Name: Prenatal Islmnden Okülomotor, Troklear ve Spinal Motor Nöronların İzolasyon ve Kültürü :GFP Transgenik Fareler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 4 s
Description: Öğrenin, embriyonik farelerden oküler ve spinal motor nöronları izole etme ve kültürleme yöntemini. Bu teknik, motor nöron hastalıklarının mekanizmalarını ve seçici hassasiyetini karşılaştırmalı olarak incelemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz SMN diseksiyon teknikleri öğretim için Brigitte Pettmann (Biogen, Cambridge, MA, ABD) teşekkür ederiz; Dana Farber Kanser Enstitüsü Akış Sitometri Tesisi, Harvard Tıp Fakültesi İmmünoloji Bölümü Akış Sitometri Tesisi, Joslin Diyabet Merkezi Akış Sitometri Çekirdek, Brigham ve Kadın Hastanesi Akış Sitometri Çekirdek, ve Boston Çocuk Hastanesi Akış Sitometri Araştırma Tesisi facs ilköğretim motor nöronların izolasyonu için; A.A. Nugent, A.P. Tenney, A.S. Lee, E.H. Nguyen, M.F. Rose, ek Engle laboratuvar üyeleri ve teknik yardım ve düşünceli tartışma için Als Projesi konsorsiyumu üyeleri. Bu çalışma ALS Projesi tarafından desteklenmiştir. Buna ek olarak, R.F. Japan Heart Foundation/Bayer Yakuhin Research Grant Abroad ve NIH Training grant in Genetics T32 GM007748 tarafından finanse edilmiştir; J.J., Schepens Göz Araştırma Enstitüsü aracılığıyla Göz Hastalıklarının Moleküler Üsleri'nde (5T32EY007145-16) NIH/NEI eğitim programı ve Boston Çocuk Hastanesi aracılığıyla Gelişimsel Nöroloji Eğitim Programı Doktora Sonrası Bursu (5T32NS007473-19) tarafından desteklendi; M.C.W, NEI (5K08EY027850) ve Çocuk Hastanesi Oftalmoloji Vakfı (Fakülte Keşif Ödülü) tarafından desteklendi; Ve E.C.E. howard Hughes Tıp Enstitüsü araştırmacısı.

<ol><li>Kiernan, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Amyotrophic lateral sclerosis.</a> Lancet. 377 (9769), 942-955 (2011).</li>
<li>Wood-Allum, C., Shaw, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neurone+disease%3A+a+practical+update+on+diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Medicine+%28London%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">Motor neurone disease: a practical update on diagnosis and management.</a> Clinical Medicine (London, England). 10 (3), 252-258 (2010).</li>
<li>Nijssen, J., ComLey, L. H., Hedlund, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+vulnerability+and+resistance+in+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Motor neuron vulnerability and resistance in amyotrophic lateral sclerosis.</a> Acta Neuropathologica. 133 (6), 863-885 (2017).</li>
<li>Gizzi, M., DiRocco, A., Sivak, M., Cohen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+motor+function+in+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Ocular motor function in motor neuron disease.</a> Neurology. 42 (5), 1037-1046 (1992).</li>
<li>Kanning, K. C., Kaplan, A., Henderson, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+diversity+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Motor neuron diversity in development and disease.</a> Annual Review of Neuroscience. 33, 409-440 (2010).</li>
<li>Nimchinsky, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+vulnerability+of+oculomotor%2C+facial%2C+and+hypoglossal+nuclei+in+G86R+superoxide+dismutase+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Differential vulnerability of oculomotor, facial, and hypoglossal nuclei in G86R superoxide dismutase transgenic mice.</a> The Journal of Comparative Neurology. 416 (1), 112-125 (2000).</li>
<li>Angenstein, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+changes+in+MRI+of+motor+brain+stem+nuclei+in+a+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Age-dependent changes in MRI of motor brain stem nuclei in a mouse model of ALS.</a> Neuroreport. 15 (14), 2271-2274 (2004).</li>
<li>Niessen, H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+quantification+of+spinal+and+bulbar+motor+neuron+degeneration+in+the+G93A-SOD1+transgenic+mouse+model+of+ALS+by+T2+relaxation+time+and+apparent+diffusion+coefficient%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">In vivo quantification of spinal and bulbar motor neuron degeneration in the G93A-SOD1 transgenic mouse model of ALS by T2 relaxation time and apparent diffusion coefficient.</a> Experimental Neurology. 201 (2), 293-300 (2006).</li>
<li>Spiller, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+Motor+Neuron+Resistance+and+Recovery+in+a+New+Inducible+Mouse+Model+of+TDP-43+Proteinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Selective Motor Neuron Resistance and Recovery in a New Inducible Mouse Model of TDP-43 Proteinopathy.</a> The Journal of Neuroscience. 36 (29), 7707-7717 (2016).</li>
<li>Graham, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+mouse+motoneuron-enriched+fraction+from+mouse+spinal+cord+on+a+density+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+World+Journal%22%5BJournal%5D)">Isolation of a mouse motoneuron-enriched fraction from mouse spinal cord on a density barrier.</a> Scientific World Journal. 2, 1544-1546 (2002).</li>
<li>Gingras, M., Gagnon, V., Minotti, S., Durham, H. D., Berthod, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+protocols+for+isolation+of+primary+motor+neurons%2C+astrocytes+and+microglia+from+embryonic+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimized protocols for isolation of primary motor neurons, astrocytes and microglia from embryonic mouse spinal cord.</a> Journal of Neuroscience Methods. 163 (1), 111-118 (2007).</li>
<li>Beaudet, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+yield+extraction+of+pure+spinal+motor+neurons%2C+astrocytes+and+microglia+from+single+embryo+and+adult+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">High yield extraction of pure spinal motor neurons, astrocytes and microglia from single embryo and adult mouse spinal cord.</a> Scientific Reports. 5, 16763(2015).</li>
<li>Camu, W., Henderson, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+embryonic+rat+motoneurons+by+panning+on+a+monoclonal+antibody+to+the+low-affinity+NGF+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Purification of embryonic rat motoneurons by panning on a monoclonal antibody to the low-affinity NGF receptor.</a> Journal of Neuroscience Methods. 44 (1), 59-70 (1992).</li>
<li>Arce, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiotrophin-1+requires+LIFRbeta+to+promote+survival+of+mouse+motoneurons+purified+by+a+novel+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Cardiotrophin-1 requires LIFRbeta to promote survival of mouse motoneurons purified by a novel technique.</a> Journal of Neuroscience Research. 55 (1), 119-126 (1999).</li>
<li>Wiese, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+enrichment+of+embryonic+mouse+motoneurons+from+the+lumbar+spinal+cord+of+individual+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Isolation and enrichment of embryonic mouse motoneurons from the lumbar spinal cord of individual mouse embryos.</a> Nature Protocols. 5 (1), 31-38 (2010).</li>
<li>Conrad, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lectin-based+isolation+and+culture+of+mouse+embryonic+motoneurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Lectin-based isolation and culture of mouse embryonic motoneurons.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).</li>
<li>Lerner, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+cell-derived+factor-1+and+hepatocyte+growth+factor+guide+axon+projections+to+the+extraocular+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Stromal cell-derived factor-1 and hepatocyte growth factor guide axon projections to the extraocular muscles.</a> Developmental Neurobiology. 70 (8), 549-564 (2010).</li>
<li>Ferrario, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axon+guidance+in+the+developing+ocular+motor+system+and+Duane+retraction+syndrome+depends+on+Semaphorin+signaling+via+alpha2-chimaerin%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Axon guidance in the developing ocular motor system and Duane retraction syndrome depends on Semaphorin signaling via alpha2-chimaerin.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (36), 14669-14674 (2012).</li>
<li>Clark, C., Austen, O., Poparic, I., Guthrie, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B12-Chimaerin+regulates+a+key+axon+guidance+transition+during+development+of+the+oculomotor+projection%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">α2-Chimaerin regulates a key axon guidance transition during development of the oculomotor projection.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (42), 16540-16551 (2013).</li>
<li>Theofilopoulos, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholestenoic+acids+regulate+motor+neuron+survival+via+liver+X+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Cholestenoic acids regulate motor neuron survival via liver X receptors.</a> The Journal of Clinical Investigation. 124 (11), 4829-4842 (2014).</li>
<li>Montague, K., Guthrie, S., Poparic, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+and+In+Vitro+Knockdown+Approaches+in+the+Avian+Embryo+as+a+Means+to+Study+Semaphorin+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">In Vivo and In Vitro Knockdown Approaches in the Avian Embryo as a Means to Study Semaphorin Signaling.</a> Methods in Molecular Biology. 1493, 403-416 (2017).</li>
<li>Porter, J. D., Hauser, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+extraocular+muscle+in+long-term+organotypic+culture%3A+differential+influence+of+appropriate+and+inappropriate+motoneurons%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Survival of extraocular muscle in long-term organotypic culture: differential influence of appropriate and inappropriate motoneurons.</a> Developmental Biology. 160 (1), 39-50 (1993).</li>
<li>Serafini, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Netrin-1+is+required+for+commissural+axon+guidance+in+the+developing+vertebrate+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Netrin-1 is required for commissural axon guidance in the developing vertebrate nervous system.</a> Cell. 87 (6), 1001-1014 (1996).</li>
<li>Varela-Echavarría, A., Tucker, A., Püschel, A. W., Guthrie, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+axon+subpopulations+respond+differentially+to+the+chemorepellents+netrin-1+and+semaphorin+D%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Motor axon subpopulations respond differentially to the chemorepellents netrin-1 and semaphorin D.</a> Neuron. 18 (2), 193-207 (1997).</li>
<li>Irving, C., Malhas, A., Guthrie, S., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+the+trochlear+motor+axon+trajectory%3A+role+of+the+isthmic+organiser+and+Fgf8%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Establishing the trochlear motor axon trajectory: role of the isthmic organiser and Fgf8.</a> Development. 129 (23), 5389-5398 (2002).</li>
<li>Chen, J., Butowt, R., Rind, H. B., von Bartheld, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GDNF+increases+the+survival+of+developing+oculomotor+neurons+through+a+target-derived+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">GDNF increases the survival of developing oculomotor neurons through a target-derived mechanism.</a> Molecular and Cellular Neurosciences. 24 (1), 41-56 (2003).</li>
<li>Whitman, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+CXCR4%2FCXCL12+Signaling+Causes+Oculomotor+Nerve+Misrouting+and+Development+of+Motor+Trigeminal+to+Oculomotor+Synkinesis%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Loss of CXCR4/CXCL12 Signaling Causes Oculomotor Nerve Misrouting and Development of Motor Trigeminal to Oculomotor Synkinesis.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 59 (12), 5201-5209 (2018).</li>
<li>Whitman, M. C., Bell, J. L., Nguyen, E. H., Engle, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+Vivo+Oculomotor+Slice+Culture+from+Embryonic+GFP-Expressing+Mice+for+Time-Lapse+Imaging+of+Oculomotor+Nerve+Outgrowth%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Ex Vivo Oculomotor Slice Culture from Embryonic GFP-Expressing Mice for Time-Lapse Imaging of Oculomotor Nerve Outgrowth.</a> Journal of Visualized Experiments. , In press e59911(2019).</li>
<li>Lewcock, J. W., Genoud, N., Lettieri, K., Pfaff, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ubiquitin+ligase+Phr1+regulates+axon+outgrowth+through+modulation+of+microtubule+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The ubiquitin ligase Phr1 regulates axon outgrowth through modulation of microtubule dynamics.</a> Neuron. 56, 604-620 (2007).</li>
<li>Bibel, M., Richter, J., Lacroix, E., Barde, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+defined+and+uniform+population+of+CNS+progenitors+and+neurons+from+mouse+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Generation of a defined and uniform population of CNS progenitors and neurons from mouse embryonic stem cells.</a> Nature Protocols. 2 (5), 1034-1043 (2007).</li>
<li>An, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell-derived+cranial+and+spinal+motor+neurons+reveal+proteostatic+differences+between+ALS+resistant+and+sensitive+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Stem cell-derived cranial and spinal motor neurons reveal proteostatic differences between ALS resistant and sensitive motor neurons.</a> eLife. 8, e44423(2019).</li>
<li>Huber, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+secreted+semaphorin+signaling+in+spinal+motor+axon+guidance%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for secreted semaphorin signaling in spinal motor axon guidance.</a> Neuron. 48 (6), 949-964 (2005).</li>
<li>Plachta, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+lectin+causing+the+degeneration+of+neuronal+processes+using+engineered+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Identification of a lectin causing the degeneration of neuronal processes using engineered embryonic stem cells.</a> Nature Neuroscience. 10 (6), 712-719 (2007).</li>
<li>Eide, L., McMurray, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+adult+mouse+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Culture of adult mouse neurons.</a> BioTechniques. 38 (1), 99-104 (2005).</li>
<li>Brewer, G. J., Torricelli, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+adult+neurons+and+neurospheres%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of adult neurons and neurospheres.</a> Nature Protocols. 2 (6), 1490-1498 (2007).</li>
<li>Seibenhener, M. L., Wotten, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+hippocampal+neurons+from+prenatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of hippocampal neurons from prenatal mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), (2012).</li>
<li>Hanson, M. G. Jr, Shen, S., Wiemelt, A. P., McMorris, F. A., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+AMP+elevation+is+sufficient+to+promote+the+survival+of+spinal+motor+neurons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Cyclic AMP elevation is sufficient to promote the survival of spinal motor neurons in vitro.</a> The Journal of Neuroscience. 18 (18), 7361-7371 (1998).</li>
<li>Lamas, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophic+requirements+of+human+motor+neurons+defined+using+amplified+and+purified+stem+cell-derived+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Neurotrophic requirements of human motor neurons defined using amplified and purified stem cell-derived cultures.</a> Plos One. 9 (10), (2014).</li>
<li>Mazzoni, E. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+binding+of+transcription+factors+to+cell-specific+enhancers+programs+motor+neuron+identity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Synergistic binding of transcription factors to cell-specific enhancers programs motor neuron identity.</a> Nature Neuroscience. 16 (9), 1219-1227 (2013).</li>
</ol>

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan etmezler.

Tarihsel olarak, CN3 ve/veya CN4 motor nöronlarının in vitro çalışmaları, ayrıştırılmış17,18,19,20,21, explant17,22,23,24,25,26gibi heterojen kültürlere güvenmiş v...

Birincil motor nöronların kültürü nöronal gelişim, fonksiyon ve eksojen strese yatkınlık çalışmasını sağlayan güçlü bir araçtır. Motor nöron kültürleri amiyotrofik lateral skleroz gibi nörodejeneratif hastalıkların çalışması için özellikle yararlıdır (ALS)1,2, olan hastalık mekanizmaları tamamen anlaşılamamıştır. İlginçtir, spinal motor nöronların önemli hücre ölümü rağmen (SMNs) hem ALS hastaları ve ALS model fareler, okülomotor nöronlarda hücre ölümü (CN3s) ve troklear nöronlar (CN4s) nispeten kıt1,3,4,5,6,7,8,9. Bu nedenle, CN3s/CN4'lerin ve Kobİ'lerin saf kültürlerinin karşılaştırmalı analizleri, göreceli kırılganlık altında yatan mekanizmalar hakkında önemli ipuçları sağlayabilir. Ne yazık ki, bu tür analizler için önemli bir engel bu motor nöronların saflaştırılmış kültürlerbüyümek için yetersizlik olmuştur.
Kobİ'lerin hayvan modellerinden arındırılması için birçok protokol tanımlanmıştır. Bu protokollerin çoğu yoğunluk gradyan santrifüj10,11,12 ve/ veya p75NTR-antikor tabanlı hücre sıralama kaydırma teknikleri13,14,15,16kullanın. Yoğunluk gradyan santrifüj ükemi diğer omurilik hücrelerine göre Daha büyük smn'lerden yararlanırken, p75NTR omurilikteki Kobİ'ler tarafından özel olarak ifade edilen ekstrasellüler bir proteindir. Yaklaşık% 100 saf SMN kültürleri biri veya her ikisi bu protokoller11,12,14tarafından oluşturulmuştur. Ancak, CN3s/CN4s p75NTRifade etmez, çünkü bu protokoller CN3/CN4 kültürleri üreten başarılı olmamıştır , ve diğer özel CN3/CN4 işaretleri tespit edilmemiştir. Ayrıca Kobİ'lerden daha küçüktürler ve bu nedenle boyuta göre izole etmek daha zordur. Bunun yerine, CN3s veya CN4s in vitro çalışmalar ayrışmış17dayanıyordu,18,19,20,21, explant17,22,23,24,25,26, ve dilim 27,28kültürler, heterojen hücre tipleri oluşan ve hiçbir protokoller için var olan birincil CN3'lerin veya CN4'lerin izolasyonu ve kültürü.
Burada, aynı embriyonik gün 11.5 (E11.5) IslMN:GFP transgenik fareler29 (Şekil 1, Şekil 2A)cn3'lerin, CN4'lerin ve Kobİ'lerin görselleştirilmesi, izolasyonu, arınması ve yetiştirilmesi için bir protokol açıklanmıştır. IslMN:GFP özellikle motor nöronları hücre zarına lokalize olan farnesile edilmiş gfp ile etiketler. Bu protokol, motor nöron hastalığında patolojik mekanizmaları açıklamak için birden fazla motor nöron türünün ve yaşla uyumlu karşılaştırmasının yapılmasını sağlar.

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 488-konjuge keçi anti-fare IgG (H + L)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11001</td><td>1:400</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594-konjuge F (ab ') 2 keçi anti-tavşan IgG (H + L)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11072</td><td>1:400</td></tr><tr><td>B27 Takviyesi (50x), serum içermeyen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSAria llu SORP Akış Sitometresi</td><td>BD Bioscience</td><td>- </td><td>Bu, 405, 488, 594 ve 640 nm lazerlerle donatılmış 4 lazer sistemine sahiptir.</td></tr><tr><td>BD Şahin 70 ve mu; m Naylon Hücre Süzgeçleri</td><td>CORNING</td><td>352350</td><td>FACS'tan önce ayrışan hücreleri filtrelemek için.</td></tr><tr><td>BD Falcon Geçmeli Kapaklı Yuvarlak Alt Test Tüpleri</td><td>CORNING</td><td>352054</td><td></td></tr><tr><td>BDNF Human</td><td>ProSpec-Tany TechnoGene, Ltd.</td><td>CYT-207</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Kültürü mikroplakası, 96 kuyulu, PS, F-dip (Baca Kuyusu)</td><td>Greiner Bio-One International</td><td>655090</td><td>Birden fazla 96 oyuklu yemek denedik ve bu, ICC sonrası kültür ve analizler için en iyisiydi</td></tr><tr><td>Mikroskopi için Dairesel Kapaklı Camlar</td><td>Karl Hecht & Assistent</td><td>1001/14</td><td>Alan geniş olduğu için (çap: 14 mm) bu lamel kullandık.</td></tr><tr><td>CNTF İnsan</td><td>ProSpec-Tany TechnoGene, Ltd.</td><td>CYT-272</td><td></td></tr><tr><td>Penicillium cyclopium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1530</td> CPA'dan siklopiazonik asit<td>. ER stres faktörlerinden biri.</td></tr><tr><td>4 & prime;, 6-diamidino-2-fenilinodol (DAPI)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td>DMSO</td></tr><tr><td>Dumont # 5 Forseps Inox Uç Boyutu 0,05 mm x 0,01 mm Biologie İpuçları</td><td>Roboz Cerrahi Alet</td><td>RS-5015</td><td></td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP25205</td><td></td></tr><tr><td>GDNF İnsan</td><td>ProSpec-Tany TechnoGene, Ltd.</td><td>CYT-305</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX takviyesi</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Hanks' Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14175-095</td><td></td></tr><tr><td>Hibernate E</td><td>BrainBits</td><td>HE</td><td></td></tr><tr><td>Hibernate E düşük floresan</td><td>BrainBits</td><td>HELF</td><td>Embriyonun GFP ekspresyonlarının gözlemlenmesini engelleyen floresan düşük olmalıdır.</td></tr><tr><td>At serumu, ısı inaktive edilmiş, Yeni Zelanda menşeli</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>26050-070</td><td></td></tr><tr><td>IBMX</td><td>Tocris Cookson</td><td>2845</td><td>İzobutilksantin</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23017-015</td><td></td></tr><tr><td>Leibovitz' s L15 orta Thermo</td><td>Fisher Scientific</td><td>11415064</td><td></td></tr><tr><td>2-Merkaptoetanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6250</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Diseksiyon Makası</td><td>Roboz Cerrahi Alet</td><td>RS-5913</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Bıçak 4.75" 1.7 mm x 27 mm bıçak</td><td>Roboz Cerrahi Alet</td><td>RS-6272</td><td></td></tr><tr><td>Moria Mini Delikli</td><td>Kaşık Güzel Bilim Araçları</td><td>10370-19</td><td></td></tr><tr><td>Nöronal sınıf III ve beta;-tubuline karşı fare monoklonal antikoru (TUBB3)</td><td>BioLegend</td><td>801202</td><td>1:500, TUJ1</td></tr><tr><td>Nikon Perfect Focus Eclipse Ti canlı hücre floresan mikroskobu ve Elements yazılımı</td><td></td> Nikon-Diferansiyel <td></td><td>girişim kontrast görüntüleri ve hücre kültürlerinin immünositokimya görüntüleri bu ekipmanlarla yakalandı</td></tr><tr><td>Nitrik Asit %90, Dumanlama (Sertifikalı ACS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A202-212</td><td>Lamelleri durulamak için</td></tr><tr><td>Olympus 1.7 mL Mikrotüpler, Clear</td><td>Genesee Scientific</td><td>22-281</td><td>Bunlar, bağlamda "1.7 mL mikrosantrifüj tüpleri" olarak tanımladığımız tüplerdir.</td></tr><tr><td>Papain Dissosiyasyon Sistemi</td><td>Worthington Biochemical Corp</td><td>LK003150</td><td>Papain solüsyonu ve alubumin-ovomukoid inhibitör solüsyonu bu kitten hazırlanır.</td></tr><tr><td>Penisilin-streptomisin (10.000 U/mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Poli D-lizin (PDL)</td><td>MilliporeSigma</td><td>A-003-E</td><td></td></tr><tr><td>Adacık1'e karşı tavşan monoklonal antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab109517</td><td>1:200</td></tr><tr><td>SMZ18 ve DS-Ri1 ile SMZ1500 zoom stereomikroskoplar Kamerayla</td><td>Nikon-Diseksiyon</td><td></td> <td>yapıldı ve bu floresan mikroskoplar altında diseke edilen embriyo ve dokuların görüntüleri alındı.</td></tr><tr><td>Sylgard 170 Siyah Silikon Kapsülleyici - A+B 0.9 kg kit</td><td>Dow Corning</td><td>1696157</td><td>Bu kiti kullanarak diseksiyon yemekleri yapıyoruz.</td></tr><tr><td>TC ile işlenmiş Tabaklar, 100 mm x 20 mm</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-202</td><td>Bu tabağı kullanarak diseksiyon tabakları yapıyoruz.</td></tr><tr><td>Tampon Pansuman Forseps 4.5" Tırtıklı 2.2 mm Uç Genişliği</td><td>Roboz Cerrahi Alet</td><td>RS-8100</td><td></td></tr><tr><td>LOGOQ e VET için Dönüştürücü</td><td>GE Healthcare</td><td>L8-18i-RS</td><td>Dişi farelerde ultrason için</td></tr><tr><td>Veteriner ultrason makinesi</td><td>GE Healthcare</td><td>LOGOQ e VET</td><td>Dişi farelerde ultrason için</td></tr><tr><td>Zeiss LSM 700 serisi lazer taramalı konfokal mikroskop ve Zen Yazılımı</td><td>Carl Zeiss</td><td>-</td><td>Bu ekipmanlar ile embriyonun konfokal görüntüsü alındı</td></tr></tbody></table>

prenatal islmn'den okülomotor, troklear ve spinal motor nöronların İzolasyon ve kültürü :gfp transgenik fareler

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

Okülomotor nöronlar (CN3s) ve troklear nöronlar (CN4s) spinal motor nöronlar (SMNs) ile karşılaştırıldığında amiyotrofik lateral skleroz (ALS) gibi dejeneratif motor nöron hastalıklarına karşı dikkate değer direnç gösterirler. Birincil fare CN3'leri, CN4'leri ve Kobİ'leri yalıtma ve kültür eve verme yeteneği, bu seçici güvenlik açığının altında yatan mekanizmaları incelemek için bir yaklaşım sağlayacaktır. Bugüne kadar, çoğu protokol deneysel sonuçların yorumlanması şaşırtmak heterojen hücre kültürleri kullanın. Karma hücre popülasyonları ile ilgili sorunları en aza indirmek için saf kültürler vazgeçilmezdir. Burada ilk protokol, embriyonik gün 11.5 (E11.5) IslMN:GFP transgenik fare embriyolarını kullanarak aynı embriyolardan SMN'lerin karşıtlarıyla birlikte CN3s/CN4'leri verimli bir şekilde nasıl arındırıp yetiştireceklerini ayrıntılı olarak açıklar. Protokol, doku diseksiyonu ve ayrışması, FACS tabanlı hücre izolasyonu ve CN3/CN4 ve SMN çekirdeklerinden gelen hücrelerin in vitro ekimi hakkında ayrıntılı bilgi sağlar. Bu protokol, mevcut protokollere yeni bir in vitro CN3/CN4 kültür sistemi ekler ve aynı zamanda karşılaştırma için saf bir tür ve yaşla eşleşen SMN kültürü sağlar. Motor nöronların morfolojik, hücresel, moleküler ve elektrofizyolojik özelliklerine odaklanan analizler bu kültür sisteminde uygulanabilir. Bu protokol motor nöron gelişimi, selektif güvenlik açığı ve hastalığı tanımlayan mekanizmaların araştırılmasını sağlayacaktır.

Bu protokolün amacı, motor nöron bozukluklarının altında yatan mekanizmaların karşılaştırmalı analizini sağlamak için hem birincil CN3/CN4'leri hem de Kobİ'leri yüksek oranda arındırmak ve kültürü geliştirmektir (genel bakış için Şekil 1 ve Şekil 2'ye bakınız).
Nöronlar başarıyla izole edildikten ve kültürde büyüdükten sonra, neredeyse saf primer CN3/CN4 ve SMN kültürle...

Bu çalışma, primer okülomotor, troklear ve spinal motor nöronların homojen hücre kültürlerini ortaya çıkarmak için bir protokol sunmaktadır. Bu kültürler, oküler ve spinal motor nöronların morfolojik, hücresel, moleküler ve elektrofizyolojik özelliklerinin karşılaştırmalı analizleri için kullanılabilir.

Prenatal Islmn'den Okülomotor, Troklear ve Spinal Motor Nöronların İzolasyon ve Kültürü :GFP Transgenik Fareler

Oculomotor neurons (CN3s) and trochlear neurons (CN4s) exhibit remarkable resistance to degenerative motor neuron diseases such as amyotrophic lateral ...

Bu aynı anda ve verimli bir şekilde arındırmak ve embriyonik farelerden kültür birincil oküler ve spinal motor nöronlar için ilk protokoldür. Motor nöron hastalığının altında yatan mekanizmaların incelenmesini sağlar. Bu protokol mevcut sistemlere bir in vitro okülomotor kültür bileşeni ekler ve karşılaştırma için saf türler ve yaş eşleşen spinal motor nöron kültürleri sağlar.Amiyotrofik lateral sklerozda spinal motor nöronlar dejenere olurken okülomotor nöronlar nispeten korunur. Bu kültürlerin karşılaştırılması hastalık mekanizması ve tedavisi hakkında bilgi verebilir. Bu yöntem motor nöron gelişimi, hastalık ve selektif kırılganlık altında yatan mekanizmaların çalışmalarını kolaylaştıracaktır.Kültür sistemimiz motor nöron morfolojisi, moleküler biyoloji ve elektrofizyolojinin karakterizasyonuna olanak sağlar. Bu teknikte yeni olanlar için çok fazla pratik yapmanızı öneririz. Diseksiyon teknik olarak zor olabilir ve birincil kültür için yeterli nöron elde etmek için birden fazla dissektör gerekli olabilir.Döllenmeden yaklaşık 11,5 gün sonra hamile bir fareden Adacık1 EGF pozitif embriyolar alarak başlayın. Sprey iyice etanol ile karın ve steril mikrodiseksiyon makas ve başparmak pansuman forceps ile rahim kaldırmak. Kısaca steril PBS rahim yıkayın.Daha sonra önceden soğutulmuş steril PBS ile dolu diseksiyonu plakasına aktarın. Mikroskobun parlak ışığı altında, mikrodiseksiyon makas, başparmak giydirme forceps ve Dumont 5 cımbız kullanarak dikkatle rahim embriyoları çıkarın. Sonra steril bir Moria mini delikli kaşık önceden soğutulmuş hazırda bekletme E düşük floresan orta 1X V27 ile desteklenen dolu 24-well plaka ayrı bir kuyuya her embriyo aktarmak için kullanın.Plakayı buzda tutarken, bir embriyoyu steril bir diseksiyon plakasına aktarın ve tamamen buz gibi steril Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisi veya HBSS ile kaplayın. Orta beyne zarar vermeden embriyonun yüzünü ve kuyruğunu çıkarmak için cımbız kullanın. Daha sonra embriyoyu, mikroskobun ön ünü işaret eden uzuvlar ve kuyruklarla yatkın bir şekilde yerleştirin.Küçük bir açıklık oluşturmak için dördüncü ventrikül çatı sını kesmek için cımbız kullanın. Dördüncü ventrikül ve çatı arasında oluşturulan alana cımbız kanca için bu açıklığı kullanın. Kortekse ve lateral zemin plaka ve motor kolon embriyo rostral dorsal yüzeyi boyunca diseksiyon.Daha sonra GFP pozitif CN3 ve CN4 çekirdeklerini ortaya çıkarmak için incelenmiş dokuyu açık bir kitap şeklinde açın. Ventral orta beyni embriyodan dikkatlice ayırın ve cımbız ve mikrodiseskes bıçağı yla meningeal dokuyu çıkarın. İki taraflı GFP pozitif CN3 ve CN4 çekirdeklerini zemin plakasından ve diğer GFP pozitif çevre dokulardan ayırın ve nöronlara dokunmaktan veya zarar vermemeye özen talın.Ayrı CN3 ve CN4 çekirdekleri topluyorsanız, bu iki çekirdeğin orta beyin boyunca kesilmiş ve minimal HBSS ile diseksiyonlu ventral orta beyin dokusu toplamak için bir P1000 pipet kullanın. Diseksiyon ortamı ile doldurulmuş etiketli 1,7 mililitrelik mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin ve tüpü parçalanmaya kadar buzüzerinde saklayın. Toplam sayı deneysel gereksinimleri karşılayana kadar aynı tüpteki ek embriyolardan ventral orta beyinleri çekmeye devam edin.Ventral omuriliği incelemek için, embriyoyu mikroskobun ön yüzüne bakacak şekilde eğilimli tutun. Cımbız bir çift ile tutun ve dördüncü ventrikül açılmamış kaudal kısmına diğer çiftin ucunu takın. Embriyonun tüm rostrokaudal ölçüde arka beyin ve omurilik dorsally geri kalanını açın.Dördüncü ventrikül başlayan ve makas olarak forseps kullanarak kaudal omuriliğin merkezi kanal doğru çalışan dorsal doku kesin. Sonra cımbız bir set ile embriyo tutun ve diğer çifti ile her iki tarafta dorsal doku flep kapalı çimdik. Her iki tarafta testere benzeri hareketlerle ventral omuriliği kaldırarak GFP pozitif SMN'nin hemen altına delmek için mikrodiseskes bıçağını kullanarak ventral omuriliği çıkarın.Alt ekstremitenin üst sınırında omuriliği enine kes ve servikal lomber kısmını çıkarın. İlk GFP pozitif ön boynuz projelerinin yer aldığı C1'in üzerinde enine doğrudan kesin. Ventral omurilik dorsal tarafını yukarı yerleştirin ve gfp pozitif SMN sütunları arasında gfp negatif dokuya bir çift cımbız la basarak tutun.Mikrodiseskes bıçağı ile GFP pozitif SMN sütunun her iki tarafını keserek kalan ekli mezenkim, DRG'leri ve dorsal omuriliği çıkarın. En az HBSS ile diseksiyonventral omurilik dokusu toplamak ve diseksiyon ortamı ile dolu etiketli 1.7 mililitre mikrosantrifüj tüp yerleştirmek için bir P1000 pipet kullanın. Dissociation kadar buz üzerinde saklayın ve aynı tüp içinde ek embriyolardan ventral omurilik çekerek devam edin.Diseksiyon doku örnekleri ile mikrosantrifüj tüplerin her birine uygun miktarda papain çözeltisi ekleyin. Tüpleri 37 derecede 30 dakika boyunca parmak la çalarak her 10 dakikada bir tüplerini çalkalayın. Kuluçkadan sonra, her süspansiyonu sekiz kez P200 pipetle triturate ve santrifüj edin, 5 dakika boyunca 300 kez g'de santrifüj edin.Hücre peletlerini uygun albumin ovomucoid inhibitör çözeltisi hacmi ile hafifçe yukarı ve aşağı boruile tutarak yeniden askıya alın. Santrifüjleri tekrarlayın. Sonra dikkatle bir P1000 pipet ile supernatant çıkarın.Diseksiyon ortamının uygun hacmindeki hücreleri yeniden askıya alın. Süspansiyonları 70 mikrometrelik bir hücre süzgecinden geçirin. Ardından, CN3/CN4 ve SMN'den alınan GFP pozitif hücrelerini yalıtmak için FACS sıralamasını kullanın.Motor nöron kültürü ortamı ile izole hücre süspansiyonları seyreltmek uygun yoğunlukları için 37 derece santigrat önceden ısıtılır ve bir PDL laminin kaplı 96-iyi plaka bir kuyuya süspansiyon 200 mikrolitre ekleyin. Kültür 37 derece santigrat ve% 5 karbondioksit inkübatör motor nöron kültür ortamı her beş günde bir yenilemek için emin nöronlar. Başarılı bir şekilde izole edilen nöronlar kültürde yetiştirildiğinde, neredeyse saf primer CN3/CN4 ve SMN kültürleri elde edildi ve 14 gün boyunca in vitro olarak sürdürüldü.Motor nöron belirteci Islet1 ve nöronal marker TUJ1 ile immünositokimya ile değerlendirildiğinde cn3/CN4 için %93.5, SMN için %86.7 idi. Saflıklar büyük ölçüde embriyoların yaşına ve FACS sırasında GFP kapıları için uygun eşiklerin belirlenmesine dayanıyordu. E10.5 embriyolarından izole edilen nöronların saflığı E11.5 embriyolarınınkilerle karşılaştırılabilir.Ancak E13.5 embriyoları kullanıldığında saflık önemli ölçüde azalmıştır. Primer CN3/CN4'lerin ve SMN'lerin endoplazmik retikulum streslerine farklı yanıtlar gösterilip gösterilemedik lerini belirlemek için hücreler iki gün in vitro olarak değişen siklopiazonik asit veya CPA konsantrasyonları ile tedavi edildi ve üç gün sonra immünositokimyanın sağkalım oranlarını değerlendirmesi için sabitlendi. Her örnekteki canlı nöronların sayısı sayıldı ve sağkalım oranları hesaplandı.CN3/CN4 monokültürleri SMN monokültürlerine göre EBM tedavisine göre anlamlı olarak daha dirençliydi. Bu prosedürü takiben, motor nöronları incelemek için birçok ek yöntem yapılabilir. Birkaç örnek elektrofizyoloji, hücre biyolojisi, transkripsiyon veya kromatin erişilebilirlik çalışmaları içerir.

isolation-culture-oculomotor-trochlear-spinal-motor-neurons-from

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Omurilik fare embriyonik motor nöronlar izole alternatif bir yol tarif edilir. Bu yöntem, lektin düşük afinite sinir büyüme faktörü reseptör p75NTR bağlamak için aslında dikkate alır. Bu lektin tabanlı preplating p75NTR karşı spesifik antikor ile benzer bir arınma sağlar.

Fare Embriyonik motor nöronlar lektin tabanlı İzolasyon ve Kültür

Nöral tüpten embriyonik nöral krest izolasyonu kullanımını...

Embriyonik Mürin Nöral Tüp çıkan sinirsel Crest Hücre İzolasyonu ve Kültür

Video, transgenik bir fare embriyosundan okülomotor, troklear ve spinal motor nöronların izolasyonunu göstermektedir. Embriyo, kolay görselleştirme ve tanımlama için yeşil bir floresan proteini (GFP) ile etiketlenmiş motor nöronları eksprese eder. Motor nöronlar bir floresan mikroskobu altında cerrahi olarak izole edilir ve bir kültür ortamında tutulur.

Bir Fare Embriyosundan Okülomotor, Troklear ve Spinal Motor Nöronların İzolasyonu ve Kültürü

Bu video, transgenik fare embriyolarından alınan okülomotor dilimlerin ex vivo kültürünü ve görüntülemesini göstermektedir. Embriyolar izole edilir ve agaroza gömülür. Bir vibratom kullanılarak, okülomotor çekirdekleri ve gözleri içeren dilimler elde edilir. Dilimler kültürde tutulur ve bir floresan mikroskobu kullanılarak görüntülenir.

Transgenik Fare Embriyolarından Okülomotor Kesitlerin Ex Vivo Kültürü ve Görüntülenmesi

Parkinson hastalığı sırasında orta beyin dopaminerjik nöronlarının dejenerasyonunun nedenleri tam olarak anlaşılamamıştır. Hücresel kültür sistemleri, bu nöronların nörofizyolojik özelliklerinin incelenmesi için önemli bir araç sağlar. Burada, nörodejenerasyonun in vitro modellemesi için kullanılabilecek optimize edilmiş bir protokol sunuyoruz.

Embriyonik Kemirgen Brain itibaren İlköğretim Mesensefalik dopaminerjik Nöronlar İzolasyonu, Kültür ve Uzun Vadeli Bakım

Bu çalışma, WT yenidoğan farelerinden nöronların izole edilmesi için bir teknik sunmaktadır. Yenidoğan faresinden omuriliğin dikkatli bir şekilde parçalanmasını ve bunu takiben nöronların omurilik dokusundan mekanik ve enzimatik bölünme yoluyla ayrılmasını gerektirir.

Yenidoğan Faresinden İzole Edilen Spinal Kord Nöronları İzolasyonu ve Kültürü

Birincil fare oligodendrocytes, immunomagnetic izolasyonu vitro kültür için hücreleri hızlı ve spesifik yalıtım sağlar açıklar.

Fare birincil Oligodendrocytes hızlı ve spesifik Immunomagnetic izolasyonu

Bu teknik amacı birincil motoneurons (MNs) fare omurilik üzerinden zenginleştirilmiş kültürünün hazırlamaktır. Tarif MN hastalıklar neden mutasyonlar sonuçlarını değerlendirmek için biz burada bu yalıtım MNs ve onların transfection magnetofection tarafından izole.

Fare birincil Motoneurons Transfecting tarafından Charcot Marie Tooth hastalığı Vitro modelleme

Burada, E13 fare embriyo ganglionic itibar bir roman mikrocerrahi teknik nöral kök hücrelerin izolasyonu için tanıtmak.

Yalıtım ve kültür embriyonik fare nöral kök hücrelerin

Bir ex vivo dilim tahlil gerçek zamanlı olarak görüntülenmiş olmak okülomotor sinir büyüme sağlar. Dilim E 10.5 ISLMN katıştırarak oluşturulur: agarose 'de Gfp embriyolar, bir vibratom üzerinde dilimleme, ve bir aşama-üst kuluçç büyüyen. Axon rehberlik yollarının rolü, kültür ortamına inhibitörler ekleyerek değerlendirilir.

Olomotor sinir gelişimi için zaman aşımı görüntüleme için embriyonik GFP-Ifade fareler dan ex vivo okülomotor dilim kültürü

Chick siliker gangliyonu (CG) parasempatik sinir sisteminin bir parçasıdır. Civciv CG nöronların nöronal kültürlersinir kas etkileşimleri çalışmada etkili hücre modelleri olduğu gösterilmiştir. Biz diseksiyon, dissosilasyon ve civciv embriyolarından CG nöronların in vitro kültür için ayrıntılı bir protokol açıklar.

Chick Ciliary Ganglion Nöronların İzolasyon ve Kültür

Öğrenin, embriyonik farelerden oküler ve spinal motor nöronları izole etme ve kültürleme yöntemini. Bu teknik, motor nöron hastalıklarının mekanizmalarını ve seçici hassasiyetini karşılaştırmalı olarak incelemeyi sağlar.

Prenatal Isl^mn'den Okülomotor, Troklear ve Spinal Motor Nöronların İzolasyon ve Kültürü :GFP Transgenik Fareler

Daha fazla video keşfet