Tekrarlayan Diffüz Travmatik Beyin Hasarının Fare Modelinde Travma Sonrası Epilepsi Nin İndüklemesi

Protokolümüz, hafif travmatik beyin hasarının neden olduğu travma sonrası epilepsi fare modelini ilk detaya çıkaran ilk protokoldür. Hafif bir diffüz travmatik beyin hasarı modelinin kullanımı hemen hemen her zaman dağınık bir bileşeni olan insan travmatik beyin hasarı patolojisinin önemli bir yönünü taklit eder. Biyobelirteçler ve tedaviler geliştirmek için, insan patolojisi yönlerini uygun şekilde yeniden üreten modeller kullanılarak araştırma yapılması gerekmektedir.

Bizim travmatik beyin hasarı modeli de hafif travmatik beyin hasarı veya beyin sarsıntısı sonrası beyin fonksiyonunun bozulmasına neden mekanizmaları içine fikir sağlamak için potansiyele sahiptir. Ağrı refleksine yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra fareyi köpük bir pedüzerine yerleştirin ve farenin başını ağırlık düşürme tüpünün altına yerleştirin. Bir milimetre kalınlığında 1.3 santimetre çapında bir milimetre kalınlığında paslanmaz çelik disk göz ve kulaklar arasında hayvan başının merkezine yerleştirin.

50 santimetre yükseklikten 100 gram ağırlık çubuk serbest bırakmak için ağırlık bırakma tüpü nde pin çıkarın. Kontrol farelerde sahte bir yaralanmaya neden olmak için, ağırlık düşüşü sırasında pimkazara serbest önlemek için tüp ağırlık çubuğu kaldırın. Ağırlık düşmesi indüksiyon sonra, tam recumbency kadar izleme ile steril bir poli kaplı emici havlu ile kaplı bir ısıtma yastığı sırtına hayvan yerleştirin.

Daha sonra fareyi, 45 dakika boyunca, kurtarma jeli ve birkaç nemli chow parçası yla ısıtma yastığında ısıtılan temiz bir kafese yerleştirin. EEG elektrot implantasyonu için cerrahi alanı hazırlamak için, ped üzerine bir sıcaklık sensörü yerleştirin ve stereotaktik cihaz üzerinde ısıtma yastığı üstüne steril bir perde üzerine yeniden anestezili beyin yaralı fare yerleştirin. Kulak çubukları ile yerine baş sabitleme sonra, hayvanın gözlerine yağlayıcı merhem uygulayın ve kafa derisi nden saç kaldırmak için tüydökücü krem kullanın.

Pozlanmış cildi 20 saniyelik üç alternatif povito iyot cerrahi antiseptik solüsyon ve %70 etanol ile dairesel hareketle dezenfekte edin. Kafa derisi çıkardıktan sonra, maruz kalan alanı genişletmek için açık cilt sınırları üzerinde küçük hemostatlar uygulayın. Sonra, yavaşça periost kaldırmak ve hidrojen peroksit ile kafatası bezi neşter kullanın.

Kafatası doku temizlenir ve beyazımsı bir görünüm sergiler, steril bir gazlı bez veya bez ile kemik kuru. Elektrot implantasyonu için, vida elektrotları için altı çapak deliği oluşturmak için dakikada 0,5 milimetrelik yuvarlak 0,5 milimetrelik çelik uçlu yüksek hızlı bir matkap kullanın. Tüm delikler delindiğinde, altı vidalı elektrotları çapak deliklerine yerleştirin ve yarım kepçe diş çimentosu tozunu birkaç damla çözücüyle karıştırın.

Diş çimentosu karışımı yapışkan ama dövülebilir ve hayvanın kafatası üzerine yerleştirildiğinde düzgün bir şekilde yoğunlaştırılmış olması için yeterince sert olana kadar karıştırmak için bir spatula kullanın. Çimentoyu kafatasının tüm açıkta kalan yüzeyine ve her vida elektroduüzerine uygulayın. 1-2 dakika sonra, lehim demirini açın ve üç EEG kafa montajını stereotaktik tutucu kol haline getirin.

Altı tel kurşun pozisyonu, her vida elektrotunun tel kurşununun konumuyla eşleşecek şekilde kafa montajını kafatasının üzerine yerleştirin. Cihazı ventral kısmının diş çimentosu üzerine dayanacak şekilde düşürün. Vida elektrotlarının her birinden gelen her bir kurşunun kablosunu baş yuvasının ilgili tel kurşunuyla bükün, uygun sinyal iletimi için her bükülmüş tel çiftini lehimleyin ve fazla kabloyu kesmek için makas kullanın.

Baş montaj etrafında tel her lehimli çifti bend. Tüm çiftleri bükülmüş zaman, taze diş çimentosu ile tüm tel kapağı baş montaj sadece siyah kısmı maruz bırakarak. Deri fleplerini tutan hemostatları bırakın ve enfeksiyonu önlemek için implantın çevresindeki bölgeye klorheksidin antiseptik uygulayın.

Daha sonra hayvanı, izleme, geri kazanım jeli ve birkaç nemli chow parçasıyla sıcak bir ısıtma yastığına koymadan önce hayvanın gelecekteki izleme için referans olarak hayvanın ağırlığını ölçmek için bir denge dengesine aktarın. Bu şekilde, bir farede spontan nöbet 97 gün sonra tekrarlanan kilo damlası travmatik beyin hasarı kullanılarak kaydedilen üç EEG baş montaj kullanılarak kaydedilen bu video protokolünde gösterildiği gibi yapılandırılan gösterilmiştir. Burada, tekrarlanan kilo damlası travmatik beyin hasarından 65 gün sonra farede kaydedilen spontan konvülsif olmayan elektrografik nöbet gösterilmiştir.

Bu şekilde, tekrarlanan kilo damlası travmatik beyin hasarından 23 gün sonra bir farede spontan nöbet tek bir EEG kafa montaj kullanılarak kaydedildi. Tipik bir nöbetin spektral gücü, 10 ila 40 hertz aralığında en yüksek yoğunluğu gösterir ve 15 hertz'de zirve yitirebilir. Bu protokol, bazı hayvanlarda nöbet kümeleme insidansını gösteren ve aralıklı kayıtlar yerine sürekli elde etme önemini vurgulayan tekrarlayan kilo damlası travmatik beyin hasarı sonrası hayvanlarda nöbet başlangıcının zaman çizelgelerini göstermektedir.

Çelik diskin doğru yerleştirilmesi, vida elektrotlarının dikkatli bir şekilde yerleştirilmesi ve tel kabloların dikkatli lehimlemesi uzun süreli başarılı bir deney için çok önemlidir. EEG takibinden sonra, nöbet geçiren beyin hasarı olan hayvanlar hücresel, moleküler ve fizyolojik farklılıklarının sonraki analizleri için olmayan hayvanlardan tabakalanabilir. Travma sonrası epilepsisi olan ancak nöbet geçirmeyen hayvanların tabakalanması müdahalelerin ve biyobelirteçlerin geliştirilmesi açısından kritik öneme sahip.