Sıçan Merkezi Sinir Sisteminde Antisense Oligonükleotidlerin İntinal Teslimi

Bu protokol sıçan merkezi sinir sistemine terapötik doğrudan teslim farmakokinetiği değerlendirmek için izin verir, farmakodinamik, ve sıçan hastalığı modellerinde yeni terapötik etkinliğini. Bu işlem güvenli, etkili ve pahalı ekipman veya cerrahi araçlar gerektirmez. Prosedürü gösteren ler, Laboratuvarımdaki araştırma bilim adamları Yi Chen ve Yi Luo olacak.

Özel kılavuz kanülleri hazırlamak için, yaklaşık bir buçuk ila iki santimetre uzunluğundaki kılavuz kanülelde etmek için 19 kalibrelik bir iğnenin her iki ucunu da kesmek için kesme tekerleği olan bir döner alet kullanın. Daha sonra her iki ucunu da düzeltmek için döner aletin taşlama tekerleğikullanın. Kateter teli tertibatını hazırlamak için, her hayvan için intratekal kateter görevi görmek için 011 inç çapında PE10 borudan sekiz santimetre uzunluğunda bir parça kesin.

Boru her parçasının bir ucundan iki santimetre işareti yapmak için etanol dirençli marker kalem kullanın. Her hayvan için, politetrafloroetilen kaplamalı paslanmaz çelik telden sekiz santimetre LIK PE10 kateterinlüne 11 santimetre uzunluğunda stylet tel kesimi yerleştirin. Teslimat kateter montajını hazırlamak için, 5 ila 10 santimetre 023 inç çapında PE50 kateter bir parça kesti ve kateterin bir ucuna 23 gauge boru adaptörü takın.

Daha sonra pe10 boru yaklaşık 0,5 santimetrelik bir parça içine kesilmiş bir göbek ile 30 gauge iğne takın ve kateterin diğer ucuna PE10 boru bağlayın. Bir kılavuz kanül-iğne montaj hazırlamak için, bir 23 gauge iğne ucuna bir kılavuz kanül yerleştirin. Ameliyata başlamadan önce, ameliyat masasına bir ısıtma yastığı yerleştirin ve pedi steril bir perde levha ile kapatın.

Çarşafüzerine 50mL konik santrifüj tüp yerleştirin ve anestezili deneysel sıçanda parmak tutam yanıt eksikliği ni onaylayın. Hayvanı tarttıktan sonra, kuyruktan kaudal torasik omurgaya kadar arkatıraş ve eğilimli pozisyonda steril levha üzerine tıraş sıçan yerleştirin. Lomber bölgede omurgayı esnetmek için 50mL tüpünü karın altına yerleştirin ve gözlere oftalmik merhem uygulayın.

Daha sonra, deri altı sürekli sürüm Buprenorfin kilogram başına bir miligram enjekte ve sıralı povison ve alkol scrubs ile maruz kalan cilt temizleyin. Bir fenestre steril şeffaf levha ile hayvan drape. Kateterin yerleştirilmesi ve bileşiğin enjeksiyonu için, tıraşlı pelvis üzerindeki kaslar arasındaki iki doğal çukuru belirleyin ve bir elinizi çukurları tutarak, omurgayı omurlar arasındaki ilk büyük girintiyi bulmak için kaudal yönden rostral yöne hafifçe basmak ve hissetmek için diğer elinizi kullanın.

S1 ve L6 omurları arasındaki intervertebral uzayı belirledikten sonra, L5 ve L6 omurları arasındaki intervertebral uzayı tanımlamak için biraz rostrally hareket. Enjeksiyon bölgesi kesi merkezinde olacak, böylece rostral gelen kaudal yönde orta hat boyunca bu sitede deri ve kas kapsülü en fazla iki santimetre uzunluğunda kesi yapmak için bir neşter kullanın. Kas tabakası görselleştirilene kadar bağ dokusunu parçalamak için diseksiyon makası kullanın.

L6 lomber vertebra dorsal spinal süreci hemen lateral kas kapsülü bir santimetre kesi olun. Kılavuz kanül iğne tertibatını altıncı lomber vertebranın ön yönüne yakın konumlandırın ve iğnenin ucunun spinal kanala nüfuz edebilmesi için altıncı omurun ön kısmı boyunca kontrayı intervertebral uzaya doğru itin. L6 lomber vertebra dorsal spinal süreci bulmak için künt forceps kullanın sonra invertebrata uzaya altıncı vertebra ön yönü boyunca iğne itin.

Kılavuz kanülini iğne boyunca yerine itin, iğneyi çıkarın ve kateter telinin tersini kılavuz kanüle takın. Kateteri omurilik kanalına yaklaşık 45 derecelik açıyla sokmak, kateterin ucunu kanala yaklaşık 0,3 santimetre kadar zorlar. Kateterin intratekal ucundan yaklaşık 2,5 santimetre lik stylet telini çıkarın ve kateterüzerindeki iki santimetrelik işaret kasın altında nisbi görünene kadar kateteri omurilik kanalına ilerletin.

Kateter yerinde yken, kateteri ve stylet telini yerinde bırakmak için kılavuz kanüllerini çıkarın. İki santimetre işareti kanalın girişinde olana kadar kateteri omurilik kanalına doğru ilerletin ve stil kablolarını tamamen geri çekin. Serebral spinal sıvı implante kateter girerek görselleştirilmiş olabilir.

Daha sonra doğum kateter tertibatını 30 gauge iğne ucu ile implante edilen kateterin distal ucuna bağlayın. Daha sonra, 100 mikrolitrelik bir şırıngaya 60 mikrolitre steril salin yükleyin ve test bileşiğin30 mikrolitrelik bir bolus'u ikinci bir şırıngaya yükleyin. Tuzlu şırıngayı, doğum kateter tertibatının boru adaptörü ucuna bağlayın ve 20 mikrolitre steril salini intratekal uzaya boşaltın.

Tüm tuzlu su temizlendiğinde, tuzlu şırıngayı bolus yüklü şırınga ile değiştirin ve test bileşiğinden 30 mikrolitrelik mikrolitreyi 30 saniyelik bir süre içinde intratekal uzaya enjekte edin. Tüm bolus teslim edildiğinde, başka bir tuzlu yüklü şırınga ile bolus yüklü şırınga değiştirin ve ek bir 40 mikrolitre tuzlu ile kateter floş. İkinci cilt salin teslim edildiğinde, doğum kateter intibakını implante edilen kateterden ayırın ve implante edilen kateteri aseptik olarak kesmek ve ısı yakmak için tüpü bağlamak için bir çift sıcak ısı yalıtımlı diseksiyon forceps kullanın.

Isı yalıtımlı kateteri bağ dokusuna sabitlemek için emilebilir monofilament dikişleri kullanın ve sonra cildi kapatmak için emilemez dikişler kullanın. Sonra deriden herhangi bir kan yıkamak için gazlı bez ve tuzlu kullanın ve tam telafi kadar izleme ile ısıtmalı bir kuvöz de sıçan yerleştirin. Bu temsili deneyde tek bolus antisense oligonükleotid tesliminden sonra toplanan tüm bölgelerde çok iyi bir nakavt elde edilmiştir.

Ancak, bölgesel değişkenlik bir dereceye kadar nakavt en yüksek yüzdesi gösteren omurilik ile ölçüldü. Uygun bir modeliçine antisense oligonükleotid başarılı bir enjeksiyon sonra, ya da diğer terapötikler, bir farmakokinetik değerlendirebilirsiniz, farmakodinamik, ve terapötik etkinliğini.