Abbiategrasso Beyin Bankası Toplama, İşleme ve Yaşlanma Beyinleri Karakterize için Protokol

Nörobilişsel bozukluk prevalansı sürekli arttıkça, amacımız doğru tanıyı koymak ve nörodejeneratif mekanizmalara ışık tutmak için kaliteli beyin dokusu örnekleri elde etmek, karakterize etmek ve depolamaktır. Beyin assimetrisi göz önüne alındığında, örnekleme metodolojimiz tüm meta çalışmaların her iki yarımküreden histolojik olarak iyi tanımlanmış dokular üzerinde yapılmasını sağlar ve birçok veri derin öğrenme yoluyla toplanabilir ve ilişkilendirilebilir. Birden fazla patoloji ile beyin hasarı üzerinde katkı etkileri sık sık görülmektedir.

Kesin tanı, hastalık patogenezi ve olası tedavileri keşfetmek için klinik sendromu nöropatolojik bulgularla birleştirmeyi gerektirir. Taze kesme prosedürleri yanı sıra makro bölüm yönetimi zor ama aynı zamanda iyi sonuçlar elde etmek için gereklidir. Eğitimli ve sıkı bir ekip bu zorlukların üstesinden gelmek için çok önemlidir.

Protokolümüz, memeli el becerisi gerektiren bir dizi adımı içerir, bu nedenle görsel gösteri, bu tekniklerde ustalaşmak isteyen araştırmacılar için açıklayıcı metinlerden daha yararlı olabilir. Thanatografiyi doğruladıktan sonra, bir tarafta mastoid işleminucundan diğer tarafına geçerek, saç derisi ve koronal plaka üzerinde deri altı doku ile kafa derisi kesi yapmak için keskin bir neşter kullanın. Kafa derisinin iki kıvrımını dikkatlice kafatasından ayırın ve sarı süper yörüngesel yağ görünür olana kadar kesiti devam edin.

Ön kafa derisi yansıtın ve arka doku diğer bölümünü çekin. Bir neşter ve forseps kullanarak, kafatasının her iki tarafında zamansal kas küçük bir örnek hasat, 4% formaldehit bir örnek yerleştirerek ve dört santigrat derece diğer örnek. Elektrikli testere kullanarak ön taraftaki V kesiğiyle kafatasını kesip kafatası kapağını çıkarın.

Menenjler kestikten sonra, sabitleme için dura bir parça hasat ve dondurma için başka bir. Üçüncü ventrikül ulaşmak ve beyin omurilik sıvısı yaklaşık 10 mililitre elde etmek için piston geri çekmek için corpus callosum ile 10 mililitrelik şırınga bağlı bir 20 gauge 3.5 inç iğne takın. Sıvının görünümünü ve bulanıklığını değerlendirin ve pH'ı ölçün.

Yavaşça beyin kaldırmak için her iki frontal loblar çekin ve infundibulum hem optik sinirleri kesti, iç karotis arterler ve üçüncü, dördüncü, beşinci ve altıncı kranial sinirler. Posterior fossa ulaşmak için tentorium kesin ve vertebral arterler ve alt kranial sinirler kesti. Sonra medula en kaudal kısmını kesmek ve dikkatle tüm beyin kaldırmak için foramen magnum aracılığıyla mümkün olduğunca derin neşter yerleştirin.

Meckel mağaraüzerinde kemiğe görünür neşter kullanın ve fiksasyon ve donma için her iki taraftan Gasserian ganglion toplamak. Kemik sella turcica kırık ve% 4 formaldehit fiksasyon için hipofiz bezi kaldırmak için cerrahi bir tokmak ve keski kullanın. Kafatasını ve tüm beyni makroskopik değişikliklerden ve damar değişikliklerinden kontrol edin.

Beynin enine ve ön duruş çaplarını ölçmek ve beyni bir ölçekte tartmak için bir ölçüm bandı kullanın. Anatomik varyantlar, lezyonlar veya damar darlığı varlığı için makroskopik değerlendirme için Willis çemberini dikkatlice alın. Ayrı ve ayrı beyin, beyincik ve beyin sapı tek tek dokuları tartma önce inceleyin.

Bir ila iki, iki ila dört santimetre karelik leptomeninges parçaları convexity çıkarın ve dört santigrat derece tam yüksek glikoz DMEM kültür orta örnekleri korumak. Hasat 4% formaldehit fiksasyon için epifiz bezi ve fiksasyon ve her çifti bir dondurma için koku ampuller ve optik sinirler ilerler. Serebrum, beyincik ve beyin sapını buza dört derece yedirin.

Tüm ilgi dokuları hasat edildiğinde kemik yeniden ve cerrahi bir iğne kullanmak için süper yapışkan tutkal kullanın, ve kafa derisi geri dikiş için emilemez dikiş. Beyin bankası diseksiyonu için beyin sapı aksiyel kesmek ve superior colliculus ile rostral orta beyin düzeyinde ilk kesim yapmak için bir diseksiyon bıçak kullanın substantia nigra ortaya çıkarmak için iki dilim elde etmek. 10 içine beyin sapı kesin, sekiz milimetre lik dilimler dördüncü ventrikül üstün marjları yakın rostral pons geçen kesikler dahil etmek için dikkat ederek locus caeruleus gözlemlemek ve akustik stria inferior medulla oblongata ile, sadece dördüncü ventrikül inferior apeks üzerinde vagus dorsal motor çekirdeği de dahil olmak üzere dilimler elde etmek için.

Tüm dilimleri, beyin sapı için BS ve ardından Arap rakamları olarak rostral kaudal bir şekilde etiketleyin. Son beyin sapı bölümünden sonra, omurilik için SC adını kullanın ve ardından Arap rakamları kullanın. Vermis düzeyinde iki serebellar hemisfer ayırmak ve her yarımküreden beş dilim elde etmek için sagital kesit gerçekleştirmek için sagittal düzlemde sagittal düzlemde serebellum kesin.

Vermisteki tüm dilimleri sırasıyla sağ ve sol beyincik için CBR veya CBL olarak adlandırın ve her bölümü tanımlamak için Arapça sayılar kullanın. Daha sonra, sagital düzlemde korpus callosum ile serebrumun iki hemisferini ayırın ve ön lob temporal kutbundan optik kiazma ve mammillary cisimler arasında geçen koronal düzlem boyunca yarımküreyi tekil olarak dilimlemeden önce, ön sinilat, anterior komisitat, küçüklerin çekirdeği ve bazal ganglia. Bir santimetre posteriorly mammillary organları geçerek ve bazal gangliyonu açığa, anterior talamus alt talamus ve amigdala hakkında ikinci bir kesim olun.

Her yarımküre için 15-21 santimetre dilim elde edilene kadar ön ve arka bölgelerin kesilmesiiçin dilimleme devam edin. Dilimin, ön cepheden oksipital direğe kadar ön arka yönde ki orijinal konumlarını takip ederek, önceki slaytların yukarı bakacak şekilde sürekli olduğu kısmı sabit olduğu düz bir yüzeye yerleştirin. Tüm dilimler yerleştirildiğinde, daha önce edinilmiş bölümler ve hipokampal, parietal ve oksipital kesitler de dahil olmak üzere histopatoloji için düzeltilecek ana bölümleri seçin ve dilimlerin sabit mi yoksa dondurulmuş mu olduğunu gösteren bir etiket içeren Arap rakamları nın ardından L veya R olarak etiketleyin.

Tüm dokular kesilip etiketlendiğinde, sabitleme veya donma dan önce her bir bölüm serisi için bir görüntü elde edin. Örnekleri dondurmak için önceden dondurulmuş alüminyum tepsi üzerine ayrılmış alternatif doku bölümleri yerleştirin ve onları düz tutmak için birbirine bağlı alüminyum plaka ile bölümleri kapsayacak. Daha sonra dondurulmuş numuneleri ilgili kimlik kodları ve dilim numaraları yla etiketlenmiş plastik bir torbanın içine yerleştirmeden önce sıvı nitrojeniçindeki dilimleri üç dakika dondurun ve 80 santigrat derecedeki uygun kriyojenik kutudaki bir depoiçin dilim numaralarını belirleyin.

Örnekleri düzeltmek için ayrılmış alternatif doku bölümlerini tek tek gazlı bez parçalarına yerleştirin ve dilimleri dört derecelik soğuk bir odada beş gün boyunca %10 fosfat tamponlu formalin çözeltisine yerleştirin. Hasat edilen 27 beyinden 24'ü kesin klinik patolojik tanı ile tam nöropatolojik karakterizasyon almıştır. Bir dizi ön kantitatif elektroensefalogram analizi 36 beyin donörleri ana alfa ritim yüzdesi önemli nörobilişsel bozukluklar da önemli ölçüde normal yaşlı hafif nörokognitif bozukluk daha düşük olduğunu gösterir.

Burada sağ koronal kesitte gözlenen şiddetli ventriküler dilasyonlar ile sağ taraf atrofisi belirgin bir sağ taraf atrofi ile bir örnek gösterilmiştir. Başka bir olgu sağ hemisferin enfarktüs'ü gösterirken, başka bir örnek sağ meme gövdesinin açık bir atrofisi gösterir. Makro kesitler miyelin kaybını veya hemisferiçindeki immünoreaktivite dağılımını belirlemek için boyanabilir.

Bu örnekler, epigenetik ve çevresel faktörlernedeniyle farklı zaman dilimlerinde Alzheimer hastalığının klinik başlangıcı olan ikizlerden elde edilebilmektedir. Bununla birlikte, mikroskobik analiz yüksek Alzheimer hastalığı patolojisi ve amiloid anjiyopati gösteren çok benzer bir nöropatolojik resim ortaya koymuştur. Ancak bu iki hastada, Alzheimer hastalığının aynı klinik tanısı nöropatolojik özelliklere tam olarak karşılık gelmedi, hangi birden fazla etiyolojide bir demans ikilisi ortaya.

Nitekim, ilk durumda girus tek yalan ve substantia nigra Lewy organları sundu. İkinci vakada, amigdala'daki ve küçükler çekirdeğindeki Lewy nöritleriyle ilişkili Lewy cisimleri ortaya çıktı. Mikroskobik analiz sırasında anatomik alanların doğru bir şekilde tanımlanması için dilimlerin fotoğrafı dikkatle incelenir.

Tekli dilimlerinin fiksasyonu ve dondurulması, doku mikroyapısı Omics'in gen aktivasyonu ve protein dağılımının topografyasını korumak ve bu verileri histopatoloji ile ilişkilendirmek için de önemlidir. Iyi karakterize dokulardan hücre kültürleri, aynı zamanda hastalık patogenezi bir araştırma. Her zaman bir kazanılmış beyin dokusu olarak yeterli kişisel koruyucu ekipman giymek potansiyel olarak bulaşıcı olarak kabul edilir ve keskin aletler ve sıvı nitrojen gibi tehlikeli araçların kullanımı gereklidir çünkü.