Name: Farelerde İntrathecally Sentezlenmiş Proteinlerin Kantitatif Ölçümü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Öğrenin farelerde beyin omurilik sıvısı ve kan toplama yöntemini kullanarak intratekal protein sentezini kantitatif olarak ölçme tekniğini. Bu protokol kan-beyin bariyeri bütünlüğünü değerlendirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar Karşılaştırmalı Tıp ve Araştırma Merkezi (CCMR) Dartmouth de fareler bu çalışmalar için kullanılan kendi uzman bakımı için personel teşekkür ederiz. Bu araştırmayı Bornstein Araştırma Fonu finanse etti.

Tüm hayvan çalışmaları, Dartmouth'taki Geisel Tıp Fakültesi'nde Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından incelenen ve onaylanan protokolleri kullanır.
1. Sıvıların toplanması
NOT: Hem serum hem de BOS gereklidir. Her sıvı toplama için iki protokol ler hayatta kalma ve nekropsi için gereklidir.
<ol><li>Sağkalım prosedürleri kullanılarak serum ve BOS toplama NOT: Sağkalım sıvısı toplama için serum toplama daha az invaziv bir işlem olduğu için BOS koleksiyonundan önce yapılmalıdır. BOS serum çekilişinden sonraki bir hafta içinde alınmalıdır.<ol><li>Serum toplama için retro-orbital kanama prosedürü. NOT: Bu işlem farelerin sağkalım kanaması içindir14. Açıklanan prosedür farelerin herhangi bir yaş, cinsiyet ve suşu için geçerlidir. IACUC kuralları, vücut ağırlığının %1'inin maksimum kan hacminin tek bir kan çekimi olarak çıkarılabileni gerektirdiğinden, işlemin sadece 15 g'dan ağır farelerde yapılması önerilir.<ol>
<li>Fare içeren kafesleri raftan uygun bir çalışma alanına taşıyın. Oksijen akış ölçeri 1 L/dk'ya açarak anestezi gaz makinesini hazırlayın.</li>
			<li>Hayvanı indüksiyon odasına yerleştirin ve kapağı sıkıca kapatın. Izofluran buharlaştırıcıyı %3,5'e açın ve hayvanı bükünmeye kadar izleyin.</li>
			<li>Odadan hayvan çıkarın ve pedal refleks, yani, sıkı ayak takımı çimdik anestezi düzeyini değerlendirmek. İşlemi gerçekleştirmeden önce yeterli anestezi derinliğini sağlayın: sıkı bir kıskaç yanıt eksikliği yeterli anestezi gösterir.</li>
			<li>Baskın olmayan elin başparmak ve işaret parmağı ile kulakların arkasındaki gevşek deriyi kavrayarak anestezili fareyi dizginle. Göz üstündeki deriyi ve başparmağı geri çekmek için göz altı derisini geri çekmek için işaret parmağını kullanarak gözleri şişkinlik.</li>
			<li>Pasteur pipetinin ucunu göz küresinin altındaki göz çukuruna yerleştirin(Şekil 1, sol panel), ucu yaklaşık 45° olarak göz çukurunun ortasına doğru yönlendirin(Şekil 1, sağ panel). Pipeti ileri geçiş sırasında parmakların arasında döndürün. Hafif basınç uygulayın ve kan pipet girene kadar bırakın. NOT: Bu konumdan bir anda çekilebilecek maksimum kan miktarı vücut ağırlığının yaklaşık %1'idir, örneğin 20 g fareden 0.2 mL.</li>
			<li>Kapilleri yavaşça çıkararak göz yaralanmasını önleyin ve toplanan kanı 1,5 mL'lik bir santrifüj tüpüne yerleştirin. Göz kapağını kapatın ve daha fazla kanamayı önlemek için gazlı bez ile hafif basınç uygulayın. Bir kez tam uyarı ve mobil (genellikle 3−5 dk), onun tutma kafesi için fare dönün.</li>
			<li>Oda sıcaklığında 30−60 dakika (RT) için kanın pıhtılaşmasına izin verin, ardından 4 °C'lik soğutuculu santrifüjde 2.000 x g'da 10 dakika santrifüj kan verin. Temiz bir pipet tekniği kullanarak serumu 0,5 mL etiketli yeni bir şişeye toplayın. Serum şişesini hemen -80 °C'de dondurun.</li>
		</ol></li>
		<li>Hayatta kalma prosedürü ile BOS toplama NOT: Bu işlem sağkalım cerrahisi içindir ve Liu ve Duff tarafından 2008 yılında yayınlanan protokole dayanmaktadır.15. Fareler intraperitoneal olarak uygulanan Ketamin (20 mg/mL), ksilazin (0.5 mg/mL) ve asetpromazin (0.5 mg/mL) kokteylile anestezi edilir.<ol><li>Fare içeren kafesleri raftan belirlenmiş bir ameliyat çalışma alanına taşıyın. Steril bir ortamda ameliyat alanı hazırlayın. Kullanılan tüm alet ve malzemelerin ameliyattan önce sterilize edilmesini sağlayın.</li>
			<li>Fareyi tartın ve gerekli anestezi hacmini hesaplayın (20 g fare için 0,1 mL anestezi kokteyli). Anestezi intraperitoneal16enjekte edin. Birkaç dakika sonra, yeterli anestezi sağlamak için ayak takımı çimdikleyerek fareyi test edin. Daha fazla anestezi gerekiyorsa, anestezik kokteylin 0.01−0.03 mL daha fazla enjekte edin.</li>
			<li>BOS koleksiyonu için yeterince büyük çalışma alanını ortaya çıkarmak için, kafanın küçük bir alanını, kafatasıüzerinde medial üzerinde, küçük bir alanı tıraş etmek için makas veya tıraş layıcı kullanın. Fareyi stereotaksik aletin üzerinde eğilimli pozisyonda konumlandırın ve kulak çubuklarını kullanarak başı sabitler(Şekil 2A). NOT: Fare, kafanın gövdeyle yaklaşık 135° açı kurabilmesi için yere serilir (Şekil 2A). Hayvan konumlandırıldıktan sonra, cerrahi alanda steril bir alan korumak için cerrahi bir örtü kullanılır. Farelerde BOS koleksiyonu için net yapışkan perdeler tercih edilir, çünkü hayvanın doğrudan ve daha odaklı görselleştirilmesine olanak sağlar.</li>
			<li>% 30 klorheksidin diasetat ile cerrahi site swab. Steril bir neşter kullanarak, sarsıcı bir kesi yapmak ocisterna magna örten kasları ortaya çıkarmak için occiput aşağı deri.</li>
			<li>Forceps ile künt diseksiyon ile, sarnıç magna ortaya çıkarmak için deri altı doku ve kasları ayırmak (Şekil 2B). Kasları ayrı tutmak için mikroretraktörler kullanın(Şekil 2B)ve sarnıç magna üzerinde dura mater meningeal tabakası ortaya çıkarmak.</li>
			<li>Olası kan kontaminasyonunu gidermek için steril fosfat tamponlu salin (PBS) ile hafifçe yıkayın. Leke steril pamuklu bir bez ile dura mater kuru ve hafifçe 30 G iğne ile sarnıç magna kapsayan membran delin. BOS'u toplamak için hızlı ve hafifçe küçük bir cam kılcal tüp takın (Şekil 2C). NOT: İntrakraniyal basınç BOS'un kılcal damara kendiliğinden akmasını sağlar (Şekil 2C). Farenin yaşına ve boyutuna bağlı olarak her fareden yaklaşık 5−12 μL BOS elde edilir.</li>
			<li>Kılcal tüpü membrandan dikkatlice çıkarın. Tüpü polietilen bir tüp(Malzeme Tablosu)aracılığıyla 3 mL şırıngaya bağlayın ve toplanan BOS'u 0,5 mL etiketli bir tüpe enjekte edin(Şekil 2D). Şişeleri buzda tut.</li>
			<li>Tek kullanımlık iğne ile polidioxanone sütür (PDS) kullanarak ve gömülü dikişler kullanılarak kesikapatın 17. Herhangi bir kurutulmuş kan veya doku alanı temizleyin.</li>
			<li>Analjezik tedavi olarak 0.05−0.1 mg/kg buprenorfin hidroklorür içeren farelere deri altı veya intraperitoneal16enjekte edin. Ayrıca, dehidratasyon önlemek için steril salin subkutan 1 mL enjekte.</li>
			<li>Kurtarma için temiz ve sıcak bir kafese fare geri yerleştirin. Fare hareket halinde ve yiyecek ve suya ulaşabildikten sonra kafesi rafa geri yerleştirin.</li>
			<li>4 °C'lik soğutulmuş santrifüjde 10 dk x g 4 °C'lik bir santrifüjde santrifüj BOS. Ksanthochromia'nın belirlenmesi ve tüpün alt kısmında kırmızı bir pelet bulunması için görsel inceleme ile kan kontaminasyonu derecesini kontrol edin. Kanla kirlenmiş örnekleri atın. NOT: Kanla kontamine olmuş numunelerde BOS protein miktarlarının düzeltilmesiiçin kullanılan formül, BOS ve serumda protein içeriği, hematokrit (HCT) ve BOS'ta kırmızı kan hücreleri (RBC) sayımı ve kan18'iiçeren denklem parametrelerine dayanmaktadır. Ancak, bu tür bir düzeltme stratejisi fare BOS örneklerine küçük hacim nedeniyle kolayca uygulanamadığından, düzeltme stratejisini görsel bir denetimle sınırlandırmaktadır.</li>
			<li>Temiz bir pipet tekniği kullanarak BOS'u yeni bir 0,2 mL tüp halinde toplayın ve peleti hücrelerle birlikte geride bırakın. Aerosol nedeniyle hacim kaybını azaltmak için PBS ile Bos 1:3 seyreltin. BOS şişesini hemen -80 °C'de dondurun.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>Sağkalım dışı prosedürler kullanılarak serum ve BOS toplama NOT: Hayatta kalmayan sıvı toplama için, farenin nabzının olması gerektiğinden BOS toplama serum toplamadan önce gelir.<ol>
<li>Nekropsi de BOS koleksiyonu NOT: Bu işlem sağkalım dışı cerrahi içindir ve her fareden yaklaşık 10−20 μL BOS elde edilir. Steril cerrahi alan önerilir, ancak sağkalım dışı cerrahi için gerekli değildir.<ol>
<li>Fare içeren kafesleri raftan rahat bir çalışma alanına taşıyın. BOS koleksiyonu için 1.1.2.2−1.1.2.7 ve 1.1.2.11−1.1.2.12 adımlarını izleyin. Serum toplama için bölüm 1.2.2'ye devam edin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>İntrakardiyak delinme yoluyla kan toplanması (açık yaklaşım) NOT: Beklenen kan hacimleri vücut ağırlığının yaklaşık %3'üdür, örneğin 20 g fareden 0.6 mL.<ol>
<li>BOS koleksiyonunu takiben, farenin ayak bileliğini sıkıştırarak hala yeterince anestezi sağladığından emin olun. Herhangi bir reaksiyon gözlenirse, anestezik ikinci bir doz uygulayın. Reaksiyon gözlenmezse, devam edin.</li>
			<li>% 70 alkol ile arka ve karın deri bezi hayvan yerleştirin. Cerrahi makas ile göğüs boşluğunu açın ve kalbi ortaya çıkarın. Sol ventriküle 25 G iğne (3 mL şırınga bağlı) yerleştirin ve şırınga pistonuna hafifçe negatif basınç uygulayın. Kan toplandıktan sonra iğneyi geri çekin.</li>
			<li>Hayvanın ölmüş olduğundan emin olmak için kafa kesme veya servikal çıkık gibi ötanazi ikinci bir yöntem gerçekleştirin.</li>
			<li>Şırınganın pistini aşağı itin ve toplanan kanı 1,5 mL'lik bir şişeye enjekte edin. RT'de 30-60 dakika kanın pıhtılaşmasına izin verin ve 4 °C'lik soğutuculu santrifüjde 2.000 x g'de 10 dakika santrifüj edin.</li>
			<li>Temiz pipet tekniğini kullanarak serumu 0,5 mL etiketli yeni bir şişeye toplayın. Serum şişesini -80 °C'lik bir dondurucuda hemen dondurun.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>2. Protein analizi
<ol><li>Uyumlu serum ve BOS örneklerinde hedef protein(ler) ve albuminlerin ölçülmesi için Luminex teknolojisi gibi tercih edilen bir yöntem kullanın. NOT: Burada Luminex manyetik teknolojisi ile bir örnek verilir, ancak enzime bağlı immünosorbent tahlilleri (ELISA) dahil olmak üzere protein miktarlarını ölçen hemen hemen her teknik mevcut protokole uygulanabilir. İdeal olarak, BOS ve serum örnekleri aynı platformda hem albumin hem de hedef proteinler için çalıştırılır. Test koşulları, antijen-boncuk bağlantı konsantrasyonu, serum ve BOS numune seyreltmeleri, her bir analiz için en uygun standart eğriler ve spesifik olmayan reaktiviteyi azaltmak için tampon bileşimi gibi protokoldeki önemli adımlar için optimize edilmelidir. Protein ölçümü için ticari bir kit kullanılıyorsa, örneğin, immünglobulin isotipleme kiti (Malzeme Tablosu) içinde sunulan verileri elde etmek için kullanılanŞekil 3, üreticilerin talimatlarına uyulmalıdır.<ol><li>Çözülme üzerine ve analizden önce, BOS ve serum numuneleri (10 dk için 2.000 x g) santrifüj ve filtre plakaları ve /veya probun tıkanmasını önlemek için supernatant kullanın. Uygun numune seyreltmeleri için kit ile sağlanan test prosedürünü uygulayın. Aksi takdirde, her analit ve sıvı için uygun seyreltme belirleyin. PBS'deki numuneleri buna göre seyreltin. NOT: Belirli bir kılavuz veya talimat yoksa, her bir analit ve sıvı için seyreltmeler çalışma testinden önce, en fazla içine giren konsantrasyon tahminlerini elde etmek için gerekli seyreltme aralıkları belirlenerek kurulmalıdır. standart bir eğrinin güvenilir aralığı. Analiz edilecek biyolojik numunenin özelliklerini bilmek, örneğin sıvıdaki fizyolojik ve patolojik konsantrasyonlar, düşük, orta ve yüksek analit içeriği örnekleri ile farklı seyreltmelerin yapılmasına olanak sağlar. Numunelerde beklenen konsantrasyon aralığının a priori olarak biliniyorsa, seçilen standart eğri aralığında olmak için numunenin kaç kez seyreltilmesi gerektiği hesaplandıktan sonra seyreltmeler seçilebilir. DİkKAT: Seyreltme faktörleri hesaplanarak, BOS'un 1:3 seyreltildiğini unutmayın.</li>
		<li>Referans standart proteinleri seri olarak seyrelterek Şekil 3'teveri oluşturmak için kullanılan albumin ve IgG gibi ilgi çeken her protein için standart bir eğri hazırlayın. Standart eğrilerin hazırlanması sırasında, bir sonraki seyreltme yapmadan önce iyice her yüksek konsantrasyon karıştırın. NOT: Seçilen nicelik yöntemine bakılmaksızın, numunelerde protein konsantrasyonunu tahmin etmek için her test yapıldığında standart bir eğri nin dahil edilmesi esastır. Bir referans standart için en iyi seçim ilgi protein saflaştırılmış, bilinen konsantrasyonudur. Standart eğriyi tanımlamak için kullanılan veri noktalarının ve çoğaltmaların sayısının yanı sıra belirli seyreltmelere karar vermek, standart eğrideki doğrusal olmayanlık derecesine bağlıdır.</li>
		<li>Uygun antikor-çiftli manyetik boncuk setleri seçin(Malzeme Tablosu). Boncuk bireysel şişeler için, 30 s ve girdap için her şişe sonicate 1 dakika. Boncuk stokları her set / μL her set / μL son konsantrasyonu için seyrelterek bir "çalışan boncuk karışımı" hazırlamak tahlil / yıkama tampon (PBS, 1% sığır serum albumin [BSA]). Her kuyuya düz tabanlı 96 kuyulu bir plaka(Malzeme Tablosu)50 μL karışık boncuk ekleyin. DİkKAT: Floresan boncuklar ışığa duyarlıdır. Bu nedenle, prosedür boyunca ışığa uzun süre maruz kalmaktan korunmalıdır.</li>
		<li>Geçmişlerin, standartların ve örneklerin iyi bir harita çalışma sayfasına yerleştirilmesi diyagramı.</li>
		<li>Her arka plan için 50 μL'lik test/yıkama arabelleği ve standart eğri için kuyulara her standarttan 50°L ekleyin. Seyreltilmiş her numunenin 50 mL'ini uygun kuyulara son olarak yükleyin. Rt 30 dakika boyunca bir tabak çalkalayıcı üzerinde ajitasyon (~ 800 rpm) ile folyo ve kuluçka ile plaka sarın.</li>
		<li>Plakayı el mıknatısına(Malzeme Tablosu)yerleştirin ve manyetik boncukların tam olarak ayarlanmasına izin vermek için plakayı ~60 s için mıknatısın üzerine koyun. Plakayı yavaşça dekantasyon yaparak iyi içeriği çıkarın ve artık sıvıyı çıkarmak için emici pedlere dokunun.</li>
		<li>Plakayı mıknatıstan çıkararak, ~30 s için sallayarak ve son olarak mıknatısa yeniden takarak 200 μL'lik bir yıkama tamponu ekleyerek yıkayın. 3x yıkamatekrarlayın.</li>
		<li>Biyotinylated algılama antikor seyreltmek, yani, biyotin etiketli antikor protein konak türlerine karşı yükseltilmiş, için 4 μg/mL için ispat / yıkama tampon. Her kuyuya seyreltilmiş algılama antikorunun 50 000'ini ekleyin. Plakayı kapatın ve ~800 rpm'de plaka çalkalayıcıda RT'de 30 dk kuluçkaya yatın. Plakayı mıknatısın üzerine yerleştirin ve 2.1.6 ve 2.1.7 adımlarını tekrarlayın.</li>
		<li>Seyreltik phycoerythrin (PE)-konjuge streptavidin (SAPE) için 4 μg/mL ispat / yıkama tampon. Her kuyuya 50°L seyreltilmiş SAPE ekleyin. Plakayı kapatın ve ~800 rpm'de plaka çalkalayıcıda RT'de 30 dk kuluçkaya yatın. Plakayı mıknatısın üzerine yerleştirin ve 2.1.6 ve 2.1.7 adımlarını tekrarlayın.</li>
		<li>Plakayı mıknatıstan çıkarın ve boncukları 100 μL'lik bir aratla/yıkama tamponunda yeniden askıya alın. PE floresan yoğunluğunun (FI) büyüklüğünün algılanmasını sağlayan çift lazer akış tabanlı algılama cihazı ile kuyuları okuyun. NOT: Üretilen sinyal, örneğin FI, boncukyüzeyine bağlı hedef antijen miktarı ile orantılıdır.</li>
		<li>Ham verileri dışa aktarın ve algılama sinyali FI'yi standart protein konsantrasyonlarına karşı grafikleştirerek standart eğriler oluşturun. Örneklerdeki analit konsantrasyonunun hesaplanması için standart eğri(ler)i kullanın. NOT: Albumin tercihen g/dL ile, ilgi proteinleri ise tercihen mg/dL ile ifade edilir.</li>
	</ol></li>
</ol>3. İntekal indeks hesaplamaları
<ol><li>Protein konsantrasyonu değerlerini bir elektronik tabloda düzenleyin ve aşağıdaki formülleri uygulayarak sonuçları analiz edin.</li>
	<li>Qalbuminhesapla: <img alt="Albümin katsayısı denklemi, Q_albumin formülü, BOS ve Serum albümin düzeylerinin ilişkilendirilmesi." src="/files/ftp_upload/60495/60495eq1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Equation 1"> bosalbumin ve Serumalbuminin ineşe serum ve BOS örneklerinde albumin konsantrasyonları olduğu durumlarda, sırasıyla.</li>
	<li>Qproteininihesapla : <img alt="Protein konsantrasyon oranı denklemi Q_protein=(CSF_protein/Serum_protein), biyokimyasal analiz." src="/files/ftp_upload/60495/60495eq2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Equation 2"> BOSproteini ve Serumproteininin sırasıyla serum ve BOS örneklerinde hedef protein(ler) konsantrasyonları olduğu durumlarda.</li>
	<li>Protein indeksini hesaplayın: <img alt="Protein indeksi formülü, denklem, Q_protein/Q_albumin, biyokimyasal analiz." src="/files/ftp_upload/60495/60495eq3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Equation 3">
</li>
</ol>

<ol><li>Whedon, J. M., Glassey, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+stasis+and+its+clinical+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Alternative+Therapies+in+Health+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid stasis and its clinical significance.</a> Alternative Therapies in Health and Medicine. 15 (3), 54-60 (2009).</li>
<li>Kang, J. H., Vanderstichele, H., Trojanowski, J. Q., Shaw, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+analysis+of+cerebrospinal+fluid+biomarkers+using+microsphere-based+xMAP+multiplex+technology+for+early+detection+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Simultaneous analysis of cerebrospinal fluid biomarkers using microsphere-based xMAP multiplex technology for early detection of Alzheimer's disease.</a> Methods. 56 (4), 484-493 (2012).</li>
<li>Barro, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+biomarker+and+electrophysiological+outcome+measures+for+progressive+MS+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis%22%5BJournal%5D)">Fluid biomarker and electrophysiological outcome measures for progressive MS trials.</a> Multiple Sclerosis. 23 (12), 1600-1613 (2017).</li>
<li>Tourtellotte, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+sclerosis%3A+measurement+and+validation+of+central+nervous+system+IgG+synthesis+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Multiple sclerosis: measurement and validation of central nervous system IgG synthesis rate.</a> Neurology. 30 (3), 240-244 (1980).</li>
<li>Bonnan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrathecal+IgG+synthesis%3A+a+resistant+and+valuable+target+for+future+multiple+sclerosis+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis+International%22%5BJournal%5D)">Intrathecal IgG synthesis: a resistant and valuable target for future multiple sclerosis treatments.</a> Multiple Sclerosis International. 2015, 296184(2015).</li>
<li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid--physiology%2C+analysis+and+interpretation+of+protein+patterns+for+diagnosis+of+neurological+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid--physiology, analysis and interpretation of protein patterns for diagnosis of neurological diseases.</a> Multiple Sclerosis. 4 (3), 99-107 (1998).</li>
<li>DiSano, K. D., Linzey, M. R., Royce, D. B., Pachner, A. R., Gilli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+neuro-immune+patterns+in+two+clinically+relevant+murine+models+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Differential neuro-immune patterns in two clinically relevant murine models of multiple sclerosis.</a> Journal of Neuroinflammation. 16 (1), 109(2019).</li>
<li>Pachner, A. R., Li, L., Lagunoff, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+cells+in+the+central+nervous+system+in+the+Theiler%27s+virus+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroimmunology%22%5BJournal%5D)">Plasma cells in the central nervous system in the Theiler's virus model of multiple sclerosis.</a> Journal of Neuroimmunology. 232 (1-2), 35-40 (2011).</li>
<li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+rate+of+cerebrospinal+fluid+%28CSF%29--a+concept+common+to+normal+blood-CSF+barrier+function+and+to+dysfunction+in+neurological+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Flow rate of cerebrospinal fluid (CSF)--a concept common to normal blood-CSF barrier function and to dysfunction in neurological diseases.</a> Journal of Neurological Sciences. 122 (2), 189-203 (1994).</li>
<li>Reiber, H., Zeman, D., Kusnierova, P., Mundwiler, E., Bernasconi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+relevance+of+free+light+chains+in+cerebrospinal+fluid+-+The+hyperbolic+reference+range+for+reliable+data+interpretation+in+quotient+diagrams%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Diagnostic relevance of free light chains in cerebrospinal fluid - The hyperbolic reference range for reliable data interpretation in quotient diagrams.</a> Clinica Chimica Acta. 497, 153-162 (2019).</li>
<li>Reiber, H., Felgenhauer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+transfer+at+the+blood+cerebrospinal+fluid+barrier+and+the+quantitation+of+the+humoral+immune+response+within+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Protein transfer at the blood cerebrospinal fluid barrier and the quantitation of the humoral immune response within the central nervous system.</a> Clinica Chimica Acta. 163 (3), 319-328 (1987).</li>
<li>Dorta-Contreras, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reibergrams%3A+essential+element+in+cerebrospinal+fluid+immunological+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+de+Neurologia%22%5BJournal%5D)">Reibergrams: essential element in cerebrospinal fluid immunological analysis.</a> Revista de Neurologia. 28 (10), 996-998 (1999).</li>
<li>Metzger, F., Mischek, D., Stoffers, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Connected+Steady+State+Model+and+the+Interdependence+of+the+CSF+Proteome+and+CSF+Flow+Characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The Connected Steady State Model and the Interdependence of the CSF Proteome and CSF Flow Characteristics.</a> Frontiers Neuroscience. 11, 241(2017).</li>
<li>Wolforth, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+blood+collection+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Methods of blood collection in the mouse.</a> Laboratory Animals. 29, 47-53 (2000).</li>
<li>Liu, L., Duff, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+serial+collection+of+cerebrospinal+fluid+from+the+cisterna+magna+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A technique for serial collection of cerebrospinal fluid from the cisterna magna in mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (21), e960(2008).</li>
<li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+restraint+and+common+compound+administration+routes+in+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (67), e2771(2012).</li>
<li>Johnston, S. A., Tobias, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Veterinary+Surgery%3A+Small+Animal+Expert+Consult+-+E-Book%5BTitle%5D)+AND+%22Elsevier+Health+Sciences%22%5BJournal%5D)">Veterinary Surgery: Small Animal Expert Consult - E-Book.</a> Elsevier Health Sciences. , (2017).</li>
<li>Nigrovic, L. E., Shah, S. S., Neuman, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction+of+cerebrospinal+fluid+protein+for+the+presence+of+red+blood+cells+in+children+with+a+traumatic+lumbar+puncture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Correction of cerebrospinal fluid protein for the presence of red blood cells in children with a traumatic lumbar puncture.</a> Journal of Pediatrics. 159 (1), 158-159 (2011).</li>
<li>McCarthy, D. P., Richards, M. H., Miller, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+multiple+sclerosis%3A+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+Theiler%27s+virus-induced+demyelinating+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse models of multiple sclerosis: experimental autoimmune encephalomyelitis and Theiler's virus-induced demyelinating disease.</a> Methods in Molecular Biology. 900, 381-401 (2012).</li>
<li>Link, H., Tibbling, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+albumin+and+IgG+analyses+in+neurological+disorders.+II.+Relation+of+the+concentration+of+the+proteins+in+serum+and+cerebrospinal+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Clinical+Laboratory+Investigation%22%5BJournal%5D)">Principles of albumin and IgG analyses in neurological disorders. II. Relation of the concentration of the proteins in serum and cerebrospinal fluid.</a> Scandinavian Journal of Clinical Laboratory Investigation. 37 (5), 391-396 (1977).</li>
<li>Tibbling, G., Link, H., Ohman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+albumin+and+IgG+analyses+in+neurological+disorders.+I.+Establishment+of+reference+values%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Clinical+Laboratory+Investigation%22%5BJournal%5D)">Principles of albumin and IgG analyses in neurological disorders. I. Establishment of reference values.</a> Scandinavian Journal of Clinical Laboratory Investigation. 37 (5), 385-390 (1977).</li>
<li>Deisenhammer, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+on+routine+cerebrospinal+fluid+analysis.+Report+from+an+EFNS+task+force%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Guidelines on routine cerebrospinal fluid analysis. Report from an EFNS task force.</a> European Journal of Neurology. 13 (9), 913-922 (2006).</li>
<li>Johanson, C. E., Stopa, E. G., McMillan, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-cerebrospinal+fluid+barrier%3A+structure+and+functional+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">The blood-cerebrospinal fluid barrier: structure and functional significance.</a> Methods in Molecular Biology. 686, 101-131 (2011).</li>
<li>Zaias, J., Mineau, M., Cray, C., Yoon, D., Altman, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reference+values+for+serum+proteins+of+common+laboratory+rodent+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Reference values for serum proteins of common laboratory rodent strains.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 48 (4), 387-390 (2009).</li>
<li>Felgenhauer, K., Renner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrodynamic+radii+versus+molecular+weights+in+clearance+studies+of+urine+and+cerebrospinal+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Clinical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Hydrodynamic radii versus molecular weights in clearance studies of urine and cerebrospinal fluid.</a> Annals of Clinical Biochemistry. 14 (2), 100-104 (1977).</li>
<li>Pachner, A. R., DiSano, K., Royce, D. B., Gilli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+utility+of+a+molecular+signature+in+inflammatory+demyelinating+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%2C+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Clinical utility of a molecular signature in inflammatory demyelinating disease.</a> Neurology, Neuroimmunology & Neuroinflammation. 6 (1), 520(2019).</li>
<li>Pachner, A. R., Li, L., Gilli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokine+biomarkers+in+central+nervous+system+tissue+and+cerebrospinal+fluid+in+the+Theiler%27s+virus+model+mirror+those+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Chemokine biomarkers in central nervous system tissue and cerebrospinal fluid in the Theiler's virus model mirror those in multiple sclerosis.</a> Cytokine. 76 (2), 577-580 (2015).</li>
<li>Gerbi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+concentration+in+the+arterial+and+venous+renal+blood+serum+of+the+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">Protein concentration in the arterial and venous renal blood serum of the rabbit.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 31 (1), 49-61 (1951).</li>
<li>Abbott, N. J., Patabendige, A. A., Dolman, D. E., Yusof, S. R., Begley, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Structure and function of the blood-brain barrier.</a> Neurobiology of Disease. 37 (1), 13-25 (2010).</li>
<li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteins+in+cerebrospinal+fluid+and+blood%3A+barriers%2C+CSF+flow+rate+and+source-related+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Restorative+Neurology+and+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Proteins in cerebrospinal fluid and blood: barriers, CSF flow rate and source-related dynamics.</a> Restorative Neurology and Neuroscience. 21 (3-4), 79-96 (2003).</li>
<li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Knowledge-base+for+interpretation+of+cerebrospinal+fluid+data+patterns.+Essentials+in+neurology+and+psychiatry%5BTitle%5D)+AND+%22Arquivos+de+Neuropsiquiatria%22%5BJournal%5D)">Knowledge-base for interpretation of cerebrospinal fluid data patterns. Essentials in neurology and psychiatry.</a> Arquivos de Neuropsiquiatria. 74 (6), 501-512 (2016).</li>
<li>Kuehne, L. K., Reiber, H., Bechter, K., Hagberg, L., Fuchs, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+neopterin+is+brain-derived+and+not+associated+with+blood-CSF+barrier+dysfunction+in+non-inflammatory+affective+and+schizophrenic+spectrum+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Psychiatric+Research%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid neopterin is brain-derived and not associated with blood-CSF barrier dysfunction in non-inflammatory affective and schizophrenic spectrum disorders.</a> Journal of Psychiatric Research. 47 (10), 1417-1422 (2013).</li>
<li>Bromader, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+serum+and+cerebrospinal+fluif+cytokines+in+response+to+non-neurological+surgery%3A+an+observational+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Changes in serum and cerebrospinal fluif cytokines in response to non-neurological surgery: an observational study.</a> Journal of Neuroinflammation. 9, 242(2012).</li>
<li>Starhof, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+pro-inflammatory+cytokines+differentiate+parkinsonian+syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid pro-inflammatory cytokines differentiate parkinsonian syndromes.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 305(2018).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Artmış BOS protein konsantrasyonlarının değerlendirilmesi için kullanılan kantitatif yöntemler, CNS'nin fizyolojik ve patolojik durumunun karakterizasyonunda yararlı araçlardır. Ancak, BOS protein düzeylerinin güvenilir bir şekilde ölçülmesinin ötesinde, BOS proteinlerinin saptanması, BOS'ta kan ve CNS kaynaklı fraksiyonlar arasında ayrım yapan sonuçların bir ifadesi nin ifade sini gerektirir. Ancak, bugüne kadar, yaygın olarak kullanılan protein niceleme tahlilleri iki protein bileşeni arasında ayrımcılığa izin vermez, ...

Beyin ve omuriliği çevreleyen berrak ve renksiz bir sıvı olan beyin omurilik sıvısı (BOS), büyük klinik ve temel bilimsel öneme sahiptir. BOS merkezi sinir sisteminin elektrolitik ortamını korur (CNS), sistemik asit-baz durumunu dengeler, nöronal ve glial hücrelere besin kaynakları, CNS için lenfatik bir sistem olarak fonksiyonları, ve hormonlar taşır, nörotransmitter, sitokinler ve CNS boyunca diğer nöropeptidler1. Böylece, BOS bileşimi CNS aktivitesini yansıttığından, bu sıvı CNS'nin fizyolojik ve patolojik durumunu karakterize etmek için değerli, dolaylı da olsa erişim sağlar.
BOS, yüz yılı aşkın bir süredir CNS'yi etkileyen koşulları teşhis etmek için kullanılmıştır ve bu süre içinde öncelikle klinisyenler tarafından bir tanı aracı olarak incelenmiştir. Ancak, son yıllarda nörobiyologlar CNS patofizyolojisi çalışma için BOS potansiyelini tanıdı. Özellikle, bu analizin dinamik değişimlere ışık tutabileceği beklentisiyle, BOS'un protein bileşiminin ayrıntılı bir şekilde incelenmesine olanak sağlayan nörolojik alanda çeşitli yüksek işlem protein analiz araçları kullanılmaya başlanmıştır. CNS içinde meydana gelen.
Luminex ve Simoa teknolojileri 2 gibi multipleksimmünoassay teknikleri teknolojik gelişmeler,3, çok düşük konsantrasyonlarda proteinlerin yüzlerce tespit yeteneği ile bugün araştırmacılar sağlar. Ayrıca, bu aynı teknolojiler küçük örnek hacimlerin kullanımına izin vermekte, böylece küçük hayvanlarda, fareler de dahil olmak üzere, sınırlı sayıda BOS numune hacminin yakın zamana kadar sıvının ayrıntılı karakterizasyonlarını engellediği çalışmaları teşvik etmektedir.
Bununla birlikte, bir uyarı BOS cinsinden ölçülen proteinlerin hasarlı bir kan-beyin arayüzü (BBI) nedeniyle intratekal sentez ve / veya serum transudation elde edilebilmiştir. Ne yazık ki, BOS protein analizi tek başına sadece bu iki bileşenin toplamını belirleyebilirsiniz. Transudate ve intrathecally üretilen proteinler arasında ayrım yapmak için, mevcut protein analiz aracını kullanan BOS protein ölçümleri serum konsantrasyonlarında bireysel değişkenlik ve bariyer bütünlüğü için ayarlanmalıdır. Ancak, bu ayarlama yaygın klinik uygulamada kullanılan rağmen, örneğin, BOS IgG indeksi, intratekal IgG sentezi tespit etmek için yüksek duyarlılığa sahip4,5,6, Bugüne kadar çok az araştırma çalışmaları serum konsantrasyonu ve bariyer bütünlüğü için BOS protein konsantrasyonları düzeltilmiş var7,8.
Günümüzde Reibergram yaklaşımı, proteinlerin bariyer fonksiyonunu ve intratekal sentezini belirlemenin en iyi yoludur. Bu analizleri BOS / serum bölüm diyagramları grafiksel bir değerlendirme, entegre bir şekilde, hem bariyer (dys) fonksiyonu ve intratekal protein sentezi, sadece kan kaynaklı protein atıfta9,10. Çok bol protein albumin genellikle referans protein olarak seçilir çünkü sadece karaciğerde üretilir ve büyüklüğü, yaklaşık 70 kDa, küçük ve büyük proteinler arasında ara protein11. Analiz diyagramı ilk olarak 1987 yılında Reiber ve Felgenhauer tarafından immünglobulinlerin (Igs)11'inana sınıfları için tanımlanmıştır, ampirik olarak binlerce insan örneğinin analizinden elde edilen sonuçlara dayanmaktadır9. Yaklaşım daha sonra moleküler difüzyon / akış hızı12teorisinde difüzyon iki Fick yasalarının uygulanması ile doğrulandı . Böyle bir teori bariyer yoluyla bir proteindifüzyon uhiperbolik bir dağılıma sahiptir ve nicel CNSproteinlerindinamiklerini açıklayabilir gösterir 9,13. Genel olarak, intratekal protein sentezini göstermek için Reibergram kullanmanın avantajı, aynı anda serumdan BOS giren protein fraksiyonunu ve yerel üretim nedeniyle BOS'ta bulunan protein miktarını aynı anda tanımlamasTır.
Bu makale ve ilgili protokol, BOS ve kan toplamadan BOS protein düzeylerini düzelten son hesaplamalara kadar tüm prosedürü, nörolojik fare modellerinde intratekal protein sentezinin nicel ölçümü için tanımlar. Bozukluk -ları. Bu prosedür, (1) herhangi bir BOS proteininin patofizyolojik kökenini ve (2) bariyer bütünlüğünün stabilitesini ve işlevsel önemini değerlendirmek için bir temel sağlar. Bu prosedür ve protokol sadece fare BOS örneklerinin değerlendirilmesinde yararlı olmakla kalmıyor, aynı zamanda nörolojik hastalıklar ve insan hastalarının çok sayıdaki hayvan modellerinde BOS'un analizinde de yararlıdır.

<table><tbody><tr><td>1 mL insülin şırıngası</td><td>BD</td><td>329650</td><td></td></tr><tr><td>1 mL şırınga</td><td>BD</td><td>329622</td><td></td></tr><tr><td>25 gauge iğne</td><td>BD</td><td>305122</td> 3 mL şırınga BD 309582 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>30 gauge insülin iğnesi</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Emici pedler</td><td>Herhangi bir uygun marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Asepromazin</td><td>Patterson Vet Supply Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BioPlex El Tipi Manyetik Yıkayıcı</td><td>BioRad</td><td>171020100</td><td>Mıknatıs</td></tr><tr><td>BioPlex MAGPIX Multipleks Okuyucu</td><td>BioRad</td><td>171015001</td><td></td></tr><tr><td>BioPlex Pro Düz Tabanlı Plakalar</td><td>BioRad</td><td>171025001</td><td></td></tr><tr><td>Biotinilated tespit antikoru</td><td>Herhangi bir uygun kaynak</td><td></td><td>Antikor, aşağıdaki türlere karşı yönlendirilmelidir: İlgilenilen protein.</td></tr><tr><td>Sığır Serum Albümini (BSA)</td> <td>Sigma</td><td>A4503</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin hidroklorür</td><td>PAR Farmasötik</td><td>NDC 42023-179-05</td><td></td></tr><tr><td>Kılcal Tüpler</td><td>Sutter Aleti</td><td>B100-75-10</td><td>OD: 1.0 mm, ID: 0.75 mm Borosilikat cam 10 cm; ID'yi küçültmek için Bunsen'in üzerine çizilmiştir.</td></tr><tr><td>Santrifüj tüpü, 0.2 mL</td><td>VWR</td><td>20170-012</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj tüpü, 0.5 mL</td><td>VWR</td><td>87003-290</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj tüpü, 1.5 mL</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td></td></tr><tr><td>Klorheksidin diasetat</td><td>Nolvasan</td><td>E004272</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık pipet uçları</td><td>Herhangi bir uygun marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kulak çubukları</td><td>KOPF Instruments</td><td>1921 veya 1922</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Kopter</td><td>V1001</td><td></td></tr><tr><td>Dondurucu</td><td>VWR</td><td>VWR32086A</td><td></td></tr><tr><td>Gazlı Bez</td><td>Medline</td><td>NON25212</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma yastığı</td><td>Sunbeam</td><td></td><td>XL King Size SoftTouch, Otomatik Kapanmalı 4 Isı Ayarı, Deniz Mavisi, 12 İnç x 24 İnç</td></tr><tr><td>İndüksiyon Odası</td><td>VETEQUIP</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Patterson Veteriner Tedarik A.Ş</td>. <td>NDC 14043-704-06</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin (KetaVed)</td><td>Patterson Vet Tedarik A.Ş</td><td></td><td></td></tr>. <tr><td>MagPlex Mikroküreler (antikorla birleştirilmiş)</td><td>BioRad</td><td></td><td>Antikor bağlantılı manyetik boncuk</td></tr><tr><td>Mikroplaka Çalkalayıcı</td><td>Güneybatı Bilimsel</td><td>SBT1500</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Ekartörler</td><td>Dolum Kalitesi</td><td>ACD-010</td><td>Kör - 1 mm</td></tr><tr><td>Microsoft Office (Excel)</td><td>Microsoft</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MilliPlex MAP Fare İmmünoglobulin İzotipleme Manyetik Boncuk Paneli</td><td>EMD Millipore</td><td>MGAMMAG-300K</td><td>Fare sıvılarındaki immünoglobulin izotipleri ve alt sınıflarından oluşan bir panelin Luminex aracılığıyla miktar tayini için ticari kit.</td></tr><tr><td>Fare Albümin yakalama ELISA kiti</td><td>Novus Biological</td><td>NBP2-60484</td><td>Fare sıvılarındaki albüminin ELISA aracılığıyla miktar tayini için ticari kit.</td></tr><tr><td>Çok kanallı pipet</td><td>Eppendorf</td><td>3125000060</td><td></td></tr><tr><td>Steril olmayan swablar</td><td>MediChoice</td><td>WOD1002</td><td>Sterilite için otoklavlanması gerekiyor</td></tr><tr><td>Oksijen</td><td>AIRGAS</td><td>OX USPEA</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur Pippettes</td><td>Fisher</td><td>13-678-20A</td><td>5 & 3/4"</td></tr> <tr><td>Tek kullanımlık iğneli PDS sütür, 6-0 Prolen</td><td>Patterson Vet</td><td>8695G</td><td>P-3 Ters Kesim, 18</td></tr><tr><td>" PE-Streptavidin</td><td>BD Biosciences</td><td>554061</td><td></td></tr><tr><td>Pipetleyiciler</td><td>Eppendorf</td><td>Research seriers</td><td></td></tr><tr><td>Polietilen boru</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soğutmalı Santrifüj</td><td>Beckman Coulter</td><td>ALLEGRA X-12R</td><td></td></tr><tr><td>Ölçekli</td><td>Uline</td><td>H2716</td><td></td></tr><tr><td>Neşter</td><td>Tüyü</td><td>EF7281</td><td></td></tr><tr><td>Tıraş Makinesi</td><td>Harvard Aparatı</td><td>52-5204</td><td></td></tr><tr><td>Standart proteinler</td><td>Herhangi bir uygun kaynak</td><td></td><td>Bir referans standardı için en iyi seçim, ilgilenilen proteinin saflaştırılmış, bilinen bir konsantrasyonudur.</td></tr><tr><td>Stereotaksik alet</td><td>KOPF Instruments</td><td>Model 900LS</td><td>Standart Aksesuarlar</td></tr><tr><td>Steril 1 x PBS</td><td>Corning Cellgro</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Steril salin</td><td>Baxter</td><td>0338-0048-02</td><td>% 0,9 Sodyum Klorür Sulama USP</td></tr><tr><td>Cerrahi Forseps Kavisli, 7 (2)</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11271-30</td><td>Dumont</td></tr><tr><td>Cerrahi Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14094-11</td><td>Paslanmaz 25x</td></tr><tr><td>Buharlaştırıcı + Akış ölçer</td><td>Moduflex Anestezi Aletleri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Fisher</td><td>02-215-414</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma pedi</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>RT-JR-20</td><td></td></tr><tr><td>Su Sonikatörü</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-08895-01</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin</td><td>Patterson Veteriner Tedarik A.Ş</td><td></td><td></td></tr>.</tbody></table>

farelerde İntrathecally sentezlenmiş proteinlerin kantitatif Ölçümü

Quantitative Measurement of Intrathecally Synthesized Proteins in Mice

Beyin ve omurilikte bulunan bir sıvı olan beyin omurilik sıvısı (BOS), hem temel hem de klinik bilim için büyük önem taşımaktadır. BOS protein bileşiminin analizi, nörolojik hastalıkların yanı sıra temel nörolojik araştırmalarda da önemli bilgiler sağlar. Bir uyarı, BOS cinsinden ölçülen proteinlerin hem intratekal sentezden hem de serumdan transudasyondan kaynaklanabilir ve BOS'un protein analizi sadece bu iki bileşenin toplamını belirleyebilir. Protein transudasyonu ile hayvan modellerinde ve insanlarda intrathecally üretilen proteinler arasında ayrım yapmak için, geleneksel protein analiz araçlarını kullanan BOS protein profilleme ölçümleri, kan-beyin arabiriminin bütünlüğünün bir göstergesi olan albumin BOS/serum quotient (Qalbumin)ve intrakalprotein sentezinin bir tahmini olan protein indeksini (Qprotein/Qalbumin)içermelidir. Bu protokol, bos ve kan toplamadan, intratekal protein sentezinin kantitatif ölçümü ve nörolojik bozuklukların fare modellerinde BBI bozukluğunun kantitatif ölçümü için tüm prosedürü göstermektedir.

Bu temsili deney multipl skleroz (MS) iki klinik olarak ilgili kemirgen modelleri IgG intratekal sentezini karşılaştırmayı amaçladı: PLP139-151-deneysel otoimmün ensefalomiyelit (R-EAE) ve kronik progresif nüks, Theiler's murine ensefalomiyelit virüsü kaynaklı demiyelinating hastalık (TMEV IDD). R-EAE relaps-remitting MS anlamak için yararlı bir model, TMEV-IDD modeli kronik progresif MS özellikleri ise19.
Bu çalışmada R-EAE (n = 12) ve TMEV-IDD (n = 28) intr...

Yüksek spinal sıvı protein düzeyleri ya değiştirilmiş bir kan-beyin bariyeri veya intratekal sentez arasında plazma proteininin difüzyon sonucu olabilir. Bu makalede, her iki vakanın da ayrımına yardımcı olan ve intrathecally sentezlenmiş proteinlerin nicel ölçümlerini sağlayan optimize edilmiş bir test protokolü sunulmuştur.

Farelerde İntrathecally Sentezlenmiş Proteinlerin Kantitatif Ölçümü

Cerebrospinal fluid (CSF), a fluid found in the brain and the spinal cord, is of great importance to both basic and clinical science. The analysis of the ...

Bu protokol, BOS protein düzeylerinin kantitatif düzeltmesinde BOS ve kan toplamanın, nörolojik bozuklukların fare modellerinde bir tekal protein sentezini ölçmesine olanak sağlar. Bu prosedür, BOS proteinlerinin patofizyolojik kökeninin ve kan BOS'un bütünlüğünün stabilitesi ve fonksiyonel öneminin değerlendirilebileceği bir temel sağlar. İnterthecal protein sentezi ve bariyer bütünlüğünün analizi diğer hayvan modellerine ve insan çalışmalarına uygulanabilir.Örneğin, merkezi sinir sistemi hastalıkları kontrol etmek için. Farelerde önemli hacimlerde temiz BOS toplamak teknik olarak zor olabilir, bu nedenle büyük hacimlerde kirlenmemiş numune elde edilene kadar tekniğin pratik edilmesi tavsiye edilir. Prosedürleri gösteren Micheal Linzey, Dartmouth deneysel ve moleküler tıp programı yüksek lisans öğrencisi, bizim yeni immünoloji araştırma grubunda olacaktır.Retro orbital kanama ile serum toplanması için. 15 gramdan daha büyük bir anestezili farede pedal refleksine yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, baskın olmayan elin başparmak ve işaret parmağıyla kulakların arkasındaki gevşek deriyi tutun ve gözün üzerindeki deriyi geri çekmek için işaret parmağını kullanın. Gözün altındaki de

quantitative-measurement-of-intrathecally-synthesized-proteins-in-mice

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

(Tg) AD transgenik fare modelleri, nasıl ve neden Aβ veya tau düzeyleri BOS değişikliği insan hastalarda hastalık ilerledikçe araştırmak için mükemmel bir fırsat sağlar. Burada, fare seri BOS örnekleme için rafine bir sisterna magna ponksiyonu tekniği göstermektedir.

Cisterna Magna Fare Beyin Omurilik Sıvısı Seri Toplama Tekniği

Bu protokol, ayrışmış nöronal kültür ve immünsitokimya kullanarak beyin bölümlerinde de sinaps sayısını ölçmek için nasıl ayrıntıları. Kompartman-spesifik antikorların kullanarak, presinaptik terminalleri yanı sıra postsinaptik uzmanlık siteleri etiket. Biz bu belirteçler tarafından oluşturulan sinyaller arasındaki sinaps ko noktaları olarak tanımlar.

Sinapslar miktarının: Synapse Numarası ölçmek için bir İmmünositokimya tabanlı Testi

Bu video, belirli bir presinaptik proteinin dağılımını ölçmek için bir fare beyin diliminin immünofloresan boyamasını göstermektedir. İşlem, spesifik olmayan bölgelerin bloke edilmesini, hedef protein için birincil antikorların ve bir referans işaretleyicinin uygulanmasını, ardından ikincil antikor etiketlemesini ve nükleer karşı boyamayı içerir. Referans işaretleyici, tutarlı bir taban çizgisi sağlayarak doğru niceleme sağlar ve presinaptik proteinin dağılımı, konfokal mikroskopi kullanılarak...

İmmünofloresan Kullanarak Fare Beynindeki Bir Presinaptik Proteinin Dağılımının Ölçülmesi

Sinaptik plastisiteyi ve hafızayı kontrol eden moleküllerin ve yolakların tanımlanması, sinirbilimde hala büyük bir zorluktur. Burada, işitsel bir öğrenme paradigmasında öğrenme ve hafıza konsolidasyonu sırasında sinapsların moleküler yeniden düzenlenmesinde rol oynadığı varsayılan sinaptik proteinlerin göreceli nicelleştirilmesini ele alan bir iş akışı açıklanmaktadır.

İşitsel Ayrımcılık Öğrenme sonra Fare Beyin Bölgeler Yüksek Çözünürlüklü Sayısal Synaptic Proteome Profil

Katı faz ekstraksiyonu ve sıvı kromatografi tandem kütle spektrometrisine dayalı olarak insan BOS'unda Aβ1-42'nin mutlak miktar tayini için bir referans ölçüm prosedürü açıklanmaktadır.

Aβ mutlak Niceleme<sub&gt; 1-42</sub&gt; BOS bir kitle Spektrometrik Referans Ölçüm Prosedürü kullanma

İki substrat özgü γ-secretase deneyleri başarılı bir şekilde üretilip. Burada sunulan her iki hücre tabanlı deneyleri γ-secretase enzimatik faaliyetleri yolu ile ateş böceği luciferase gazetecilere verim ölçmek için tasarlanmıştır.

Amiloid habercisi γ-Secretase-aracılı Protein ve çentik bölünme hücre tabanlı Luciferase muhabir tahlil platformlarda nicel ölçüm

Protein sentezini hücreler için kritik bir biyolojik süreçtir. Beyinde, adaptif değişiklikler için gereklidir. Sağlam beyinde protein sentezinin oranlarının ölçülmesi dikkatli metodolojik hususlar gerektirir. Burada L-[1-14C]-leucine nicel autoradiographic yöntemi, serebral protein sentezinin bölgesel oranlarının in vivo olarak belirlenmesi için sunuyoruz.

Serebral protein sentezi In vivo bölgesel oranlarının belirlenmesi için nicel Autoradiographic yöntemi

Burada, bir sinaptik protein ayirt boyama kullanarak işaret protein, confocal mikroskobu ve bilgisayar tabanlı analiz göre dağılımını belirlemek için nicel bir yaklaşım açıklar.

Türdeş olmayan dağıtım ayirt kullanarak fare beynindeki bir sinaptik protein miktarının

Bu yöntem protein düzeyleri farklı dokular ve standartlaştırılmış bir nicel Batı blotting yaklaşım kullanarak farklı gelişim timepoints karşılaştırılması için sağlam ve tekrarlanabilir bir yaklaşım açıklar.

Sağlam dokulara ve standart nicel Western Blot kullanarak geliştirme boyunca Protein düzeylerinin karşılaştırılması

Bu protokol, kemirgen beynin farklı hücresel bölmeler içinde Ubiquitin-proteasome sistemi (UPS) etkinliğini verimli bir şekilde ölçmek için tasarlanmıştır. Kullanıcılar, aynı hayvanlarda nükleer, sitoplazmik ve sinaptik fraksiyonlar içinde çalışan UPS 'i inceleyebilir, bu karmaşık analizleri gerçekleştirmek için gereken zaman ve hayvan sayısını azaltır.

Subcellular Ubiquitin ölçümü-kemirgen beyinde proteasom aktivitesi

Bu çalışma, izole beyin mikrogliasında intranükleer akış sitometrisi kullanılarak küresel histon modifikasyonlarının ölçülmesi için bir protokolü açıklamaktadır. Çalışma ayrıca veri toplama için kullanılan mikroglia izolasyon protokolünü de içermektedir.

İzole Fare Beyni Mikrogliasında İntranükleer Akış Sitometrisi Kullanılarak Global Histon Post Translasyonel Modifikasyonların Miktar Tayini

Öğrenin farelerde beyin omurilik sıvısı ve kan toplama yöntemini kullanarak intratekal protein sentezini kantitatif olarak ölçme tekniğini. Bu protokol kan-beyin bariyeri bütünlüğünü değerlendirmeye yardımcı olur.

Farelerde İntrathecally Sentezlenmiş Proteinlerin Kantitatif Ölçümü

Daha fazla video keşfet