Name: Mesane Dolgusu Sırasında Suburothelium Doğrudan Erişim için Kaldırılan Detrusor Kas ile Ademi Merkeziyet (Ex Vivo) Murine Mesane Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-28T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 36 s
Description: Keşfedin, detrusor kası çıkarılmış fare mesane modeliyle suburothelium doğrudan erişim yöntemini. Mesane dolumu sırasında biyolojik aktif mediyatörlerin mekanizmalarını inceleyerek idrar kesesi fonksiyonlarını anlayın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Diyabet Enstitüsü ve Sindirim ve Böbrek Hastalıkları Hibe DK41315 tarafından desteklenmiştir.

Bu yazıda tanımlanan hayvanlarla ilgili tüm işlemler, Ulusal Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Için Sağlık Enstitüleri Rehberi ve Nevada Üniversitesi Kurumsal Hayvan Kullanımı ve Bakımı Komitesi'ne göre yürütülmüştür.
NOT: Burada sunulan model, detrusor kasının çıkarılmasından oluşurken, ürotelyum ve SubU/LP sağlam kalarak(Şekil 1B)araştırmacıların mesane dolgusu sırasında SubU/LP'ye doğrudan erişimini sağlar.
1. Detrusor içermeyen Mesane Hazırlığıdise
<ol><li>İzole mesanesoğuk (10 °C) dolu ve %5 CO2/95 % O2 Krebs bikarbonat çözeltisi (KBS) ile oksijenli bir kesişen tabağa aşağıdaki bileşimle (mM) yerleştirin: 118,5 NaCl, 4.2 KCl, 1.2 MgCl2, 23.8 NaHCO3, 1.2 KH2PO4, 11.0 dekstroz, 1.8 CaCl2 (pH 7.4)13.</li>
	<li>İzole mesanenin kubbesinin küçük bir kısmını KBS ile dolu Sylgard kaplı bir kesme kabına sabitleyin. Pimin SubU/LP'ye bakan kasın en iç kenarından serosa'nın bir parçasından veya en dıştaki kenarından geçtiğinden emin olun.</li>
	<li>Bir mikroskop kullanarak, üretra ve üreterleri tanımlayın ve her birini diseksiyon kabının altına sabitleyin.</li>
	<li>Mesane, üretra ve her iki üreterin tüm ana gövdesi görüntülenir, böylece aşırı yağ ve bağ dokuları çıkarın.</li>
	<li>Üreterleri 6-0 naylon dikişlerle bağlayın. Daha sonra, hazırlama güvenliğini sağlamak için kesitlerin açık uçlarını diseksiyon kabının altına doğru sabitleyin.</li>
	<li>İnce uçlu forceps kullanarak, yavaşça üreter ve mesane gövdesi arasındaki köşesinde serosa bir parça çekin.</li>
	<li>Saydamlığı artırmak ve detrusor kasının altındaki submukozanın kenarboşluğunu ayırt etmek için mikroskopun ışığını ayarlayın.</li>
	<li>Kesmeye başlayın(soyma değil!) mesane duvarını detrusor kas tabakasının iç yüzeyi boyunca ince uçlu makaslarla keserken, kesme segmentini hazırlıktan hafifçe çekin. Her zaman, mukozanın lateral kenarı görülebilir ve dokunmaktan kaçının emin olun.</li>
	<li>Preparat ın pozisyonu detrusor kas dışarı diseksiyon devam etmek için rahat böylece diseksiyon çanak etrafında çevirerek tamamen detrusör kas çıkarın.</li>
	<li>Protokolün kalan adımları sırasında hazırlık immobilize yeteneği sağlamak için mesane kubbesinin üstüne detrusor kas küçük bir parça bırakın.</li>
	<li>6-0 naylon iplik bir çift döngü olun, mesane hazırlık boyun etrafına yerleştirin ve döngü gevşek bırakın.</li>
	<li>6-0 ipek iplik ikinci bir çift döngü ekleyin, mesane hazırlık boyun etrafına yerleştirin ve döngü kaybetmek bırakın. İki dikiş olması dikişlerin etrafındaki sızıntıları önler.</li>
	<li>20 PE boru (kateter) yaklaşık 2 cm kesin, bir alev yakın ucu yavaş yavaş hareket ettirerek ucu alevlendirin.</li>
	<li>Kateteri sıcak (37 °C) oksijenli KBS ile doldurun.</li>
	<li>Kateteri mesane üretrasının deifine yerleştirin ve kateter ucu mesanenin yaklaşık ortasına ulaşana kadar kateteri yavaşça itin.</li>
	<li>Kateter ve mesane boynunun çevresindeki doku etrafında dikiş kravat.</li>
	<li>Mesaneyi yavaşça yaklaşık 50-100°L ılık (37 °C) oksijenli KBS ile doldurun, KBS yüzeyinden kısa bir süre (<10 s) kaldırın ve dikişlerde ve mesane gövdesindeki sızıntıları izleyin.</li>
	<li>Sızıntı gözlenmezse, deney için hazırlık hazırdır. Dikiş etrafında bir sızıntı görülürse, dikiş çıkarın ve değiştirin. Mesane gövdesinde bir delikten bir sızıntı fark edilirse, hazırlık atın.</li>
</ol>2. Denuded Mesane Preparatının Doldurulması
<ol><li>Perfuse KBS (37 °C) bir su 3 mL oda içine (37 °C) bir Sylgard alt ile ceketli organ çanak.</li>
	<li>Oksijen ve emme hatlarını ayarlayın.</li>
	<li>Denuded mesane hazırlık odasına yerleştirin.</li>
	<li>Preparatın perfüzyon çözeltisinin yüzeyinin üzerinde süzülmemesi için kateteri haznenin kenarına sabitle.</li>
	<li>Mesane kateterini aynı boyutta montaj kullanarak üç yönlü stopcock'a bağlı daha uzun bir PE20 boruya (infüzyon hattı) bağlayın.</li>
	<li>İnfüzyon pompası, basınç transdüser ve mesane arasındaki çizgilerin açık olduğundan emin olun.</li>
	<li>Infüzyon şırıngını taze, sıcak (37 °C) ve oksijenli KBS ile doldurun.</li>
	<li>Pompa parametrelerini ayarlayın: şırınganın türü/hacmi (yani, 1 mL), çalışma (yani aşılama), akış (yani, sabit) ve akış hızı (örn. 15 μL/dk).</li>
	<li>Mesane doldurmak için şırınga pompası üzerinde Başlat düğmesine basın.</li>
	<li>Mesane dolgusu sırasında dolum hacmini ve damar basıncını izleyin.</li>
</ol>3. Denuded Mesane HazırlığısubU / LP Yönü Arabulucuların Tespiti
<ol><li>Buz gibi mikrosantrifüj tüpler veya yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC) ekler içine banyo çözeltisi aliquots toplayın.</li>
	<li>Numuneleri uygun algılama uygulamasına göre hazırlayın ve işleyin. Pürin kullanılabilirliğinin saptanması durumunda, numuneleri HPLC ile floresan tespiti13,18ile işleyin.</li>
</ol>

<ol><li>Apodaca, G., Balestreire, E., Birder, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+uroepithelial-associated+sensory+web%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">The uroepithelial-associated sensory web.</a> Kidney International. 72, 1057-1064 (2007).</li>
<li>Fry, C. H., Vahabi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+the+Mucosa+in+Normal+and+Abnormal+Bladder+Function%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+and+Clinical+Pharmacology+and+Toxicology%22%5BJournal%5D)">The Role of the Mucosa in Normal and Abnormal Bladder Function.</a> Basic and Clinical Pharmacology and Toxicology. , 57-62 (2016).</li>
<li>Merrill, L., Gonzalez, E. J., Girard, B. M., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptors%2C+channels%2C+and+signalling+in+the+urothelial+sensory+system+in+the+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviewes+Urology%22%5BJournal%5D)">Receptors, channels, and signalling in the urothelial sensory system in the bladder.</a> Nature Reviewes Urology. 13, 193-204 (2016).</li>
<li>Ferguson, D. R., Kennedy, I., Burton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATP+is+released+from+rabbit+urinary+bladder+epithelial+cells+by+hydrostatic+pressure+changes--a+possible+sensory+mechanism%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">ATP is released from rabbit urinary bladder epithelial cells by hydrostatic pressure changes--a possible sensory mechanism?</a> Journal of Physiology. 505, 503-511 (1997).</li>
<li>Wang, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATP+and+purinergic+receptor-dependent+membrane+traffic+in+bladder+umbrella+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">ATP and purinergic receptor-dependent membrane traffic in bladder umbrella cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 115, 2412-2422 (2005).</li>
<li>Miyamoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+role+for+Piezo1+in+stretch-evoked+Ca%282%29%28%2B%29+influx+and+ATP+release+in+urothelial+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Functional role for Piezo1 in stretch-evoked Ca(2)(+) influx and ATP release in urothelial cell cultures.</a> Journal of Biological Chemistry. 289, 16565-16575 (2014).</li>
<li>Mochizuki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+TRPV4+cation+channel+mediates+stretch-evoked+Ca2%2B+influx+and+ATP+release+in+primary+urothelial+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">The TRPV4 cation channel mediates stretch-evoked Ca2+ influx and ATP release in primary urothelial cell cultures.</a> Journal of Biological Chemistry. 284, 21257-21264 (2009).</li>
<li>McLatchie, L. M., Fry, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATP+release+from+freshly+isolated+guinea-pig+bladder+urothelial+cells%3A+a+quantification+and+study+of+the+mechanisms+involved%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">ATP release from freshly isolated guinea-pig bladder urothelial cells: a quantification and study of the mechanisms involved.</a> BJU International. 115, 987-993 (2015).</li>
<li>Birder, L. A., Apodaca, G., de Groat, W. C., Kanai, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenergic-+and+capsaicin-evoked+nitric+oxide+release+from+urothelium+and+afferent+nerves+in+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Adrenergic- and capsaicin-evoked nitric oxide release from urothelium and afferent nerves in urinary bladder.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 275, F226-F229 (1998).</li>
<li>Birder, L. A., Kanai, A. J., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DMSO%3A+effect+on+bladder+afferent+neurons+and+nitric+oxide+release%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">DMSO: effect on bladder afferent neurons and nitric oxide release.</a> Journal of Urology. 158, 1989-1995 (1997).</li>
<li>Birder, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vanilloid+receptor+expression+suggests+a+sensory+role+for+urinary+bladder+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Vanilloid receptor expression suggests a sensory role for urinary bladder epithelial cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U S A. 98, 13396-13401 (2001).</li>
<li>Birder, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-adrenoceptor+agonists+stimulate+endothelial+nitric+oxide+synthase+in+rat+urinary+bladder+urothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Beta-adrenoceptor agonists stimulate endothelial nitric oxide synthase in rat urinary bladder urothelial cells.</a> Journal of Neuroscience. 22, 8063-8070 (2002).</li>
<li>Durnin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ex+vivo+bladder+model+with+detrusor+smooth+muscle+removed+to+analyse+biologically+active+mediators+released+from+the+suburothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">An ex vivo bladder model with detrusor smooth muscle removed to analyse biologically active mediators released from the suburothelium.</a> Journal of Physiology. 597, 1467-1485 (2019).</li>
<li>Yoshida, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-neuronal+cholinergic+system+in+human+bladder+urothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Non-neuronal cholinergic system in human bladder urothelium.</a> Urology. 67, 425-430 (2006).</li>
<li>Beckel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pannexin+1+channels+mediate+the+release+of+ATP+into+the+lumen+of+the+rat+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Pannexin 1 channels mediate the release of ATP into the lumen of the rat urinary bladder.</a> Journal of Physiology. 593, 1857-1871 (2015).</li>
<li>Collins, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OnabotulinumtoxinA+significantly+attenuates+bladder+afferent+nerve+firing+and+inhibits+ATP+release+from+the+urothelium%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">OnabotulinumtoxinA significantly attenuates bladder afferent nerve firing and inhibits ATP release from the urothelium.</a> BJU International. 112, 1018-1026 (2013).</li>
<li>Daly, D. M., Nocchi, L., Liaskos, M., McKay, N. G., Chapple, C., Grundy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+in+afferent+pathways+and+urothelial+function+in+the+male+mouse+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Age-related changes in afferent pathways and urothelial function in the male mouse bladder.</a> Journal of Physiology. 592, 537-549 (2014).</li>
<li>Durnin, L., Hayoz, S., Corrigan, R. D., Yanez, A., Koh, S. D., Mutafova-Yambolieva, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urothelial+purine+release+during+filling+of+murine+and+primate+bladders%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Urothelial purine release during filling of murine and primate bladders.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 311, F708-F716 (2016).</li>
<li>Gonzalez, E. J., Heppner, T. J., Nelson, M. T., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purinergic+signalling+underlies+transforming+growth+factor-beta-mediated+bladder+afferent+nerve+hyperexcitability%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Purinergic signalling underlies transforming growth factor-beta-mediated bladder afferent nerve hyperexcitability.</a> Journal of Physiology. 594, 3575-3588 (2016).</li>
</ol>

Bu çalışmanın bazı bölümleri daha önce Journal of Physiology dergisinde (PMCID: PMC6418748; DOI:10.1113/JP27692413). Wiley and Sons, Inc. tarafından bu yayındaki materyallerin kullanımı için izin verilmiştir. Yazarların ifşa etmesi gereken herhangi bir mali veya başka çakışma yoktur.

Mesanenin iki işlevi vardır: idrarın depolanması ve boşaltılsa. Bu fonksiyonların normal çalışması, detrusor kas uyarılabilirliğini düzenlemek için intraluminal hacim ve basıncın ve sinyallerin mesane duvarındaki hücreler den aktarılmasını uygun mekanik algılamayı gerektirir. Mesane mukozasının (ürotelyum) SubU/LP'de mesane duvarındaki çok sayıda hücre tipini etkileyen çeşitli sinyal molekülleri salarak mesane uyarılabilirliğini düzenlediğine inanılmaktadır. Şu anda, ürotelyum kaynaklı mediatörlerin karakterizasyonu giri...

Bu modelin amacı mesane dolgu farklı aşamalarında mesane mukozasının submukozal tarafına doğrudan erişim sağlamaktır.
Kritik hacim ve basınca ulaşıldığında mesane dolum sırasında erken kasılma ve boşalmaktan kaçınmalıdır. Anormal kontinans veya idrar voiding sık sık mesane dolgu seyrinde detrusor düz kas (DSM) anormal uyarılabilirlik ile ilişkilidir. DSM'nin uyarılabilirliği, düz kas hücrelerine özgü faktörler ve mesane duvarı içindeki farklı hücre tiplerinin ürettiği etkiler le belirlenir. Üriner mesanenin duvarı ürotelium (mukoza), suburothelium (SubU)/lamina propria (LP), detrusor düz kas (DSM) ve serosa 'dan(Şekil 1A)oluşur. Ürotelyum şemsiye hücrelerden (yani, ürotelyumun en dış tabakası), ara hücrelerden ve bazal hücrelerden (yani ürotelin en iç tabakasından) oluşur. Interstisyel hücreler, fibroblastlar, afferent sinir terminalleri, küçük kan damarları ve bağışıklık hücreleri de dahil olmak üzere çeşitli hücre türleri SubU/LP'de bulunur. Bu yaygın mesane ürotelyyum SubU / LP ve DSM hücreleri etkileyen submukoza içine arabulucu bırakarak refleks micturition ve kontinansbaşlatan bir duyu organı olduğu varsayılır1 ,2,3. Çoğunlukla, bu tür varsayımlar arabulucuların salınımını göstermiştir çalışmalara dayanmaktadır: hidrostatik basınçdeğişiklikleremaruz mukoza parçalarından 4,5; streç maruz kültürlü ürotellial hücrelerden6,7, hipotonisite kaynaklı hücreşişme7 veya sürükleme kuvvetleri8; reseptör veya sinir aktivasyonu üzerineizole mesane duvar şeritleri 9,10,11,12,13,14; ve mesane lümeni sonunda mesane dolgusularında 15,16,17,18,19. Bu tür çalışmalar mesane duvarı segmentleri veya kültürlü ürotelyal hücrelerin mekanik stimülasyon üzerine arabulucuların salınımını göstermek için etkili iken, onlar mesane dolgu üretmek fizyolojik uyaranlarla ortaya çıkan submukoza da arabulucuların serbest bırakılması için doğrudan kanıt tarafından desteklenmesi gerekir. Bu SubU / LP mesane duvarının derin mesane dolgu sırasında SubU / LP çevresine doğrudan erişim engel bulunan verilen zor bir görevdir.
Burada, mesane ürotelyumu, DSM ve mesane duvarındaki diğer hücre tipleri arasındaki sinyalizasyona katılan mechanotransdüksiyonun lokal mekanizmaları üzerinde çalışmaları kolaylaştırmak için geliştirilen detrusor kası13 ile ademi merkeziyetçi (ex vivo) murine mesane modelini gösteriyoruz. Bu yaklaşım düz mesane duvar tabakaları, mesane duvar şeritleri veya kültürlü ürotelyal hücreler kullanmaktan daha üstündür, çünkü mesanedeki fizyolojik basınç ve hacimlere yanıt olarak serbest bırakılan veya oluşan ürotenyum kaynaklı mediatörlerin SubU/LP çevresinde doğrudan ölçümlere izin verir ve hücre kültüründeki potansiyel henotypik değişimleri önler. SubU/LP'deki arabulucuların mesane dolgusu farklı aşamalarında kullanılabilirliğini, salınımını, metabolizmasını ve transurothelial naklini ölçmek için kullanılabilirliği, salınımını, metabolizmasını ve transurothelial naklini ölçmek için kullanılabilir(Şekil 1B). Hazırlık ayrıca aşırı aktif ve az aktif mesane sendromları modellerinde ürotelyal sinyalizasyon ve mekanotransdüksiyon uzerinde nisrarl incelemede de kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>CaCl2</td><td>Fisher</td><td>C79</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>Dekstroz</td><td>Fisher</td><td>D16</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>Diseksiyon pimleri</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>26002-20</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>İnfüzyon Pompası</td><td>Kent Scientific</td><td>GenieTouch</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher</td><td>P217</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Fisher</td><td>P284</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>Işık kaynağı</td><td>SCHOTT ACEI</td><td></td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Olympus SZX7</td><td></td><td>Herhangi bir kapsamı kullanmak için esnek</td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Fisher</td><td>M33</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S671</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Fisher</td><td>S233</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>İğneler 25G</td><td>Becton Dickinson</td><td>305122</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>Organ banyosu</td><td>Özel yapım</td><td></td><td>Esnek kaynak; Radnoti diseksiyon çanağı</td></tr><tr><td>PE-20 borudan</td> yaptık <td>Intramedic</td><td>427405</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>Basınç dönüştürücü</td><td>AD cihazı</td><td></td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>S & T Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>00632-11</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>Yazılım basınç-hacim</td><td>AD Aletleri</td><td>Güç laboratuvarı</td><td></td></tr><tr><td>Sütür Naylon, 6-0</td><td>AD cerrahi</td><td>S-N618R13</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>Sütür İpek, 6-0</td><td>Deknatel via Braintree Scientific, Inc.</td><td>07J1500190</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>Şırıngalar 1 mL</td><td>Becton Dickinson</td><td>309602</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>Vannas Bahar</td><td>Makas Güzel Bilim Araçları</td><td>15000-08</td><td>Kaynak esnek</td></tr><tr><td>Su sirkülatörü</td><td>Baxter</td><td>K-MOD 100</td><td>Kaynak esnek</td></tr></tbody></table>

mesane dolgusu sırasında suburothelium doğrudan erişim için kaldırılan detrusor kas ile ademi merkeziyet (ex vivo) murine mesane modeli

A Decentralized (Ex Vivo) Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling

Daha önceki çalışmalar, Ussing odalarına yapıştırılmış ve hidrostatik basınç veya mekanik streç teki değişikliklere maruz kalan düz mesane mukozalarından ve hidrostatik basınç değişiklikleri, esneme, hücre şişmesi veya sürükleme kuvvetleri üzerine kültürlü ürotelyal hücrelerden ve dolgu sonunda mesane lümeninde kimyasal maddelerin salınımını ortaya çıkarmış. Bu bulgular, bu mediatörlerin mesane dolgusu sırasında suburothelium (SubU)/lamina propria (LP) olarak da salındıkları ve mesane duvarının derinliklerindeki hücreleri etkileyip mesane uyarılabilirliğini düzenleyeceği varsayımına yol açmıştır. Bu tür çalışmalarda en az iki belirgin sınırlama vardır: 1) Bu yaklaşımların hiçbiri SubU/LP'de arabulucuların varlığı hakkında doğrudan bilgi sağlamaz ve 2) kullanılan uyaranlar fizyolojik değildir ve mesanenin otantik dolgusunu tekrarlamaz. Burada, mesane dolgusu seyrinde mesane mukozasının suburothelial yüzeyine doğrudan erişim sağlayan bir prosedürü tartışıyoruz. Oluşturduğumuz mürin detrusorsuz preparat, bozulmamış mesanenin doldurulmasını çok benzer şekilde andırır ve omurilik refleksleri ve detrusor düz kaslardan gelen kafa karıştırıcı sinyal yokluğunda mesane üzerinde basınç-hacim çalışmalarıyapılmasını sağlar. Yeni detrusor içermeyen mesane modelini kullanarak, yakın zamanda arabulucuların intravesical ölçümlerinin mesane dolgusu sırasında SubU/LP'de salınan veya mevcut olan alabilen lere vekil olarak kullanılamayacağını gösterdik. Model, mesane dolumu sırasında metabolizma tarafından üretilen ve/veya SubU/LP'ye taşınan ürotelyum kaynaklı sinyal moleküllerinin incelenmesini sağlayarak mesanenin nöronlarına ve düz kaslarına bilgi aktarımı sağlar ve kontinent ve mikturition sırasında uyarılabilirliğini düzenler.

Murine detrusor içermeyen mesane hazırlığı duvarı sağlamdır ve DSM ve serosa hariç tüm katmanları içerir. Prensip kanıtı çalışmaları DSM içermeyen mesane duvarında ürotelyum ve SubU/LP içerirken, tunica kaslı ve serosa nın bulunmadığını göstermiştir (Şekil 2)13.
Detrusor içermeyen mesanenin doldurulması normal mesane dolgusuna yaklaşık olarak dabur. <strong class="xf...

Detrusor içermeyen mesane modeli, idrarın depolanması ve boşaltılmasını sırasında suburothelium/lamina propria'da biyolojik olarak aktif mediatör bulunabilirliğinin düzenlenmesi için yerel mekanizmaları incelemek için suburothelium'a doğrudan erişim sağlar. Hazırlık, bozulmamış bir mesanenin doldurulmasını çok benzer şekilde andırır ve basınç hacmi çalışmalarının sistemik etkiler olmadan yapılmasını sağlar.

Mesane Dolgusu Sırasında Suburothelium Doğrudan Erişim için Kaldırılan Detrusor Kas ile Ademi Merkeziyet (Ex Vivo) Murine Mesane Modeli

Previous studies have established the release of chemical substances from flat bladder mucosa sheets affixed in Ussing chambers and exposed to changes in ...

Çıkarılan detrusor kas ile mesane modeli aynı anda mesane dolgu sırasında lamia propria ve mesane lümen ürotelyal mediatörler durumu çalışma için yeni bir deneysel yaklaşımdır. Bu model, dolgu sırasında mesane uyarılabilirliğini düzenleyen urothelium, suburothelium ve detrusor kas arasındaki sinyal mekanizmalarına yeni bakış açısı sağlayabilir. Bozulmamış murin mesane örneğini 10 santigrat derece oksijenli KBS içeren bir diseksiyon mikroskobu altında bir diseksiyon çanak içine yerleştirerek ve mesane etrafında bağ ve yağ dokuları temizleyerek başlayın.Izole mesane kubbesinin küçük bir kısmını, detrusor kasının en dış kenarına kadar, suburothelium lamia propria'ya bakan kasın en iç kenarından KBS ile doldurulmuş bir sylgard kaplı diseksiyon kabına sabitleyin ve sağlam mesane hazırlıkını görüntülemek için üreterleri ve mesane boynunu sabitleyin. İnce uçlu forceps kullanarak, yavaşça üreter ve mesane gövdesi arasındaki köşesinde serosa bir parça çekin ve şeffaflığı artırmak ve detrusor kas altında submucosa marjı ayırt etmek için mikroskop ışığı ayarlamak. Hazırlık duvarının bozulmasını önlemek için, mesane mukozasının lateral kenarı açıkça görünürken detrusör kası kestiğinden emin olun.İnce uçlu makas kullanarak, detrusor kas tabakasının iç yüzeyi boyunca mesane duvarını kesmeye başlarken, kesilen segmenti hafifçe, mukozanın lateral kenarının doku kenarına dokunmaktan kaçınarak gözlemlenebildiği hazırlıktan uzaklaştırın. Protokolün kalan adımları sırasında hazırlık immobilize izin vermek ve 37 derece santigrat derece oksijenli KBS ile 20 polietilen boru iki santimetre lik bir parça doldurmak için mesane kubbesinin üstüne detrusor kas küçük bir parça bırakın. Kateteri mesane üretrasının deliğe yerleştirdikten sonra kateter ucu mesanenin yaklaşık ortasına ulaşana kadar kateteri hafifçe itin.Daha sonra mesane boynunun çevresindeki dokuda kateteri çift halka 6.0 naylon dikişle sabitle. Sızıntıları için doku kontrol ettikten sonra, bir hekte alt ile 37 derece santigrat derece su ceketli organ çanak üç mililitrelik bir odaya denuded mesane hazırlık yerleştirin ve hazırlık perfüzyon çözeltisi yüzeyinin üzerinde yüzen değil, böylece odanın yan kateter güvenli. Mesane kateterini üç yönlü stopcock'a bağlı polietilen 20 boruya ve 37 derece santigrat derece oksijenli KBS ile dolu bir infüzyon şırıngasına bağlayın ve dolgu sırasında intravezal basınçtaki dolum hacmini izlemeye özen gösteren KBS ile mesane doldurmak için infüzyon pompasını çalıştırın.Preparatın suburothelium lamina propria yönü ndeki aracıları tespit etmek için, banyo çözeltisinin aliquotlarını çeşitli uygun deneysel zaman noktalarında toplayın ve numuneleri planlanan downstream analizine göre işleyin. Denuded mesane hazırlık duvarı ürotelyum ve suburothelium içerir, ancak detrusor düz kas içermez. Basınç hacmi ilişkileri bozulmamış ve denuded preparatlar son derece benzer.Dolgu sırasında suburothelium lamina propria tarafında serbest bırakılan ürotellium kaynaklı aracıların ölçümü için modelin uygunluğu, denuded preparatın suburothelium lamina propriasını yıkanan çözeltiye pürin arabulucularının salınımını ölçerek test edilebilir. Gösterildiği gibi, ihmal edilebilir miktarda pürin sağlam bir detrusor kas ile izole bir mesane hazırlık içeren bir banyo tespit edilebilir;bu pürinlerin miktarları bir denuded mesane hazırlık içeren banyo dan toplanan örneklerde önemli ölçüde daha yüksek ise. Özellikle lümenden toplanan örneklerdeki pürin ve metabolitlerin dağılımı ve dolgu sonunda suburothelium lamina propria önemli ölçüde farklılık gösterir.ATP'nin son derece floresan analogu olan atheno ATP'nin detrusor içermeyen preparatın suburothelial tarafına eklenmesi, atheno ATP'de azalma ve atheno ATP ürünlerinde artışa yol, atheno ADP, atheno AMP ve atheno ADO. Aynı şekilde, lümen hazırlık atheno ATP eklenmesi atheno ATP bir azalma ve atheno ADP bir artış sonuçlanır, atheno AMP, ve atheno ADO lümen. Ayrıca, denuded hazırlık suburothelium lamina propria tarafına atheno ATP eklenmesi lümen içinde atheno AMP ve atheno ADO görünümünü sonuçları.Aynı şekilde, lümen atheno ATP ekleyerek suburothelium lamina propria atheno AMP ve atheno ADO görünümünü sonuçları. Bu prosedürü takiben, uyarıcı ve inhibitör mediatörlerin durumu lamina propria ve mesane dolgu farklı aşamalarında mesane lümen ölçülebilir. Arabulucuların bilateral transüretral taşınması ve arabulucuların metabolizması da bu model kullanılarak incelenebilir.Bu yeni mesane modelinin kullanılması, sağlık ve hastalıkta mesane uyarılabilirliğini kontrol eden ürotelyum ve detrusor düz kas arasında içsel, lokal mekanosensduyarlı sinyalizasyon un yeni anlaşılmasına yol açacaktır.

a-decentralized-ex-vivo-murine-bladder-model-with-detrusor-muscle

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kateterizasyon, yerel koterizasyon ve yanık sitelerine karsinom hücreleri sonraki yapışma ile minimal invaziv bir moda dişi farelerde mesane tümörleri kurulur.

Murin Mesane Kanseri bir Ortotopik Model

Ultrason ve bioluminescent görüntüleme ile intravezikal teslim Sarna ve izleme tümör büyümesinin antitümör etkileri değerlendirmek için ortotopik mesane tümörü modeli oluşturmak.

Bir Ortotopik Mesane Tümörü Model ve intravezikal Sarna Tedavisinin Değerlendirilmesi

Kaynak: O'Brien, V. P. ve diğerleri, Tekrarlayan Escherichia coli Idrar Yolu Enfeksiyonu Gardnerella vaginalis mesane maruziyeti tarafından fare içinde tetikleniyor. J. Vis. Exp. (2020)Bu video, önceden enfekte edilmiş bir fare modelinin mesane epitelinde bakteri kolonizasyonu ve konak-patojen etkileşimlerini görselleştirmek için taramalı elektron mikroskopisi kullanımını göstermektedir.

Bakteriyel Enfeksiyonun Görselleştirilmesi İçin Fare Mesanesi Dokusu Hazırlanması

Bu videoda, organ ortamının gelişmekte olan tümörler üzerindeki rolünü incelemek için kültürlenmiş mesane tümörü organoidlerinin murin mesanesine ortotopik transplantasyonunu açıklıyoruz.

Mesane Tümörü Organoid Modeli: Mesane Organoidlerinin Alıcı Murin Mesanesine Ortotopik Transplantasyonu İçin Bir Yöntem

Bu videoda, iki aşamalı sıralı enzimatik tedavi kullanarak insan idrar kesesi örneklerinden detrusor düz kas hücrelerinin izolasyonunu gösteriyoruz.

Detrusor Düz Kas Hücresi İzolasyonu: İnsan İdrar Kesesi Örneklerinden DSM Hücreleri Elde Etmek İçin Enzimatik Bir Sindirim Prosedürü

Birincil invaziv kadavradan mesane kanseri zenograftlarını aşılamak için kurulan teknik laparotomi ve mesane seferberlik gerektirir. Bu prosedür, fareler üzerinde önemli morbidite uğratan teknik açıdan zor ve zaman alıcıdır. Bu nedenle perkütan yaklaşım ultrason rehberlik kullanarak, yüksek hassasiyet geliştirdi.

Kemirgen Ortotopik Mesane ksenogratflarının Minimal İnvaziv kurulması

Amerika Birleşik Devletleri'nde yaklaşık 3-8000000 insan interstisyel sistit / mesane ağrı sendromu (IC / BPS), pelvik ağrı ile kısmen özelliği, bir zayıflatıcı durum muzdarip. Duruma sinir sistemi katkılarını araştırmak amacıyla, idrar kesesi ağrı fizyolojik modeli fareler ve sıçanlar kullanılır.

Farelerde Mesane Ağrı için bir model olarak Mesane Distansiyonunun Uyarılmış Visceromotor Cevapları

Bu protokolün amacı, omurilik hasarının fare modeline optimize edilmiş bir doku ayrıştırma protokolü uygulamak ve akış sitometrisi ile tek hücre analizi yaklaşımını doğrulamaktır.

Omurilik Yaralanmasını Takiben Faredeki İdrar Kesesinin Moleküler Analizi için Tek Hücreli Ayrışma Yaklaşımı

Bu yazıda sıçanlarda conus medullaris transeksiyonu ile detrusor az aktivite modeli oluşturmak için bir yöntem sunulmaktadır. Detrusor az aktivitesi bu hayvanlarda başarıyla uyarıldı. Model, idrar yolu fonksiyonunu incelemek için kullanılabilir.

Conus Medullaris Transeksiyonu ile Sıçanlarda Detrusor Düşük Aktivite Modeli

Bu protokol, ilgilenilen genlerde delesyon barındıran fare ürotelyal organoidlerinin üretilmesi ve karakterizasyonu sürecini açıklar. Yöntemler arasında fare ürotelyal hücrelerinin toplanması, bir CMV promotörü ile Cre ekspresyonunu yönlendiren adenovirüs ile ex vivo transdüksiyon ve in vitro ve in vivo karakterizasyon bulunmaktadır.

Eski Vivo Fare Ürotelyal Hücrelerinde Adenovirüs-Cre Aracılı Gen Delesyonlarının Organoid Modeli

Keşfedin, detrusor kası çıkarılmış fare mesane modeliyle suburothelium doğrudan erişim yöntemini. Mesane dolumu sırasında biyolojik aktif mediyatörlerin mekanizmalarını inceleyerek idrar kesesi fonksiyonlarını anlayın.

Mesane Dolgusu Sırasında Suburothelium Doğrudan Erişim için Kaldırılan Detrusor Kas ile Ademi Merkeziyet (Ex Vivo) Murine Mesane Modeli (Video) | JoVE Journal

Mesane Dolgusu Sırasında Suburothelium Doğrudan Erişim için Kaldırılan Detrusor Kas ile Ademi Merkeziyet (Ex Vivo) Murine Mesane Modeli

Daha fazla video keşfet