Sıçanlarda Çevresel Özofagus Rekonstrüksiyonu için Doku-Mühendislik Greft

Özofagus anastomoz sızıntısı olmadan özofagus mukozası ve kas rejenerasyonsağlayan doku mühendisliği özofagus gelişimini gerektiren, bir sıçan modelinde çevresel özofagus onarımı teknik olarak zordur. Transplantasyon sonrası tükürük sızıntısını en aza indirmek için mikrovasküler anastomoz ile birlikte iç nanofiber ve dış 3D baskı iplikçiklerinden oluşan pilot model olarak iki katmanlı borulu bir iskele uyguladık. Konvansiyonel standart özofagus rekonstrüksiyonu çok çeşitli komplikasyonlar ve morbidite ile ilişkilidir.

Bu nedenle, özofagus doku mühendisliği yerli hasta özofagus modelleri geliştirmek için umut verici bir alternatif stratejiler olabilir. Melez iskele kombinasyonu, biyoreaktör ekimi, ve bir oral beslenme sistemi sürekli mekanik basınç ile benzer bir kontamine ortama sahip herhangi bir sisteme uygulanabilir. 3D baskılı yemek borusu iskelesini ultraviyole ışığa bir saatlik maruzkalma, 10 dakikalık etanol emmeve PBS ile üç yıkıntı ile sterilize ederek başlayın.

Son yıkamadan sonra, yapışmaz 24-iyi doku kültür plaka içine iki katmanlı boru lu iskele yerleştirin ve hafifçe ama düzgün bir kat 10 altı yağ türetilmiş insan mezenal kök hücreleri altı yağ türetilmiş insan mezenal kök hücreleri iskelenin iç yüzeyine büyüme orta ile takviye edilmiştir. Biyoreaktörün kültür odasındaki akrilik tutucuya hücre tohumlu boru lu iskeleyi sıkıca sabitlemek ve odaya 500 mililitre büyüme ortamı eklemek için pulsatil akış biyoreaktör sistemi kullanın. Daha sonra, %5 karbondioksit içeren nemli bir atmosfer altında akışa bağlı kesme geriliminin santimetre karesi 1 dyne uygulayın.

Beş gün sonra, standart protokollere göre iskelenin iç yüzeyindeki hücre yanıtlarını belirlemek ve hücreleri konfokal mikroskopi ile görüntülemek için live/DEAD Canlılık Test Kiti kullanın. Cerrahi işlem başlamadan önce, anestezi sıçanda pedal refleksyanıt eksikliği onaylamak, ve steril bir perde üzerinde supine pozisyonda hayvan yerleştirin. Cerrahi siteden saç kaldırmak için makası kullanın ve ardışık BETADINE ve% 70 etanol scrubs ile maruz kalan cilt dezenfekte.

T-tüp yerleştirme için, sıçanın karın bir orta hat deri ve kas kesi yapmak, ve ön mide duvarında üç milimetrelik bir delik oluşturmak için bir neşter bıçak kullanın. Mide duvarına düzeltmek için defekt siteye silikon t-tüp ucu yerleştirin ve dikkatle mide kas dokusuna tüp dikiş. 4-0 VICRYL sütür ile karın duvarı dikiş.

İmplante edilen T-tüpün distal ucunu subkutan tünelden boynun arkasına dikkatlice yerleştirin ve mide içeriğinin geriye doğru akmasını önlemek için bir heparin kapağını T-tüpün ucuna bağlamak için bir anjiyokateter kullanın. Kapak yerinde olduğunda, karın derisinin tüm tabakalarını kapatmak için 4-0 poliglactin sütür kullanın ve tam recumbency kadar izleme ile bir metabolik kafes içine sıçan yerleştirin. T-tüpü nismekten bir hafta sonra, fareyi ameliyata hazırlayın.

Mikroskop altında sıçan yerleştirin ve maruz dezenfekte cilt bir ön median boyun kesi yapmak. Trakeoözofageal yapısını ortaya çıkarmak için kayış kaslarını ayırın. Yemek borusunun sol tarafını nefes borusundan ayırın.

Yemek borusunun üst kısmını tiroid bezinden dikkatlice ayırın ve yemek borusunun tüm katmanlarını içeren beş milimetre uzunluğunda tam bir çevre defekti oluşturmak için cerrahi makas kullanın. Daha sonra, üst özofagus kalıntısı ve iskelesağ inferoposterior marjı arasında 9-0 dikiş eklemek ve distal özofagus defekti üst ucunda bir mikroanastomoz oluşturmak için üst özofagus kalıntısı ve iskele arasında sağdan sola dikiş devam. Daha sonra, alt özofagus kalıntısının üst kenar boşluğu ile aynı şekilde iskeleyi anastomozlayın.

Anastomozlar tamamlandığında, greftin vasküler kaynağını ve istikrarlı bakımını sağlamak için ekteki tiroid bezi flebi nakli nin üzerine serin. Daha sonra, 4-0 VICRYL sütür ile deri altı kas ve deri dokusu dikiş ve tam recumbency kadar izleme ile bir kızılötesi ısınma cihazı üzerinde bir metabolik kafes içine sıçan yerleştirin. Enjeksiyon yoluyla iskelenin iç duvarına eşit bir uygulamadan sonra, insan mezenkimal kök hücre gömülü bazal membran matris elektron mikroskobu tarama ile değerlendirilen beklenen mezenkimal kök hücre morfolojisi gösterir.

Tam çevresel özofagus defekti olan sıçanlara özofagus naklinden sonra, greft implante edilen bölgeye stabil fiksasyon ve vasküler besleme için tiroid bezi flebi ile kapatılır. Özofagus nakli yapılan sıçanlar işlemden yaklaşık dokuz gün sonrasına kadar 340 gramda kalırlar ve bu noktada hayvanların çeşitli nedenlerle hızla kiloları azalır ve 15. Sıçanların çoğunda saç toplarının neden olduğu özofagus dışı obstrüksiyon gelişse de, herhangi bir deneysel hayvanda perforasyon, fistül ile anastomoz sızıntısı, seroma birikimi, apse oluşumu veya çevresindeki yumuşak doku nekrozu gibi brüt bir bulgu yoktur.

Transplantasyon bölgesinin yeniden epitelizasyonu keratin için immünororesans boyama ile doğrulanabilir, ve rejenere kollajen tabakası ve elastin lifleri Masson'un trikrom boyama ile açıkça görülebilir. Özofagus kas tabakasının rejenerasyonu de desmin immünohistokimyasal analiz ile değerlendirildiği gibi bol bir neovaskülerizasyon ile kanıtlanır. Bu işlemin başarısı, özofagus rekonstrüksiyonu sırasında beslenme sağlamak için boyun arkasında fiksasyon yoluyla T-tüp istikrarlı bakım dayanır.

Bu prosedüre özgü erken mortalitenin üstesinden gelmek için, fonksiyonel özofagus rekonstrüksiyonuna yardımcı olmak için özofagus implantasyonu ndan sonra organoid veya erken vaskülarizasyon teknolojisi uygulanabilir.