Name: Rejeneratif Axolotlda Mikrocerrahi Laminektomi Ile Kontüzyon Omurilik Yaralanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-20T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Keşfedin mikrocerrahi laminektomi ile kontüzyon omurilik yaralanması oluşturma yöntemini rejeneratif axolotl (Ambystoma mexicanum) modellerinde. Bu teknik klinik travmayı taklit ederek omurilik rejenerasyonu araştırmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Michael Pedersen, Aarhus Üniversitesi'nde mr protokolleri geliştirme ve tüm projekurma konusundaki uzmanlığı ve zamanı için. Peter Agger, Aarhus Üniversitesi'nde mr protokollerini geliştirmek için uzmanlığı ve zamanı için. Steffen Ringgard, Aarhus Üniversitesi'nde mr protokollerini geliştirmek için uzmanlığı ve zamanı için. Axolotl'daki SCI modelinin geliştirilmesi A.P. Møller Maersk Vakfı, Riisfort Vakfı, Linex Vakfı ve ELRO Vakfı tarafından desteklendi.

Bu çalışmada hayvanların etik kullanımına ilişkin tüm geçerli kurumsal ve resmi düzenlemeler izlenmiúve Çalışma, Danimarka Hayvan Deney Ii. Hayvanlar Meksika aksolotllarıydı (Ambystoma mexicanum, ortalama vücut kütlesi ± STD: 12.12 g ± 1.25 g).
1. Hazırlık
<ol><li>
Anestezi için axolotl hazırlayın.
	<ol>
<li>Yüksek kaliteli kimyasal olarak arıtılmayan musluk suyu kullanın. Eğer kullanılamıyorsa, %40 Holtfreter'ın çözeltisini kullanın.</li>
		<li>Çözün 200 etil mg 4-aminobenzoat (benzocaine) aseton 3 mL içinde. Bu çözeltiyi 1 L musluk suyunda veya Holtfreter çözeltisinde çözün.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cerrahi tablo olarak stereo mikroskop altına yerleştirilen standart bir Petri kabı (100 mm çapında) kullanın. Petri kabına cerrahi bir tekstil bezi yerleştirin. NOT: Petri kabının cerrahi alan olarak kullanılması, hayvanın dokunmadan hareket etmesini ve dönmesini sağlayarak ameliyat sırasında spinal stabiliteyi sağlar.</li>
	<li>Tüm steril mikrocerrahi aletleri (örn. makas ve anatomik ensepsler) hazırlayın.</li>
</ol>2. Anestezi
<ol><li>Derin ve kararlı anestezi sağlamak için yaklaşık 45 dakika boyunca benzokain çözeltisi ile bir kap içine axolotl yerleştirin. NOT: Benzokain verilen konsantrasyon axolotls tüm boyutlarda anestezi neden olacaktır.</li>
	<li>30-45 dk içinde genel anestezi belirtileri olup olmadığımı kontrol edin. Bu solungaç hareketleri tam bir eksikliği içerir, refleks düzeltme, ya da dokunsal veya ağrılı uyaranlara yanıt (ayak ağı nazik çimdikleme).</li>
	<li>Anesteziyi korumak için, anestezik çözeltide ıslak kağıt havlularla hayvanları sarın. Cilt ve solungaçların nemli tutulmasını sağlamak için cerrahi işlem sırasında bu solüsyonu düzenli olarak ıslatın.</li>
	<li>Ameliyattan sonra taze musluk suyu içeren bir kapta yerleştirerek hayvan kurtarmak. 1 saat16içinde solungaç hareketi ve yeniden sağlama refleksi gibi iyileşme belirtileri gözlemleyin.</li>
</ol>3. Mikrocerrahi Laminektomi
NOT: Laminektomi stereomikroskop altında yapılır.
<ol><li>Petri kabına eğilimli pozisyonda hayvan yerleştirin. Kuyruk maruz böylece kağıt havlu sarın. NOT: Kağıt havlular, prosedür boyunca stabiliteyi sağlamak için mükemmeldir.</li>
	<li>
Arka uzuvları tanımlayın. İlk kesiği onlara sadece kaudal yap.
	<ol>
<li>Mikrosksor bir çift ile, spinous süreçlerin kemik çıkıntı hissedilene kadar omurga dikey bir kesi gerçekleştirin. NOT: Keel ve cildi forcep'lerle kavradığınızda çok dikkatli olun, çünkü bunlar hassas cilde kolayca zarar verir.</li>
		<li>Kesiği yanal olarak uzatın, böylece kesi kuyruğun tüm genişliğini geçer.</li>
		<li>Doğru derinliği sağlamak için spinous işlemini forceps ile kavrayın.</li>
		<li>Her iki taraftaki spinous prosesin 1 mm altındaki dikey kesileri uzatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Aşağıda belirtildiği gibi ventral ve yatay kesiler gerçekleştirmek için bir tarafa hayvan yerleştirin.
	<ol>
<li>Bir çift mikrosikül ile, dikey kesinin ventral noktasından başlayarak, 10-20 g ağırlığındaki hayvanlar için yaklaşık 15 mm'lik yatay bir kesi yapın. Daha büyük hayvanlar için kesiyi daha uzun, küçük hayvanlar için daha kısa yapın.</li>
		<li>Makas kullanarak, vertebral kolon orta hatta hissedilene kadar yatay kesi ile medially inceleyin.</li>
		<li>Hayvanın diğer tarafında ki 3.3, 3.3.1 ve 3.3.2 adımlarını tekrarlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Her iki taraftan derin medial düzlemde kesilen, orta hattan kesişen, bu nedenle iki yatay kesi ler bağlayan.
	<ol>
<li>Serbest kuyruk ve omurga parçasını bir tarafa taşıyarak spinous prosesleri ortaya çıkarır (Şekil 1).</li>
		<li>Islä±k kağıt havlular kullanarak kuyruk parçasÄ±nÄ± sabitle</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Başı cerrahın baskın olmayan tarafına bakacak şekilde hayvanı tekrar yatkın konuma getirin.
	<ol>
<li>Bir çift forceps ile, sadece arka ekstremitelere kaudal süreçleri kavramak. Hem yukarı hem de hayvanın başına doğru hafif çehre uygulayın.</li>
		<li>Bir çift mikrosiyenin bıçaklarını sürecin etrafına yatay olarak yerleştirin ve yavaşça kesin. İşlemdeki asansör, omuriliğin açığa çıkarılmasını sağlar.</li>
		<li>Sadece kaldırıldı ve adımları 3.5.1 ve 3.5.2 tekrarlamak için spinous süreci kavramak. NOT: Bu iki vertebral düzeylerine karşılık gelen bir maruz omurilik bırakmalıdır. Laminektomi yapılırken genellikle beyaz köpüklü bir salgı ortaya çıkar. Omurilik kolayca ayırt edici parlaklık ile tespit edilir, orta hat boyunca çalışan bir damar ile birlikte.</li>
		<li>Hayvanın büyüklüğüne bağlı olarak, maruz kalan alan yeterince geniş olmayabilir. Forseps iki çift kullanarak, omuriliğin her iki tarafında lamina kavramak ve hafif bir hareket ile yanal büküm.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Kontüzyon Tipi Yaralanmanın Tanıtılması (Şekil 2)
<ol><li>Hayvanı yatkın pozisyonda tutun.</li>
	<li>Hayvanı travma ünitesine aktarmak için Petri kabını kullan.</li>
	<li>Bir asistan omuriliğine el feneri yaksın.</li>
	<li>Kontüzyon travma ünitesi silindirini, ünitedeki mikro ayarlayıcıları kullanarak açıkta kalan omuriliğin üzerine yerleştirin. Silindirin içinden nişan ala.</li>
	<li>Lamina ile düz olana kadar silindiri indirin.</li>
	<li>Düşen çubuğu elektromıknatısa takın. Travma ünitesi üzerine istenilen düşen yükseklik ayarı silindirini yerleştirin.</li>
	<li>Düşen çubuğu silindire yerleştirin. NOT: Kör bir çalışma için, cerrah şimdi hayvan bir yaralanma ya da sahte bir cerrahi gruba atanacak olup olmadığını bilmeden odadan çıkmalıdır.</li>
	<li>Elektromıknatısı kapat. Çubuk açıkta kalan omuriliğine düşüyor.</li>
	<li>Omuriliğin çubuğunu kaldırmak için yükseklik ayarlama vidasını kullanın.</li>
	<li>Mikroskoptan omurilik bakarak yarayı doğrulayın. Yaralı bölge daha karanlık görünecek ve orta hat damarından kanama belirgin olacak.</li>
</ol>5. Keskin Yaralanma Tanıtımı
NOT: 3.5.4'ten sonra bu adımları gerçekleştirin.
<ol><li>Bir çift mikroskor ile mükemmel bir dikey kesim omuriliği kesti.</li>
	<li>Kesilen 2 mm'yi vücudun kaudal tarafına kadar tekrarlayın. NOT: Omurilik kaldırılan parçanın uzunluğu çalışma gereksinimine göre ayarlanabilir. Ancak, 2 mm kesim regenerable10olacaktır.</li>
	<li>Kesiklerin tamamlandığından emin olun. Tamamlandıktan sonra, spinal kanalın ventral kısmı boyunca kazınan makas bıçakları hissedin.</li>
	<li>Omurilik kanalından 2 mm'lik omurilik parçasını kaldırın.</li>
</ol>6. Cerrahi Yaranın Kapatılması
<ol><li>Hayvanı cerrahi masaya geri getir. Kör bir çalışmada, omurilik cerrah için görünür değil, böylece omurga yeniden konumlandırın.</li>
	<li>
Hayvanı yatkın pozisyonda tutun.
	<ol>
<li>Yatay kesien en kaudal kısmından 10.0 naylon dikiş yerleştirmeye başlayın. Yaraları tek bir katmanda kapatın. NOT: Çok sıkı cilt kavramak etmeyin, nekroz neden olacak çünkü.</li>
		<li>Kesiğin dikey kısmına doğru çalışın.</li>
		<li>Açıya ulaşırken, Petri kabını çevirin ve diğer yatay kesidik.</li>
		<li>Dik kesiler üzerine dikişler ayarlayın.</li>
		<li>Omurganın en üst kısmına dikiş koymayın, çünkü buradaki deri tutamaz.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. Hayvanı Anestezisiz Çözüme Döndürmek
<ol><li>Petri kabını hayvanla birlikte kaldırın ve her ikisini de sadece 5 cm derinliğinde tatlı suya hafifçe batırın ve hayvanın kaymasını bırakın. NOT: Sığ su derinliği, hayvanın nefes almak için yüzeye yüzmeye çalışmamasını sağlar.</li>
	<li>İlk hafta boyunca suyu değiştirmeyin.</li>
	<li>Hayvanları beslerken, yiyeceğin hayvanın başının yakınına yerleştirildiğinden emin olun. NOT: Bu önlemlerin amacı, ilk hafta boyunca mümkün olduğunca çok hareket önlemektir.</li>
</ol>8. Postoperatif Ultrason
<ol><li>Anestezinin sona erdirilmesinden önce, SCI sitesinin üç boyutlu görüntülerinin yapımında kullanılabilecek yaralanmanın görüntülerini elde etmek için yüksek frekanslı bir ultrason sistemi kullanın.</li>
	<li>Dönüştürücü, tercihen uzak bir joystick tarafından yönetilen bir mikromanipülatöre takın.</li>
	<li>Anesteziye ait hayvanı yatkın pozisyonda anestezik solüsyonla dolu küçük bir kapta batırın. NOT: Tarama sırasında hareket önlemek için minyatür kum torbaları veya diğer ekipman ile hayvan düzeltin.</li>
	<li>Dönüştürücünün ucunu hayvanın uzunluk ekseni ile hizalayın ve hayvanın arka ekstremitelerinin arkasındaki omurganın sadece birkaç milimetre yukarısına kadar benzocaine çözeltisine batırın.</li>
	<li>SCI sitesini tanımlayın. NOT: Sci'nin hemen üstündeki eksik spinous süreçler nedeniyle yaralanma bölgesi kolayca tanınabilir.</li>
	<li>Ultrason ayarlarını ayarlayarak görüntüyü optimize edin. SCI sitesinin görüntünün merkezinde olduğundan emin olun. SCI sitesini ve bitişik sağlıklı dokuyu kapsayacak şekilde görüş alanını (yani görüntü derinliği, derinlik ofset ve görüntü genişliği) ayarlayın. Görüntü kontrastını en iyi duruma getirmek için iki boyutlu kazancı ayarlayın.</li>
	<li>Ultrason transdüserini elektronik olarak işletilen bir mikromanipülatörle SCI alanı boyunca süpürerek, sci sitesini kapsayan B-modlu görüntüleri birden fazla sagittal kesit dilim lokasyonunda, dilimler arası aralıklı ardışık dilimlerle elde edin 50 m. ~50 kare/s kare hızı na ve 40 MHz'lik bir transdüser frekansına sahip 500 kare içeren sine görüntüleri edinin. NOT: Bu kurulum, uzaktan kumanda çubuğu (adım 8.2) tarafından yönetilen bir elektronik mikromanipülatör gerektirir.</li>
	<li>Tarama sırasını bitirdikten sonra adım 7'ye dönün.</li>
</ol>

<ol><li>Shavelle, R. M., DeVivo, M. J., Brooks, J. C., Strauss, D. J., Paculdo, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvements+in+Long-Term+Survival+After+Spinal+Cord+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Physical+Medicine+and+Rehabilitation%22%5BJournal%5D)">Improvements in Long-Term Survival After Spinal Cord Injury.</a> Archives of Physical Medicine and Rehabilitation. 96 (4), 645-651 (2015).</li>
<li>Hicken, B. L., Putzke, J. D., Richards, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bladder+management+and+quality+of+life+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physical+Medicine+%26+Rehabilitation%22%5BJournal%5D)">Bladder management and quality of life after spinal cord injury.</a> American Journal of Physical Medicine & Rehabilitation. 80 (12), 916-922 (2001).</li>
<li>Levi, R., Hultling, C., Nash, M. S., Seiger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Stockholm+spinal+cord+injury+study%3A+1.+Medical+problems+in+a+regional+SCI+population%5BTitle%5D)+AND+%22Paraplegia%22%5BJournal%5D)">The Stockholm spinal cord injury study: 1. Medical problems in a regional SCI population.</a> Paraplegia. 33 (6), 308-315 (1995).</li>
<li>Bjornshave Noe, B., Mikkelsen, E. M., Hansen, R. M., Thygesen, M., Hagen, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+traumatic+spinal+cord+injury+in+Denmark%2C+1990-2012%3A+a+hospital-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Incidence of traumatic spinal cord injury in Denmark, 1990-2012: a hospital-based study.</a> Spinal Cord. 53 (6), 436-440 (2015).</li>
<li>Singh, A., Tetreault, L., Kalsi-Ryan, S., Nouri, A., Fehlings, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+and+incidence+of+traumatic+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Epidemiology%22%5BJournal%5D)">Global prevalence and incidence of traumatic spinal cord injury.</a> Clinical Epidemiology. 6, 309-331 (2014).</li>
<li>Aguayo, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degenerative+and+regenerative+responses+of+injured+neurons+in+the+central+nervous+system+of+adult+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+B%3A+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Degenerative and regenerative responses of injured neurons in the central nervous system of adult mammals.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 331 (1261), 337-343 (1991).</li>
<li>Aguayo, A. J., Bjorklund, A., Stenevi, U., Carlstedt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+mesencephalic+neurons+survive+and+extend+long+axons+across+peripheral+nervous+system+grafts+inserted+into+the+adult+rat+striatum%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Fetal mesencephalic neurons survive and extend long axons across peripheral nervous system grafts inserted into the adult rat striatum.</a> Neuroscience Letters. 45 (1), 53-58 (1984).</li>
<li>Richardson, P. M., Issa, V. M., Aguayo, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+long+spinal+axons+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurocytology%22%5BJournal%5D)">Regeneration of long spinal axons in the rat.</a> Journal of Neurocytology. 13 (1), 165-182 (1984).</li>
<li>Butler, E. G., Ward, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+the+spinal+cord+following+ablation+in+urodele+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Zoology%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of the spinal cord following ablation in urodele larvae.</a> Journal of Experimental Zoology. 160 (1), 47-65 (1965).</li>
<li>Diaz Quiroz, J. F., Tsai, E., Coyle, M., Sehm, T., Echeverri, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+control+of+miR-125b+levels+is+required+to+create+a+regeneration-permissive+environment+after+spinal+cord+injury%3A+a+cross-species+comparison+between+salamander+and+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Model+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Precise control of miR-125b levels is required to create a regeneration-permissive environment after spinal cord injury: a cross-species comparison between salamander and rat.</a> Disease Model Mechanisms. 7 (6), 601-611 (2014).</li>
<li>Clarke, J. D., Alexander, R., Holder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+descending+axons+in+the+spinal+cord+of+the+axolotl%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Regeneration of descending axons in the spinal cord of the axolotl.</a> Neuroscience Letters. 89 (1), 1-6 (1988).</li>
<li>McHedlishvili, L., Mazurov, V., Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+the+central+nervous+system+during+salamander+tail+regeneration+from+the+implanted+neurospheres%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+of+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of the central nervous system during salamander tail regeneration from the implanted neurospheres.</a> Methods of Molecular Biology. 916, 197-202 (2012).</li>
<li>Thygesen, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+clinically+relevant+blunt+spinal+cord+injury+model+in+the+regeneration+competent+axolotl+%28Ambystoma+mexicanum%29+tail%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Therapeutic+Medicine%22%5BJournal%5D)">A clinically relevant blunt spinal cord injury model in the regeneration competent axolotl (Ambystoma mexicanum) tail.</a> Experimental Therapeutic Medicine. 17 (3), 2322-2328 (2019).</li>
<li>Goss, R. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGoss%2C+RJ+%22Principles+of+Regeneration%22">Principles of Regeneration</a>. , Academic Press. New York. (1969).</li>
<li>Hutchison, C., Pilote, M., Roy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+axolotl+limb%3A+a+model+for+bone+development%2C+regeneration+and+fracture+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">The axolotl limb: a model for bone development, regeneration and fracture healing.</a> Bone. 40 (1), 45-56 (2007).</li>
<li>Thygesen, M. M., Rasmussen, M. M., Madsen, J. G., Pedersen, M., Lauridsen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propofol+%282%2C6-diisopropylphenol%29+is+an+applicable+immersion+anesthetic+in+the+axolotl+with+potential+uses+in+hemodynamic+and+neurophysiological+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Regeneration+%28Oxford%29%22%5BJournal%5D)">Propofol (2,6-diisopropylphenol) is an applicable immersion anesthetic in the axolotl with potential uses in hemodynamic and neurophysiological experiments.</a> Regeneration (Oxford). 4 (3), 124-131 (2017).</li>
<li>Krogh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Progress+of+Physiology%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">The Progress of Physiology.</a> The American Journal of Physiology. 90 (2), 243-251 (1929).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Omurilik yaralanma riski önemli olduğundan, protokolün kritik adımları spinous süreçleri kaldırarak ve gerekirse omurilik kanalına kemik erişimi genişletilmesi. Protokolde belirtildiği gibi, ilk olarak en kafatası işleminin kaldırılması şiddetle tavsiye edilir. Bu daha kaudal süreçler makas tarafından vurulduktan omurilik korumak anlamına gelecektir. Bu yeterli cerrahi erişim sağlamak için tavsiye edilir, çok küçük bir birincil kesi yapmak anlamına gelir. Ayrıca, bir şeyi forceps ile kavradığınızda, uygulanan çekme nin y...

Bu çalışmanın genel amacı, yenileyici omurilik yaralanması modeli üreten axolotl(Ambystoma mexicanum)künt ve keskin SCI vermek için kontrollü ve tekrarlanabilir bir mikrocerrahi yöntem oluşturmaktı.
SCI, düzeyi ve ölçüde bağlı olarak, bozulmuş mesane ve bağırsakkontrolü1 ile birlikte ekstremitelere nörolojik sakatlık inflicts ciddi bir durumdur,2,3. En SCI trafik kazaları gibi yüksek enerjik travma sonucu ve düşüyor4,5. Keskin yaralanmalar çok nadirdir. Bu nedenle, en sık görülen makroskopik yaralanma türü çürükler olduğunu.
Memeli merkezi sinir sistemi (CNS) non-rejeneratif doku, sci aşağıdaki nörolojik doku bu nedenle hiçbir restorasyon görülür6,7,8. Öte yandan, bazı hayvanların cns doku da dahil olmak üzere dokuları yenilemek için ilginç bir yeteneği var. Bu hayvanlardan biri axolotl. Bu yaygın rejeneratif biyoloji çalışmalarında kullanılan ve omurilik rejenerasyon ilgi, bir omurgalı olduğu için9,10,11,12.
Aksitotl en SCI çalışmaları ya tüm kuyruk ampütasyon veya omurilik9,10,11,12daha büyük bir bölümünün ablasyon olarak yapılır. Son zamanlarda, klinik durumları daha iyi taklit künt yaralanmalar13 yeni bir çalışma yayınlandı. Axolotl tam aparat amputasyonu tam rejenerasyon sonuçları ise, bazı non-ampütasyon tabanlı rejeneratif olaylar kritik boyut defekti bağlıdır (CSD)14,15. Bu, kritik eşiği aşan yaralanmaların yenilenolmadığı anlamına gelir. Daha yüksek klinik çevirideğerine sahip rejeneratif bir model geliştirmek için, bu çalışmada 2 mm künt travmanın CSD sınırını aşıp aşmayacağı araştırılmıştır.
Bu yöntem, özellikle axolotl küçük hayvan modellerinde omurilik rejenerasyonu üzerinde çalışan araştırmacılar için geçerlidir. Ayrıca, genel olarak küçük hayvanlarda kullanıma uygun bir künt travma mekanizması geliştirmek için standart laboratuvar ekipmanı kullanarak bir yol sergiler, çünkü daha genel ilgi olabilir.

<table><tbody><tr><td>25 g özel düşen çubuk</td><td>özel ev yapımı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>30 mm PVC boru</td><td>özel ev yapımı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aseton</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>67-64-1</td><td>Propanone</td></tr><tr><td>Axolotl (Ambystoma mexicanum)</td><td>Exoterra GmbH</td><td>N/A</td><td>12-22 cm ve 10 g - 80 g, Tüm suşlar (vahşi tip, melanoid, beyaz, albino, GFP'li transgenik beyaz)</td></tr><tr><td>Benzocain</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>94-09-7</td><td>etil 4-aminobenzoat</td></tr><tr><td>Electromaget</td><td>özel ev yapımı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Excel 2010</td><td>Microsoft</td><td>N/A</td><td>Excel 2010 veya daha yenisi</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Ulusal Sağlık</td><td></td><td>Enstitüleri ImageJ 1.5e veya daha yenisi. Rasband, W.S., ImageJ, ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri, Bethesda, Maryland, ABD, https://imagej.nih.gov/ij/, 1997-2016.</td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikrocerrahi aletleri</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Forseps ve makas</td></tr><tr><td>MS550s</td><td>Fujifilm, Visualsonics</td><td>MS550s</td><td>40 MHz merkez frekansı, dönüştürücü</td></tr><tr><td>MS700</td><td>Fujifilm, Visualsonics</td><td>MS700</td><td>50 MHz merkez frekansı, dönüştürücü</td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>herhangi bir yapıcı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Yumuşak bez</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Yaklaşık 70 x 55 cm ölçülerinde herhangi bir yumuşak bez parçası2 örneğin bir bulaşık havlusu</td></tr><tr><td>Stereo mikroskop</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vevo 2100</td><td>Fujifilm, Visualsonics</td><td>Vevo 2100</td><td>Yüksek frekanslı ultrason sistemi</td></tr></tbody></table>

rejeneratif axolotl'da mikrocerrahi laminektomi ile kontüzyon omurilik yaralanması

Contusion Spinal Cord Injury via a Microsurgical Laminectomy in the Regenerative Axolotl

Bu çalışmanın amacı axolotl(Ambystoma mexicanum)standart ve tekrarlanabilir rejeneratif omurilik yaralanması modeli oluşturmaktır. Klinik omurilik yaralanmalarının çoğu yüksek enerjili künt travmalar olarak ortaya çıkar, kontüzyon yaralanmaları indükleyen. Ancak, axolotl omurilik teki çalışmaların çoğu keskin travmalarla yapılmıştır. Bu nedenle, bu çalışma daha klinik olarak ilgili rejeneratif bir model üretmeyi amaçlamaktadır. Hemen hemen her türlü dokuyu yenileme yetenekleri sayesinde, axolotls rejeneratif çalışmalarda model olarak yaygın olarak kullanılır ve omurilik yaralanması (SCI) çalışmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu protokolde, axolotls bir benzocaine çözeltisi daldırma tarafından anestezi edilir. Mikroskop altında, açısal bir kesi sadece arka ekstremitelere kaudal bir düzeyde ikili olarak yapılır. Bu kesiden, spinous süreçleri incelemek ve ortaya çıkarmak mümkündür. Forceps ve makas kullanılarak, iki seviyeli laminektomi yapılır, omurilik açığa. Bir silindir düşen çubuk oluşan özel bir travma cihazı inşa edilir, ve bu cihaz omurilik bir çürük yaralanması neden olmak için kullanılır. Kesikler daha sonra dikilir ve hayvan anesteziden kurtulur. Cerrahi yaklaşım omuriliği ortaya çıkarmada başarılıdır. Travma mekanizması, histoloji, MRG ve nörolojik muayene ile doğrulanan, omurilik kontüzyon yaralanmaları üretebilir. Son olarak, omurilik yaralanma dan yeniler. Protokolün kritik adımı, omurilikte hasar vermeden spinous süreçleri kaldırmaktır. Bu adım, güvenli bir yordam sağlamak için eğitim gerektirir. Ayrıca, yara kapanması son derece kesi sırasında cilde gereksiz hasar vermemebağlıdır. Protokol, 12 hayvan üzerinde yapılan randomize bir çalışmada gerçekleştirildi.

Protokolün amacı, motor ve duyusal fonksiyonları yaralanmak için kaudal felç edecek bir SCI üretmektir. Aksitotl rejenerasyon yetkin olduğu için birkaç hafta içinde işlevini geri yükler ve araştırmacıların kısa bir süre içinde CNS rejenerasyonunu incelemelerine olanak sağlar.
Tüm hayvanlara 45 dakika anestezi sağlandı ve erken iyileşme atakları yaşanmadı. Tüm hayvanlar bir saat içinde kurtarıldı ve sonraki haftalarda anestezi hasar belirtisi gösterdi13,<sup c...

Bu el yazması cerrahi bir rejeneratif aksiyom(Ambystoma mexicanum)kontrollü künt ve keskin omurilik yaralanmaları inflicting için protokoller sunar.

Rejeneratif Axolotl'da Mikrocerrahi Laminektomi Ile Kontüzyon Omurilik Yaralanması

The purpose of this study is to establish a standardized and reproducible regenerative blunt spinal cord injury model in the axolotl (Ambystoma ...

Bu protokol axolotl omurilik rejenerasyon araştırmalarında standart kontüzyon tipi yaralanma tanıtmak için ilk. Bu tekniğin en büyük avantajı, günlük klinikte görülen travmayı taklit ederek gelecekteki bir bulgunun tercüme edilme olasılığını artırmasıdır. Çürük yaralanma cihazı omurilik yaralanması başka bir küçük hayvan modeli nde kullanılabilir.Cerrahi teknik zordur, özellikle laminektomi. Bu nedenle, in vivo cerrahi ilerlemeden önce hayvanların ex vivo çok sayıda prosedürü eğitmek için tavsiye edilir. Başlamak için, bir cerrahi tekstil bezi üstüne, bir stereo mikroskop altında standart bir Petri çanak yerleştirerek bir cerrahi tablo kurmak.Anestezili axolotl'ı Petri kabının üzerine yatkın bir pozisyonda yerleştirin ve kuyruğun açığa olması için kağıt havlulara sarın. Arka ekstremiteleri tanımlayın ve onlara sadece kaudal ilk kesi yapmak için mikro makas bir çift kullanın. Spinous süreçlerin kemik çıkıntısı hissedilene kadar omurgadan dikey kesi yapın.Kesiği yanal olarak genişletin, böylece kesi kuyruğun tüm genişliğini geçer ve uygun derinliği sağlamak için spinous prosesleri çertelerle kavrar. Daha sonra dikey kesiyi her iki taraftaki spinous işleminin bir milimetre altında genişletin. Bir tarafta hayvan yerleştirin ve dikey kesi ventral noktadan başlayarak, ağırlığı 10 ila 20 gram olan hayvanlar için yaklaşık 15 milimetre yatay bir kesi yapmak.Vertebral kolon orta hatta hissedilene kadar yatay kesi ile hemen incelemek için makas kullanın. Sonra diğer tarafa hayvan açın ve işlemi tekrarlayın. Her iki taraftan derin medial düzlemde diseksiyon sonra, iki yatay kesibağlamak için orta hattan inceleyin.Daha sonra, spinous süreçleri ortaya çıkarmak için kuyruk ve omurga serbest parçası bir tarafa taşıyın. Baş cerrahın baskın olmayan tarafına bakacak şekilde hayvanı yatkın bir konuma getirin ve dikenli süreçleri kavramak için bir çift çaksilik kullanın, sadece arka ekstremitelere kaudal. Hayvanın kafasına doğru hafifçe bir asansör uygulayın.Mikro makas bir çift bıçakları sürecin etrafında yatay yerleştirin ve yavaşça kes, omurilik açığa. Az önce kaldırılan ait olana doğru spinous proses kaudal'ı tutun ve işlemi tekrarlayın. Çıkarıldığında omurilik hasar vermez emin olmak için spinous süreci üzerinde sürekli bir asansör tutmak zorunludur.Maruz kalan alan yeterince geniş değilse, omuriliğin her iki tarafındaki laminayı kavramak için iki çift forseps kullanın ve hafif bir hareketle onları yanal olarak bükün. Spinous işlemini kaldırırken, bunu birden çok adımda yapmak gerekebilir. Bu nedenle, omurilik açığa birkaç dakika sürebilir.Bir kontüzyon tipi yaralanma tanıtmak için, travma birimine hayvan transfer ve omurilik üzerinde bir el feneri parlaklık için bir Petri çanak kullanın. Daha sonra, mikro ayarlayıcıları kullanarak maruz kalan omuriliğin üzerine kontüzyon travma ünitesi silindirini yerleştirin ve silindiri lamina ile aynı seviyeye gelene kadar indirin. Düşen çubuğu elektro mıknatısa takın ve istenilen düşen yükseklik ayar silindirini travma ünitesine yerleştirin.Daha sonra, düşen çubuğu silindirin üzerine yerleştirin, elektromıknatısı kapatıp çubuğu açıkta kalan omuriliğe bırakın ve çubuğu yukarı kaldırmak için yükseklik ayarlama vidasını kullanın. Keskin bir yaralanma tanıtıyorsanız, mükemmel bir dikey kesim omurilik kesmek, sonra vücudun kaudal tarafına iki milimetre kesikler tekrarlayın. Kesiklerin tamamlandığından emin olmak için omurilik kanalının ventral kısmı boyunca kazınan makanın bıçaklarını hissedin ve omurilik parçasını kanaldan kaldırın.Cerrahi yarayı kapatmak için, 10 nokta o naylon dikişleri yatay kesinin en kaudal kısmından bir tabaka halinde yaraları kapatArak ve kesiğin dikey kısmına doğru çalışarak yerleştirin. Bir açı yada, Petri kabını çevirin ve diğer yatay kesileri dikin, sonra dikey kesilere dikişler yerleştirin. Anesteziyi sonlandırmadan önce, yaralanmanın görüntülerini elde etmek için yüksek frekanslı ultrason kullanın.Dönüştürücünün ucunu hayvanın uzunluk ekseni ile hizalayın ve hayvanın arka ekstremitelerinin arkasındaki omurganın sadece birkaç milimetre yukarısına kadar benzocaine çözeltisine batırın. Yaralanma bölgesini belirleyin ve el yazması talimatlara göre resimler elde edin. Bittiğinde, petri kabını beş santimetre derin tatlı suya batırarak ve hayvanın kaymasını sağlayarak axolotl'ı anesteziiçermeyen çözeltiye geri döndürün.Bu protokol kullanılarak oluşturulan omurilik yaralanmaları yaralı ve sahte aksokolotllarda hematoksilin ve eozin boyama kullanılarak doğrulandı. Rejenerasyonu doğrulamak için, histolojik bölümler yaralanma dan dokuz hafta sonra hazırlandı. Görüntülerde yaralı hayvanlarda yeniden kurulan omurilik bağlantısı ortaya çıktı.Yaralanma ve yenilenme de nörolojik fonksiyonu inceliyoruz. Kuyruğun uyarılmasıiçin hayvanın tepkisi daha yüksek dokunsal ve nosiseptif duyusal fonksiyonları gösteren daha yüksek puanlar ile puanlandı. Yaralı hayvanlar arasında, nörolojik fonksiyon kaybı üç hafta sonra yaralanma, ve dokuz hafta içinde kademeli bir restorasyon oldu.Omurilik yaralanması da ultrasonik grafik görüntüleme kullanılarak görselleştirilmiş, hangi damar bütünlüğünün bir belirteç olarak dorsal arter görselleştirilmesi için izin. Hi-field MRG taramaları yaralanmadan hemen sonra ve üç, altı ve dokuz hafta uygulandı. Bu taramalar ödem ve omurilik bütünlüğünün restorasyonu görselleştirmek başardık.Taramalar hemen yaralanma sonrası, gürültüeğilimli idi. Hasta ve titiz cerrahi omurilik erken hasar olmadan laminektomi sonrası başarılı bir sonuç için önünü açacaktır. Bu işlemden sonra görüntüleme ve elektrofizyolojik teknikler gibi çeşitli in vivo yöntemler uygulanabilir.

contusion-spinal-cord-injury-via-microsurgical-laminectomy

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Sinir habercisi nakli, korunması ve / veya spinal kord yaralanması (SCI) ve motor nöron bozukluğu, amiyotrofik lateraller skleroz (ALS) kaybettim / işlevsiz servikal frenik motor nöronların yerini gelecek vaat eden bir strateji. Biz, ALS ve SKY kemirgen modellerinde servikal omurilik ventral boynuz hücre teslimat için bir protokol sağlar.

Amyotrophic Lateral Sclerosis ve Travmatik Spinal Kord Yaralanması Servikal Ventral Horn Hedefleme intraspinal Hücre Transplantasyonu

Kaynak: Elzat, E. Y. Y., et al., Minimal İnvaziv Tekniğe Dayalı Bir Fare Kontüzyonu Omurilik Yaralanması Modelinin Oluşturulması. J. Vis. Uzm. (2022). Bu video, bir omurilik yaralanması koaksiyel platformu kullanılarak bir fare modelinde T9 seviyesi omurilikte bir kontüzyon yaralanmasını indükleme yöntemini göstermektedir. T9 seviyesindeki omuriliğe bir ağırlık düşer ve bu da hemen doku renk değişikliğine ve şişmeye neden olan bir kontüzyon oluşturur.

Omurilik Yaralanması Koaksiyel Platform Kullanılarak Bir Fare Modelinde Omurilik Kontüzyonunun İndüklenmesi

Omurilik yaralanması ciddi morbidite ve mortalitesi yüksek bir neden travmatik bir durumdur. Bu çalışmada detaylı olarak nöral kök hücrelerin bir nakli ardından farelerde omurilik yaralanması bir kontüzyon modelini tarif.

Omurilik Yaralanması Deneysel Kontuzif Modelinde Sinir Kök Hücre Nakli

Bu makalede, yenidoğan faresinde tekrarlanabilir omurilik kompresyon yaralanması (SCI) oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Model, spontan fonksiyonel iyileşmenin altında yatan adaptif plastisite mekanizmalarını incelemek için avantajlı bir platform sağlar.

Bir Yenidoğan Fare Omurilik Sıkıştırma Yaralanması Modeli

Burada, biz orta kanal niş konut endojen sinir kök hücreleri (NSCs) yedek bir yetişkin fare en az omurilik yaralanma modelinde performansını göstermek. Neurosphere tahlil harekete geçirmek ve yaralanma takip kesin ve ilkel NSCs geçirilmesi ölçmek için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir.

Endojen nöral kök hücre etkinleştirme en az Medulla Spinalis Yaralanmalarında, fare modeli değerlendirmek için bir Neurosphere tahlil

Burada sunulan, CAS9-gRNA kompleksini omurilik merkezi kanalına enjekte ederek, akolotl spinal tellerinde zaman ve uzaya kısıtlı gen vuruş yapmak için bir protokoldür ve ardından Electroporation.

CAS9 protein-gRNA kompleksleri Electroporation yoluyla Axolotl omurilik nöral kök hücrelerinin doğrudan gen Knock-Out

Xenopus laevis kurbağa yavrusu omurilik transeksiyonu, torasik seviyede omuriliği tamamen kesen enine bir kesim yaparak omurilik yaralanmasını ve rejenerasyonunu incelemek için ilgili bir yaralanma yöntemidir.

Xenopus laevis Kurbağa Yavruları'nda Omurilik Transeksiyonu

Burada, sıçanlarda laminektomiyi ortadan kaldıran açık omurilik yaralanmasını modelleyen yeni ve hızlı bir teknik tanımlanmıştır. Lateral hemiseksiyon mikroskopla görüntülenirken yapılır. Teknik çok yönlüdür ve diğer hayvanların omuriliğinin servikal, torasik ve bel bölgelerinde de kullanılabilir.

Sıçanlarda Açık Omurilik Yaralanmalarını Modellemek için Minimal İnvaziv, Hızlı Omurilik Lateral Hemikesim Tekniği

Minimal invaziv teknikler ve basit bir laboratuvar cihazı, deney hayvanlarına operatif hasarı azaltarak ve anatomik morfoloji bakımına izin vererek omurilik yaralanması modelinin tekrarlanabilirliğini arttırır. Yöntem değerlidir, çünkü güvenilir sonuçlar ve tekrarlanabilir prosedür, hastalık onarım mekanizmalarının araştırılmasını kolaylaştırır.

Minimal İnvaziv Bir Tekniğe Dayalı Bir Fare Kontüzyonu Omurilik Yaralanması Modelinin Oluşturulması

Bu çalışmanın amacı, Ambystoma mexicanum'da mandibulanın tam enine amputasyonu için güvenli ve tekrarlanabilir bir cerrahi yaklaşımı standartlaştırmaktı; böylece kraniofasiyal doku yenilenmesi incelendi.

Ambystoma Mexicanum Modelinde kraniofasiyal doku yenilenmesinin incelenmesi için mandibular yaralanma modelinin tasarımı ve standartlaştırılması

Keşfedin mikrocerrahi laminektomi ile kontüzyon omurilik yaralanması oluşturma yöntemini rejeneratif axolotl (Ambystoma mexicanum) modellerinde. Bu teknik klinik travmayı taklit ederek omurilik rejenerasyonu araştırmalarına katkı sağlar.

Rejeneratif Axolotl'da Mikrocerrahi Laminektomi Ile Kontüzyon Omurilik Yaralanması

Daha fazla video keşfet