Helianthus Annuus'ta Büyük Ölçekli Termal Görüntüleme Taraması ile Bitki Transpirasyonunun Yeni Regülatörlerinin Belirlenmesi

Bu protokol, bitki transpirasyonunu düzenleyebilen yeni bileşikleri belirlemek için termal görüntüleme kullanır. Bu teknik, test edilebilen bitki türleri, bileşiğin doğası ve görüntüleme türü açısından çok yönlüdür. Ekimiçin bitkiler kurmak için, ilk standart 10 tarafından 20 inç bitki tepsileri hiçbir delik ile ince vermikülit dört santimetre kalınlığında tabaka ekleyin ve tepsiler arasında iki santimetre ayrı tohum tutucuları yerleştirin.

Vermikülit ile tohum tutucuları doldurun ve tohum yarısı maruz kalır, böylece her tutucu içine sivri bir ayçiçeği tohumu aşağı yerleştirin. Tüm tohumlar kaplandığında, üstten su ile ince vermikülit ve sis ek iki santimetre ile kaplayın. Bir saat sonra, kapaklar ile tepsiler kapağı ve bir sera bir büyüme odasında bitkiler yerleştirin.

Hidroponik sistemi kurmak için, distile su ile hidroponik büyüyen bitkiler için uygun bir uygun büyüklükte konteyner doldurun ve üretici tarafından belirtildiği gibi genel hydroponics gübre ekleyin. Daha sonra sürekli hareket ile ortaya çıkan hidroponik çözeltisi havalandırmak için hava ve su pompaları kullanın. Hydroponics floaters hazırlamak için, konteyner boyutlarına iki santimetre kalınlığında genişletilmiş polistiren köpük bir levha kesilmiş ve köpük bir ila iki santimetre çapında delikler yapmak için ahşap yakma aracı kullanın.

Sonra yüzenleri hidroponik sisteme yerleştirin. Dikimden beş gün sonra, fideler vermikülitin dışına hafifçe çekin. Hemen fazla vermikülit kaldırmak ve kalan perikarps yumuşatmak için 30 dakika su bir kap ta fideler yerleştirin.

Ortaya çıkan birincil kökler görünür olduğunda, gerektiğinde perikarps elle kaldırın. Tohum tutucular içindeki fideleri hidroponik sistemde hazırlanmış polistiren köpük şamandıralara aktarın. Iki gün boyunca hidroponik bitkiler büyümek.

Küçük bileşik kütüphaneden kimyasallar oda sıcaklığında çözülsün. Negatif kontrol tedavisi için altı kapaksız iki mililitre mikrotüpler, ABA tedavisi için üç tüp ve triplicate ilgi 20 kimyasalların etkilerinin analizi için son 60 tüpler etiket. Test tüplerinin her birine 10 mikrolitre, üç ABA tüpüne 10 mikrolitre, üç ABA tüpüne 10 mikrolitre ve altı kontrol tüpüne 10 mikrolitre dimetil sülfoksit ekleyin.

Daha sonra her tüpe 990 mikrolitre 10 milimolar MES potasyum hidroksit karıştırın. Tüpleri, pozisyonla ilgili önyargıyı hesaba katmak için raf içinde eşit olarak dağıtılan pozitif ve negatif kontrol ve deneysel tüplerle bir tüp rafına yerleştirin. Termal görüntüleme kamerasını kurmak için önce kamerayı bir fotokopi standına monte edin ve tüm kabloları dizüstü bilgisayara bağlayın.

Dizüstü bilgisayarı açmadan önce kamerayı açın ve termal görüntüleme analiz yazılımını açın. Kayıt parametrelerini ayarlamak için, Kayıt Ayarları altında anahtar simgesinin seçilmesine izin vermek için fareyi Kayıt düğmesinin üzerine yuvarlayın ve uygun kayıt modunu ve seçeneklerini seçin. Fidelerin tedavisi için, dikkatlice tohum tutucu yutun ve hızla su içeren sığ çanak içine kök daldırma.

Her fidenin ana kökünü, tohum tutucunun en bazal ucunun 0,8 ila bir santimetre altında kesin ve taze kesilmiş bitkiyi bir kimyasal tüpe yerleştirin. Tüm fideler aktarıldığında, bitkileri termal görüntüleme kamerasının altına yerleştirin ve tüm bitkilerin kameranın görüş alanı içinde olduğunu doğrulayın. Kamerayı cotyledonların yüzeyine odaklamak için Control Alt A tuşuna basın ve Film Kaydet’e tıklayın.

Kaydı onaylayan yeni bir pencere açılır. 1-2 saat sonra kaydı durdurun. Veri analizi için doğru seq dosyalarını açın ve filmi duraklatın.

İlgi alanı üçe üç piksel simgesinin bir ölçüm imleci bölgesini tıklatın ve fareyi ilk bitkinin bir karyolasının ortasına taşıyın. Cotyledon’u etiketlemek için resmin üzerine sol tıklayın. İlk bitkinin ikinci karonunu aynı şekilde etiketlayın.

Tüm bitkiler iki imleçle etiketlendiğinde, ilgi alanı simgesinin düzenleme bölgelerini tıklatın ve sol tıklatın basılı tutun ve tüm ilgi çekici bölgeleri seçmek için kaydırın. Ardından, fareyi istatistik görüntüleyici simgesinin üzerine yuvarlayın ve zamansal çizimi seçin. Yeni bir pencere açılacak.

Filmi çalıştırın, bir grafik verilerle dolacak. Ardından grafik penceresinde, yeni bir menü açmak için çift oku tıklatın ve verileri kaydetmek için kaydet simgesini tıklatın. Kırmızı boya eritrosin B kullanımı kimyasalların gözle görülür bir kesilmiş kök yoluyla bir ayçiçeği fidesi cotyledons içine 10 dakika içinde absorbe yeteneğini göstermektedir.

Bitkiler ABA ile tedavi edildiğinde, stomatal diyafram azalması ve stomatal iletkenlik ile ilişkili 30 dakika içinde ayçiçeği kotoledonlarında yaprak sıcaklığında bir artış tespit edilir. Buna ek olarak, 10 mikromolar ABA ile tedaviden 15 dakika sonra, beş mikromolar ABA ile tedaviden 20 dakika sonra ısıl görüntüleme ile yaprak sıcaklığının ölçülmesinin stomatal diyafram ve iletkenliğin ölçülmesi için iyi bir proxy olduğunu gösteren foliar sıcaklığının arttığı görülmektedir. Bu temsili deneyde, standart puan tabanlı istatistiksel tedavi, stomatal kapanma veya açılması teşvik kimyasalların tanımlanmasına olanak sağlar.

Bileşiklerin transpirasyon üzerindeki etkilerini ölçmek için, bitkilerin en uygun ışık, nem ve sıcaklık koşullarında yetişmeleri önemlidir. Bu protokol çoğu dicots uygulanabilir. Ayrıca fotosentetik performans yeni bileşiklerin etkisini değerlendirmek için kullanılabilir, örneğin klorofil floresan ölçerek.