsuz genotiplerle farklı uyumsuz gruplar oluşturulabilir. Kapiller elektroforezlerde kontrolü kullanmayı unutmamak önemlidir, çünkü parça boyutunda yanlış alel tanımlamasına neden olan daha fazla farklılık olarak rapor edebilen otomatik bir parça analiz sistemi kullanırlar. Mikroskopi gözlemleri ve genetik analizin birleşimi kayısıda kendi kendine uyumsuzluğu belirlemek ve çeşitleri arasındaki uyumsuzluk ilişkilerini kurmak için çok yararlı bir yaklaşım almıştır.Kendi kendine uyumsuzluk artık kayısı yerlileriçin bağlantıdır. Faktörlerin belirlenmesi dahil gibi görünüyor. İleride yapılacak çalışmalar kayısıdaki bu çeşidin genetik olarak dinlendirilmesine odaklanmalıdır.Bu belgesel yaklaşımın birleşimi, ticari meyve bahçelerinde çeşitlerin uygun seçimi ve kayısı yetiştirme programlarında desen genotiplerinin seçilmesi için değerli bilgilerle sonuçlanmaz. Benzer bir yaklaşım diğer odunsu çok yıllık bitkileri kullanılabilir.

determination-self-inter-compatibility-relationships-apricot

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Arabidopsis çift döllenmede sperm nükleer morfolojisi temelinde epifloresan mikroskobu kullanılarak başarılı veya başarısız döllenmeyi belirlemek için bir yöntem gösterilmektedir.

Arabidopsis Çift Döllenmede Sperm Nükleer Morfolojisinin İzlenmesi ile Döllenme Durumunun Değerlendirilmesi

Japon erik tipi melezlerde tozlaşma gereksinimlerinin belirlenmesi için bir metodoloji, floresan mikroskopisi altındaki polen tüplerinin alan ve laboratuvar tozlaşmalarını ve gözlemlerini, S-genotiplerinin PCR tarafından tanımlanması ve tozlayıcıların seçimi için çiçeklenmenin izlenmesi ile birleştiren bir metodoloji açıklanmaktadır.

Fenolojik İzleme, El Tozlaşmaları, Floresan Mikroskopisi ve Moleküler Genotipleme ile Japon Eriğinde Tozlaşma Gereksinimlerinin Oluşturulması

Bal arılarından korbiküler polen toplama yöntemlerinin yanı sıra renk sıralama, asetoliz ve taksonomik tanımlama için polenlerin mikroskop slayt hazırlama protokollerini açıklıyoruz. Ek olarak, polen tuzakları kullanılarak beş kırpma sisteminden toplanan korbiküler polenlerin pelet rengi ve taksonomik çeşitliliğini sunuyoruz.

Bal Arısı Kolonilerinden Polenlerin Toplanması ve Tanımlanması

Bu çalışmada, maya Saccharomyces cerevisiae'de çiftleşme verimliliğinin ölçülmesi için sağlam bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, türleşme çalışmalarında zigotik öncesi bariyerlerin nicelleştirilmesi için özellikle yararlıdır.

Saccharomyces cerevisiae'de Haploidlerin Çiftleşme Etkinliğinin Belirlenmesi

Bu protokol, narenciye çeşitlerinde polen uyumluluğunu ve uyumsuzluğunu belirlemek için hızlı bir yöntem sağlar.

Manuel Polinasyon, Mikroskopi ve S-Genotip Analizleri Kullanılarak Narenciyede Kendini-(In)uyumluluk, Uyumluluk-(In)uyumluluklarının ve Inter-(In)uyumluluklarının belirlenmesi

Arabidopsis thaliana'da polen hidrasyon profillerini ölçmek için geliştirilmiş bir yöntem burada açıklanmaktadır. Yeni yöntem daha yüksek çözünürlük sunar, invaziv değildir ve yüksek oranda tekrarlanabilir. Protokol, tozlaşmanın erken aşamalarını düzenleyen süreçlerin daha ince bir diseksiyonu için yeni bir aracı temsil etmektedir.

Arabidopsis thaliana için Yüksek Çözünürlüklü, Tek Taneli, In Vivo Polen Hidrasyon Biyotahlili

Burada, P. blakesleeanus çiftleşmesinin indüksiyonu için temel bir protokol sunuyoruz.

Mucoromycete Phycomyces blakesleeanus ile Cinsel Haçlar

Mayoz fazı sırasında kromozom hareketi, spor oluşumu için temel olan, yeterince anlaşılmamış bir olgudur. Bu protokol, Arabidopsis thaliana erkek mayositlerinde mayotik faz sırasında sentromer hareketlerini elde etmek, analiz etmek ve ölçmek için bir yöntemi açıklar.

Arabidopsis thaliana'da Erkek Mayoz Fazı Sırasında Sentromer Hareketlerinin Canlı Görüntüleme Karakterizasyonu

Kardiyomiyosit döngüsünün ölçülmesi zordur. Burada açıklanan protokol, neo-kardiyomiyosit çekirdek oluşumu ve çekirdek ploidisinin doğru ve hassas bir şekilde ölçülmesini sağlayarak bu zorluğa önemli bir katkı sağlar.

Kardiyomiyosit DNA Sentezi ve ploidinin Eşzamanlı Değerlendirme: Bir Yöntem kardiyomiyosit Yenilenme ve ciro miktarının belirlenmesi Yrd

İntravital Floresans mikroskobu (IVFM) hasta, posta ve kemik iliği (BM) niş içine hematopoetik hücrelerin engraftment çalışmaya genetik hayvan modelleri ile birlikte uygulanır.

Intravital floresan mikroskobu (IVFM) kemik iliği nişler hematopoetik hücrelerin Engraftment Dynamics çalışmaya genetik modelleri ile birleştirerek

Öğrenin kayısı çeşitlerinde öz ve inter-uyumluluk ilişkilerini floresan mikroskopi ve PCR analiziyle belirlemeyi. Bu yöntem laboratuvar koşullarında uyumluluk değerlendirmesi yaparak üreme programlarına rehberlik eder.

El-Tozlaşma, Mikroskopi ve Genetik Analizleri Birleştiren Kayısıda Öz ve İnter-(in)Uyumluluk İlişkilerinin Belirlenmesi

Daha fazla video keşfet