Name: İnsan Dışkı Örneklerinde Campylobacter Jejuninin Ulaşım Medyasında Tespit ve Sağkalım Sınırını Belirlemek Için Kültür Yöntemleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-10T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Keşfedin, insan dışkı örneklerinde Campylobacter jejuni tespiti için kültür yöntemleri ve taşıma medyasında sağkalım limitini belirleme teknikleri. Bu yöntem, immunoassay ile geleneksel yöntemleri karşılaştırarak klinik tanı kapasitesini artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışmalar TECHLAB, Inc. tarafından finanse edilmiştir.

1. Contrived İnsan Dışkı Örneklericampylobacter Numaralandırma
NOT: Tüm adımlar steril teknik ve malzemeler dezenfekte laminar akış güvenlik kaputu içinde tek kullanımlık koruyucu levha üzerinde yapılır.
DİkKAT: Canlı Campylobacter bulaşıcı dır ve ishal de dahil olmak üzere hastalığa neden olabilir. Bakterileri kullanırken eldiven, laboratuvar önlüğü ve güvenlik gözlüğü takın. Ağız pipet etmeyin. Bakterilerle temas eden tüm maddeleri uygun biyolojik tehlike kaplarında atın.
<ol><li>Bakterilerin stok kültürünün büyümesi<ol>
<li>C. jejuni (ATCC-33560) veya C. coli (ATCC 33559)(Malzeme Tablosu)suşlarını kurutulmuş veya dondurulmuş kültürler olarak elde edin ve üreticinin talimatlarına göre bakterileri rehydrate veya eritin. Rehydrated bakterileri campylobacter-spesifikagar plakasına koyve kültürü başlatın. Mikroaerobik atmosfer gaz üreten poşet içeren anaerobik bir kavanozda 37 °C'de plaka48 h kuluçka.</li>
		<li>Ertesi gün, beyin-kalp infüzyonu 100 mL hazırlamak (BHI) büyüme suyu içeren 0.5% triptikal, 0.5% proteaz pepton, 0.0125% sodyum pirüuvat, ve 0.0125% sodyum bisülfit.</li>
		<li>Önceden gevşek şişe kapsayan ve bir mikroaeroofilik ortam üretecek bir poşet ile anaerobik bir kavanoza yerleştirerek BHI suyu azaltmak. Suyu bir gecede 37 °C'de önceden azaltın. Benzer şekilde, 1.1.10 ve 1.2.2 adımlarında koloni sayımları için kullanılacak Campylobacter-spesifikplakaları önceden küçültün.</li>
		<li>Campylobacter havaya duyarlı olduğundan, et suyu aşılamadan önce tüm malzemeleri toplamak ve kültürleri işleme sırasında aylaklık etmeyin. Aşılamaya hazır olduğunuzda, fetal büyükbaş serumu (FBS) toplam hacmin %4'üne kadar azaltılmış et suyuna ekleyin. 600 nm (OD600)optik yoğunluk ölçümlerinde boş olarak hizmet vermek için önceden küçültülmüş et suyu 1 mL koruyun.</li>
		<li>FBS içeren önceden azaltılmış suyu 3 mL çıkarın ve Campylobacter kültürünü içeren başlangıç plakası kazımak için et suyu kullanın. Plakayı bir aşı halkası ile hafifçe kazıyın ve bakteriyel bulamacı steril bir tüpe aktarın.</li>
		<li>100 mL önceden küçültülmüş suyu yaklaşık 3 mL bakteriyel bulamaç ile aşılayın ve gaz üreten poşet içeren bir anaerobik kavanozda 37 °C'de 115 rpm'de orta sallayarak inkübatör.</li>
		<li>OD600'debakteri spektrofotometrik olarak bulanıklık la büyümesini izleyin. Ayrılmış suyu boş olarak kullanın. Anaerobik kavanoz açılırsa, gaz üreten poşeti değiştirin.</li>
		<li>48−72 h'den veya OD600 değeri ~0,4'e ulaşmadan önce et suyu kuluçkasını durdurun. NOT: Bu OD600 genellikle 107-10 8 CFU/mL eşittir. Tipik sonuçlar için Tablo 1'e bakın.</li>
		<li>Saf stok kültüründe bakteri sayısını belirlemek için, 900 μL seyreltme tamponu(Malzeme Tablosu)içinde 100 μL'lik 8 adet 10 kat seyreltme serisi gerçekleştirin. 100 μL'lik et suyu ilk seyreltme için çıkarıldıktan sonra, şişeyi taze gaz üreten poşetle anaerobik kavanoza geri döndürün.</li>
		<li>10-5 ila 10-7 seyreltmelerin 100 μL'sini, 1.1.3 adımdan çoğaltılmış önceden indirgenmiş Campylobacter-spesifikplakalara yaymak için steril kaplama boncukları kullanın. Kullanılan seyreltme li etiket plakaları, gaz üreten poşetli ikinci bir anaerobik kavanoza koyun ve 37 °C'de 48−72 saat kuluçkaya yatırın. NOT: Seyreltme şeması ve kolonifotoğrafları için Şekil 1 ve Şekil 2'ye bakınız.</li>
		<li>Büyümeden sonra, saymak için 30−300 koloniler arasında plaka seçin. Denklem 1'i kullanarak stok suyu kültürünün CFU/mL'sini belirlemek için sayımları yararlanın: Stoktaki CFU/mL = Seçilen (yinelenen) analitik plakalar üzerindeki kolonilerin ortalama #ı ÷ (mL kaplamalı x plakaseyreltme) [Denklem 1] 
</li>
	</ol></li>
	<li>Contrived klinik dışkı örneklerinin hazırlanması ve numaralandırması<ol>
<li>Analitik sayımlar için plakalar adım 1.1.10'da hazırlandıktan hemen sonra, stok suyu ve Campylobacter-negatif dışkı havuzundan (NFP) 10 seri 2 kat seyreltme ler hazırlayarak ikinci bir stok suyu seyreltme seti yapın. Örneğin, eşit hacimlerde et suyu ve NFP'yi (örn. 0,1 mL) karıştırarak ilk seyreltmeyi hazırlayın ve belirlenen bir et suyu ve NFP karışımını eşit belirlenmiş hacimli NFP ile bir tüpe aktararak sonraki seyreltmeleri yapın. Olmayan Campylobacter kolonileri belirlemeye yardımcı olmak için dışkı havuzuna eklenen hiçbir Campylobacter içeren et suyu ile bir kontrol plakası ekleyin.<ol>
<li>NFP'yi daha önce test edilmiş ve Campylobacterenzim immünoassay ve 16S rRNA qPCR gibi yöntemlerle negatif olarak test edilmiş, ishal edilen hasta gözetim örneklerinden veya sağlıklı donör dışkılarından yapın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>T-streak 10 μL her Campylobacter/ dışkı seyreltme çoğaltılmış önceden indirgenmiş Campylobacter-özel agar plakaları üzerinde. Plakaları gaz üreten bir poşetle anaerobik kavanoza yerleştirin ve 37 °C'de 48 ± 2 saat boyunca kuluçkaya yatırın.</li>
		<li>Saf Campylobacter kültürlerinden benzer koloniler için çizgili plakaları görsel olarak inceleyin. NOT: Üçüncü çeyrek genellikle bunların bulunacağı yerdir. Seyreltme şeması ve koloni boyutu, renk ve morfolojigörüntüleri için Şekil 1 ve Şekil 2'ye bakınız.</li>
		<li>Koloniler ve Gram lekesi gibi birden fazla Campylobacterseçin. Bir yağ daldırma lens ile mikroskopi kullanarak, gram-negatif kavisli, spiral veya puro şeklinde küçük bakteriler için ince çizgili bir alan incelemek. NOT: Campylobacter Gram-negatif ve bir karşı leke olarak temel fuşin gerektirir (tipik safranin yerine) doğru görselleştirilmesi için. Klasik martı kanatlı bakteriler görülebilir ama bir gereklilik değildir. Temsili mikrograf için Şekil 2'ye bakınız.</li>
		<li>Belirli bir seyreltme de yinelenen plakalar biri 1 veya daha fazla Campylobacter kolonileri mevcut varsa, bu seyreltme dışkı kültürü olumlu düşünün.</li>
		<li>Görünür bir Campylobacteriçeren son seyreltme düşünün -gram-negatif koloni gibi kültür algılama sınırı. Kontrived klinik dışkı örneğinde pozitif seyreltmenin CFU/mL'sini hesaplamak için Denklem 2'yi kullanın: Dışkı örneğinde CFU/mL = Analitik CFU/mL ÷ Son pozitif koloni ile seyreltme [Denklem 2] NOT: Tipik sonuçlar için Tablo 2'ye bakınız.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Ulaşım Medyasında Depolanan Campylobacter'in Canlılık Tayini
<ol><li>Mix 1 mL Campylobacter et suyu kültürü (adım 1.1.8) NFP 1 mL ile ve NFP 10 yinelenen iki kat seri seyreltme hazırlamak. Her seyreltme daha fazla seyreltmek için Cary-Blair medyasında 1:4 ilave, tıpkı taşıma medyasında hazırlanan bir klinik numunenin tedavi edilmesi gibi.</li>
	<li>Cary-Blair ortamlarında 20 seyreltme tüpünü ve negatif kontrolü 2−8 °C'de 96 saat boyunca saklayın ve sıfır zamanda ve her 24 saatte bir meydana gelen her seyreltme kolonisini depolayın. Koloni sayma için, her seyreltme koloni sayma için et suyu örnek: dışkı tüpleri ve kurulum dışkı kültürü, yinelenen.</li>
	<li>Her gün 1.1.9−1.2.7 adımlarında açıklandığı gibi, Campylobacter-selektif agar ve kuluçka 37 °C'de dışkı seyreltmelerinin 10 μL porsiyonlarını 48 saat boyunca tamamlayın.</li>
	<li>Yukarıda açıklandığı gibi orijinal bakteri stokunun (adım 1.1.8 veya taze olarak yetiştirilen bir et suyu stokundan) eşzamanlı analitik plaka sayımıyapın (adım 1.1.9−1.1.11) gerçekleştirin. Orijinal bakteri stokunun CFU/mL'sini(Denklem 1)hesaplayın ve taşıma ortamı dışkı örneğindeki bakterilerin konsantrasyonunu ve seyreltmelerini hesaplayın(Denklem 2).</li>
</ol>3. Kültür Dışı Kültür Sonuçlarının Doğrulanması Nasiması
<ol><li>En az yanlış pozitif sonuçlar12 veren bir enzim immünoassay (EIA) kullanın ve kültür sonuçlarını doğrulamak için paket ekleme talimatlarına göre gerçekleştirin.</li>
	<li>Campylobacter türlerinin geniş bir yelpazede 16S rRNA geni veya diğer gen tespit edebilirsiniz moleküler bir titre kullanabilirsiniz13. Moleküler testin C. upsaliensis veya C. lari gibi standart antibiyotik içeren agar14'tekötü büyüyen türlerle reaksiyona girer olduğunu doğrulayın. Dışkı örneklerinden DNA çıkarma ve testi gerçekleştirmek için üreticinin talimatlarına uyun. NOT: 16S amplicon çift yönlü DNA sıralaması olumlu bir örnek campylobacter türünü doğrulamak için kullanılabilir. Türlere özgü PCR (hedef genler için Tablo 3'e bakınız) ayrık veya pozitif örneklerde bulunan türleri tanımlamak için de kullanılabilir15.</li>
</ol>

<ol><li>CDC. Annual Summaries of Foodborne Outbreaks. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/fdoss/annual-reports/index.html">https://www.cdc.gov/fdoss/annual-reports/index.html</a> (2018).</li>
<li>Kaakoush, N. O., Castaño-Rodríguez, N., Mitchell, H. M., Man, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Epidemiology+of+Campylobacter+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Global Epidemiology of Campylobacter Infection.</a> Clinical Microbiology Reviews. 28 (3), 687-720 (2015).</li>
<li>Pitkanen, T. a, H, M. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPitkanen%2C+Ta+%22Global+Water+Pathogen+Project%22">Global Water Pathogen Project</a>. Rose, J. B., Jimenez-Cisneros, B. , UNESCO (2017).</li>
<li>Fitzgerald, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicenter+Evaluation+of+Clinical+Diagnostic+Methods+for+Detection+and+Isolation+of+Campylobacter+spp.+from+Stool%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Multicenter Evaluation of Clinical Diagnostic Methods for Detection and Isolation of Campylobacter spp. from Stool.</a> Journal of Clinical Microbiology. 54 (5), 1209-1215 (2016).</li>
<li>Kirkpatrick, B. D., Tribble, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+human+Campylobacter+jejuni+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Update on human Campylobacter jejuni infections.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 27 (1), 1-7 (2011).</li>
<li>CDC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+Trends+of+Infection+with+Pathogens+Transmitted+Commonly+Through+Food+-+Foodborne+Diseases+Active+Surveillance+Network%2C+10+U.S.+Sites%2C+2006-2013%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Incidence and Trends of Infection with Pathogens Transmitted Commonly Through Food - Foodborne Diseases Active Surveillance Network, 10 U.S. Sites, 2006-2013.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 63, 328-332 (2014).</li>
<li>Jaime, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Campylobacter+upsaliensis%3A+Another+Pathogen+for+Consideration+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Campylobacter upsaliensis: Another Pathogen for Consideration in the United States.</a> Clinical Infectious Diseases. 34 (11), 59-60 (2002).</li>
<li>Bullman, S., O'Leary, J., Corcoran, D., Sleator, R., Lucey, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular-based+detection+of+non-culturable+and+emerging+campylobacteria+in+patients+preseting+with+gastroenteritis%5BTitle%5D)+AND+%22Epidemiology+and+Infection%22%5BJournal%5D)">Molecular-based detection of non-culturable and emerging campylobacteria in patients preseting with gastroenteritis.</a> Epidemiology and Infection. 140, 684-688 (2012).</li>
<li>Giltner, C. L., Saeki, S., Bobenchik, A. M., Humphries, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Detection+of+Campylobacter+Antigen+by+Enzyme+Immunoassay+Leads+to+Increased+Positivity+Rates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Rapid Detection of Campylobacter Antigen by Enzyme Immunoassay Leads to Increased Positivity Rates.</a> Journal of Clinical Microbiology. 51 (2), 618-620 (2013).</li>
<li>M'ikanatha, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+stool+specimens+for+Campylobacter+spp.%2C+Pennsylvania%2C+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Emerging+Infectious+Disease%22%5BJournal%5D)">Culturing stool specimens for Campylobacter spp., Pennsylvania, USA.</a> Emerging Infectious Disease. 18, 484-487 (2012).</li>
<li>Al Amri, A., Senok, A. C., Ismaeel, A. Y., Al-Mahmeed, A. E., Botta, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+PCR+for+direct+identification+of+Campylobacter+spp.+in+human+and+chicken+stools%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Multiplex PCR for direct identification of Campylobacter spp. in human and chicken stools.</a> Journal of Medical Microbiology. 56 (10), 1350-1355 (2007).</li>
<li>Buss, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Campylobacter+culture+fails+to+correctly+detect+Campylobacter+in+30%25+of+positive+patient+stool+specimens+compared+to+non-cultural+methods%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Clinical+Microbiology+%26+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Campylobacter culture fails to correctly detect Campylobacter in 30% of positive patient stool specimens compared to non-cultural methods.</a> European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 38, 1087-1093 (2019).</li>
<li>Wohlwend, N., Tiermann, S., Risch, L., Risch, M., Bodmer, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+Multiplex+Real-Time+PCR+Assay+for+Detecting+Major+Bacterial+Enteric+Pathogens+in+Fecal+Specimens%3A+Intestinal+Inflammation+and+Bacterial+Load+Are+Correlated+in+Campylobacter+Infections%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a Multiplex Real-Time PCR Assay for Detecting Major Bacterial Enteric Pathogens in Fecal Specimens: Intestinal Inflammation and Bacterial Load Are Correlated in Campylobacter Infections.</a> Journal of Clinical Microbiology. 54 (9), 2262-2266 (2016).</li>
<li>Couturier, B. A., Hale, D. C., Couturier, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+Campylobacter+upsaliensis+with+Persistent+Bloody+Diarrhea%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Association of Campylobacter upsaliensis with Persistent Bloody Diarrhea.</a> Journal of Clinical Microbiology. 50 (11), 3792-3794 (2012).</li>
<li>Chaban, B., Musil, K. M., Himsworth, C. G., Hill, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+cpn60-Based+Real-Time+Quantitative+PCR+Assays+for+the+Detection+of+14+Campylobacter+Species+and+Application+to+Screening+of+Canine+Fecal+Samples%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Development of cpn60-Based Real-Time Quantitative PCR Assays for the Detection of 14 Campylobacter Species and Application to Screening of Canine Fecal Samples.</a> Applied and Environmental Microbiology. 75, 3055-3061 (2009).</li>
<li>Allos, B., Blaser, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAllos%2C+B+%22Mandell%2C+Douglas%2C+and+Bennett%27s+Principles+and+Practice+of+Infectious+Diseases%2C+7th+ed%22">Mandell, Douglas, and Bennett's Principles and Practice of Infectious Diseases, 7th ed</a>. Mandell, G. L., Bennett, J. E., Dolin, R. , Churchill Livingstone. 2793-2802 (2009).</li>
<li>Anderson, N. W., Buchan, B. W., Ledeboer, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+BD+MAX+Enteric+Bacterial+Panel+to+Routine+Culture+Methods+for+Detection+of+Campylobacter%2C+Enterohemorrhagic+Escherichia+coli+%28O157%29%2C+Salmonella%2C+and+Shigella+Isolates+in+Preserved+Stool+Specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Comparison of the BD MAX Enteric Bacterial Panel to Routine Culture Methods for Detection of Campylobacter, Enterohemorrhagic Escherichia coli (O157), Salmonella, and Shigella Isolates in Preserved Stool Specimens.</a> Journal of Clinical Microbiology. 52 (4), 1222-1224 (2014).</li>
<li>Wasfy, M., Oyofo, B., Elgindy, A., Churilla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+preservation+media+for+storage+of+stool+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Comparison of preservation media for storage of stool samples.</a> Journal of Clinical Microbiology. 33 (8), 2176-2178 (1995).</li>
<li>Bessède, E., Delcamp, A., Sifre, E., Buissonniere, A., Mégraud, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Methods+for+Detection+of+Campylobacters+in+Stool+Samples+in+Comparison+to+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">New Methods for Detection of Campylobacters in Stool Samples in Comparison to Culture.</a> Journal of Clinical Microbiology. 49 (3), 941-944 (2011).</li>
<li>Bessède, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+Diagnostic+Accuracy+of+Two+Immunochromatographic+Tests+Detecting+Campylobacter+in+Stools+and+Their+Role+in+Campylobacter+Infection+Diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the Diagnostic Accuracy of Two Immunochromatographic Tests Detecting Campylobacter in Stools and Their Role in Campylobacter Infection Diagnosis.</a> Journal of Clinical Microbiology. 56 (4), (2018).</li>
<li>Shane, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectious+Diseases+Society+of+America+Clinical+Practice+Guidelines+for+the+Diagnosis+and+Management+of+Infectious+Diarrhea%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Infectious Diseases Society of America Clinical Practice Guidelines for the Diagnosis and Management of Infectious Diarrhea.</a> Clinical Infectious Diseases. 65 (12), 1963-1973 (2017).</li>
<li>Toledo, Z., Simaluiza, R. J., Astudillo, X., Fernández, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+and+antimicrobial+susceptibility+of+thermophilic+Campylobacter+species+isolated+from+healthy+children+attending+municipal+care+centers+in+Southern+Ecuador%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+do+Instituto+de+Medicina+Tropical+de+Sao+Paulo%22%5BJournal%5D)">Occurrence and antimicrobial susceptibility of thermophilic Campylobacter species isolated from healthy children attending municipal care centers in Southern Ecuador.</a> Revista do Instituto de Medicina Tropical de Sao Paulo. 59, 77-77 (2017).</li>
<li>Lee, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symptomatic+and+asymptomatic+Campylobacter+infections+associated+with+reduced+growth+in+Peruvian+children%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">Symptomatic and asymptomatic Campylobacter infections associated with reduced growth in Peruvian children.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 7 (1), 2036(2013).</li>
</ol>

Yazarlar TECHLAB, Inc bu makalede bir karşılaştırıcı olarak kullanılan QUIK CHEK™ kiti üreten çalışanlarıdır.

Burada açıklanan kültür yöntemleri basit, yaygın olarak kullanılan teknikler ve malzemelerin çoğulaboratuvar10mevcuttur üzerine inşa edilmiştir. Dışkı kültürleri için klinik olarak ilgili bir algılama eşiği hakkında yeni bilgiler sağlayan analitik ve contrived örneklerin birleşimidir. Ayrıca, 5 ayrı tahlil ile kültür sonuçlarının karara Campylobacter dışkı kültürünün hasta örneklerinin önemli bir bölümünü yanlış tanımladığı vardığı sonuçları güçlendirir. ÇED ve moleküler tahliller kontrol ler olarak yararlıdır, çünkü her biri farklı bir ilkeye (antikor ve DNA amplifikasyonu ile antijen etkileşimi) dayanır ve daha da önemlisi bakterilerin canlılığına güvenmez. Bu çalışmalar da kullanılan EIA tahliliyi iyi doğrulanmış olduğunu ve 4 moleküler test12ile tam olarak aynı fikirde olduğu gösterilmiştir unutmayın.
Campylobacter spp. Kültürü özellikle zahmetli, duyarlılık 60−76%19,20arasında değişen rapor ve burada gerçek-pozitif örnekleri tespit etmek için başarısızlık onun ~ 30% oranı belirgin. Personel, kültür verileri negatif olduğunda, eia kontrolü ve moleküler testlerin sık lıkla olumlu sonuçlar doğuracağını bekleyebilir.
Protokoldeki en kritik adım, rakip dışkı florası arasında pin noktası kolonilerinin belirlenmesidir. Algılama eşiğine yakın seyreltmeler olarak, alternatif sıfır ve sıfır olmayan koloni sayısı tahminlerine (örneğin, 2, 0, 1, 0, 0) sahip olmak olağandışı değildir. Kültür eşiklerinin belirli bir CFU/mL değil, bir dizi konsantrasyon olacağını kabul etmek önemlidir. Yine de, kültür tespiti için bir alt sınır olarak ~ 1 x 106 CFU / mL dışkı tahmini enfekte insanlar gram dışkı21başına 106 ila 109Campylobacter döken raporları ile iyi karşılaştırır . Antibiyotikler veya agar plakaları ve varyasyonları bireysel dışkı örneklerikaçınılmaz değişiklikler şüphesiz eşik değerleri değişecektir. Bu protokol, büyüme medyasında iyileştirmelere olanak sağlamalıdır.
Kültür algılama için bir sınır bu ilk bilgi mümkün tanı testleri için klinik olarak ilgili eşikleri ayarlamak için yapar, ve non-semptomatik taşıma incelenmemiş sorunları ele almak için gerekli olan mikrobiyolojik temel koyar22, Campylobactertarafından23 , ya da bakteriyel yük belirtileri veya ciddi sekel ile ilişkili ise.

Amerika Birleşik Devletleri Hastalık Kontrol Merkezleri (CDC) son zamanlarda Foodborne Diseases Active Surveillance Network (FoodNet) gözetim programı 2018 yılında laboratuvar tanısı Campylobacter enfeksiyonları9.723 vaka bildirdi yayınladı1. Bu, 2015−2017 1'deki Campylobacter vaka raporlarında%12'likbir artışı temsil eder. Dünya çapında, Campylobacter spp. en sık bakteriyel bağırsakenfeksiyonlarıarasında 2 . Bununla birlikte, her yıl meydana gelen Campylobactertabanlı bağırsak hastalıklarının sayısı3underreported olduğundan şüpheleniliyor. Çoğu hasta sadece orta rahatsızlık ve hiçbir tıbbi tedavi ile kurtarabilirsiniz, çünkü bu küçümseme tahmin edilebilir. Ancak, daha ciddi semptomları olan veya ciddi hastalık için daha yüksek risk altında olan ve daha sonra tıbbi bakım arayan hastalar için, dışkı kültürü Campylobacter onların sıkıntı neden olan patojen olup olmadığını değerlendirmek için en yaygın yöntemdir4.
Campylobacter spp için, dışkı kültürü özellikle zahmetli. En sık görülen patojenik organizmalar, C. jejuni, C. coli, C. upsaliensis, ve C. lari, mikroaofilik5. Bu bakteri bir kez havaya maruz rasgele, bilinmeyen oranlarda ölecek anlamına gelir. Böylece numune toplama ve kültür kurulumu arasındaki zaman, kültüre göre uygulanabilir Campylobacter spp.'yi tespit etme yeteneğinde kontrolsüz bir değişken haline gelir.
Dışkı örneklerinin doğrudan kültürü için Campylobacter'ın yavaş büyümesi de bir sorundur. Campylobacter kolonileri kuluçka 48 saat sonra bile çok küçük ve kolayca dışkı matris rakip organizmalar tarafından kaplanabilir. C. jejuni ve C. coli en suşları dirençli olan antibiyotik içeren plakalar yaygın olarak kullanılır, antibiyotikler birçok büyümesini inhibe olarak (ama hepsi değil) rakip dışkı bakterilerinin, Campylobacter kolonilerin daha iyi görselleştirilmesine izin6. Ancak, C. lari ve C. upsaliensis gibi diğer Campylobacter türleri bu antibiyotiklerin bazılarına duyarlıdır, ve ya kötü ya da hiç büyümek. Bu bu antibiyotiğe duyarlıtürler campylobacter enfeksiyonların underreporting katkıda 7 .
Campylobacter için bir kültürün yanlış olmasının üçüncü bir nedeni vardır. Bakteri, stresli, canlı kalabilir ama "non-culturable"8olabilir. Bu tanım, kültürün örnekte bulunan bakterileri tespit edeceği anlamına gelir. Bunun ne sıklıkta oluştuğu bilinmemektedir8.
Kültür ile bu potansiyel sorunlar göz önüne alındığında, hatalı kültür sonuçları tek bir karşılaştırıcı taht yanlış 9 görünmesi vermedi, böylece birden fazla karşılaştırma başvuru yöntemlerikullanılır. Kullanılan kültür yöntemleri (örneğin, Campylobacter-seçici plakalar, taşıma ortamı, gaz üreten poşetler) dışkı numune sikültürü için klinik laboratuvarlarda yaygın olarak kullanıldığından seçilmiştir10.
Burada açıklanan kültür protokolleri, insan dışkısında kültür tarafından tespit edilebilen en düşük Campylobacter jejuni sayısı bilinmeden geliştirildi. Kümes hayvanı dışkısı11'debulunan koloni oluşturan birimlerin (CFU) sayısı için tahminler yayınlanmış olsa da, campylobacter spp. tavuklarda kommensal olduğu ve ishale neden olmadığı için bu sonuçlar insan dışkısına eşit olamaz. Bu temel bilgi insanlarda gastroenterit belirtileri üretecek Campylobacter bakteri sayısını belirlemek ve suşları veya türler arasında virülans karşılaştırmak için gereklidir.

<table><tbody><tr><td>Anaerobik 3.5L Kavanoz</td><td>Termo Fisher</td><td>HP0031A</td><td></td></tr><tr><td>AnaeroGRO Campylobacter Seçici Agar</td><td>Hardy Teşhis</td><td>AG701</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Beyin Kalp İnfüzyonu</td><td>BD Biosciences</td><td>237500</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Proteaz Pepton</td><td>Yaşam Teknolojileri A.Ş</td>. <td>211684</td><td></td></tr><tr><td>Temel Fuchsin</td><td>Fisher Scientific</td><td>B12544</td><td></td></tr><tr><td>BBL Triptikaz Peptone</td><td>Life Technologies Corp</td><td>211921</td><td></td></tr><tr><td>C. coli Tip suşu</td><td>ATCC</td><td>33559</td><td></td></tr><tr><td>C. jejuni Tip suş</td><td>ATCC</td><td>33560</td><td></td></tr><tr><td>CampyGen gaz üretim sistemi poşeti</td><td>Thermo Fisher</td><td>CN0025A</td><td></td></tr><tr><td>Campylobacter QUIK CHEK</td><td>TechLab, Inc.</td><td>T5047 / T31025</td><td></td></tr><tr><td>Cary-Blair taşıma ortamı</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-005-47</td><td></td></tr><tr><td>Coli Rulo Steril kaplama boncukları</td><td>Millipore Sigma</td><td>71013</td><td></td></tr><tr><td>Seyreltme Tamponu</td><td>Anaerob Sistemleri</td><td>AS-908</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>Equitech-Bio, Inc</td><td>SFBM30</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bisülfit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>243973</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum piruvat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>Spektrofotometre küvetleri</td><td>ABD Bilimsel</td><td>9090-0460</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan dışkı Örneklerinde campylobacter jejuni'nin ulaşım medyasında tespit ve sağkalım sınırını belirlemek için kültür yöntemleri

Culture Methods to Determine the Limit of Detection and Survival in Transport Media of Campylobacter Jejuni in Human Fecal Specimens

Campylobactertabanlı bağırsak hastalığı tanısı için insan dışkı bir kültür birkaç gün sürer, bir bekleyin bu vergi hekim ve hastanın metanet. Bir kültür de örnek işleme sırasında canlılık rasgele kaybı, diğer dışkı florasının aşırı büyüme ve geleneksel medya üzerinde çeşitli patojenik Campylobacter türlerin in kötü büyüme yanlış negatif sonuçlareğilimli. Bu sorunlar hasta tedavisi ile ilgili klinik kararları şaşırtmak ve Campylobacter büyüme ve enfeksiyonlar hakkında temel sorulara cevap alan sınırlı dır. Bir kültür tarafından tespit edilebilen bakteri sayılarının alt sınırını tahmin eden bir prosedür ve bu kırılgan organizmanın taşınması nda kullanılan ortamda C. jejuni'nin sağkalımını ölçmek için bir yöntem tanımladık. Bu bilgileri bilerek, tanısal testler için klinik olarak ilgili algılama eşikleri belirlemek ve semptomatik olmayan kolonizasyonun yaygın olup olmadığı, diğer enterik patojenlerle birlikte enfeksiyon yaygın olup olmadığı veya bakteriyel yükün semptomlar veya ciddi sekellerle ilişkili olup olmadığı gibi incelenmemiş sorunları ele almak mümkün olur. Çalışma da başlangıçta konvansiyonel kültür tarafından sınıflandırılan ve daha yeni bir enzim immünoassay tarafından test edildi 1.552 prospektif olarak toplanan hasta ishal dışkı örneklerinin test dahil. Pozitif ve ayrık örnekler daha sonra gerçek-pozitif veya doğru-negatif durum atamak için dört moleküler yöntemle tarandı. Kültür dışı 5 yöntem, 48 pozitif ve ayrık numunenin tümü üzerinde tam bir anlaşma gösterirken, kültür 14'ünü (%28) yanlış tanımlamıştır. Kültür tarafından yanlış tanımlanan örnekler arasında 13 yanlış negatif ve 1 yanlış pozitif örnek yer al›rıldı. Bu temel protokol birden fazla Campylobacter spp ile kullanılabilir ve insanlarda gastroenterit belirtileri üreten Campylobacter bakteri sayısıbelirlenecek ve yaygınlık oranları güncellenmesi için izin verecektir.

Rakip dışkı florası arasında Campylobacter spp. kolonilerin belirlenmesi keskin görme ve önemli bir yargı gerektirir. Kültür tarafından tespit edilebilen en düşük koloni sayısı incelenmemekle birlikte, hastalardan alınan örneklerin 106−109 CFU/mL16,17olduğu tahmin edilmektedir. Ancak doğru bakteri sayılarını belirlemek için bağımsız bir yöntem olmadığı için hasta örnekleri nicel olarak kullanılamaz. Bu sınırlamayı aşmak için, bir bakteri stoku ile iki eşzamanlı ölçüm yapılır. Bir test, campylobacter kolonilerinin fekal matriksteki stok bakterilerin seri seyreltmelerinden görsel olarak saptanması nda kullanılır, klinik numuneleri simüle eder; diğeri ise spiking için kullanılan bakteri stok kültüründe bulunan CFU/mL'yi ölçmek için analitik olarak kullanılır (Şekil 2A).
Campylobacter için algılama eşikleri tanımlı değerler olmayacaktır. Her dışkı matris karmaşık ve benzersiz ve bakterilerin büyüme değişken olduğu için bu beklenebilir. Başarı için önemli bir parametre rakip dışkı florası arasında kesin boyut kolonileri belirlenmesidir. Çivili dışkı kültürünün temsili bir plakası Şekil 2C ve Şekil 2D'degösterilmiştir. Campylobacter olmadan negatif kontrol plakası diğer dışkı florası belirlemeye yardımcı olmak için önemlidir. Gram boyama birçok aday da doğru parlak koloniler ve fuşin lekeli gram-negatif bakterilerin ara pembe renk ayırt etmek için göz trenler ve seçilen kolonilerde bakterilerin morfolojisi doğrular(Şekil 2B). 5 C. jejuni ve 2 C. coli suyu kullanılarak yedi bağımsız deney yapıldı ve 0.3−5 x 106 CFU/mL'den çakışan eşikler verildi. Tipik veriler için Tablo 2'ye bakın. Algılama limitleri C. jejuni için ortalama 2 x 106 ve C. coliiçin 1.2 x 106 CFU/mL. Bu kültür büyük olasılıkla standart antibiyotik içeren Campylobacterüzerinde dışkı numunegram başına ~ 1−2 x 106C. jejuni veya C. coli tespit edebilirsiniz gösterir -birçok klinik laboratuvarları tarafından kullanılan özel agar. Koloni tespiti için farklı eşikler verebilir farklı antibiyotikler ile birden fazla özel agar vardır. Burada açıklanan yöntemler, kültürün doğruluğunu artırmak ve yeni medyanın çok yönlülüğünü genişletmek için daha nicel ve karşılaştırmalı çalışmaları teşvik etmelidir. Örneğin, ilk 10-5 plakada 152 koloni, ikinci10-5 plakada 144 koloni sayılmıştır. İki tabaka arasındaki ortalama 148 kolonidir. Plakalar 0.1 mL (100 μL) 10-5 seyreltme ile aşılanmıştır, bu da Denklem 1 ile saf kültür stoğunda 148 x 106 (14,8 x 107) CFU/mL'ye eşittir. Dışkı seyreltmeleri yapıldığında, kültür 1:1 oranında negatif dışkı havuzuna çivilendi. Bu nedenle, Denklem 2ile dışkı eğrisindeki ilk nokta ("a" levhası) 14,8 x 107'ye karşılık gelir ve 7,4 x 107 CFU/mL'ye eşittir. Bu "a" tüp 9 ek seyreltme yapmak için kullanılır. Şekil 1'de Campylobacterile görünür bir gram-negatif koloni ile son seyreltme -morfoloji si "g" plakası üzerindedir. Bu örnekte algılama dışkı kültür eşiği için 1.1 x 106 CFU/mL eşittir.
Sürdürülebilir canlılık kültürün doğruluğunun anahtarı olsa da, hastaların tedavi ve referans laboratuvarlarına numunelerin sevkiyatı sırasında Campylobacter spp.'nin canlılığının korunması sorunludur. Tipik depolama hava maruz ilerlik ve özel bir atmosfer ile sıradan kapaklı tüpler örnekleri soğutmak için. Taşıma medyasındaki örneklerin (korunmuş numuneler olarak da bilinir) daha iyi sağkalım alabildiği düşünülmektedir, ancak nicel veri sağlayan birkaç rapor vardır18.
Yukarıda gösterilen analitik ve contrived örneklem yöntemlerinin birleşimi, taşıma medyasında C. jejuni'nin canlılık ve hayatta kalma süresi tahminlerini elde etmek için tekrar kullanılmıştır. Bir bakteriyel stok suyu dışkı matris 1024 kat örnek seyreltme on iki kat hazırlamak için kullanılmıştır. İlk et suyu analitik sayımlar tarafından 4.8 x 107 CFU/mL konsantrasyonuna sahip bulundu. 0. günde yapılan plakalarda C. jejuni tespit edildi (2 gün sonra) 1.5 x 106 CFU/mL'ye eşdeğer 32 kat seyreltme ile plaka üzerinde çizgili plaka üzerinde. Ancak, Cary Blair dışkı örneğinin 24 saat soğutulmasından sonra yapılan plakalarda, sadece 2 kat seyreltme (2,4 x 107<img alt="Bilimsel çalışma için hızlandırılmış ve koloni sayımı analizi ile bakteri seyreltme deney diyagramı." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60457/60457fig1a.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60457/60457fig1large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Agar plakalarında bakteri üreme analizi; mikroskopi ve koloni morfolojisi sonuçlarını içerir." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60457/60457fig2a.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60457/60457fig2large.jpg" target="_blank"></a><table border="1" fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table><table border="1" fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="10"></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td rowspan="3"></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td rowspan="4"></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="10"></td><td></td><td rowspan="2"></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td rowspan="2"></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td rowspan="2"></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table><table border="1" fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Campylobacter için dışkı kültürü kesin olmasa da, hala kimlik için altın standart olarak kabul edilir. C. jejuni'nin insan dışkısındaki nakil medyasında tespit ve sağkalım sınırını belirleme yöntemleri tanımlanmış ve daha doğru bir şekilde yeni bir immünoassay ile karşılaştırılmaktadır.

İnsan Dışkı Örneklerinde Campylobacter Jejuni'nin Ulaşım Medyasında Tespit ve Sağkalım Sınırını Belirlemek Için Kültür Yöntemleri

A culture from human stool for diagnosis of Campylobacter-based intestinal illness takes several days, a wait that taxes the fortitude of the physician ...

Campylobacter kültürünün zorluğu, hastalık üretmek için ne kadar az bakteriye ihtiyaç duyulduğu gibi temel çalışmaları engellemiştir. Burada kullanılan bu birleştirilmiş analitik ve contrived örnekleri bu sorunu giderebilir. Bu teknik, klinik ilgili hasta semptomlarının pozitif dışkı kültürü sonucu ve ilk kez gerçek sayıda bakteri ile ilişkili olmasını sağlar.Kaç bakteri hastalık ile ilişkili öğrenme tanı, algılama için önemli bir hedef ve suşları veya Campylobacter türleri arasında virülans karşılaştırmak için sağlam bir yöntem sağlayacaktır. Campylobacter kültür basit ama kantitatif canlılık korumak için hızlı ve organize hazırlık gerektirir. Bir tabakta rakip dışkı florası arasında Campylobacter kolonileri tanımlamak için önemli bir yargı da gereklidir.C.jejuni veya C.coli kültürüne başlamadan önce eldiven, laboratuvar önlüğü ve güvenlik gözlüğü takın ve dezenfekte edilmiş laminar akış güvenlik başlığının içine tek kullanımlık koruyucu bir levha yerleştirin. Steril tekniği kullanarak bir Campylobacter özel agar plaka üzerine her sulu veya çözülmüş bakteri stok çizgi ve bir mikroaerobik atmosfer gazı üreten poşet içeren bir anaerobik kavanozda 48 saat boyunca 37 derece santigrat plaka yerleştirin. 24 saat sonra, gevşek BHI suyu bir şişe kapağı ve 37 derece Santigrat bir gecede kuluçka için bir mikroaerobik ortam üretecek bir poşet ile yeni bir anaerobik kavanoziçine şişe yerleştirin.Ertesi sabah campylobacter kültürünün başlangıç plaka kazımak için önceden azaltılmış suyu ve aşılama döngü üç mililitre kullanın. Bulamacı steril bir boruya aktarın ve kalan 97 mililitrelik azaltılmış suyu üç mililitre kazınmış bulamaç ile inoküle edin. Gaz poşeti ile kavanoza et suyu yerleştirin ve kültür 4daha fazla 600 nanometre bir optik yoğunluğu ulaşana kadar, 48 ila 72 saat boyunca sallayarak bir kuluçka üzerinde dakikada 37 derece santigrat ve 115 devrimler kültür kuluçka.Bu saf stok kültüründe bakteri sayısını belirlemek için seyreltme 900 mikrolitre 100 mikrolitre suyu sekiz 10 kat seyreltme serisi gerçekleştirin. Steril kaplama boncuklar kullanarak, 10 kez 10 negatif beşinci 10 için negatif yedinci seyreltme ler için yinelenen önceden azaltılmış Campylobacter özel plakalar ve seyreltme konsantrasyonu ile etiket plakaları plakaları ikinci bir anaerobik kavanoza yerleştirmeden önce bir gaz üreten poşet ile 48 ila 72 saat için 37 derece santigrat. Büyüme döneminin sonunda saymak için 30 ila 300 kolonisi olan plakaları seçin.Saydıktan sonra formüle göre stok suyu kültürünün mililitre başına koloni oluşturan birimleri belirlemek için sayıları kullanın. Bu çivili dışkı havuzu kullanarak tüm adımları destekleyen gibi analitik koloni sayıları doğru olması önemlidir. Gösterildiği gibi sayma için kaplama hemen sonra, et suyu ve Campylobacter negatif dışkı havuzu eşit hacimlerde karıştırın ve negatif dışkı havuzunda dokuz sonraki iki kat seyreltme yapmak, olmayan Campylobacter kolonileri belirlemeye yardımcı olmak için dışkı havuzuna hiçbir Campylobacter içeren et suyu içeren bir kontrol plakası ekleyerek.Her Campylobacter dışkı seyreltme 10 mikrolitre çoğaltılabilir önceden azaltılmış Campylobacter özel agar plakaları ve yaklaşık 48 saat boyunca 37 santigrat derece bir gaz üreten poşet ile anaerobik kavanozda plakalar inkübün. Kuluçka sonunda, saf Campylobacter kültürlerinden gelenkolonilere benzeyen kolonilerin çizgili plakalarını görsel olarak inceleyin. Koloniler aslında Campylobacter gram boyama için koloniler gibi birden fazla Campylobacter seçin ve gram-negatif kavisli, spiral veya puro şeklinde küçük bakterileri tanımlamak için bir yağ daldırma lens kullanarak ışık mikroskobu ile ince çizgili bir alan görselleştirmek onaylamak için.Campylobacter eklenmeden negatif bir kontrol plakası diğer dışkı florasını belirlemeye yardımcı olmak için önemlidir. Görsel bir Campylobacter benzeri gram-negatif koloni içeren son seyreltme kültür algılama sınırı düşünün. Ve formülü kullanarak, yapılan klinik dışkı örneğindeki pozitif seyreltmenin mililitrebaşına koloni oluşturan birimlerini hesaplayın.Taşıma orta bir mililitre Campylobacter et suyu kültürünün bir mililitre negatif dışkı havuzu ile karıştırılmasında depolanan Campylobacter canlılığını belirlemek ve negatif dışkı havuzunda 10 adet iki katlı seri seyreltmeler hazırlamak. Cary-Blair ortamında her seyreltme bir ila dört oranında seyreltin ve 96 saat boyunca 2-8 santigrat derece kapak tüpleri cary-Blair orta ve negatif kontrol saklayın. Zaman sıfır başlayarak ve bundan sonra her 24 saatte bir Campylobacter seçici agar plakaları üzerine her seyreltme 10 mikrolitre aliquots çizgi ve 48 saat boyunca 37 derece santigrat plakaları kuluçka.Hasta örneklerinden doğru bakteri sayılarını oluşturmak için bağımsız bir yöntem bulunmadığından, tek bir saf bakteri stoku ile iki eşzamanlı ölçüm yapılabilir. Bir test, campylobacter kolonilerinin fekal matriksteki stok bakterilerin seri seyreltmelerinden ve klinik numunelerin simüle edilmesinden elde edilen görsel algılamaiçin kullanılır. Diğer test analitik olarak kullanılır, aynı bakteri stok kültüründe bulunan mililitre başına koloni oluşturan birimleri ölçmek için kullanılan spiking için kullanılır.Başarı için önemli bir parametre, çivili dışkı kültürünün bu temsili plaka gösterildiği gibi, rakip dışkı florası arasında kesin büyüklüktekoloniler belirlenmesidir. Burada, yedi bağımsız deneyden elde edilen tipik veriler gözlemlenebilir. Sadece dışkı kültürleri içinde Campylobacter benzer koloniler tespit yeterli değildir.Tüm koloniler gram lekesi veya daha gelişmiş yöntemlerle doğrulanmalıdır. Biz c.upsaliensis veya C.lari gibi nadir türleri tespit etmek için kültürden daha doğru bir enzim immünoassay kullanın, hangi agar içeren standart antibiyotik kötü büyümek. Bu teknik Campylobacter non-semptomatik taşıma ve yüksek bakteriyel yükler Campylobacter enfeksiyonun ciddi sonuçları için daha yüksek risk altında bir hasta koymak gibi şeyler çalışmak için gerekli bir temel oluşturur.Genellikle bulaşıcı ve tehlikeli olabilecek bakterilerle çalışırken ve sağlıklı bağışçılardan toplandığında bile bilinmeyen patojenler içerebilen negatif dışkı havuzu ile her zaman PPE takın.

culture-methods-to-determine-limit-detection-survival-transport-media

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Biz son zamanlarda basit bir bakteriyel tespiti için floresan assay "mix-ve-okuma" kurmak için uygulanabilir Flourogenik DNAzyme probları üretmek için yeni bir yaklaşım bildirdin. Bu özel DNA sondaları böylece floresans sinyali kuşağa bakteriyel algılama çevirme belirli bakteri tarafından üretilen ham hücre dışı karışımı (CEM) varlığında, bir kromofor-değiştirilmiş-DNA RNA kimerik substratın bölünme katalize. Bu yazıda, "RFD-EC1" ifade belirli bir DNAzyme prob modeli bakterinin tespiti için...

Flourogenik DNAzymes kullanarak Bakterilerin Tespiti

Büyük hacimli tarımsal sularda gıda kaynaklı patojenlerin entegre konsantrasyon, zenginleştirme ve son nokta kolorimetrik tespitini içeren bir protokol burada sunulmaktadır.  Su, seçici veya seçici olmayan ortamlarla zenginleştirilmiş Modifiye Moore Swablarından (MMS) süzülür ve algılama, bakteriyel-gösterge kolorimetrik substratlarla gömülü kağıt bazlı analitik cihazlar (μPAD) kullanılarak gerçekleştirilir.

Kolorimetrik Algılama Paper-based<em&gt; Escherichia coli</em&gt;<em&gt; Salmonella</em&gt; Spp. Ve<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Tarım Su geniş hacimli

Cronobacter spp., Salmonella enterica ve Listeria monocytogenes'i tek tek vahşi yakalanan sineklerin vücut yüzeylerinden ve beslenme kanallarından tespit etmek için PCR tabanlı bir protokol uyarlanmıştır. Bu protokolün amacı, gıda kaynaklı salgın araştırmaları sırasında çevresel örnekleme programının bir parçası olarak toplanan bireysel böceklerden bakteriyel patojenleri tespit etmek ve izole etmektir.

Bireysel Filth Sinekler gelen Gıda Kaynaklı Bakteriyel Patojenler Algılama

RNA parçalayan DNAzime, üreaz ve manyetik boncuklardan yararlanan modifiye bir turnusol testi kullanarak E. coli'nin kolorimetrik tespiti için bir protokol açıklıyoruz.

Turnusol Testi kullanarak Bakterilerin Kolorimetrik Tespiti

Hızlı algılama özellikle patojenik bakterilerin manyetik gevşeme ve floresan emisyon modaliteleri kombinasyonu ile hedef ve bu protokol genel amacı, düşük maliyetli, taşınabilir için fonksiyonel nanosensors sentez etmektir.

Gıda kaynaklı patojen tarama kullanarak Manyeto-floresan Nanosensor: E. Coli O157: H7 hızlı tespiti

Bir fare modeli enterohemorrhagic bioluminescence etiketli bakteri kullanarak E. coli (EHEC) kolonizasyon için detaylı bir protokol sunulmuştur. Kollarındaki bu bakteriler tarafından bir non-invaziv görüntüleme sistemi içinde canlı hayvan vivo içinde tespiti geçerli anlayışımız EHEC kolonizasyon ilerletebilirsiniz.

Non-invaziv Vivo içinde Bioluminescence sistemi tarafından fare konak Enterohemorrhagic Escherichia Coli kolonizasyon algılama

Salmonella spp. /Shigella spp. ortak patojenler için ishal atfedilen. Burada, biz yüksek üretilen iş platformu Salmonella spp. testi ile taranması için tarif / gerçek zamanlı PCR kullanarakShigella spp. rehberli kültürü ile kombine.

Salmonella spp. testi ile taranması için yüksek üretilen iş platformu /Shigella spp.

Escherichia coli, doğum sırasında bakterileri yutan yenidoğanlarda sepsise neden olur. E. coli'nin enterik yoldan kan dolaşımına seyahat etme kabiliyetinde yer alan süreç tam olarak anlaşılamamıştır. Bu in vitro model, E. coli suşlarının bağırsak epitel hücrelerinden geçme yeteneğini değerlendirir.

Yenidoğan Escherichia coli Bakteriyemi İzolasyonlarının İntestinal Transsitozunun Değerlendirilmesi

Campylobacter , dünya çapında bakteriyel gıda kaynaklı gastroenteritin önde gelen nedenidir. Kuruluşların tesislerinde yaygınlığı azaltmak için önlemler almasına rağmen, kontamine ürünler sürekli olarak tüketicilere ulaşmaktadır. Son on iki yılda geliştirilen teknik, Campylobacter spp.'yi çiğ etten izole etmek ve tespit etmek için mevcut yöntemlerin sınırlamalarını ele almaktadır.

Campylobacter spp.'nin Çiğ Etten Tespiti ve İzolasyonu

Bu protokol, pks+ Escherichia coli farelerinin inflamatuar olmayan koşullarda kolonileşmesi için gerekli adımları, ayrıca kolonizasyonun doğrulanması ve dışkıda pks+ E. coli genişlemesinin değerlendirilmesi için invaziv olmayan yöntemleri tanımlar.

Murine pks+ Escherichia coli ile İltihap Olmayan Koşullarda Kolonizasyon

Keşfedin, insan dışkı örneklerinde Campylobacter jejuni tespiti için kültür yöntemleri ve taşıma medyasında sağkalım limitini belirleme teknikleri. Bu yöntem, immunoassay ile geleneksel yöntemleri karşılaştırarak klinik tanı kapasitesini artırır.

İnsan Dışkı Örneklerinde Campylobacter Jejuninin Ulaşım Medyasında Tespit ve Sağkalım Sınırını Belirlemek Için Kültür Yöntemleri (Video) | JoVE Journal

İnsan Dışkı Örneklerinde Campylobacter Jejuni'nin Ulaşım Medyasında Tespit ve Sağkalım Sınırını Belirlemek Için Kültür Yöntemleri

Daha fazla video keşfet