Name: Ködal Ven Glukoz Enjeksiyonu ile Parabiyotik Farelerde Ortak Kan Akımının Saptanmasına Neden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 27 s
Description: Öğrenin parabiyotik farelerde kuyruk veninden glukoz enjeksiyonu ile kan kimerizmini doğrulama yöntemini. C57BL/6 erkek farelerde güvenli ve güvenilir bir teknik sunarak biyomedikal araştırmaları destekler.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81570399 ve 81773735), Çin Ulusal Anahtar Araştırma ve Geliştirme Programı - Geleneksel Çin Tıbbı Modernizasyon Araştırma projesi (2017YFC1702003) ve Hei Long Jiang tarafından desteklenmiştir. Üstün Gençlik Bilim Fonu (JC2017020).

Hayvanlar la ilgili tüm prosedürler ve bakımı Harbin Tıp Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır.
NOT: Yöntem için gerekli araç ve gereçler Malzeme Tablosu'ndalistelenmiştir.
1. Malzeme ve hayvanların hazırlanması
<ol><li>Standart bir laboratuvar hayvan tedarikçisinden 20 g-25 g arasında ağırlıkla C57BL/6 erkek fareler sipariş imredin.</li>
	<li>Fareleri 12 saat ışıklık bir döngü içinde barındırın: 24−26 °C'de 12 saat karanlık, su ve gıdaya reklam libitum erişimi ile.</li>
</ol>2. Parabiyoz
<ol><li>0.1 mL/10 g. konsantrasyonunda 20 g/L 2,2,2-tribromoetanol intraperitoneal enjeksiyon ile fareler anestezi kin gevşemesi, yavaş ve istikrarlı nefes alma, cilt stimülasyon refleks kaybı ve kornea refleks ortadan kalkması ile belirtildiği gibi uygun anestezi doğrulayın.</li>
	<li>Kuru gözleri önlemek için bir Q-ucu ile oftalmik merhem uygulayın.</li>
	<li>Daha önce açıklandığı gibi parabiyoz prosedürügerçekleştirin 5.<ol>
<li>Fareleri supine pozisyonuna getirin. Bir farenin sol tarafını ve diğer farenin sağ tarafını dirsekten yaklaşık 1 cm yukarıdan başlayarak diz den 1 cm aşağıya elektrikli tıraş ile iyice tıraş edin. Tıraşlı ciltteki kürkü tamamen temizlemek için tüy dökücü krem kullanın.</li>
		<li>Traş edilen alanları iyodophor ile silin. Fareleri steril bir pedle kaplı ısıtmalı bir pedüzerine yerleştirin.</li>
		<li>Her hayvanın traşlı tarafında keskin bir makas kullanarak dirseğin 0,5 cm yukarısından diz ekleminin 0,5 cm altına kadar uzunlamasına deri kesileri oluşturun.</li>
		<li>Kesiği hafifçe takiben deriyi deriden deriden subkutan fasyadan ayırın.</li>
		<li>Parabiontun olecranon ve diz bağlantısını 3-0'lık bir dikişle bağlayın.</li>
		<li>Sürekli 5-0 dikiş ile tıraş lı cildi dikin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dehidratasyonu önlemek için her fareye 0,5 mL %0,9 NaCl deri altı enjekte edin.</li>
	<li>Ağrıyı dindirmek için her fareye tramadol (10 mg/25 g/gün) enjekte edin.</li>
</ol>3. Dolaşım kimerizminin doğrulanması
<ol><li>Glikoz dalgalanma yöntemi NOT: Parabiyoz cerrahisinden sonraki 10.<ol>
<li>0.1 mL/10 g konsantrasyonu ile her fareye 20 g/L 2,2,2-tribromoetanol intraperitoneal enjeksiyon ile parabiontize.</li>
		<li>Venöz görsel fare kuyruk fiksatöründeki donör fareleri düzeltin.</li>
		<li>Kaudal damarları parabiontun kuyruğundan birinin kan kanadında, kuyruğunu temizlemek ve kan damarlarını temizlemek için %70−75 alkolle ıslatılmış bir pamuk topuyla ovun.</li>
		<li>Sağ elde glikoz içeren 1,0 mL'lik bir şırınga tutun ve iğneyi damara paralel tutun (15°'den az).</li>
		<li>İğneyi kuyruk ucundan yaklaşık 2−4 cm uzaklıkta bir pozisyona yerleştirin.</li>
		<li>10 s içinde donöre 100 μL (1,2 g/kg) glikoz enjekte edin. NOT: Donör terimi, kuyruk damarından glikoz enjeksiyonu alan parabiont anlamına gelir. Alıcı doğrudan glikoz almaz diğer parabiont olduğunu.</li>
		<li>Iodophor ile ttemiz. Bir makas ile donör ve alıcı farelerin tonlarını kesin ve glikoz enjeksiyonu sonra farklı zaman noktalarında kan bir damla toplamak (1 dk, 5 dk, 10 dk, 15 dk, 20 dk, 30 dk, 40 dk, 50 dk, ve 60 dk). Daha fazla zarar görmesini önlemek için her toplama zaman noktasında kan pıhtısı çıkarın. NOT: Toplanan kanın hacmi bir test için 10-25 ul, toplamda 90-225 ul idi.</li>
		<li>Glikoz düzeyi tespiti için kanı glucometer test şeritlerinin ortasına damlatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Olumlu bir kontrol3olarak Evan mavi Counterstain kullanın.<ol>
<li>Donör fareye %0,5 Evan'ın mavi Counterstain intraperitoneally enjekte edin.</li>
		<li>2 saat sonra, 0.2 mL/10 g konsantrasyonu ile her fareye 20 g/L 2,2,2-tribromoetanol intraperitoneal enjeksiyon ile parabiontlar ötenazi ve kardiyak delinme ile her iki parabionttan kan toplamak.</li>
		<li>15 dakika boyunca 916 x g kan örneklerini santrifüj edin.</li>
		<li>Supernatant serum toplayın.</li>
		<li>Serumu 1:50'de %0.9 NaCl ile seyreltin.</li>
		<li>Seyreltilmiş serum örneklerinin emiciliğini 620 nm'de spektrofotometre ile ölçün.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Baruch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging-induced+type+I+interferon+response+at+the+choroid+plexus+negatively+affects+brain+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Aging-induced type I interferon response at the choroid plexus negatively affects brain function.</a> Science. 346 (6205), 89-93 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+cloning+of+the+mouse+obese+gene+and+its+human+homologue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue.</a> Nature. 372 (6505), 425-432 (1994).</li>
<li>Torres, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiotic+model+for+differentiating+local+and+systemic+effects+of+continuous+and+intermittent+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Parabiotic model for differentiating local and systemic effects of continuous and intermittent hypoxia.</a> Journal of Applied Physiology (1985). 118 (1), 42-47 (2015).</li>
<li>Loffredo, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+differentiation+factor+11+is+a+circulating+factor+that+reverses+age-related+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Growth differentiation factor 11 is a circulating factor that reverses age-related cardiac hypertrophy.</a> Cell. 153 (4), 828-839 (2013).</li>
<li>Kamran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiosis+in+mice%3A+a+detailed+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Parabiosis in mice: a detailed protocol.</a> Journal of Visualized Experiments. (80), e50556(2013).</li>
<li>Conboy, M. J., Conboy, I. M., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterochronic+parabiosis%3A+historical+perspective+and+methodological+considerations+for+studies+of+aging+and+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Heterochronic parabiosis: historical perspective and methodological considerations for studies of aging and longevity.</a> Aging Cell. 12 (3), 525-530 (2013).</li>
<li>Eggel, A., Wyss-Coray, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+revival+of+parabiosis+in+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Swiss+Medical+Weekly%22%5BJournal%5D)">A revival of parabiosis in biomedical research.</a> Swiss Medical Weekly. 144, w13914(2014).</li>
<li>Brack, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ageing+of+the+heart+reversed+by+youthful+systemic+factors%21%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Ageing of the heart reversed by youthful systemic factors!</a> EMBO Journal. 32 (16), 2189-2190 (2013).</li>
<li>Wu, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+cells+contribute+to+cardiomyocyte+regeneration+after+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating cells contribute to cardiomyocyte regeneration after injury.</a> Circulation Research. 116 (4), 633-641 (2015).</li>
<li>Kaiser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Rejuvenation+factor%27+in+blood+turns+back+the+clock+in+old+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">'Rejuvenation factor' in blood turns back the clock in old mice.</a> Science. 344 (6184), 570-571 (2014).</li>
<li>Rando, T. A., Finkel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+aging+and+rejuvenation--a+sense+of+humors%3F%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cardiac aging and rejuvenation--a sense of humors?</a> New England Journal of Medicine. 369 (6), 575-576 (2013).</li>
<li>Heidt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+contribution+of+monocytes+to+heart+macrophages+in+steady-state+and+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Differential contribution of monocytes to heart macrophages in steady-state and after myocardial infarction.</a> Circulation Research. 115 (2), 284-295 (2014).</li>
<li>McPherron, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Through+thick+and+thin%3A+a+circulating+growth+factor+inhibits+age-related+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Through thick and thin: a circulating growth factor inhibits age-related cardiac hypertrophy.</a> Circulation Research. 113 (5), 487-491 (2013).</li>
<li>Villeda, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Young+blood+reverses+age-related+impairments+in+cognitive+function+and+synaptic+plasticity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Young blood reverses age-related impairments in cognitive function and synaptic plasticity in mice.</a> Nature Medicine. 20 (6), 659-663 (2014).</li>
<li>Katsimpardi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+and+neurogenic+rejuvenation+of+the+aging+mouse+brain+by+young+systemic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Vascular and neurogenic rejuvenation of the aging mouse brain by young systemic factors.</a> Science. 344 (6184), 630-634 (2014).</li>
<li>Starzl, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lost+chord%3A+microchimerism+and+allograft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Today%22%5BJournal%5D)">The lost chord: microchimerism and allograft survival.</a> Immunology Today. 17 (12), 577-584 (1996).</li>
<li>Coleman, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+historical+perspective+on+leptin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">A historical perspective on leptin.</a> Nature Medicine. 16 (10), 1097-1099 (2010).</li>
<li>Salpeter, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+regulation+of+the+age-related+decline+of+pancreatic+beta-cell+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Systemic regulation of the age-related decline of pancreatic beta-cell replication.</a> Diabetes. 62 (8), 2843-2848 (2013).</li>
<li>Sheldon, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gestational+exercise+protects+adult+male+offspring+from+high-fat+diet-induced+hepatic+steatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Gestational exercise protects adult male offspring from high-fat diet-induced hepatic steatosis.</a> Journal of Hepatology. 64 (1), 171-178 (2016).</li>
<li>Martineau, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+metabolic+profile+of+intrahepatic+cholestasis+of+pregnancy+is+associated+with+impaired+glucose+tolerance%2C+dyslipidemia%2C+and+increased+fetal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">The metabolic profile of intrahepatic cholestasis of pregnancy is associated with impaired glucose tolerance, dyslipidemia, and increased fetal growth.</a> Diabetes Care. 38 (2), 243-248 (2015).</li>
<li>Wang, F., Liu, Y., Yuan, J., Yang, W., Mo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compound+C+Protects+Mice+from+HFD-Induced+Obesity+and+Nonalcoholic+Fatty+Liver+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Compound C Protects Mice from HFD-Induced Obesity and Nonalcoholic Fatty Liver Disease.</a> International Journal of Endocrinology. 2019, 3206587(2019).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Parabiyoz deneysel yollarla ortak bir vasküler sistem kurmak için iki canlı hayvan bağlayan cerrahi tekniği ifade eder6,7,8. Bu modelin avantajı, tek bir birey tarafından üretilen maddelerin her iki hayvanüzerinde aynı anda hareket edebiliyor olmasıdır. Böylece, parabiyoz modeli birçok anlamlı ve yenilikçi sonuçlar üreten, ilgili bir hastalık bir madde veya faktör rolünü keşfetmek için kullanılabilir. Onun büyük uygulama değeri ...

Parabiyoz, iki canlı organizmanın cerrahi olarak biraraya gelerek ortak dolaşım sistemi1ile tek bir fizyolojik sistem olarak geliştiği bir modelleme yöntemidir. Bu modeller, tek bir bireyin ürettiği maddelerin ortak dolaşım sistemi aracılığıyla her iki hayvan üzerinde aynı anda hareket edebildiği avantajı sayesinde fizyolojiyi incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Parabiyotik deneyler Paul Bert2tarafından öncülük edildi 1800'lerin ortalarından bu yana, parabiyotik modeller oluşturmak için yöntemler standart hale gelmiştir. Ancak, kan kimerizminin başarılı kurulmasını doğrulamak için basit ve uygun bir yöntem eksik olmuştur. Bu çapraz dolaşım başarıyla bir mikroplaka okuyucu ile her iki parabionts kanevans mavi emiciliği ölçümü takip parabionts birinde% 0.5 Evans mavi boya enjekte intraperitoneally enjekte tarafından değerlendirilebilir bildirilmiştir3. Başka bir yöntem cd45.1+içeren belirli bir fare cinsi gerektirir - ve CD45.2+etiketli monositler her parabiont. Hücre sitometrisi daha sonra dalak veya kan dan monositler iki belirteçlerin sıklığını ölçerek kan kimerizm belirlemek için kullanılır4. Ancak, bu yöntemler genellikle hayvanlar için öldürücü veya hantal, ve parabiyotik modellerin hızlı ve güvenilir doğrulama için güvenli ve basit bir yöntem son derece arzu edilir. Bu çalışmada, parabiyozun fare modelinde doğrulanan yeni bir yöntem oluşturduk. Kuyruk damarından alınan kan örneklerindeki glikoz konsantrasyonu bir glucometer kullanılarak ölçülür ve donör ve alıcı farelerdeki glikoz seviyesinin değişim şekli dolaşım kimerizminin bir göstergesi olarak kabul edilir. Bu yönteme "glikoz dalgalanma yöntemi" adını verdik. Bu doğrulama yönteminin uygulanması farelerle sınırlı değildir, ancak glikoz metabolizmasının ciddi disregülasyonu olanlar dışında çeşitli patolojik modellere genişletilebilir. Prosedür basit, zaman kazandırır ve güvenlidir.

<table><tbody><tr><td>kavisli forseps</td><td>JZ cerrahi aletler, Çin</td><td>J31340</td><td></td></tr><tr><td>ince makas</td><td>JZ cerrahi aletler, Çin</td><td>WA1030</td><td></td></tr><tr><td>iğne forsep</td><td>JZ cerrahi aletler, Çin</td><td>60017961</td><td></td></tr><tr><td>2.5 mL şırıngalar</td><td>Agilent, ABD</td><td>5182-9642</td><td></td></tr><tr><td>Tribromoethano</td><td>Sigma-Aldrich, ABD</td><td>T48402-5G</td><td></td></tr><tr><td>penisilin</td><td>Solarbio, Çin</td><td>IP0150</td><td></td></tr><tr><td>tramadol</td><td>Yijishiye, Çin</td><td>YJT712520</td><td></td></tr><tr><td>glukometre</td><td>Roche Diyabet Bakımı, Indiana</td><td>Accu-Chek Aktif test şeritleri</td><td></td></tr><tr><td>Evan'ın mavi Counterstain</td><td>Solarbio, Çin</td><td>G1810</td><td></td></tr><tr><td>tüy dökücü krem</td><td>Nair, ABD</td><td>LL9161</td><td></td></tr><tr><td>Isınma Battaniyesi ( Isıtma yastığı)</td> <td>Kent Scientific Corp, ABD</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>Elektrikli tıraş makinesi</td><td>Codos, Çin</td><td>CP-5000</td><td></td></tr><tr><td>3-0,5-0 cerrahi sütür</td><td>Şangay Tıbbi Sütür İğnesi Fabrikası, Çin</td><td>SYZ 3-0 #, SYZ 5-0 #</td><td></td></tr></tbody></table>

ködal ven glukoz enjeksiyonu ile parabiyotik farelerde ortak kan akımının saptanmasına neden

Detecting Establishment of Shared Blood Supply in Parabiotic Mice by Caudal Vein Glucose Injection

Parabiyoz, vücudun boylamsal ekseni boyunca iki paralel hayvanı cerrahi olarak birleştirmek için deneysel bir yöntemdir. Parabionlarda kan kimeraizminin başarılı bir şekilde kurulmasını, kaudal ven enjeksiyonu ile tespit etmek için bir protokol sayılmak üzere bir protokol sayılmiyoruz. Parabiyotik fareler inşa edildi. Glikoz donör fareye kuyruk damarı ile enjekte edildi ve kan şekeri seviyesinin dalgalanması her iki farede de farklı zaman noktalarında kan gdolüter kullanılarak ölçüldü. Sonuçlarımız, glukoz enjeksiyonundan sonra donör farelerdeki kan şekeri seviyesinin 1 dk sonra keskin bir şekilde arttığını ve sonrasında yavaş yavaş azaldığını göstermiştir. Bu arada, alıcı farelerin kan şekeri seviyesi enjeksiyondan sonra 15 dk zirveye ulaştı. Benzer sonuçlar, glikoz için pozitif kontrol olarak kullanılan Evans mavisi ile elde edildi. Kan şekeri düzeylerindeki senkron dalgalanma, iki fare arasındaki kan akışının başarılı bir şekilde belirlendiğini gösterir.

Altı donör farede, kan şekeri seviyesi kuyruk damarından 100 μL (1,2 g/kg) glukoz enjeksiyonundan sonra ortalama 1 dakika 26,5 mol/L'ye (3 artış) yükseldi ve daha sonra kademeli olarak 60 dk'da 13,3 μmol/L'ye düştü. Alıcı farelerde, enjeksiyon dan sonra kan şekeri yavaş yavaş artmış ve 15 dk ile ilk tepe seviyeye ulaşmıştır (G artış, 12.2 μmol/L). Yukarıdaki sonuçlara göre, dolaşım kimerizmi standardı şu şekilde belirlenmiştir: 1) glukoz enjeksiyonundan sonra 1 dakika içinde donör fareler...

Burada, en az hasara neden olan ve parabiontlar için ölümcül olmayan bir kaudal ven enjeksiyonu ile iki parabiontun ortak kan dolaşımının başarılı bir şekilde kurulmasını saptamak için yeni bir yöntem açıklıyoruz.

Ködal Ven Glukoz Enjeksiyonu ile Parabiyotik Farelerde Ortak Kan Akımının Saptanmasına Neden

Parabiosis is an experimental method for surgically combining two parallel animals along the longitudinal axis of the body. We present a protocol for ...

Protokolümüz dolaşım kimerizmi için geliştirilmiş bir doğrulama yöntemi ve biyomedikal araştırmalar için başarılı parabiyoz modeli kurulumu için bir yöntem sunmaktadır. Parabiyozda kan kimerizmi tespiti için kullanılan mevcut yöntemlerle karşılaştırıldığında, protokolümüz güvenli ve basittir ve hızlı ve güvenilir bir doğrulama sağlar. Bu yöntem parabiyoz modellerinde kan kimerizminin saptanmasına özgü olmasına rağmen, parabiyotik prosedürleri içeren herhangi bir biyomedikal çalışmaya uygulanabilir.En zorlu adım glikoz enjeksiyonudur. Bu nedenle deneysel bir işlem gerçekleştirmeden önce kuyruk damar enjeksiyonu uygulama, ya da venöz görsel fare kuyruk fiksatör kullandığınızdan emin olun. Pedal refleksine yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, iki 20 ila 25 gram anestezik C57 siyah 6 erkek fareyi supine pozisyonuna yerleştirin ve bir farenin sol tarafını ve ikinci farenin sağ tarafını dirsekten yaklaşık bir santimetre yukarısından diz altına doğru bir santimetre kadar iyice tıraş etmek için elektrikli bir tıraş cihazı kullanın.Her hayvanın temizlenmiş derisinde, dirseğin 0,5 santimetre yukarısından diz ekleminin 0,5 santimetre altına kadar uzunlamasına deri kesileri yapmadan önce kalan tüyleri tüydökücü kremle çıkarın ve cildi deri altı fasyasından nazikçe ayırın. Parabiontun olecranon ve diz lerini 3-0 dikişle bağlayın ve tıraşolmuş deriyi 5-0 dikişle dikin. Daha sonra subkutan olarak dehidratasyon önlemek için 0.5 mililitre sodyum klorür enjekte, ve intramusküler ağrı gidermek için fare 25 gram başına 10 miligram tramadol enjekte, üç gün boyunca günde her fare içine.Glikoz dalgalanması ile parabionlar arasındaki sirkülasyonun başarılı bir şekilde yapılmasını doğrulamak için, parabiyoz ameliyatından sonraki 10. Kuyruk ucundan 2-4 santimetre kaudal vene bir mililitrelik şırınga iğnesi yerleştirin ve mümkün olduğunca damara paralel olarak 100 mikrolitre tuzlu çözeltinin kilogramı başına 10 saniyelik bir süre içinde donöre enjekte edin. Sonraki kullanım makas donör ve alıcı hayvanlardan enjeksiyondan sonra ilgi çeşitli zaman noktalarında bir damla kan toplama sağlamak için tonlarını kaldırmak için.Sonra glikoz düzeyi tespiti için bir glucometer test şeridinin merkezine her kan örneğinin bir damla ekleyin. Evans mavi boya emici tarafından dolaşımın başarılı inşaat doğrulamak için, donör fare içine intraperitoneally 0.5% Evans mavi karşı leke 200 mikrolitre enjekte ve iki saat sonra kardiyak delinme ile her iki parabiontkan kan toplamak. Serumu santrifüjle ayırın ve serumu %0,9 sodyum klorür oranıyla 1-50 oranında seyreltmek için konik bir tüpe aktarın.Daha sonra seyreltilmiş serum örneklerinin emiciliğini bir spektrofotometre üzerinde 620 nanometre olarak ölçün. Altı donör faredeki kan şekeri düzeylerinin bu temsili analizinde, kuyruk damarına 100 mikrolitre glikoz enjekte edildikten sonra kan şekeri litre başına ortalama bir dakika içinde 26,5 mikromolara yükseldi. Kan şekeri düzeyleri daha sonra yavaş yavaş 60 dakika litre başına 13.3 mikrolitre azalmıştır.Alıcı farelerde, enjeksiyondan sonra kan şekeri yavaş yavaş artarak 15 dakikada ilk zirve seviyesine ulaştı. Parabiontların serumundaki Evans mavi boya konsantrasyonu da dolaşım kimerizminin başarılı bir yapıya işaret eder ve parabiontlar arasındaki deri altı vasküler kavşaklar açıkça görülebilir. Parabiyoz ameliyatından 15 gün sonra kan kimerizmi oluşturmayan parabionlarda alıcı fareler donör hayvana glukoz enjekte edildikten sonra 60 dakika içinde kan şekeri seviyesinin artmadığını gösterdi.İki alıcıda Evans mavisinin kan konsantrasyonu da yüksek değildi, glikoz dalgalanma yöntemi evans mavi yöntemi kadar hassas olduğunu gösteren. Ayrıca hızlı bir şekilde artan glikoz düzeyleri nedeniyle kan insülin düzeyi belirgin bir saat sonra azalmış ve üç saat normal seviyelere geri, insülin metabolizması üzerinde enjekte glikoz etkileri geri olduğunu gösteren. İğnenin doğrudan kuyruk damarına yerleştirildiğinden emin olun.Bu yöntemle parabionların kan kimeralizmi onaylandıktan sonra canlı parabiyotik hayvanlarda fizyopatolojik değişiklikler incelenebilir.

detecting-establishment-shared-blood-supply-parabiotic-mice-caudal

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Iki organizmanın Parabiyotik birleştiren ortak bir dolaşım sisteminin gelişmesine yol açar. Bu protokol, bir vahşi tip fare ve bir kurucu GFP-ifade eden fare arasında bir Parabiyotik bir bağlantı oluşturmak üzere cerrahi adımları açıklar.

Farelerde parabiyoz: Detaylı Bir Protokol

İnsülin kaynaklı vazodilatasyon kas perfüzyon düzenleyen ve mikrovasküler artırır kan ve doku interstitium arasında yüzey alanı (mikrovasküler işe alım) çözünen değişimi için kullanılabilir. Kombine intravital mikroskobu ve kontrast-artırılmış Ultrasonografi sunulan aynı anda insülin'ın eylem daha büyük gemiler ve mikro değerlendirmek için içinde vivo.

Intravital mikroskobu ve kontrast-artırılmış Ultrasonografi fare Hindlimb, insülin kaynaklı vazodilatasyon ve kas perfüzyon çalışmaya kombine

Geçerli makalenin üretimi ve yüksek yağlı diyet beslenen farelerin metabolik karakterizasyonu diyet kaynaklı insülin direnci ve obezite bir model olarak açıklar. Daha fazla oral glukoz tolerans testi ve glukoz metabolizma vivo içindetüm vücut değişikliklere izleme insülin tolerans testi gerçekleştirmek için detaylı iletişim kuralları bulunmaktadır.

Vivo glikoz metabolizması farelerde Oral glukoz tolerans testi (OGTT) ve insülin tolerans testi (ITT) kullanarak yüksek yağlı diyet beslenen incelenmesi

Bu çalışma, polikistik over sendromu fare modelinde hepatik glikoz üretiminin hem oruç hem de glikoz bakımından zengin durumlarda kuyruk damarı yoluyla stabil bir izotopik glikoz izleyici kullanılarak doğrudan ölçülen ölçümünü açıklar.

Polikistik Over Sendromu Fare Modelinde Hepatik Glikoz Üretiminin Değerlendirilmesi

Burada, hastalar için tasarlanmış ticari bir sürekli glikoz monitörünü farelere implante etmek ve sonuçları analiz etmek için komut dosyaları sağlamak için basit bir yöntem açıklıyoruz.

Serbestçe hareket eden farelerde basit sürekli glikoz izleme

Bu protokol, spontan diyabetik NOD farelerinden saflaştırılmış splenositlerle mücadele eden obez olmayan diyabetik (NOD)-şiddetli kombine immün yetmezlikli farelerde NIT-1 hücrelerinin nakli ve görüntülenmesi için basit ve minimal invaziv bir yöntemi tanımlamaktadır.

Farelerde Otoimmün Diyabetin Evlat Edinilen Transfer Modelinde Greft Sağkalımının Biyolüminesan İzlenmesi

Daha yüksek kan şekeri konsantrasyonu ile insülin salınımını ölçmek için bir hiperglisemik kelepçe kullanılır. Hipoglisemik bir kelepçe, karşı düzenleyici yanıtların neden olduğu glikoz üretimini ölçmek içindir. Her iki yöntemde de aynı cerrahi prosedür kullanılır. Burada, sistemik glukoz metabolizmasını değerlendirmek için bir klemp tekniği sunuyoruz.

Bilinçli Farelerde Hiperglisemik Kelepçe ve Hipoglisemik Kelepçe

Bu protokolde, bir fare modelinde GC-MS kullanılarak BAT ile optimize edilmiş arteriyovenöz metabolomikler ile ilgili yöntemler özetlenmiştir. Bu yöntemler, organizma düzeyinde BAT aracılı metabolit değişimi hakkında değerli bilgiler edinilmesine izin verir.

Kahverengi Yağ Dokusunda İn Vivo Metabolit Değişimini Ölçmek için Arteriyovenöz Metabolomikler

Burada, intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu (ICSI)-embriyo transferi (ET) fare modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz, bu da ICSI'ye atfedilebilecek glikoz metabolizmasındaki yaşa bağlı değişiklikleri gözlemlememize olanak tanıyarak insan gelişimi üzerindeki potansiyel uzun vadeli etkileri hakkında bilgi veriyor.

İntrasitoplazmik Sperm Enjeksiyonu Sonrası Fare Yavrularında Kan Şekerinin İzlenmesi

Protokol, bağırsak mikrobiyal metabolitlerinin üretimini ve emilimini değerlendirmek için portal venlerden ve farelerden inferior vena kava'dan sırayla kan toplamak için bir yöntem göstermektedir.

Farelerde Bağırsak Mikrobiyal Metabolitlerini Değerlendirmek için İnferior Vena Cava'dan Ardışık Kan Alımı ve Ardından Portal Ven

Burada, olası karışıklıkların azaltılması ile endokrin pankreas fonksiyonunu değerlendirmek için ek bir teknik olarak, sağlam bir pankreas ile fare damar sistemi yoluyla perfüzyon yoluyla glikoz ile uyarılan insülin sekresyonu (GSIS) gerçekleştirme hakkında ayrıntılar sunuyoruz.

Sağlam Bir Pankreas ile Farelerin Damar Sisteminden Perfüzyon Yoluyla Glikozla Uyarılan İnsülin Sekresyonu

Öğrenin parabiyotik farelerde kuyruk veninden glukoz enjeksiyonu ile kan kimerizmini doğrulama yöntemini. C57BL/6 erkek farelerde güvenli ve güvenilir bir teknik sunarak biyomedikal araştırmaları destekler.

Ködal Ven Glukoz Enjeksiyonu ile Parabiyotik Farelerde Ortak Kan Akımının Saptanmasına Neden

Daha fazla video keşfet