Name: Farelerde Geri Dönüşümlü Silikon YağA Bağlı Oküler Hipertansiyon Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-15T10:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Öğrenin, farelerde silikon yağ enjeksiyonu ile geri dönüşümlü oküler hipertansiyon modeli oluşturmayı. Bu yöntem, glokom nörodejenerasyonunu ve nöroprotektif tedavileri araştırmak için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma NIH'nin YH'ye EY024932, EY023295 ve EY028106 hibeleri ile desteklenmiştir.

Tüm prosedürler Stanford Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. So intracameral enjeksiyon ile oküler hipertansiyon indüksiyonu
<ol><li>Bir mikropipet oluşturmak için bir pipet puller ile bir cam kılcal çekerek intracameral SO enjeksiyon için bir cam mikropipet hazırlayın. Mikropipetin ucundaki bir açıklığı kesin ve 35°−40° açı yapmak için mikrodeğirmenci-beveling makinesiyle ucu daha da keskinleştirin.</li>
	<li>Cila lı yontucun kenarlarını temizleyin ve suyla yıkayarak tüm enkazları çıkarın. Kullanmadan önce mikropipetok.</li>
	<li>Kornea girişi için paracentesis iğne hazırlayın. Bunu yapmak için, luer kilidindeki 5 mL'lik şırıngaya 32 G iğne takın ve bantla daha da sabitleyin. İğne ucu nu 30°'de yukarı doğru bükün.</li>
	<li>So enjektörü önce 10 mL'lik bir şırıngaya 18 G iğne takarak ve emniyete alarak hazırlayın. Sonra bir ucunda 18 G iğne ile plastik bir tüp takın ve diğer ucundan gerektiği gibi SO ile doldurun.</li>
	<li>Sterilize edilmiş mikropipeti plastik boruya takın ve şırınga pistonluyu itin ve tüm mikro pipeti SO ile doldurun.</li>
</ol>2. Bir göz için intracameral SO enjeksiyonu
<ol><li>9−10 haftalık erkek C57B6/J fareyi %3 izofluran oksijenle karıştırılmış bir indüksiyon odasına yerleştirin ve 3 dk boyunca 2 L/dk'da oksijenle karıştırın.</li>
	<li>İntraperitoneally enjekte 2,2,2-tribromoetanol 0.3 mg/g vücut ağırlığı. NOT: Ketamin/ksilazin aksine, 2,2,2-tribromoetanol belirgin göz bebeği genişlemesine neden olmaz.</li>
	<li>Bir parmak sıkışması yanıt eksikliği ve anestetik gücünü belirlemek için bıyık veya kuyruk hareket eksikliği olup olmadığını kontrol edin.</li>
	<li>Fareyi cerrahi platformda yanal bir konuma yerleştirin. İşlem sırasında hassasiyetini azaltmak için enjeksiyondan önce korneaya %0.5 proparacaine hidroklorür uygulayın.</li>
	<li>Limbustan yaklaşık 0,5 mm uzaklıktaki süperotemporal kadranda 32 G paracentesis iğnesi ile giriş kesisi yapın.</li>
	<li>Ön odaya piercing önce yaklaşık 0,3 mm için kornea katmanları ile Tünel. Lens veya iris dokunmamaya dikkat edin.</li>
	<li>Tünelden (paracentesis) ön odadan bazı sulu mizah (yaklaşık 1−2 μL) serbest bırakmak için iğneyi yavaşça geri çekin.</li>
	<li>IOP'yi daha da azaltmak için ~8 dk bekleyin. Bu kontralateral, kontrol gözü ölçülerek belirlenebilir.</li>
	<li>Kornea tünelinden SO ile önceden yüklenmiş cam mikropipeti ön odaya yerleştirin ve yontman iris yüzeyine bakacak şekilde.</li>
	<li>SO damlacık iris yüzeyinin en, ~ 2.3−2.4 mm çapında kaplayana kadar so ön hazneiçine SO enjekte etmek için şırınga piston yavaş yavaş itin.</li>
	<li>Mikropipeti yavaş yavaş çekmeden önce 10 s daha fazla ön haznede bırakın.</li>
	<li>SO sızıntısını en aza indirmek için üst göz kapağını kornea kesisini kapatmak için yavaşça itin.</li>
	<li>Göz yüzeyine antibiyotik merhem (bacitracin-neomisin-polimisin) uygulayın.</li>
	<li>İşlem boyunca, sık sık yapay gözyaşları ile kornea nemlendirin.</li>
	<li>Anestezi tamamen iyileşene kadar fareyi ısıtma yastığında tutun.</li>
</ol>3. SO kaldırma
<ol><li>Sulama sistemini hazırlayın.<ol>
<li>Sulama çözeltisini üreticinin talimatlarına göre hazırlayın ve sulama şişesine yerleştirin. Sulama çözeltisi şişesini ameliyat platformunun üzerinde 110−120 cm'ye (81−88 mmHg) yükseltin.</li>
		<li>Sulama çözeltisi şişesine bir IV uygulama seti takın. IV tüp hava kabarcıkları çıkarın. IV boruya kadar 20° yüze bükülmüş 33 G'lik bir iğne bağlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Drenaj sistemini hazırlamak için, 1 mL şırıngadan pistonu çıkarın. Şırıngaya 33 G iğne takın ve iğneyi 20°'ye kadar bükün.</li>
	<li>SO'yu ön odadan çıkarın.<ol>
<li>İntraperitoneally enjekte 2,2,2-tribromoetanol (0.3 mg/g vücut ağırlığı). Anestezik mukavemet ve bıyık veya kuyruk hareket eksikliği belirlemek için parmak çimdik yanıt eksikliği olup olmadığını kontrol edin.</li>
		<li>Fareyi bir ameliyat platformuna yerleştirin ve bantla yanal pozisyonda sabitleyin. Hassasiyetini azaltmak için korneaya %0.5 proparacaine hidroklorür damlatın.</li>
		<li>Önceden yapılmış 32 Gacentesi paracentesis iğnekullanarak SO damlacık kenarında ~ 2 ve 5 arasında korneanın temporal kadranda iki kesi ler olun.</li>
		<li>Bir kornea kesisi, maksimum hız ile sulama çözeltisi bağlı bir 33 G sulama iğnesi takın.</li>
		<li>So damlacık sulama çözeltisi ile sulama sırasında ön oda çıkmak için izin vermek için diğer kornea kesi ile bir piston olmadan şırınga bağlı başka bir 33 G drenaj iğnesi yerleştirin.</li>
		<li>Drenaj iğnesini, sonra da sulama iğnesini geri çek.</li>
		<li>Normal derinliğini korumak için ön odaya bir hava kabarcığı enjekte edin ve kornea kesisini kapatmak için basın.</li>
		<li>Her iki göze de antibiyotik merhem uygulayın.</li>
		<li>Anestezi tamamen iyileşene kadar fareyi ısıtma geri kazanım yastığında tutun.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Haftada bir Kez IOP ölçümü
<ol><li>Fareyi 2L/dk'da oksijenle karıştırılmış %3 izofluran ile perdelik bir indüksiyon odasına yerleştirin.</li>
	<li>İntraperitoneally ksilazin ve ketamin enjekte (0.01 mg xylazine/g, 0.08 mg ketamin/g).</li>
	<li>İşlem boyunca yapay gözyaşı uygulayarak korneanemli tutun.</li>
	<li>Göz bebeğinin tam olarak dilate izin vermek için yaklaşık 15 dk bekleyin.</li>
	<li>Ürün talimatlarına göre bir tonometre kullanarak her iki gözün IOP'sini ölçün. Tonometreyi fare gözünün yanına getirin. Sondanın ucundan fare korneasına olan mesafeyi yaklaşık 3−4 mm. Tek bir okuma oluşturmak için ölçüm düğmesine 6x basın. Ortalama IOP'yi elde etmek için her gözden üç makine tarafından oluşturulan okuma elde edilir.</li>
	<li>SO enjeksiyonundan 8 hafta sonra hayvanları kurban edin ve tam montaj retina, RGC sayma, optik sinir (ON) yarı ince kesitlerin immünohistokimyasını ve13'tenönce tanımlanan aksonların niceliğini gerçekleştirin.</li>
</ol>

<ol><li>Chang, E. E., Goldberg, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glaucoma+2.0%3A+neuroprotection%2C+neuroregeneration%2C+neuroenhancement%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Glaucoma 2.0: neuroprotection, neuroregeneration, neuroenhancement.</a> Ophthalmology. 119 (5), 979-986 (2012).</li>
<li>Tham, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+of+glaucoma+and+projections+of+glaucoma+burden+through+2040%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Global prevalence of glaucoma and projections of glaucoma burden through 2040: a systematic review and meta-analysis.</a> Ophthalmology. 121 (11), 2081-2090 (2014).</li>
<li>Pang, I. H., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+glaucoma+retinopathy+and+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy.</a> Journal of Glaucoma. 16 (5), 483-505 (2007).</li>
<li>Morrison, J. C., Johnson, E., Cepurna, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+models+for+glaucoma+research%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Rat models for glaucoma research.</a> Progress in Brain Research. 173, 285-301 (2008).</li>
<li>McKinnon, S. J., Schlamp, C. L., Nickells, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+retinal+ganglion+cell+death+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of retinal ganglion cell death and glaucoma.</a> Experimental Eye Research. 88 (4), 816-824 (2009).</li>
<li>Chen, S., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Rodent+Model+of+Glaucoma+and+Its+Implications%5BTitle%5D)+AND+%22Asia+Pacific+Journal+of+Ophthalmology+%28Philadelphia%29%22%5BJournal%5D)">The Rodent Model of Glaucoma and Its Implications.</a> Asia Pacific Journal of Ophthalmology (Philadelphia). 4 (4), 236-241 (2015).</li>
<li>Sappington, R. M., Carlson, B. J., Crish, S. D., Calkins, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbead+occlusion+model%3A+a+paradigm+for+induced+ocular+hypertension+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The microbead occlusion model: a paradigm for induced ocular hypertension in rats and mice.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 51 (1), 207-216 (2010).</li>
<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+neuropathy+due+to+microbead-induced+elevated+intraocular+pressure+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Optic neuropathy due to microbead-induced elevated intraocular pressure in the mouse.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (1), 36-44 (2011).</li>
<li>Cone, F. E., Gelman, S. E., Son, J. L., Pease, M. E., Quigley, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+to+experimental+glaucoma+among+3+mouse+strains+using+bead+and+viscoelastic+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility to experimental glaucoma among 3 mouse strains using bead and viscoelastic injection.</a> Experimental Eye Research. 91 (3), 415-424 (2010).</li>
<li>Samsel, P. A., Kisiswa, L., Erichsen, J. T., Cross, S. D., Morgan, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+the+induction+of+experimental+glaucoma+using+magnetic+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">A novel method for the induction of experimental glaucoma using magnetic microspheres.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (3), 1671-1675 (2011).</li>
<li>Ichhpujani, P., Jindal, A., Jay Katz, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silicone+oil+induced+glaucoma%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Archieves+for+Clinical+and+Experimental+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Silicone oil induced glaucoma: a review.</a> Graefes Archieves for Clinical and Experimental Ophthalmology. 247 (12), 1585-1593 (2009).</li>
<li>Kornmann, H. L., Gedde, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glaucoma+management+after+vitreoretinal+surgeries%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Glaucoma management after vitreoretinal surgeries.</a> Current Opinion in Ophthalmology. 27 (2), 125-131 (2016).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silicone+oil-induced+ocular+hypertension+and+glaucomatous+neurodegeneration+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Silicone oil-induced ocular hypertension and glaucomatous neurodegeneration in mouse.</a> Elife. 8, (2019).</li>
<li>Kwong, J. M., Caprioli, J., Piri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+binding+protein+with+multiple+splicing%3A+a+new+marker+for+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">RNA binding protein with multiple splicing: a new marker for retinal ganglion cells.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 51 (2), 1052-1058 (2010).</li>
<li>Rodriguez, A. R., de Sevilla Muller, L. P., Brecha, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RNA+binding+protein+RBPMS+is+a+selective+marker+of+ganglion+cells+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">The RNA binding protein RBPMS is a selective marker of ganglion cells in the mammalian retina.</a> Journal of Comparative Neurology. 522 (6), 1411-1443 (2014).</li>
<li>Smith, R. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSmith%2C+RS+%22Systematic+evaluation+of+the+mouse+eye+%3A+anatomy%2C+pathology%2C+and+biomethods%22">Systematic evaluation of the mouse eye : anatomy, pathology, and biomethods</a>. , CRC Press. (2002).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Burada SO intracameral enjeksiyon ile fare gözü sürekli IOP yükseklik indükleyen basit ama etkili bir prosedür göstermektedir. Bu işlem mikroskop altında mikrodiseksiyon deneyimi olan herkes tarafından hızlı bir şekilde öğrenilebilir. Birincil başarısızlık riski kornea kesisinden SO sızıntısıdır. Ancak, SO kullanmanın avantajlarından biri yağ damlacık görünür ve ölçülebilir olduğu için, biz kolayca enjeksiyondan kısa bir süre sonra istikrarlı oküler hipertansiyon neden ve sonraki deneyler onları dışlamak için çok küçük d...

Retina ganglion hücrelerinin ilerleyici kaybı (RGCs) ve aksonlar glokom, retinada yaygın bir nörodejeneratif hastalık özelliğidir1. 2040 yılına kadar 40−80 yaş ları arasında 100 milyondan fazla kişiyietkileyecektir. IOP glokom gelişimi ve ilerlemesinde tek değiştirilebilir risk faktörü olmaya devam etmektedir. Glokomun patogenezini, progresyonunu ve potansiyel tedavilerini araştırmak için, insan hastalarının temel özelliklerini kopyalayan güvenilir, tekrarlanabilir ve indükedilemez deneysel oküler hipertansiyon/glokom modeli zorunludur.
IOP, arka haznedeki siliyer gövdeden ön odaya sulu mizah girişine ve ön odanın açısında trabeküler meshwork (TM) ile çıkışa bağlıdır. Sabit bir duruma ulaştıktan sonra, IOP korunur. Giriş, çıkış sınırını aştığında veya daha az olduğunda, IOP sırasıyla yükselir veya düşer. Ön odanın açısını tıkararak veya TM'ye zarar vererek sulu çıkışazalarak3,4,5,6,7,8,9,10olmak üzere çeşitli glokom modelleri oluşturulmuştur. Bu modeller normalde geri dönüşümsüz göz dokusu hasarı ile ilişkilidir, ve ön odada yüksek IOP da kornea ödemi ve göz içi iltihabı gibi istenmeyen komplikasyonlara neden olur, hangi retinagörüntüleme ve görsel fonksiyon tahlilleri yapmak ve yorumlamak zor olun.
Bu eksikliklerin üstesinden gelen bir model geliştirmek için, insan vitreoretinal cerrahi nin ameliyat sonrası komplikasyonu olarak ortaya çıkan silikon yağının (SO) neden olduğu iyi belgelenmiş sekonder glokoma odaklandık11,12. SO, yüksek yüzey gerilimi nedeniyle retinal ameliyatlarda tamponad olarak kullanılır. Ancak, SO fiziksel olarak ön odaya sulu akışını önler sulu ve vitreus sıvıları, daha hafif olduğu için gözbebeği tıkayabilirsiniz. Tıkanıklık sulu mizah birikimi nedeniyle arka odada IOP yükselmesine neden olur. Bu geliştirmek ve intracameral SO enjeksiyonu ve pupillary blok13dayalı yeni bir oküler hipertansiyon fare modeli karakterize bizi motive , ikincil glokom temel özellikleri ile: etkili pupillary blok, SO kaldırma sonra normale dönebilirsiniz önemli IOP yüksekliği, ve glokom nörodejenerasyon.
Burada fare gözüne SO enjeksiyonu, çıkarılması ve IOP ölçümü dahil olmak üzere SO'ya bağlı oküler hipertansiyon için ayrıntılı bir protokol sokulduk.

<table><tbody><tr><td>% 0.5 proparakain hidroklorür</td><td>Akorn, Somerset</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10mL syinge</td><td>BD</td><td></td><td>Luer-Lok Ucu</td></tr><tr><td>18G iğne</td><td>BD</td><td></td>, <td>Düzenli Konik ile, İğne Uzunluğu: 25.4 mm</td></tr><tr><td>2,2,2-Tribromoetanol (Avertin)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>CAS # 75-80-9</td><td>50g</td></tr><tr><td>32G nano</td><td>BD</td><td>320122</td><td>BD Nano Ultra İnce Kalem İğnesi-32G 4mm</td></tr><tr><td>33G oftalmoloji iğnesi</td><td>TSK/ VWR</td><td>TSK3313/ 10147-200</td><td></td></tr><tr><td>5 mL syinge</td><td>BD</td><td></td><td>Luer-Lok Ucu</td></tr><tr><td>AnaSed Enjeksiyonu (ksilazin)</td><td>Butler Schein</td><td></td><td>100 mg/ml, 50 ml</td></tr><tr><td>suni gözyaşı</td><td>Alcon Laboratuvarları</td><td>300651431414</td><td>Systane Ultra Kayganlaştırıcı Göz</td></tr><tr><td>Damlası BSS PLUS Sulama solüsyonu</td><td>Alcon Laboratuvarları</td><td></td><td></td>65080050</tr><tr><td>Çift Kademeli Cam Mikropipet Çektirme</td><td>NARISHIGE</td><td>PC-10</td><td></td></tr><tr><td>EZ-7000 Klasik Sistem</td><td>EZ sistemi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>VetOne</td><td>502017</td><td>izofluran, USP, 250ml/şişe</td></tr><tr><td>IV Yönetim setleri</td><td>EXELint / Fisher</td><td>29081</td><td></td></tr><tr><td>KETAMIN HIDROKLORÜR ENJEKSIYONU</td><td>VEDCO</td><td>50989-996-06</td><td>KETAVED 100mg / ml * 10ml</td></tr><tr><td>microgrind kaynak ağzı açma makinesi</td><td>NARISHIGE</td><td>EG-401</td><td></td></tr><tr><td>Minyatür EVA Boru</td><td>McMaster-Carr</td><td>1883T4</td><td>0,05" ID, 0,09" OD, 10 ft. Uzunluk</td></tr><tr><td>silikon yağı (SILIKON)</td><td>Alcon Laboratories</td><td>8065601185</td><td>1.000 mPa.s</td></tr><tr><td>Standart Cam Kılcal Damarlar</td><td>WPI/ Fisher</td><td>1B150-4</td><td>4 inç. (100mm) OD 1.5mm ID 0.84mm</td></tr><tr><td>TonoLab tonometre</td><td>Colonial Medical Supply, Finlandiya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>veteriner antibiyotik merhem</td><td>Dechra Veteriner</td><td>1223RX</td><td>BNP oftalmik merhem, Vetropolisin</td></tr></tbody></table>

farelerde geri dönüşümlü silikon yağa bağlı oküler hipertansiyon modeli

A Reversible Silicon Oil-Induced Ocular Hypertension Model in Mice

Yüksek göz içi basıncı (IOP) glokom için iyi belgelenmiş bir risk faktörüdür. Burada, insan vitreoretinal cerrahisinde tamponad ajanı olarak silikon yağı (SO) kullanımının postoperatif komplikasyonu taklit eden farelerde sürekli olarak istikrarlı IOP yükselmesini indükleyen yeni ve etkili bir yöntemi açıklıyoruz. Bu protokolde SO, göz bebeğini engellemek ve sulu mizah girişini önlemek için fare gözünün ön odasına enjekte edilir. Arka oda sulu mizah birikir ve bu da arka segmentin IOP artırır. Tek bir SO enjeksiyonu güvenilir üretir, yeterli, ve istikrarlı IOP yükseklik, hangi önemli glokom nörodejenerasyon indükler. Bu model göz kliniğinde ikincil glokom gerçek bir kopya. Daha fazla klinik ayarı taklit etmek için, SO drenaj yolunu yeniden açmak ve ön oda açısında trabeküler meshwork (TM) ile boşaltılır sulu mizah, girişine izin ön odasından kaldırılabilir. IOP hızlı bir şekilde normale döndüğünden, model glokom retinaganglion hücreleri üzerinde IOP düşürücü etkisini test etmek için kullanılabilir. Bu yöntem basittir, özel ekipman veya tekrar prosedürleri gerektirmez, klinik durumları yakından simüle eder ve çeşitli hayvan türleri için uygulanabilir. Ancak, küçük değişiklikler gerekebilir.

Enjeksiyondan kısa bir süre sonra, SO damlacıklarının çok küçük olması nedeniyle stabil oküler hipertansiyon üretmeyen fareleri kolayca tanımlayabiliriz (≤1.5 mm)13.<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60409/60409fig1....

Burada, silikon yağı intrakalik enjeksiyonu ve ön hazneden silikon yağı kaldırma prosedürü ile fare gözlerinde oküler hipertansiyon ve glokom nörodejenerasyon indüklemek için bir protokol sunmak yüksek göz içi basıncı dönmek için Normal.

Farelerde Geri Dönüşümlü Silikon YağA Bağlı Oküler Hipertansiyon Modeli

Elevated intraocular pressure (IOP) is a well-documented risk factor for glaucoma. Here we describe a novel, effective method for consistently inducing ...

Glokom geri dönüşümsüz körlük önde gelen nedenidir, retinal ganglion hücre ölümü ve opto-nörodejenerasyon ile karakterize. Göz içi basıncının yükselmesi, ayrıca oküler hipertansiyon denir, glokom için en tanınmış risk faktörüdür. Fareler gibi deneysel hayvanlarda basit ama etkili bir oküler hipertansiyon modeli nörodejenerasyon glaucometers araştırmak ve nörokoruma için tedavi test etmek için önemlidir.Bu nedenle, sonuçlarla, insan hastalarda gözlenen sekonder glokomu yakından taklit eden bir fare oküler hipertansiyon modeli geliştiriyoruz. Bu model sadakatle pupilar engelleme için silikon yağı kaynaklı neden ikincil glokom çoğaltmak. İşlem basit IOP yüksekliği istikrarlı, ve göz hipertansiyonu ile ilişkili nörodejenerasyon fare gözlerinde şiddetli ise, daha da önemlisi, silikon yağı kolayca fare gözlerinden kaldırılabilir çünkü oküler hipertansiyon geri dönüşümlüdür.Prosedürü gösteren Dr.Fang Fang, benim laboratuvarımdan ameliyat sonrası bir adam. Başlamak için, bir pipet çekmece ile bir cam kılcal çekerek intracameral silikon yağ enjeksiyonu için bir cam mikropipet olun. Mikropipetin ucundaki bir açıklığı kesin ve 35 ila 40 derecelik bir bükülme yapmak için bir mikro-öğütücü beveling makinesi kullanarak ucu keskinleştirin.Lehçe bevel kenarları ve tüm enkaz kaldırmak için su ile yıkayın. Kullanmadan önce mikropipetok. Kornea girişi için paracentesis iğne hazırlamak için, bir yem kilidi üzerinde beş mililitrelik şırınga bir 32 gauge iğne takın ve daha bant ile güvenli.İğne ucubük, yüz-up, 30 derece. Silikon yağ enjektörü hazırlamak için, 10 mililitrelik bir şırınga üzerine 18 gauge iğneyi takın ve sabitlayın. Sonra bir ucunda 18 gauge iğne ile plastik bir tüp takın ve diğer ucundan gerektiği gibi silikon yağı ile doldurun.Dokuz ila 10 haftalık C57 siyah 6J fare anestezi sonra, bıyık veya kuyruk hareket eksikliği ile parmak çimdik yanıt eksikliği olup olmadığını kontrol edin. Fareyi cerrahi platformda yanal bir konuma yerleştirin. İşlem sırasında hassasiyetini azaltmak için enjeksiyondan önce korneaya %5 proparacaine hidroklorür damlatın.Limbus yaklaşık 5 milimetre süper temporal kadranda bir giriş kesi yapmak için 32 gauge paracentesis iğne kullanın. Ön odaya piercing önce yaklaşık 3 milimetre kornea katmanları ile Tünel, lens veya iris dokunmamaya dikkat ediyor. Tünel den ön odasından sulu mizah yaklaşık bir ila iki mikrolitre serbest bırakmak için yavaş yavaş iğne çekin ve göz içi basıncını azaltmak için yaklaşık sekiz dakika bekleyin.Basıncı belirlemek için kontralateral kontrol gözünü ölçün. Silikon yağı ile önceden yüklenmiş cam mikropipeti kornea tünelinden ön odaya yerleştirin ve dik lik iris yüzeyine bakacak şekilde. Yağ damlacığı yaklaşık 2,3 ila 2,4 milimetre çapında, iris yüzeyinin çoğunu kaplayana kadar ön hazneye silikon yağı enjekte etmek için şırınga pistonlu yavaş yavaş itin.Mikropipeti yavaşça çekmeden önce 10 saniye daha ön haznede bırakın. Silikon yağ sızıntısını en aza indirmek için üst göz kapağını kornea kesisini kapatmak için yavaşça itin. Sonra da göz yüzeyine antibiyotik merhem uygulayın.Anestezi tamamen iyileşene kadar fareyi ısıtma yastığında tutun. Ön hazneden silikon yağı çıkarmak için, fareyi anestezik ve sonra anestezik gücü ve bıyık veya kuyruk hareket eksikliği belirlemek için parmak çimdik yanıt eksikliği olup olmadığını kontrol edin. Fareyi bir ameliyat platformuna yerleştirin ve bantla yanal pozisyonda sabitleyin.Hassasiyetini azaltmak için korneaya %5 proparacaine hidroklorür damlatın. Önceden yapılmış 32 gauge paracentesis iğne kullanarak, silikon yağ damlacık kenarında yaklaşık iki ve beş arasında korneanın temporal çeyreğinde iki kesiler yapmak. Maksimum hızda bir kornea kesisi ile sulama çözeltisine bağlı 33 gauge sulama iğnesi takın.Başka bir 33 gauge drenaj iğnesi diğer kornea kesi ile bir piston olmadan şırınga bağlı eklemek silikon yağ damlacık sulama çözeltisi ile sulama sırasında ön oda çıkmak için izin vermek. Drenaj iğnesini sonra sulama iğnesini geri çekin. Normal derinliğini korumak ve kornea kesisini kapatmak için basın ön odasına bir hava kabarcığı enjekte etmek için bir Hamilton şırınga bağlı bir cam mikropipet kullanın.Her iki göze de antibiyotik merhem uygulayın ve fareyi anesteziden tamamen iyileşene kadar ısıtma kurtarma yastığında tutun. Fareyi bir indüksiyon odasına yerleştirin. El yazmasında açıklandığı gibi anestezi ve işlem boyunca yapay gözyaşı uygulayarak korneasını nemli tutun.Göz bebeğinin tam olarak dilate izin vermek için yaklaşık 15 dakika bekleyin. Ürün talimatlarına göre bir tonometre kullanarak her iki gözün IOP'sini ölçün. Fare gözünün yanına tonometre getirin, yaklaşık üç ila dört milimetre de fare kornea için sonda ucundan mesafetin.Bir okuma oluşturmak ve ortalama IOP'yi elde etmek için her gözden makine tarafından oluşturulan üç okuma elde etmek için ölçüm düğmesine altı kez basın. Optik sinir yarı ince kesitleri sayma ve silikon yağ enjeksiyonundan sekiz hafta sonra kurban hayvanlar üzerinde hayatta kalan aksonlar sayısallaştırma tüm montaj retina retinal ganglia hücre immünohistokimya gerçekleştirin. Fare gözlerinin 1.6 milimetreden daha büyük silikon yağ damlacıkları ile göz içi basıncı, tek bir silikon yağı enjeksiyonundan sonra sekiz hafta boyunca haftada bir kez ölçüldü.Yağı alan gözün basıncı yüksek kaldı, çoğunlukla etkili göz bebeği engelleme gösteren kontralateral kontrol gözünün basıncı iki katına. Farelerin başka bir grubunda, silikon yağı enjeksiyondan iki hafta sonra ön hazneden temizlenir. Korneanın iyileşmesi için bir hafta bekledikten sonra göz içi basıncı kontrol gözüyle aynı şekilde normale döndü.Retinagangli ler üzerinde silikon yağ kaynaklı oküler hipotansiyonun etkilerini belirlemek için, retinal tüm bağlar periferik bölgelerde kalan somata silikon yağ enjeksiyonu sonrası dramatik retina ganglion hücre ölümü gösteren RBPMS boyama ile nicel olarak ölçüldü. Optik sinir yarı ince kesitlerinde kalan aksonlar enjeksiyondan sekiz hafta sonra PBD boyama ile ölçüldü. Silikon yağa bağlı oküler hipertansiyonda büyük bir akson dejenerasyonu vardı.Hayvanlar retinadaki değişimi belirlemek için SLOOCT ile görüntülenebilir. Hayvanların görsel işlevi desen ERG ve OKR tarafından da titretilebilir. Bu oküler hipertansiyon modeli yüksek IOP indüklenen glokomcular nörodejenerasyon araştırma kolaylaştıracaktır.Ayrıca preklinik umut verici nöroprotektif tedavileri test etmek için kullanılabilir.

a-reversible-silicon-oil-induced-ocular-hypertension-model-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Glokom, dünyada körlüğün en önemli nedenlerinden biridir. Yükselmiş göz içi basıncı önemli bir risk faktörüdür. Lazer fotokoagülasyon bağlı oküler hipertansiyon, iyi kurulmuş hayvan modellerinde biridir. Bu video sıçan Argon lazer fotokoagülasyon oküler hipertansiyon nasıl ikna göstermektedir.

Lazer Kaynaklı SD Sıçanlarda Kronik Oküler Hipertansiyon Modeli

Bu videoda, anestezi uygulanmış bir sıçan, iridokorneal açıyı bloke etmek için manyetik bir alan altında manyetik boncukların ön kamaraya enjekte edildiği oküler bir prosedüre tabi tutulur. Bu tıkanıklık trabeküler ağı tıkar, sulu hümör drenajını engeller ve göz içi basıncının artmasına neden olarak retina ganglion hücrelerine ve optik sinire zarar verir. Bu, glokom benzeri bir durum geliştirir.

Bir Fare Modelinde İridokorneal Açı Obstrüksiyonu ile Deneysel Glokom İndüksiyonu

Kaynak: Lani-Louzada, R.,  ve ark., Kemirgenlerde Cerrahi Olarak İndüklenen Glokom için Limbal Vasküler Pleksusun Tam Daire Koterizasyonu. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, bir sıçan modelinde yüksek göz içi basıncının (GİB) indüksiyonunu ve izlenmesini göstermektedir. İşlem, limbal kan damarlarının koterize edilmesini içerir, bu da damar tıkanıklığı ve yüksek GİB ile sonuçlanır. Daha sonra sıçanın iyileşmesine izin verilir ve GİB, karşılaştırma için hem deneysel hem de kontrol gözlerinde düzenli...

 Bir Sıçan Modelinde Yüksek Göz İçi Basıncının İndüksiyonu

Kronik oküler hipertansiyon fare gözünde Trabeküler ağın laser kullanılarak meydana gelir. Göz içi basıncı (GİB) lazer tedavi sonrası birkaç ay boyunca yükselir. Görme keskinliği ve Deney hayvanlarının kontrast duyarlılık azalması optomotor testi kullanılarak izlenir.

Görme Kusurları karakterize Kronik Oküler Hipertansiyon bir Lazer-kaynaklı Fare Modeli

Glokomu modellemek için sıçan gözüne manyetik mikroküreler enjekte ederek yüksek göz içi basıncını (GİB) indüklemek için bir yöntem sunuyoruz. Bu, güçlü basınç artışlarına ve geniş nöronal ölüme yol açar. Bu protokolün uygulanması kolaydır, tekrar enjeksiyonları gerektirmez ve stabil uzun süreli GİB artışları üretir.

Deneysel Glokom Manyetik Mikrokürelerin Göz Enjeksiyon Bağlı

Burada, glokom görüldüğü gibi, retinal ganglion hücre kaybına neden murin göz oküler hipertansiyon uyarılması için bir protokol mevcut. Manyetik mikroboncuklarının ön kamaraya enjekte ve sulu mizah çıkışı engellemek için bir mıknatıs kullanarak iridokorneal açı çekti.

Bir Manyetik microbead Oklüzyon Modeli Farelerde Glokom Oküler Hipertansiyon Bağımlı tetikleyebilecek

Bu makalede, farelerde yüksek göz tansiyonu retinal iskemi-reperfüzyon hasarı uyarılması için bir yöntem tarif eder. yüksek göz içi basıncı ile retinal iskemi-reperfüzyon hasarı, retina nörovasküler biriminin, insan hastalıkları için, potansiyel hücresel mekanizmaları ve tedavi incelemelerine sağlayan retinada tehlikeye oksijen ve besin teslimat karakterize olan insan patolojilerinin model vermektedir.

Göz İçi Basıncı Yükselmesi ile Retina İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Kronik oküler hipertansiyon circumlimbal dikiş sıçanlar ve fareler, Retina ganglion hücrelerinin glokom ile tutarlı fonksiyonel ve yapısal bozulma yol uygulayarak indüklenen.

Manken Circumlimbal dikiş sıçanlar ve fareler tarafından indüklenen glokom

Burada, retinal dejenerasyon, glokom, diyabetik retinopati ve miyopi modellerinde retinal ve oküler yapıları in vivo olarak görselleştirmek için spektral-alan optik koherens tomografinin (SD-OCT) kullanımını açıklamaktayız.

Optik Koherens Tomografi Kullanılarak Kemirgen Modellerinde Oküler Hastalığın İn vivo Yapısal Değerlendirmeleri

Bu protokolün amacı, subakut oküler hipertansiyonu indükleyen limbal vasküler pleksusun 360° termik koterizasyonuna dayanan yeni bir glokomatöz nörodejenerasyon modelini karakterize etmektir.

Kemirgenlerde Cerrahi Olarak İndüklenen Glokom için Limbal Vasküler Pleksusun Tam Daire Koterizasyonu

Burada, ekstraorbital ve infraorbital lakrimal bezleri eksize ederek su eksikliği olan kuru gözün fare modelini oluşturmak ve su eksikliği olan kuru gözde oküler yüzeydeki değişiklikleri değerlendirmek için bir yöntem sunuyoruz.

Sulu Eksiklik Kuru Gözünün Bir Fare Modelinin Kurulması

Öğrenin, farelerde silikon yağ enjeksiyonu ile geri dönüşümlü oküler hipertansiyon modeli oluşturmayı. Bu yöntem, glokom nörodejenerasyonunu ve nöroprotektif tedavileri araştırmak için kullanılır.

Farelerde Geri Dönüşümlü Silikon YağA Bağlı Oküler Hipertansiyon Modeli

Daha fazla video keşfet