Name: Yakın Kızılötesi Hassas, Çekirdek Kabuğu Aşı Dağıtım Platformu Üretimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 27 s
Description: Keşfedin, yakın kızılötesi lazerle aktive edilebilen polibalonlar kullanarak aşı dağıtım platformu üretimini. Bu yöntem, gelişmekte olan ülkelerde aşı erişilebilirliğini artırır ve kargo stabilitesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nötron aktivasyon analizine (NAA) yardımcı olan TAMU kimya bölümündeki elemental analiz laboratuarına bağlı Dr. Bryan E. Tomlin'e teşekkür ederiz.

1. Policaprolacyone triakrilat (PCLTA) sentezi
<ol><li>Kuru 3.2 mL 400 Da policaprolacyone (PCL) triol bir gecede 50 °C açık 200 mL yuvarlak alt şişe ve K2CO3 90 °C'de bir cam şişe.</li>
	<li>Trikoyu 6,4 mL diklorometan (DCM) ve 4,246 g potasyum karbonat (K2CO3)ile argon altında karıştırın.</li>
	<li>27,2 mL DCM'de 2,72 mL akrilosil klorür karıştırın ve 5 dk'nın üzerindeki şişedeki reaksiyon karışımına damla yama ekleyin.</li>
	<li>Reaksiyon karışımını alüminyum folyo ile kaplayın ve oda sıcaklığında 24 saat argon altında rahatsız edilmeden bekletin.</li>
	<li>24 saat sonra, fazla reaktifleri atmak için vakum altında bir Buchner hunisi üzerinde bir filtre kağıdı kullanarak reaksiyon karışımı filtre.</li>
	<li>Diethyl eter kaldırmak için bir 1:3 (vol / vol) ve rotovape 30 °C'de diethyl eter içinde endcapped polimer içeren adım 1.5 filtrat çökeltmek.</li>
</ol>2. Polikasının oluşumu
NOT: Deiyonize (DI) suya polimer enjekte etmek, polikabarcıkların şişenin dibine göç etmesini ve bunun sonucunda da düzleşmeye neden olur. Polikabarın düzlemesi önlemek için %10 (wt/vol) karboksimetil selüloz (CMC) yerine cam şişeyi doldurun.
<ol><li>DI suda %10 (wt/vol) CMC çözeltisi hazırlayın.</li>
	<li>0,92 mL'lik cam şişeyi 1 mL transfer pipet kullanarak %10 CMC'nin 0,8 mL'si ile doldurun.</li>
	<li>1000 mg/mL 14 kDa PCL'yi DCM'de karıştırın ve PCLTA'yı 200 μL'lik toplam hacim için 1:3 (vol/vol) sentezlayın veya kloroformda 5 kDa polisi (laktik-koglikolik asit) diyakrilat (PLGADA) 1000 mg/mL 200mg/mL hazırlayın.</li>
	<li>Mix 2-hydroxy-4′-(2-hydroxyethoxy)-2-metilpropiophenone (fotoproinitiator) polimer ile (PLGADA veya PCL/PCLTA) karışımı 0.005:1 (vol/vol).</li>
	<li>0,016 inç iç çapı olan paslanmaz çelik bir boruya bağlı bir şırınga pompasıüzerine monte edilmiş 1 mL cam şırınga içine 200 μL polimer karışımı yükleyin.</li>
	<li>Polimer tüpün ileri ve geri hareketini kontrol etmek için bir mikromotor kullanın ve polimeri cam şişedeki %10 CMC'ye enjekte edin ve polikabunu oluşturun.</li>
	<li>2 W/cm 2'de 60 s için 254 nm dalga boyunda2ultraviyole (UV) altında polibubbles Cure .</li>
	<li>Flaş sıvı nitrojen polikabarcıklar dondurma ve 0.010 mBar vakum gecede ve -85 °C lyophilize.</li>
	<li>Polybubbles'ı forseps kullanarak kurutulmuş CMC'den ayırın ve artık CMC'yi temizlemek için polikabarcıkları DI su ile yıkayın. Diğer polimerler serbest kinetiği değiştirmek için değişiklikler ile büyük olasılıkla kullanılabilir unutmayın.</li>
</ol>3. Polikabarcık çapının modülasyonu
<ol><li>0,92 mL'lik cam şişeyi 1 mL transfer pipet kullanarak %10 CMC ile doldurun.</li>
	<li>1000mg/mL 14kDa PCL ile 1:3 (vol/vol) ile PCL/PCLTA'yı karıştırın ve PCLTA sentezedin. 0.005:1 (vol/vol) ile fotoinitiator'u polimer karışımıile karıştırın.</li>
	<li>Polimer karışımını, 0,016 inç iç çapı olan paslanmaz çelik bir boruya bağlı bir şırınga pompasına monte edilmiş 1 mL cam şırıngaya yükleyin.</li>
	<li>Polimer tüpün ileri ve geri hareketini kontrol etmek için bir mikromotor kullanın ve polimeri cam şişedeki %10 CMC'ye enjekte edin ve polikabunu oluşturun.</li>
	<li>Çeşitli çaplarda polikasını elde etmek için dağıtım oranını 0,0005'ten 1 μL/s'ye göre değiştirin.</li>
	<li>Farklı çapta polikabarcıklar ile şişe görüntüleri alın.</li>
	<li>Polybubbles çapını ölçmek ve ölçek olarak şişe boyutunu kullanmak için ImageJ kullanın.</li>
</ol>4. Polybubble içinde kargo merkezleme
<ol><li>
K2CO3kullanılarak PCL/PCLTA viskozitesinin modülasyonu : NOT: 1000 mg/mL'de 5 kDa PLAGDA'nın viskozitesi kargonun merkezalınması için yeterli olduğundan PLGADA'nın viskozitesi K2CO3 kullanılarak değiştirilmemektedir.<ol>
<li>0 mg/mL, 10 mg/mL, 20 mg/mL, 40 mg/mL ve 60 mg/mL dahil olmak üzere çeşitli konsantrasyonlarda PCLTA'ya K2CO3 (PCLTA reaksiyonundan sonra izole edildi) ekleyin.</li>
		<li>Reometri kullanarak kesme hızını 0'dan 1000'e 1/s'ye değiştirerek çözeltilerin dinamik viskozitelerini ölçün.</li>
		<li>Farklı K2CO3 (adım 4.1.1) konsantrasyonlarında PCL/PCLTA çözeltileri kullanılarak oluşturulan polikasınıların ortasına kargoyu el ile enjekte edin (kargo karışımını hazırlamak için adım 4.2'ye bakın). Adım 4.1.1'den hangi çözeltinin kargonun ortada tutulmasına neden olabileceğini gözlemleyerek K2CO3'ün optimum konsantrasyonunun belirlenmesi.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
CMC ile kargonun (küçük moleküllerle zaten gösterilen fizibilite) merkeze
	<ol>
<li>Kargonun viskozitesini artırmak için kargoyu bir rotatorda bir gecede %5 (wt/vol) CMC ile karıştırın.</li>
		<li>Polybubble'a 2 μL kargo karışımını elle enjekte edin ve 2 W/cm2'de60 s için 254 nm dalga boyunda UV kürleme ile devam edin.</li>
		<li>Flaş 30 s için sıvı nitrojen polikabarcıklar dondurma ve 0.010 mBar vakum gecede lyophilize ve -85 °C.</li>
		<li>Forseps kullanarak kurutulmuş CMC'den polikabarcıkları ayırın ve artık CMC'yi çıkarmak için DI suyuyla yıkayın.</li>
		<li>Polybubble'ı ikiye kesin ve kargonun ortalanması için konfokal mikroskopi kullanarak yarıları görüntüleyin (uyarma ve emisyon dalga boyları için 6. adıma bakın).</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Kargo Formülasyonu
NOT: Polikabarcık formülasyonu küçük moleküller, proteinler ve nükleik asitler de dahil olmak üzere çeşitli kargo tipleri ev olabilir.
<ol><li>Önceki çalışmalara dayanarak, protein kargo durumunda, polietilen glikol dahil excipients kullanın (PEG)6, polivinilpyrrolidone (PVP), ve glikopolimerler6 polikabarcık formülasyonu sırasında protein istikrarını artırmak için.</li>
	<li>2. adımdaki protokole göre çok kabarcıklar oluştur.</li>
	<li>625 μL HIV gp120/41 antijenine 17,11 g trehalose ekleyerek antijen çözeltisini hazırlayın.</li>
	<li>Polybubble ortasında 1 μL antijen çözeltisi elle enjekte edin.</li>
	<li>0, 7, 14 ve 21 gün açık polikabarcıklar ve uyarma ve emisyon dalga boyları ile antijen floresan kayıt 497 nm ve 520 nm, sırasıyla.</li>
	<li>Enzime bağlı immünosorbent tsay (ELISA) kullanarak antijenin işlevselliğini belirleyin ve %5 yağsız sütü bloke edici tampon olarak kullanın.</li>
</ol>6. Kargonun serbest bırakılması
NOT: Küçük molekül veya antijen kargo tipi olarak kullanılabilir
<ol><li>
Küçük molekül
	<ol>
<li>37 °C'de 400 μL fosfat tampon salini (PBS), PLGADA polikabarcıkları için 50 °C ve PCL/PCLTA polikasında 70 °C'de ortalanmış acriflavine ile inkübatör polikasını. NOT: Vücut ısılarının üzerinde test yapmanızı önermemizin nedeni, PCL ve PLGA içindeki altın nanorodları (AUNR) lazerle rken polikağın ulaştığı sıcaklığı (50 °C) simüle etmektir; ve b) PCL'nin (50 °C, 70 °C) bozulma sürecini hızlandırır.</li>
		<li>Her zaman noktasında, supernatants toplamak ve taze PBS 400 μL ile değiştirin.</li>
		<li>Toplanan süpernatantlarda floresan yoğunlukları ölçmek için bir plaka okuyucu kullanın. NOT: Acriflavine için 416 nm/514 nm ex/em kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Antijen
	<ol>
<li>37 °C'de 400 μL PBS'de ortalanmış büyükbaş albumin serumu (BSA)-488, PLGADA polikasında 50 °C ve PCL/PCLTA polikasında 50 °C'de kuluçka polikasında.</li>
		<li>Her zaman noktasında, supernatants toplamak ve 400 μL taze PBS ile değiştirin.</li>
		<li>Toplanan süpernatantlarda floresan yoğunlukları ölçmek için bir plaka okuyucu kullanın. BSA-488 için 497 nm/520 nm ex/em kullanın. NOT: Antijenin aşırı sıcaklığa maruz kalmaması için PCL/PCLTA polikasını 70 °C'de serbest bırakma çalışması yapılmamalıdır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. Toksisite
<ol><li>
Nötron aktivasyon analizi (NAA) kullanılarak polikabarcıklarda klor içeriğinin ölçülmesi
	<ol>
<li>Bu çalışma için 0,010 mBar vakum ve -85 °C'de 2, 4, 6, 20 ve 24 saat için lyophilized polibubbles kullanın.</li>
		<li>Ölçü 5-9 polikabarcıklar mg ve LDPE ışınlama şişeleri üzerine yerleştirin.</li>
		<li>Ulusal standartlar ve teknoloji enstitüsünden (NIST) izlenebilir kalibrasyon çözeltisinden 1000 g/mL klor kalibrasyon çözeltisi hazırlayın.</li>
		<li>1- megawatt Triga reaktörünün her numuneüzerinde nötron ışınlamalarını 9,1 × 1012/cm 2·s 600 s için nötron ışınlamaları gerçekleştirin.</li>
		<li>Polikasını ışınlanmamış şişelere aktarın.</li>
		<li>360 s çürüme aralıklarından sonra 500 s için gama ışını spektrumları elde etmek için HPGe dedektörü kullanın.</li>
		<li>Verileri analiz etmek için canberra Industries'in NAA yazılımını kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
NAA kullanarak polikabarcıklardan salınan klor içeriğinin ölçülmesi
	<ol>
<li>Bir gecede (0.010 mBar vakumve -85 °C'de) 37 °C'de 400 μL PBS'de liyofilize edilen polikasında inküpoliz polikasında.</li>
		<li>Kuluçkadan sonra 1, 2 ve 3.</li>
		<li>Adım 7.1'de açıklandığı gibi yukarıdaki yöntemi kullanarak NAA kullanarak klor içeriği için süpernatantları analiz edin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>8. Kittler, S., ve ark.8 tarafından AuNR Sentezi
<ol><li>AuNR tohumlama çözeltisini 250 μL 10 mM kloroaurik asit (HAuCl4), 7,5 mL 100 mM setrimonyum bromür (CTAB) ve 600 μL 10 mM buz gibi sodyum borohidrit (NaBH4)karıştırarak hazırlayın.</li>
	<li>100 mM CTAB'ın 40 mL'si, 10 mM HAuCl4,250 μL gümüş nitrat (AgNO3)ve 270 μL 17,6 mg/mL askorbik asidi bir tüpe karıştırarak Büyüme çözeltisini hazırlayın.</li>
	<li>1 dk için 1200 rpm'de 420 μL tohum çözeltisini büyüme çözeltisi ile şiddetle karıştırın. Daha sonra 16 saat tepki vermek için karışımı rahatsız edilmeden bırakın.</li>
	<li>10 dk için 8000 × g santrifüj tarafından karışımdan fazla reaktifler çıkarın ve supernatant atın.</li>
</ol>9. AuNR'ların Soliman, M.G., ve diğerleri tarafından hidrofobikleştirilmesi9
<ol><li>1 mM sodyum hidroksit (NaOH) kullanarak sentezlenmiş CTAB stabilize AUNR'ların 1,5 mL'lik pH'ını 10'a ayarlayın.</li>
	<li>Çözeltiyi 0,1 mL 0,3 mM metillenmiş PEG (mPEG) tiol ile bir gecede 400 rpm'de karıştırın.</li>
	<li>4 gün boyunca 500 rpm kloroform 0.4 M dodecylamine (DDA) ile PEGYlated AuNRs karıştırın.</li>
	<li>Hidrofobik AUNR içeren üst organik katmanı dışarı boru ve 4 ° C'de saklayın ileride kullanıma kadar.</li>
</ol>10. Polikasıların NIR aktivasyonu
<ol><li>Polimer (PLGADA veya PCL/PCLTA) çözeltisini hidrofobik AUNR ile 1:9 (vol/vol) karıştırın.</li>
	<li>0.005:1 (vol/vol) ile polimer-AuNR karışımına fotoinitiator ekleyin.</li>
	<li>Polimer-AuNR karışımını %10 CMC (wt/vol) ile 0,92 mL cam şişeye enjekte ederek polikabarcıklar oluşturur (adım 2'ye bakın).</li>
	<li>2W/cm2'de 60 s için 254 nm dalga boyunda polikabarcıkları iyileştirin.</li>
	<li>30 s için sıvı nitrojen de flaş dondurma ve 0.010 mBar vakum gecede lyophilize ve -85 °C.</li>
	<li>Forseps kullanarak kurutulmuş polikabarcıkları ayırın ve artık CMC'yi çıkarmak için DI suyuyla yıkayın.</li>
	<li>Polikasını 37 °C'de 400 μL PBS'de kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>Her Pazartesi, Çarşamba ve Cuma 5 dakika boyunca 8A 801 nm NIR lazer kullanarak polibubbles etkinleştirin.</li>
	<li>Sıcaklık değerlerini elde etmek için lazer aktivasyonundan önce ve sonra polikasının ileriye dönük kızılötesi (FLIR) görüntülerini alın.</li>
	<li>FLIR görüntülerinden alınan sıcaklık değerlerini temel alan, lazer aktivasyonu öncesi ve sonrası arasındaki sıcaklık farklarını hesaplayın.</li>
</ol>

<ol><li>World Health Organization. Global Immunization: Worldwide Disease Incidence. , Children's Hospital of Philadelphia. https://www.chop.edu/centers-programs/vaccine-education-center/global-immunization/diseases-and-vaccines-world-view (2018).</li>
<li>Paul, A., Bera, M., Gupta, P., Singh, N. D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((o-Hydroxycinnamate+for+sequential+photouncaging+of+two+different+functional+groups+and+its+application+in+releasing+cosmeceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22Organic+and+Biomolecular+Chemistry%22%5BJournal%5D)">o-Hydroxycinnamate for sequential photouncaging of two different functional groups and its application in releasing cosmeceuticals.</a> Organic and Biomolecular Chemistry. 17 (33), 7689-7693 (2019).</li>
<li>Kumari, A., Yadav, S. K., Yadav, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodegradable+polymeric+nanoparticles+based+drug+delivery+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+and+Surfaces+B%3A+Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Biodegradable polymeric nanoparticles based drug delivery systems.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 75 (1), 1-18 (2010).</li>
<li>Dai, C., Wang, B., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microencapsulation+peptide+and+protein+drugs+delivery+system%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+and+Surfaces+B%3A+Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Microencapsulation peptide and protein drugs delivery system.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 41 (2-3), 117-120 (2005).</li>
<li>Souery, W. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+and+quantifying+the+stability+of+amino+acid-based+cargo+within+polymeric+delivery+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Controlling and quantifying the stability of amino acid-based cargo within polymeric delivery systems.</a> Journal of Control Release. 300, 102-113 (2019).</li>
<li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+protein+formulations%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Science%22%5BJournal%5D)">Advanced protein formulations.</a> Protein Science. 24 (7), 1031-1039 (2015).</li>
<li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ultraviolet-curable%2C+core-shell+vaccine+formed+via+phase+separation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+A%22%5BJournal%5D)">An ultraviolet-curable, core-shell vaccine formed via phase separation.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. , (2019).</li>
<li>Kittler, S., Hickey, S. G., Wolff, T., Eychmüller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Easy+and+Fast+Phase+Transfer+of+CTAB+Stabilised+Gold+Nanoparticles+from+Water+to+Organic+Phase%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+f%C3%BCr+Physikalische+Chemie%22%5BJournal%5D)">Easy and Fast Phase Transfer of CTAB Stabilised Gold Nanoparticles from Water to Organic Phase.</a> Zeitschrift für Physikalische Chemie. 229, 235(2015).</li>
<li>Soliman, M. G., Pelaz, B., Parak, W. J., del Pino, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+Transfer+and+Polymer+Coating+Methods+toward+Improving+the+Stability+of+Metallic+Nanoparticles+for+Biological+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+of+Materials%22%5BJournal%5D)">Phase Transfer and Polymer Coating Methods toward Improving the Stability of Metallic Nanoparticles for Biological Applications.</a> Chemistry of Materials. 27 (3), 990-997 (2015).</li>
<li>Arun Kumar, S., Good, J., Hendrix, D., Yoo, E., Kim, D., Deo, K. A., Jhan, Y. Y., Gaharwar, A. K., Bishop, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoengineered+Light-Activatable+Polybubbles+for+On%3FDemand+Therapeutic+Delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Funct.+Mater%22%5BJournal%5D)">Nanoengineered Light-Activatable Polybubbles for On?Demand Therapeutic Delivery.</a> Adv. Funct. Mater. , 2003579(2020).</li>
<li>Wuthrich, P., Ng, S. Y., Fritzinger, B. K., Roskos, K. V., Heller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsatile+and+delayed+release+of+lysozyme+from+ointment-like+poly%28ortho+esters%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Pulsatile and delayed release of lysozyme from ointment-like poly(ortho esters).</a> Journal of Controlled Release. 21 (1), 191-200 (1992).</li>
<li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Instability%2C+stabilization%2C+and+formulation+of+liquid+protein+pharmaceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Instability, stabilization, and formulation of liquid protein pharmaceuticals.</a> International Journal of Pharmaceutics. 185 (2), 129-188 (1999).</li>
<li>Wong, D. Y., Hollister, S. J., Krebsbach, P. H., Nosrat, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28epsilon-caprolactone%29+and+poly+%28L-lactic-co-glycolic+acid%29+degradable+polymer+sponges+attenuate+astrocyte+response+and+lesion+growth+in+acute+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Poly(epsilon-caprolactone) and poly (L-lactic-co-glycolic acid) degradable polymer sponges attenuate astrocyte response and lesion growth in acute traumatic brain injury.</a> Tissue Engineering. 13 (10), 2515-2523 (2007).</li>
<li>Davoodi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+delivery+systems+for+programmed+and+on-demand+release%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Drug delivery systems for programmed and on-demand release.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 132, 104-138 (2018).</li>
<li>Huang, Y. C., Lei, K. F., Liaw, J. W., Tsai, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+laser+intensity+activated+plasmonic+gold+nanoparticle-generated+photothermal+effects+on+cellular+morphology+and+viability%3A+a+real-time%2C+long-term+tracking+and+monitoring+system%5BTitle%5D)+AND+%22Photochemical+and+Photobiological+Sciences%22%5BJournal%5D)">The influence of laser intensity activated plasmonic gold nanoparticle-generated photothermal effects on cellular morphology and viability: a real-time, long-term tracking and monitoring system.</a> Photochemical and Photobiological Sciences. 18 (6), 1419-1429 (2019).</li>
<li>Link, S., Burda, C., Nikoobakht, B., El-Sayed, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-Induced+Shape+Changes+of+Colloidal+Gold+Nanorods+Using+Femtosecond+and+Nanosecond+Laser+Pulses%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+B%22%5BJournal%5D)">Laser-Induced Shape Changes of Colloidal Gold Nanorods Using Femtosecond and Nanosecond Laser Pulses.</a> The Journal of Physical Chemistry B. 104 (26), 6152-6163 (2000).</li>
<li>U.S. Environmental Protection Agency. Chlorine. , https://www.epa.gov/sites/production/files/2016-09/documents/chlorine.pdf (2000).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Güncel teknolojiler ve zorluklar Emülsiyon bazlı mikro ve nano tanecikleri yaygın olarak ilaç dağıtım taşıyıcıları olarak kullanılmaktadır. Bu cihazlardan kargo serbest kinetik kapsamlı olarak çalışılmıştır rağmen, patlama serbest kinetik kontrol büyük bir sorun olmuştur11. Kargo çok yönlülüğü ve işlevselliği, aşırı sulu ve organik çözücülere maruz kalma nedeniyle emülsiyon tabanlı sistemlerde de sınırlıdır. Protein bazlı kargo genellikle mikro ve nano tanecikleri kargo denatür...

Sınırlı bağışıklama kapsamı özellikle aşı yla önlenebilir hastalıklardan kaynaklanan 3 milyon kişinin ölümüyle sonuçlanır1. Yetersiz depolama ve taşıma koşulları fonksiyonel aşıların israfına yol açar ve böylece küresel bağışıklamanın azalmasına katkıda bulunur. Buna ek olarak, gerekli aşı programlarına bağlı kalarak değil eksik aşılama da sınırlı aşı kapsama neden olur, özellikle gelişmekte olan ülkelerde2. Tıbbi personele birden fazla ziyaret güçlendirici çekim almak için önerilen süre içinde gereklidir, böylece tam aşı ile nüfus yüzdesi sınırlayan. Bu nedenle, bu zorlukları aşmak için kontrollü aşı teslimatı için yeni stratejiler geliştirmek için bir ihtiyaç vardır.
Aşı dağıtım teknolojileri geliştirmeye yönelik mevcut çabalar emülsiyon tabanlı polimerik sistemleri içerir3,4. Ancak, kargo genellikle potansiyel olarak toplama ve denatürasyona neden olabilir organik çözücü daha fazla miktarda maruz, özellikle protein bazlı kargo bağlamında5,6. Biz yeni bir aşı dağıtım platformu geliştirdik, "polybubbles", potansiyel olarak solvent maruz kalan kargo hacmini en aza indirirken birden fazla kargo bölmeleri ev olabilir7. Örneğin, polikasını çekirdek kabuğu platformumuzda, çapı 0,38 mm (SEM) olan bir kargo cebi, 1 mm'lik polikasının ortasına enjekte edilir. Bu durumda organik çözücüye maruz kalan kargonun yüzey alanı yaklaşık 0,453 mm2olacaktır. Kürelerin (mikro partiküllerin) bir küre (kargo deposu) içindeki ambalaj yoğunluğu göz önüne alındığında, depoya sığabilecek mikro partiküllerin (103μm çapında) gerçek hacmi 0,17 mm 3'tür. Bir mikropartikülün hacmi 5,24x10-8 mm3 olup depoya sığabilecek partikül lerin sayısı ~3.2x106 partikültür. Her mikropartikülün 0,25 μm çapında 20 kargo cebi (çift emülsiyon sonucu) varsa, organik çözücüye maruz2kalan kargonun yüzey alanı 1274 mm 2'dir. Böylece polikabaron içindeki kargo deposu, mikro partiküllerde organik çözücüye maruz kalan organik çözücüye göre ~2800 kat daha az yüzey alanına sahip olacaktır. Polyester bazlı platformumuz böylece organik çözücüye maruz kalan kargo miktarını potansiyel olarak azaltabilir ve bu da kargo toplama ve kararsızlığa neden olabilir.
Polikasında, organik fazdaki polyesterin küresel bir kabarcıkla sonuçlanan sulu bir çözeltiye enjekte edildiği faz ayırma prensibine göre oluşur. Sulu fazdaki kargo daha sonra polikanın ortasına enjekte edilebilir. Başka bir kargo bölmesi potansiyel polimer kabuk ile farklı bir kargo karıştırılarak polikasını içinde elde edilebilir. Bu aşamada polikabar dövülebilir olacak ve daha sonra ortasında kargo ile sağlam bir polikabarcık yapısı neden tedavi edilecektir. Küresel polikasını, polikağın genel boyutunu en aza indirirken polikağın içindeki kargo kapasitesini artırmak için diğer geometrik şekiller in üzerine seçilmiştir. Merkezinde kargo ile Polybubbles gecikmiş patlama serbest göstermek için seçildi. Polybubbles da yakın kızılötesi ile dahil edildi (NIR)- duyarlı (yani, theranostic-sağlayan) ajan, yani altın nanorods (AuNR), polikabarcıkların sıcaklık artışına neden. Bu etki potansiyel olarak daha hızlı bozulmayı kolaylaştırabilir ve gelecekteki uygulamalarda kinetik kontrolü için kullanılabilir. Bu yazıda, polikabarcıklar oluşturmak ve karakterize etmek, polibubbles gecikmiş patlama sürümü elde etmek ve NIR aktivasyonu neden polikabarcıklar içinde AuNR dahil etmek için yaklaşımımızı açıklar.

<table><tbody><tr><td>1 Adımlı Ultra Tetrametilbezidin (TMB)-Enzime Bağlı İmmünosorbent Testi (ELISA) Substrat</td><td>Çözeltisi Thermo scientific</td><td>34028</td><td></td></tr><tr><td>2-Hidroksi-2-metilpropiyofenon</td><td>TCI AMERİKA</td><td>H0991</td><td></td></tr><tr><td>TMB Substrat Abcam</td><td></td><td>ab17152</td><td></td></tr><tr><td>Akriloyl klorür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A24109-100G</td><td></td></tr><tr><td>Akriflavin</td><td>Chem-Impex International</td><td>22916</td><td></td></tr><tr><td>Susuz etil eter</td><td>Fisher Chemical</td><td>E138-500</td><td></td></tr><tr><td>Yaban turpu peroksidaz (HRP)</td><td></td><td></td><td></td> ile konjuge anti-HIV1 gp120 antikoru</tr> <tr><td>Sığır serum albümini (BSA)</td> <td>Fisher BioReagents</td><td>BP9700100</td><td></td></tr><tr><td>BSA-CF488 boya konjugatları</td><td>Invitrogen</td><td>A13100</td><td></td></tr><tr><td>Bromosalisilik asit</td><td>Acros Organics</td><td>AC162142500</td><td></td></tr><tr><td>Karboksimetilselüloz (CMC)</td> <td>Millipore Sigma</td><td>80502-040</td><td></td></tr><tr><td>Centrimonium bromür (CTAB)</td> <td>MP Biyomedikal</td><td>ICN19400480</td><td></td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Fisher Chemical</td><td>C2984</td><td></td></tr><tr><td>Kaplama tamponu</td><td>Abcam</td><td>ab210899</td><td></td></tr><tr><td>Diklorometan (DCM)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>270997-1L</td><td></td></tr><tr><td>Dietil eter</td><td>Fisher Kimyasal</td><td>E1384</td><td></td></tr><tr><td>Dodeasil Amin</td><td>Acros Organics</td><td>AC117665000</td><td></td></tr><tr><td>Doksorubisin hidroklorür</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP251610</td><td></td></tr><tr><td>L-askorbik asit</td><td>Acros Organics</td><td>A61 100</td><td></td></tr><tr><td>Legato 100 Şırınga Pompası</td><td>KD Scientific</td><td>14 831 212</td><td></td></tr><tr><td>mPEG tiyol</td><td>Laysan Bio</td><td>NC0702454</td><td></td></tr><tr><td>Yağsız kuru süt</td><td>Andwin Scientific</td><td>NC9022655</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum karbonat</td><td>Acros Organics</td><td>AC424081000</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat salin tamponu</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP3991</td><td></td></tr> <tr><td>(Poli (kaprolakton)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>440744-250G</td><td></td></tr> <tr><td>(Poli(kaprolakton) triol</td><td>Acros Organics</td><td>AC190730250</td><td></td></tr><tr><td>Poli (laktik-ko-glikolik asit) diakrilat</td><td>CMTec</td><td>280050</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum karbonat</td><td>Acros Organics</td><td>AC424081000</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant HIV1 gp120 + gp41 proteini</td><td>Abcam</td><td>ab49054</td><td></td></tr><tr><td>Gümüş nitrat</td><td>Acros Organics</td><td>S181 25</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum borohidrür</td><td>Fisher Chemical</td><td>S678 10</td><td></td></tr><tr><td>Tetrakloroaurik asit</td><td>Fisher Chemical</td><td>G54 1</td><td></td></tr><tr><td>Trehaloz</td><td>Acros Organics</td><td>NC9022655</td><td></td></tr><tr><td>Trietil amin</td><td>Acros Organics</td><td>AC157910010</td><td></td></tr></tbody></table>

yakın kızılötesi hassas, Çekirdek kabuğu aşı dağıtım platformu Üretimi

Production of Near-Infrared Sensitive, Core-Shell Vaccine Delivery Platform

Yeni salınım profilleri sağlarken kargonun organik çözücüye maruz kalmasını sınırlandırabilen aşı dağıtım stratejileri, dünya çapında bağışıklama kapsamının iyileştirilmesi için çok önemlidir. Burada, polibubbles adı verilen aşı dağıtım platformu sağlayan yeni bir enjekte edilebilir, ultraviyole- tedavi edilebilir ve gecikmiş patlama salınımı tanıtıldı. Kargo% 10 karboksimethycellulose tabanlı sulu çözelti oluşturulan polyester bazlı polibubbles içine enjekte edildi. Bu kağıt polikabarcıklar küresel şeklini korumak ve polikabarcıklar içinde kargo miktarını en üst düzeye çıkarmak için kargo yerleşimi ve tutma optimize etmek için protokoller içerir. Güvenliği sağlamak için polikasındaki klorlu çözücü içeriği nötron aktivasyon analizi kullanılarak analiz edildi. Serbest bırakma çalışmaları, gecikmiş patlama salınımını onaylamak için polikağın içinde kargo olarak küçük moleküllerle yapılmıştır. Kargonun isteğe bağlı teslimat potansiyelini daha fazla göstermek için, altın nanorodlar yakın kızılötesi lazer aktivasyonu sağlamak için polimer kabuk içinde karıştırıldı.

Polybubbles yaygın SEM ve NAA kullanılarak karakterize edildi. Kargo başarılı bir gecikme li serbest bırakılması ile sonuçlanması için ortalandı. Polikabarcıklar da başarılı bir şekilde lazer aktive polikabarcıklar içinde AuNR varlığı nedeniyle aktive edildi.
Polybubble karakterizasyonu CMC olmadan sulu bir çözeltiye enjekte edilen polikalar, cam şişenin alt kısmıyla temasları nedeniyle düzleştirilmiş bir pol...

Bu makalede, gecikmiş seri sürüm sağlamak için yeni bir aşı dağıtım platformu olan "polybubbles"ı üretmek için kullanılan protokoller açıklanmaktadır. Polikonik (laktik-koglikolik asit) ve polikaprolakon gibi polikrolakon polikasını oluşturmak için polyesterler, küçük moleküller ve antijen ler kargo olarak kullanıldı.

Yakın Kızılötesi Hassas, Çekirdek Kabuğu Aşı Dağıtım Platformu Üretimi

Vaccine delivery strategies that can limit the exposure of cargo to organic solvent while enabling novel release profiles are crucial for improving ...

Bu protokol, çözücü ile karbon etkileşimlerini azaltabilir polikasını kullanarak hem küçük moleküller hem de proteinler olabilecek kargo stabilitesini korumaya yardımcı olabilir. Aşı işlevleri genellikle verimsiz ulaşım ve depolama tesisleri nedeniyle tehlikeye olabilir gibi bu yeni teknik gelişmekte olan ülkelerde aşı kapsama geliştirmek için kullanılabilir. Polybubbles imal etmek için, ilk 0.92 mililitre cam şişe içine% 10 CMC 800 mikrolitre eklemek için bir mililitre transfer pipet kullanın.PCLTA sentezlemek için, 200 mikrolitre DCM'de 14 kilodalton PCL mililitre başına 1.000 gram karıştırın. PLGADA sentezlemek için, kloroform 200 mikrolitre içine beş kilodalton PLGADA mililitre başına 1.000 gram karıştırın. 0,005-1 oranında ki polimer ilgi karışımıyla fotoinitiator'u karıştırın ve elde edilen çözeltinin 200 mikrolitresini, iç çapı 0,016 inç olan dağıtım paslanmaz çelik bir boruya bağlı bir şırınga pompasına monte edilmiş bir mililitrelik cam şırıngaya yükleyin.Polimer tüpün ileri ve geri hareketini kontrol etmek için mikro motor kullanmak, polikabarcıklar oluşturmak ve 254 nanometre dalga boyunda ultraviyole ışık altında polikabarcıklar tedavi etmek için cam şişe% 10 CMC içine polimer enjekte ve santimetre kare iki watt 60 saniye boyunca ultraviyole ışık altında polibubbles tedavi, sonra flaş 30 saniye sıvı nitrojen polikabarcıklar dondurmak ve eksi 85 derece santigrat 0.01 milibar vakum gecede taşıyıcıları lyophilize. Bir polikabaron içinde ilgi kargo merkezleme için, bir rotator bir gecede kargo viskozitesini artırmak için bir gecede% 5 CMC ile kargo karıştırın elle polikabariçine kargo karışımı iki mikrolitre enjekte etmeden önce. Tüm kargo enjekte edildiğinde, yeniden tedavi, flaş dondurma, ve sadece gösterildiği gibi enjekte polybubble lyophilize.Ertesi sabah, kurutulmuş CMC polikasını ayırmak için forseps kullanın ve kalan CMC'yi çıkarmak için polikasını deiyonize suyla yıkayın. Daha sonra polybubble'ı ikiye bölün ve kargonun ortalanıp ortalanıp konfokal mikroskopi ile yarıları görüntüleyin. Küçük moleküllü kargo salınımı için, uygun kuluçka uzunluğu için 37 santigrat derecede 400 mikrolitre PBS merkezli acriflavine ile polikabarcıklar kuluçka.Her deneysel zaman noktasında, supernatant toplamak ve şişe taze PBS 400 mikrolitre ekleyin. Sonra toplanan supernatant floresan yoğunluğunu ölçmek için bir plaka okuyucu kullanın. Yakın kızılötesi aktivasyon için polimer çözeltiyi hidrofobik altın nano çubuklarla 1'e 9 oranında karıştırın ve 0,005-1 oranında fotoğraf başlatıcısı ekleyin.Elde edilen karışımı %10 CMC'nin 800 mikrolitresini içeren 0,92 mililitrelik cam şişeye enjekte edin ve ultraviyole ışık altında polikabarcıkları iyileştirin. Flaş donma ve liyofilizizasyon dan sonra, polikabarcıkları deiyonize su ile yıkayın ve taşıyıcıları uygun kuluçka süresi için 37 derecede 400 mikrolitre PBS'de kuluçkaya yatırın. Kuluçka sonunda, PLGADA poliksalar için dört hafta boyunca haftada üç kez sekiz amper için sekiz amper 801 nanometre yakın kızılötesi lazer ile polibubbles aktive sonra ve pcl-PCLTA polibubbles için 14 hafta polikasını ileriye dönük kızılötesi görüntü elde edin.Her deneysel zaman noktasında, supernatant toplamak ve şişe taze PBS 400 mikrolitre ekleyin. Daha sonra ileriye bakan kızılötesi görüntülerden gelen sıcaklık değerlerini temel alan lazer aktivasyonu öncesi ve sonrası polikasınılar arasındaki sıcaklık farklarını hesaplayın. %10 CMC bazlı sulu çözeltinin eklenmesi, polikabarcık sphercity'nin başarılı bir şekilde bakımı için tam bir polikabarcık süspansiyonu sağlar.CMC yokluğunda polikabuna kargo enjeksiyonu sızıntıya ve bunun sonucunda polikasenin içinde kargo tutma eksikliğine neden olabilir. Bu sızıntıyı gidermek için PCLTA'nın viskozitesi, polikaprolakton'un triakritile kaplanmasından sonra izole edilen potasyum karbonat kullanılarak arttırılabilir ve kargonun viskozitesi %5 CMC ile karıştırılarak arttırılabilir. PLGADA polikasınıların viskozitesi kargonun merkezleştirilmesini kolaylaştırmak için yeterlidir ve potasyum karbonat ile modülasyon gerektirmez.Hiv gp120/41 antijeni ile trehalose ile polikasız enjeksiyondan önce karıştırıldıktan sonra antikor bağlama veriminde istatistiksel olarak anlamlı bir fark gözlenmediğini unutmayın. Gecikmiş patlama bültenleri PLGADA polikabarcıkları içinde acriflavine ile 19 gün ortasında polibubbles 37 santigrat derece kuluçka ve polibubbles 50 santigrat derece kuluçka için beşinci gün gözlenir. Buna ek olarak, PLGADA polybubbles ve PCL ve PCLTA polibubbles altın nano çubuklar içeren başarıyla lazer birden çok kez aktive edilebilir.Polikonu oluştururken, reaktifleri ışıktan korumaya ve çözümleri hemen kullanmaya özen lütfen. Bu teknolojiyi geliştirdikten sonra, bu süreci çok kabarcıklı üretimi büyütmek için otomatikleştirmek de istedik.

production-near-infrared-sensitive-core-shell-vaccine-delivery

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol, SARS karşı rekombinant reseptör-bağlayıcı etki alanı (RBD) tabanlı altbirim aşılar eğitim için genel bir yordam açıklanır. RBD 293T hücrelerinin protein, RBD ve fare sera kurulmuş bir SARS pseudovirus nötralizasyon tayini ile nötralizasyonu aktivitesi tespit ile farelerin bağışıklık transfeksiyon ve anlatım yöntemleri içerir.

Rekombinant RBD tabanlı SARS Aşılar için Protokol: Protein hazırlanması, Hayvan Aşılama ve Nötralizasyon Algılama

Bu videoda, çok değerlikli dış zar vezikülü (OMV) aşıları oluşturmak için bir yöntem gösterilmektedir. Memeli hücreleri, bir SpyTag ve bir polihistidin etiketine kaynaşmış viral antijenleri eksprese etmek ve salgılamak için transfekte edilir. Bu antijenler daha sonra bir nikel-nitrilotriasetik asit (Ni-NTA) afinite sütunu kullanılarak saflaştırılır. Saflaştırılmış antijen, yüzeye bağlı SpyCatcher (SC) proteinini eksprese eden dış zar vezikülleri ile karıştırılır. Çoklu antijenler,...

Çok Değerlikli Gösteren Bir Dış Membran Vezikül Aşısı Oluşturulması

Bu videoda, gecikmeli patlama salınımını sağlayan bir polimer kabarcık veya polikabarcık tabanlı yeni bir platform oluşturma yöntemi gösterilmektedir. Polyester bazlı polimerler, çekirdek-kabuk yapısına sahip polikabarcıkları oluşturmak için kullanılır ve küçük moleküller ve antijenler kargo olarak kullanılabilir.

Moleküllerin gecikmeli bir patlama salınımı için yeni bir dağıtım platformu oluşturma tekniği

Bu videoda, polimerik nanopartiküller kullanılarak bir mRNA aşı adayı oluşturmak için bir yöntem gösterilmektedir. Katyonik polimer, negatif yüklü mRNA ile etkileşime girerek polipleksler oluşturur. Poliplekslerin oluşumu mRNA'yı stabilize eder ve bu da onu immünoterapötik uygulamalarda gelecekteki mRNA aşıları için potansiyel bir aday haline getirir.

Aşılama Amaçlı mRNA Yüklü Nanopartiküllerin Formüle Edilmesi

Aşı geliştirmede kullanılmak üzere kendi kendine biraraya gelen protein nano taneciklerinin (SAPN' ler) saflaştırılmasını, yeniden katlanması ve karakterizasyonu nun tanımlanmasını açıklayan ayrıntılı bir yöntem burada verilmiştir.

Trimerik Epitop Sunumu Gerektiren Aşılar için E. coli-expressed Self-Assembling Protein Nano tanecikleri Üretimi

Bu protokol, alt birim aşılarda antijen olarak kullanılabilen nanodiskte desteklenen zar proteinleri üretmek için ticari, hücresiz protein ekspresyon kitlerinin kullanılmasını açıklar.

Aşı Geliştirme için Chlamydia muridarum'dan Rekombinant Majör Dış Membran Proteinine Hücresiz Ölçekli Üretim ve Adjuvan İlavesi

Mevcut protokol, dış zar veziküllerinin biyomühendisliğini, üretim, saflaştırma, biyokonjugasyon ve karakterizasyon dahil olmak üzere bir "Tak ve Göster" aşı platformu olarak tanımlamaktadır.

SARS-CoV-2 Reseptör Bağlama Etki Alanını Gösteren Dış Membran Veziküllerine Dayalı Bir "Tak ve Görüntüle" Nanopartikül Aşı Platformu

Burada, nazal kendiliğinden monte edilmiş nanoemülsiyon tümör aşısının in vitro ve in vivo olarak hazırlanması ve değerlendirilmesi için ayrıntılı yöntemler sunuyoruz.

Nazal Kendi Kendine Toplanan Nanoemülsiyon Tümör Aşısının İn Vitro ve İn Vivo Hazırlanması, Özellikleri, Toksisitesi ve Etkinliğinin Değerlendirilmesi

Bu yöntem, kuduz antijeninin, önceden belirlenmiş bir gecikmeden sonra pulsatil salınımı sağlayan yapısal ve malzeme özelliklerine sahip biyolojik olarak parçalanabilir polimerik mikropartiküllere kapsüllenmesini açıklar. Partikül çekirdeğinden alınan antijenin enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA) değerlendirmesi, partikül üretimi yoluyla bozulmamış trimerik kuduz virüsü glikoproteininin varlığını doğrulamaktadır.

Kuduz Antijenini Kapsülleyen Pulsatil Polimerik Mikropartiküllerin İmalatı

Bu protokolde, antijene özgü sistemik ve mukozal yanıtları desteklemek için adjuvan olarak kullanılmak üzere katyonik nanoemülsiyon kapsüllü retinoik asit (RA) geliştirdik. FDA onaylı RA'yı nanoemülsiyona ekleyerek, nanoemülsiyonun intramüsküler enjeksiyonundan sonra vajina ve ince bağırsakta antijene özgü sIgA teşvik edildi.

OVA'ya özgü sistemik ve mukozal yanıtları teşvik etmek için bir adjuvan olarak katyonik nanoemülsiyon kapsüllenmiş retinoik asit

Keşfedin, yakın kızılötesi lazerle aktive edilebilen polibalonlar kullanarak aşı dağıtım platformu üretimini. Bu yöntem, gelişmekte olan ülkelerde aşı erişilebilirliğini artırır ve kargo stabilitesini sağlar.

Yakın Kızılötesi Hassas, Çekirdek Kabuğu Aşı Dağıtım Platformu Üretimi

Daha fazla video keşfet