Name: Çin Hamster Yumurtalık Hücre Yetiştiriciliğinde Yüksek İş-İş BulaMetli Otomatik Mikro-Biyoreaktörler Kullanılarak Proses Optimizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-18T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 28 s
Description: Keşfedin otomatik mikro-biyoreaktörlerde Çin hamster yumurtalık hücre yetiştiriciliği için DOE tabanlı proses optimizasyonunu. Bu yöntem, Protein A kolonlarıyla protein kantifikasyonu ve verimli biyoproses geliştirme sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF), Federal Eğitim ve Araştırma Bakanlığı, Almanya ve Sartorius Stedim Biotech GmbH, Almanya Biyoİşleme ekibi, destek için teşekkür etmek istiyorum.

1. Kültür Öncesi Prosedürü
NOT: Bu protokol için 1 x 107 hücre/mL canlı hücre konsantrasyonu olan rekombinant CHO DG44 hücreleri kullanılmaktadır.
<ol><li>1,2 mL hücre içeren şişeyi oda sıcaklığına kadar eritin ve hücre süspansiyonuna hemen 10 mL soğuk tohum lu orta içeren 15 mL konik santrifüj tüpüne aktarın.</li>
	<li>Konik santrifüj tüpünü 190 x g ve oda sıcaklığında 5 dakika santrifüj edin ve süpernatantı atın.</li>
	<li>500 mL'lik bir çırpıda tohum ortamının 150 mL'sini 36,8 °C'ye ısıtın.</li>
	<li>Önceden ısıtılmış tohum orta 10 mL hücre pelet yavaşça yeniden askıya ve sallamak şişesi içine hücreleri aktarın.</li>
	<li>Bir hücre sayacı kullanarak ilk VCC ve canlılığı ölçmek için şişeden numunenin 1 mL'sini kullanın. NOT: Başarılı ekim için çözülme den sonra canlılık p'in üzerinde olmalıdır.</li>
	<li>Sallayarak şişeyi 36,8 °C'de orbital shaker (19 mm shaker çapı) ve %7,5 CO2'de 120 rpm sallayarak inkübedin. NOT: Bu koşullar hücre gerginliği ne bağlı olarak değişir ve orta.</li>
	<li>Hücreleri geçtikten üç gün sonra, shaker dan sallamak şişesi çıkarın ve laminar akış kabine altına yerleştirin. Son hücre konsantrasyonunu ölçmek için 1 mL numune alın. Yeni geçitteki ilk hücre konsantrasyonu 2 x 105 hücre/mL olacak şekilde önceden ısıtılmış tohum ortamına aktarılacak hacmi hesaplayın.</li>
	<li>Ana ekimiçin biyoreaktöre aktarılmadan önce hücreleri toplam 5 kez aktarın.</li>
</ol>2. Ana Tarım
<ol><li>Prekültür'ün son hücre konsantrasyonu ölçün. Biyoreaktöre aktarılacak hacmi, reaktördeki ilk hücre konsantrasyonu 3 x 105 hücre/mL olacak şekilde hesaplayın.</li>
	<li>Reaktörü nisbiden bir gün önce üretim ortamıyla doldurun, reaktörü dengeleyin ve sıcaklık, pH ve DO gibi proses parametrelerini ayarlayın. NOT: Yetiştirme koşulları 36.8 °C ve ` çözünmüş oksijen konsantrasyonudur (DO). 6.9, 7.1 ve 7.3 pH'ları ile birlikte 1050 rpm ve 1300 rpm'lik karıştırıcı hızlarını test ettik. Ekimin toplam süresi, hücrelerin hasat edilmesine kadar 12 gündür. Toplu işlem, besleme ortamının her 24 saat eklenmesinden sonra 72 saat çalışır. Ekimiçin kullanılacak protokol bir sonraki bölümde ayrıntılı olarak listelenmiştir.</li>
</ol>3. Tarifi Otomatik Mikro-Biyoreaktör Yazılımında Yazma
NOT: AMBR hücre kültürü yazılımında bir tarif yazmanın iki yolu vardır: sihirbaz kullanılarak veya her adımı el ile ekleyerek oluşturulur. Bu protokolün amacı için sihirbazı kullanan adımlar gösterilir.
<ol><li>Yeni bir deneme oluşturma
	<ol>
<li>AMBR hücre kültürü yazılımını açın ve Giriş sekmesinde Yeni Deneme Oluştur'atıklayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Tarifi yükleme
	<ol><li>Yeni Deneme sekmesinde, denemenin yapılacağı tarihle birlikte deneyin adını girin.<ol>
<li>Kültür istasyonu ve ekim sırasında kullanılacak gemilerin kontrol noktasını etkinleştirin. DoE denemesinin programlanması sırasında kolay bir geçiş için Otomatik DoE Etiketleri de etkinleştirilir. Sonraki sekmeye geçmek için İleri'yi tıklatın.</li>
		</ol></li>
		<li>Antiköpük, inoculum, yem ve glikoz ile birlikte damar içine medya eklenmesi hakkında bilgi ayarlayın.<ol>
<li>Ortam Plakası Ekle kontrol noktasını etkinleştirin. Ortayı içeren plakanın plaka türünü, adını ve konumunu tanımlayın. DİkKAT: Plakanın tipine bağlı olarak ve plaka bir kapak içeriyorsa, sıvı işleyicinin düzgün çalışmasını sağlamak için kontrol Kapaklı</li>
			<li>Gemilere Ortam Ekle'yi tıklatın. Gemilere eklenecek ortamın hacmini girin. Plakadan damarlara ortam transferinin haritasını tanımlayın. Sonraki sekmeye geçmek için İleri'yi tıklatın.</li>
		</ol></li>
		<li>Reaktördeki yetiştirme koşullarını ayarlayın.<ol>
<li>Medya bilgileri yazılıma aktarıldıktan sonra, yetiştirme koşullarını atayın. Durum Medya tıklayın ve sıcaklık, hedef DO, üst pH sınırı ve karıştırma RPM (Yukarı veya Aşağı karıştırma) doldurun.</li>
		</ol></li>
		<li>Damarlar içine inoculums ilaveayarlayın.<ol>
<li>Hücre Plakası Ekle'yietkinleştirin. Ortayı içeren plakanın türünü, adını ve konumunu tanımlayın.</li>
			<li>Damarlara Hücre Ekle'yetıklayın. Aşılama zamanını ve damarlara eklenecek ortamın hacmini girin.</li>
			<li>Sıvı işleyicitarafından hareket edilen yolu plakadan damarlara hücre transferiiçin tanımlayın. Sonraki sekmeye geçmek için İleri'yi tıklatın. NOT: Pipet İpuçlarını Yeniden Kullan,çapraz kontaminasyonu ve yanlış ilk canlı hücre konsantrasyonunu önlemek için devre dışı bırakıldığından emin olun.</li>
		</ol></li>
		<li>Yem, glikoz ve köpük önleyici ilave ayarlayın. NOT: Yem, glikoz ve köpük önleyici ilave prosedürü birbirine benzer. Bu protokol ün hatırına yordam "Feed" için listelenir. Bu glikoz ve antiköpük için çoğaltılabilir.<ol>
<li>Özet Akışı Plakası Ekle'yi etkinleştirin ve plaka türünü, adını ve konumunu tanımlayın. Damarlara Yem Ekle'ye tıklayın ve damarlara eklenecek yem hacmini girin. Yemin plakadan damarlara transferinin haritasını tanımlayın.</li>
			<li>Ekime bağlı olarak, yem ek sayısını ekleyin. Bu ekim için, reaktör her 24 saat için 72 saat sonra beslenir.</li>
			<li>Eklenen hücrelerden gecikmeyeveri girerek besleme arasındaki zaman gecikmesini el ile ekleyin. Beslenmenin ilk günü 72 saatlik aşılamadan sonra, sonraki gün ise 96 saat sonra dır. NOT: Köpük önleyici ilave, ekim sırasında köpürmemek için her gün eklenecek şekilde programlanır.</li>
		</ol></li>
		<li>Ekim sırasında örnekleme ayarlayın.<ol>
<li>Örnek Plaka Ekle'yi etkinleştirin ve plaka türünü, adını ve konumunu tanımlayın.</li>
			<li>Gemilerden Numune Al'ı kontrol edin ve damarlardan çıkarılacak numunenin hacmini girin. Numunenin damarlardan plakaya transferinin haritasını tanımlayın. Ekim boyunca hacmin 10 mL'nin altına düşmemesini sağlayın.</li>
			<li>Ekim sırasında alınacak numune sayısını ekleyin. Beslemeye benzer şekilde, her giriş numune noktası için numunenin damardan çıkarıldığı süreyi ekleyin.</li>
		</ol></li>
		<li>İşlemi kaydedin. Şimdi idam için hazır. NOT: Protokolün sorunsuz çalışmasını sağlamak için AMBR hücre kültürü yazılımındaki İşlem Adımları sekmesine geçin ve tarifin akışını görselleştirmek için İşlem Adımı görünümünü seçin.</li>
	</ol></li>
	<li>Otomatik mikro biyoreaktör deney tasarımı
	<ol>
<li>Biyoreaktörün DOE yazılımını çalıştırmak için, ana yazılımdaki reçetenin kaydedilmesini ve kullanıma hazır olduğundan emin olun.</li>
		<li>AMBR 15 DOE yazılımını açın ve Investigation'a tıklayın ve Yeni'yiseçin.<ol>
<li>Soruşturma Oluştur iletişim kutusuna yeni DOE soruşturmasının adını girin.</li>
			<li>DOE araştırmasına bir deneme atamak için, farklı parametreleri incelemek için oluşturulan tarifi açın. Gözat'ı tıklatın ve ilgili denemeyi seçin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>DOE faktörlerini tanımlayın.<ol>
<li>Gemi etiketleri sütunda zaten kayıtlıdır. İstenilen DOE faktörünü tanımlamak için parametreyi seçin ve DOE faktörüetiketli sütuna tıklayın. Yeni'yi seçin ve birimlerin, kısaltmanın, alt ve üst sınırının (örneğin, sıcaklık, DO, pH) ekleyin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Yanıt faktörlerini tanımlayın.<ol>
<li>DOE faktörleri tanımlandıktan sonra, yanıtı deneysel analizin yapılandırıştırılacak şekilde tanımlayın.</li>
			<li>Yanıtlar sekmesinde, verilerin analizi için dikkate alınacak değerleri tanımlayın.</li>
			<li>DOE Yanıtlarını Edit'e tıklayın ve yanıtın, kısaltmanın, birimlerin, minimum ve maksimum sınırların (örn. titre, canlı hücre konsantrasyonu) adını tanımlayın.</li>
			<li>Yanıtlar tanımlandıktan sonra, her yanıt için AMBR değişkenini seçin ve değişkeni tanımlayın. Bir yanıt otomatik olarak bir mikro-biyoreaktör değişkeni ile ilişkili olabilir, açılan listeden gerekli değişkeni seçin.</li>
			<li>Gereksinime bağlı olarak yanıtın her biri için denklemi değiştirin. Seçim minimum, maksimum, ilk, son ve ortalama veriler arasındadır.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Bir tasarım oluşturun.<ol>
<li>Deneme tasarım türünü seçmek, çoğaltma ve merkez noktalarının sayısını eklemek veya kaldırmak için Tasarım Sihirbazı'nı kullanın.</li>
			<li>Tasarım ve model seçimini belirleyen hedefi seçin: Tarama: Önemli faktörleri bulmak için doğrusal ve etkileşim modellerini kullanır Optimizasyon (RSM), Ayrıntılı modelleme ve optimizasyon için kuadratik ve kübik modelleri kullanır Bölünmüş hedef: Formülasyon ve proses faktörleri için modeller ayrı ayrı seçilebilir</li>
			<li>Hedefe karar verildikten sonra, orta nokta ve çoğaltma sayısı ile birlikte modeli ve tasarımı seçin.</li>
			<li>Bitiş'e tıklayın ve bir sonraki sekmeye geçin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Deneyi tanımlayın. NOT: DOE faktörleri yazılımın sağ sütununda listelenir. İstenilen faktörlerin seçilmesi üzerine, istenilen parametre ile deney yapan gemiler vurgulanır. Kültür istasyonu içindeki gemiler, tekneye sağ tıklayarak istenilen yere taşınarak hareket ettirilebilir.<ol>
<li>AMBR hücre kültürü yazılımında içe aktarılabilen iş paketleri oluşturun. Deney sayısına bağlı olarak farklı çalışma paketleri oluşturulur ve daha fazla uygulama için saklanır</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>AMBR kontrol dizüstü bilgisayarında oluşturulan çalışma paketlerinde denemenin yürütülmesi
	<ol>
<li>Deneme sekmesinde, DOE Denemeoluştur'u tıklatın ve DOE yazılımı kullanılarak oluşturulan iş paketine göz atın.</li>
		<li>Başlat'ıtıklatarak işlemi başlatın.</li>
	</ol></li>
	<li>Deneysel sonuçların analizi
	<ol>
<li>Deneme yürütüldükten sonra, verileri Dışa Aktarma DOE Sonuçlarınıkullanarak dışa aktarın. Dışa Aktarma DOE Sonuçları penceresi açılır ve kültür gemisi ni ve istasyonunu gösteren satırlar tabloda listelenir.</li>
		<li>İstenilen satırları seçin ve tüm sonuçları depolamak ve daha fazla analiz için dosyayı kaydetmek için Dışa Aktarılan Seçili Satırlar veya Dışa Aktarma Deneysel verileri tıklatın.</li>
		<li>Sonuçlar sekmesine geçerek ve Alma Sonuçları'nı seçerek verileri AMBR DOE modülüne aktarın.</li>
		<li>İstenilen veri dosyasına göz atın ve Analiz Sonuçları'nıtıklatın.</li>
		<li>Sonuçları MODDE daha fazla analiz edin.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Otomatik Mikro-biyoreaktörde Yetiştiriciliğin Yürütülmesi
NOT: Aşağıdaki adımlar, yukarıda belirtilen yazılımda yazılan protokol yardımıyla kullanıcı tarafından yürütülür. Adımlar, aksi belirtilmedikçe kullanıcı tarafından gerçekleştirilir.
<ol><li>Gemilerin yüklenmesi
	<ol>
<li>Şekil 2'debetimlenen kültür istasyonunda bir laminar akış dolabı nın altında gama sterilize edilmiş kültür kaplarını açın.</li>
		<li>Kelepçe plakasını p etanol ve çift distile su ile temizleyin. Sonra, plaka ve geminin üstüne yerleştirin otoklav.</li>
		<li>Kelepçe plakasını bir karıştırıcı plakası ile monte edin ve her pimin sıkıca sabitlenmesini sağlar.</li>
		<li>Karıştırma tertibatıüzerine hem karıştırıcı plakasını hem de kelepçe plakasını sıkın.</li>
	</ol></li>
	<li>Mikro-biyoreaktör yazılımının çalıştırıl
	<ol>
<li>Ekimi yürütmek için Bölüm 3'te yazılı programı kullanın.</li>
		<li>İşlem sekmesinde zamanlanan veya tamamlanan işlem adımlarını görselleştirin.</li>
		<li>Karıştırıcı başlamadan önce damarlara köpük önleyici ekleyin ve ekim sırasında aşırı köpük olmamasını sağlayın. Antiköpük düzenli olarak eklenecektir ve köpük görsel olarak tespit edilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Damariçine ortam eklenmesi
	<ol>
<li>Mikro biyoreaktörlerle sağlanan 24 kuyu plakasını steril ortamla manuel olarak doldurun ve sistemin belirlenmiş güvertesinde yerleştirin. Plakanın yazılı program (bölüm 3) tarafından belirlenen güverteye yerleştirildiğinden emin olun. Geminin dolumu bölüm 3.2.2'de tasarladığı şekilde yapılacaktır. NOT: Sıcaklık ve karıştırıcı hemen sonra medya ve antifoam eklenmesi başlar. Sensör okuyucu, damar dolduruldıktan 1 saat sonra etkinleştirilir (Start Monitor adımı). Okuyucu etkinleştirildikten sonra her bir gemiye gaz lama başlar. Ortam, pH kalibrasyonu ve aşılamadan önce en az 6 saat boyunca dengelenir. İşlem parametreleri bölüm 3.2.3'te belirtildiği gibi yazılımda değiştirilebilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Aşı
	<ol>
<li>5. geçitten sonra canlıth hücre konsantrasyonu ölçün. Tüm damarlarda ilk hücre konsantrasyonunun 3 x 105 hücre/mL olduğundan emin olmak için damarlara aktarılacak hücre sayısını hesaplayın.</li>
		<li>Hücreleri 24 derin kuyu plakasına aktarın, süspansiyonun hacmi gerekli hacmin en az 1,6 katıdır. İnokülün 2 mL'lik gerekli hacmi için, 3,2 mL hücre süspansiyonu plakadaki her kuyuya aktarın.</li>
		<li>24 kuyu plakasını belirlenen güverteye yerleştirin. Gemiler bölüm 3.2.4'te olduğu gibi aşılanacaktır.</li>
	</ol></li>
	<li>Günlük örnekleme ve analiz
	<ol>
<li>Sıvı işleyiciyi kullanarak her gün damarlardan 460 μL numune alın. 800 μL filtrelenmiş 1x PBS tamponu (5x seyreltme) ile numunenin 200 μL'sini seyreltin ve hücre sayacına yerleştirin.</li>
		<li>Kalan numuneyi 190 x g ve oda sıcaklığında 5 dk için santrifüj edin ve daha fazla analiz için süpernatantı (glikoz, laktat, glutamin ve glutamat) saklayın.</li>
		<li>Protein niceliği için ekimin sonuna kadar -20 °C'de 100 μL'lik süpernatantı dondurun.</li>
	</ol></li>
	<li>Ekimin sonu
	<ol>
<li>Proses parametresi kontrolü (yani sıcaklık, ajitasyon, pH ve DO) sonlandığında, işlemin izlenmesini durdurun.</li>
		<li>Stirrer plakasını ve kelepçe plakasını sökün.</li>
		<li>Kültür kaplarını çıkarın ve kültür istasyonlarını temizleyin. Kurutma plakalarını kültür istasyonlarına yerleştirin ve vidalayın.</li>
		<li>Bu arada, kelepçe plakalarını p etanol ve çift distile su ile iyice temizleyin.</li>
		<li>Kurutma döngüsü tamamlandıktan sonra biyoreaktör yazılımında Durdur'a tıklayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Hücre kültürü hasadı
	<ol>
<li>Hasat hücreleri 12. 30 dk için 190 x g hücre suyu santrifüj.</li>
		<li>Hücre peletini atın ve supernatant'ı -20 °C'de saklayın.</li>
	</ol></li>
</ol>5. MAb Konsantrasyonu Ölçme
<ol><li>Ekim sırasında proteinin nicelleştirilmesi için 1,7 mL Protein A sütunu kullanın.</li>
	<li>
Örnekleri eritmeden önce denge ve elüsasyon tamponu hazırlayın.
	<ol>
<li>0,5 M Na2HPO4 içeren 0,5 M NaCl pH içeren bir çözeltiyi 7,9 pH'lık bir çözelti ve elüsyon tamponu olarak 2 pH ile 0,5 M NaCl içeren 100 mM lik glisin çözeltisi kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Analiz için yerleştirilmeden önce her iki tamponu da 0,2 μm'lik bir membran ve gaz giderme yoluyla filtreleyin.</li>
	<li>Yüksek performanslı sıvı kromatografi sistemini (HPLC) yeni hazırlanmış denge tamponuyla temizle.</li>
	<li>A proteinini HPLC sistemine yükleyin.</li>
	<li>1 mL/dk akış hızı ile kromatografi yapın. Kolon fırın sıcaklığını 30 °C ve otoörnekr sıcaklığını 10 °C'ye ayarlayın</li>
	<li>Dondurulmuş numuneleri oda sıcaklığında eritin ve her numunenin 225 μL'sini 0,22 μm PVDF membrandan filtreleyin. İstenilen proteinin daha yüksek konsantrasyonu ile numuneleri seyreltmek, otonumuneyi yerleştirmeden önce denge tamponu ve membrandan filtreleme ile 1:20 oranındadır.</li>
	<li>Örnekleri otomatik numuneye yerleştirin. Yöntem ve sırayı yazılıma yükleyin ve sırayı başlatın. NOT: Yöntem üç aşamadan oluşur (Bkz. Şekil 1):numunenin ilk iki dakika boyunca kolona enjeksiyonu; 10 dk için denge tampon ile 8 dakika ve sütun rejenerasyon için elüsyon tampon izledi.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60577/60577fig01.jpg"> Şekil 1: Protein Tek bir çalışma sırasında farklı aşamaları temsil eden bir kromatogram. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60577/60577fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<ol><li>Langer, E. S. 15th Annual report and survey of Biopharmaceutical Manufacturing Capacity and Production: A study of Biotherapeutical Developers and Contract Manufacturing Organizations. Bioplan Associates. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://bioplanassociates.com/wp-content/uploads/2018/07/15thAnnualBiomfgReport_TABLEOFCONTENTS-LR.pdf">http://bioplanassociates.com/wp-content/uploads/2018/07/15thAnnualBiomfgReport_TABLEOFCONTENTS-LR.pdf</a> (2019).</li>
<li>Walsh, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biopharmaceutical+benchmarks+2018%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Biopharmaceutical benchmarks 2018.</a> Nature Biotechnology. 36, 1136(2018).</li>
<li>Kim, J. Y., Kim, Y., Lee, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CHO+cells+in+biotechnology+for+production+of+recombinant+proteins%3A+current+state+and+further+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">CHO cells in biotechnology for production of recombinant proteins: current state and further potential.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 93 (3), 917-930 (2012).</li>
<li>Lai, T., Yang, Y., Ng, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+Mammalian+cell+line+development+technologies+for+recombinant+protein+production%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceuticals+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Advances in Mammalian cell line development technologies for recombinant protein production.</a> Pharmaceuticals (Basel). 6 (5), 579-603 (2013).</li>
<li>Carlage, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+dynamic+changes+in+the+proteome+of+a+Bcl-XL+overexpressing+Chinese+hamster+ovary+cell+culture+during+exponential+and+stationary+phases%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">Analysis of dynamic changes in the proteome of a Bcl-XL overexpressing Chinese hamster ovary cell culture during exponential and stationary phases.</a> Biotechnology Progress. 28 (3), 814-823 (2012).</li>
<li>Hacker, D. L., de Jesus, M., Wurm, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((25+years+of+recombinant+proteins+from+reactor-grown+cells+-+where+do+we+go+from+here%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Advances%22%5BJournal%5D)">25 years of recombinant proteins from reactor-grown cells - where do we go from here.</a> Biotechnology Advances. 27 (6), 1023-1027 (2009).</li>
<li>Shukla, A. A., Gottschalk, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-use+disposable+technologies+for+biopharmaceutical+manufacturing%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Single-use disposable technologies for biopharmaceutical manufacturing.</a> Trends in Biotechnology. 31 (3), 147-154 (2013).</li>
<li>Ao, S., Gelman, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAo%2C+S+%22Advances+in+electrical+engineering+and+computational+science.+Lecture+notes+in+electrical+engineering%22">Advances in electrical engineering and computational science. Lecture notes in electrical engineering</a>. 39, Springer. New York. (2009).</li>
<li>Bareither, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+disposable+small+scale+reactor+for+high+throughput+bioprocess+development%3A+a+proof+of+concept+study%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Automated disposable small scale reactor for high throughput bioprocess development: a proof of concept study.</a> Biotechnology and Bioengineering. 110 (12), 3126-3138 (2013).</li>
<li>Kang, Y., Ludwig, D. L., Balderes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+can+cell+culture+flocculation+offer+for+antibody+purification+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Bioprocessing%22%5BJournal%5D)">What can cell culture flocculation offer for antibody purification processes.</a> Pharmaceutical Bioprocessing. 2 (6), 483-485 (2014).</li>
<li>Choe, W., Durgannavar, T. A., Chung, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fc-Binding+Ligands+of+Immunoglobulin+G%3A+An+Overview+of+High+Affinity+Proteins+and+Peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Materials+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Fc-Binding Ligands of Immunoglobulin G: An Overview of High Affinity Proteins and Peptides.</a> Materials (Basel). 9 (12), (2016).</li>
<li>Schäpper, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+microbioreactors+in+fermentation+process+development%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Application of microbioreactors in fermentation process development: a review.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 395 (3), 679-695 (2009).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbioreactors+for+Bioprocess+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Association+for+Laboratory+Automation%22%5BJournal%5D)">Microbioreactors for Bioprocess Development.</a> Journal of the Association for Laboratory Automation. 12 (3), 143-151 (2007).</li>
<li>Claßen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectroscopic+sensors+for+in-line+bioprocess+monitoring+in+research+and+pharmaceutical+industrial+application%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Spectroscopic sensors for in-line bioprocess monitoring in research and pharmaceutical industrial application.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 409 (3), 651-666 (2017).</li>
<li>Janoschek, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+to+transfer+a+fed-batch+platform+process+into+semi-perfusion+mode%3A+The+benefit+of+automated+small-scale+bioreactors+compared+to+shake+flasks+as+scale-down+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">A protocol to transfer a fed-batch platform process into semi-perfusion mode: The benefit of automated small-scale bioreactors compared to shake flasks as scale-down model.</a> Biotechnology Progress. 35 (2), 2757(2019).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Verimi artırmak için sürecin optimizasyonu biyofarmasötik endüstrisinde çok önemlidir. Shake şişeleri potansiyel olarak zorlanma nın taranması için kullanılabilir; ancak, pH ve DO gibi proses parametrelerinin izlenmesi şişelerde kullanılamaz. Mikro-biyoreaktörler, sürecin sürekli izlenmesine ve kontrol altına alabilmesine olanak sağladıkları için avantaja sahiptirler. Mikro-biyoreaktör bu kontrol döngüleri de daha büyük ölçekli benzer bir durum sağlamak ve böylece, daha büyük ölçekli biyoreaktörler karşılaştırılabilir so...

Küresel biyofarmasötik pazarı 2018 yılında 250 milyar doların üzerinde ydi ve sürekli olarak1milyar abd doları hızla genişlemektedir. İlaç şirketleri küçük moleküler ilaçlar üretmekten rekombinant proteinler gibi biyoteknolojik olarak üretilen terapötiklere geçiyorlar. Bu tek başına fazla 150 milyar dolar1gelir sorumludur. Memeli hücreleri artık bu farmasötik rekombinant proteinlerin üretimi için yaygın olarak kullanılmaktadır. Mevcut dönemde, memeli hücreleri tarafından üretilen 68 onaylı ürünler arasında, 57 Çin Hamster yumurtalık hücreleri tarafından üretilmektedir (CHO)2. CHO hücreleri özellikle post-translational değişiklikler gerektiren rekombinant proteinlerin üretimi için kullanılır. Bu hücreler bir süspansiyon büyümek ve bu nedenle bir serum serbest kimyasal olarak tanımlanan orta3,,4çoğaltılabilir sonuçlar etkinleştirmek gibi tercih edilir. CHO hücreleri kullanarak diğer avantajı ürünün glikan yapısı insan monoklonal antikor benzer olmasıdır (mAb) ve gen amplifikasyon nedeniyle daha yüksek rekombinant protein verimi ve spesifik verimlilik sonuçları5.
Rekombinant CHO (rCHO) hücre kültürünün verimi son yirmi yılda yüz kat artmıştır. Bu gelişme proses parametrelerinin optimizasyonu, besleme stratejisi ve serum serbest kimyasal olarak tanımlanan orta6geliştirilmesi atfedilir. Farmasötik ürünlerin gereksinimlerindeki artış ile, üretim sürecinin gelişimi için maliyet ve zaman verimliliği üzerindeki basınç artar7. Ürün kalitesini güvence altına alırken basıncı azaltmak için kalite kalite (QbD) kalite üzerinde ilaç endüstrisinin odak yönlendirmiştir. QbD, ürün üretimini ve süreci anlamak için kullanılır. ObD kullanılan önemli bir araç Deney Tasarımı (DOE). Çeşitli giriş değişkenleri ile ortaya çıkan çıktı verileri arasındaki ilişkiyi ortaya çıkararak sürecin anlaşılmasını artırmaya yardımcı olur. Biyoprosesin optimize etmek için DOE yaklaşımının uygulanması, proses koşullarını asimile etme ve titrek miktarını ve kalitesini artırmada projenin erken aşamalarında yararlıdır. Bu yaklaşım, eski moda strateji ile karşılaştırıldığında yararlıdır: bir faktör-at-a-time (OFAT). Klasik, Shainin veya Taguchi kullanarak DOE istatistiksel yaklaşımlar OFAT8çok daha üstündür.
Süreç ve ortam optimizasyonu shake şişelerinde yapılabilir. Şişeler nispeten ucuzdur. Ancak sıcaklık, pH ve çözünmüş oksijen (DO) gibi parametreleri kontrol etmek mümkün değildir. Bu sakıncaları aşmak için, 0,5 L'den 5 L'ye kadar çok kullanımlı tezgah üstü biyoreaktörler kullanılabilir. Reaktörler kapsamlı bir on-line izleme ve süreç kontrolü sağlar. Ancak, çok kullanımlı biyoreaktör kullanımı zaman ve emek yoğundur. Bu dezavantajları aşmak için, tezgah üstü biyoreaktörün izlenmesi ve shake şişesinin kolay kullanımı nın izlenmesi sürecini birleştiren yeni bir tek kullanımlık biyoreaktör kullanılmaktadır. Yüksek verim tarama sistemi ve tek kullanımlık teknoloji proses performansı ve geliştirme verimliliğini artırmak için katkıda bulunmuştur9.
Bu makalede, otomatik mikro-biyoreaktör (AMBR) yazılımında tarifi yüklemek için kurallar listelenmiştir. Bu deney sırasında farklı karıştırıcı hızlarının ve pH'sının canlı hücre konsantrasyonu (VCC) ve titreşen üzerindeki etkisi incelenmiştir. Deney sonucu ve analizi deney yazılımı MODDE 12 tasarımı ile gerçekleştirilir. Ürün analitiği, Protein A sütunlu yüksek basınçlı sıvı kromatografi (HPLC) sisteminde gerçekleştirilir. MAb'nin Fc bölgesinin yüksek yakınlıklı A proteinine bağlanması prensibine dayanır10,11. Bu yöntemle mAb'yi tanımlamak ve ölçmek mümkündür. Niceleme 280 nm ölçülü elüsyon tepe alanları üzerinde gerçekleştirilir.

<table><tbody><tr><td>1 mL tek kullanımlık pipet uçları, sterilize</td><td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td><td>A-0040</td><td></td></tr><tr><td>200 mM L-glutamin</td><td>Corning, Merck</td><td>25-005-CV</td><td></td></tr><tr><td>24 Kuyu derin kuyu plakaları</td><td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td><td>A-0038</td><td></td></tr><tr><td>5 mL tek kullanımlık pipet uçları, sterilize</td><td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td><td>A-0039</td><td></td></tr><tr><td>ambr 15 otomatik mikrobiyoreaktör sistemi</td><td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td><td>001-2804</td><td></td></tr><tr><td>ambr 15 Hücre Kültürü 24 Tek Kullanımlık Biyoreaktörler - Sparged</td><td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td><td>001-1B86</td><td></td></tr><tr><td>Köpük Önleyici C Emülsiyonu</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>A8011</td><td></td></tr><tr><td>Şişe Üstü Steril filtre</td><td>Corning, Merck</td><td>CLS431474</td><td>0.1 & mu; m gözenek boyutu</td></tr><tr><td>CEDEX Deterjan (%3 Mukozol)</td><td>Roche Innovatis AG</td><td>05-650-658-001</td><td></td></tr><tr><td>Hücre sayacı</td><td>Roche Innovatis AG</td><td>05-650-216-001</td><td>CEDEX HiRes</td></tr><tr><td>CHO DG44 hücre hattı</td><td>Cellca, Sartorius Stedim Biotech GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CHOKO Feed Media A (FMA)</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>CR80025</td><td></td></tr><tr><td>CHOKO Feed Media B (FMB)</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>CR80026</td><td></td></tr><tr><td>CHOKO Üretim Ortamı</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>CR80027</td><td></td></tr><tr><td>CHOKO Stok Kültürü Meium</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>CR80028</td><td></td></tr><tr><td>Chromaster yüksek basınçlı sıvı kromatografi sistemi</td><td>VWR Uluslararası</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Konik Santrifüj tüpü</td><td>Corning, Merck</td><td>SIAL0790</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Merck</td><td></td><td></td>1070179026</tr><tr><td>Glisin</td><td>Carl Roth</td><td>56-40-6</td><td></td></tr><tr><td>HPLC Şişeleri</td><td>VWR International</td><td>SUPLSU860181</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Protein A Sütunu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1502226</td><td>POROS&trade; Bir 1.7&nbsp; mL</td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum fosfat dibazik susuz</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>7558-79-4</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavisi</td><td>VWR Uluslararası</td><td>VWRVK940</td><td></td></tr><tr><td>YSI</td><td>YSI Inc</td><td>2900D</td><td>YSI 2900 Seç</td></tr></tbody></table>

Çin hamster yumurtalık hücre yetiştiriciliğinde yüksek İş-İş bulametli otomatik mikro-biyoreaktörler kullanılarak proses optimizasyonu

Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation

Biyoproseslerin istenilen ürünlerin verimini artırmak için optimizasyonu biyofarmasötik endüstrisinde önem taşımaktadır. Bu, gerinim seçimi ve biyoproses parametreleri geliştirilerek elde edilebilir. Shake şişeleri bu amaçla kullanılmıştır. Ancak, pH ve çözünmüş oksijen (DO) gibi proses parametrelerini kontrol etme yeteneğinden yoksundurlar. Bu sınırlama otomatik bir mikro-biyoreaktör yardımıyla aşılabilir. Bu biyoreaktörler daha büyük ölçekte ekimi taklit. Bu sistemin en önemli avantajlarından biri, Deneme Tasarımı'nın (DOE) yazılıma entegre sidir. Bu tümleştirme, birden çok işlem parametresini aynı anda çeşitlendirebileceğiniz bir tasarım oluşturulmasını sağlar. Kritik proses parametreleri ve optimum biyoproses koşulları yazılım içinde analiz edilebilir. Burada sunulan çalışmanın odak noktası, kullanıcıyı yazılımda proses tasarımı ve DOE'nin ekim eki ile dahil edilen adımlarla tanıştırmaktır.

Bu çalışmada yapılan ekime genel bir bakış Şekil 2'desunulmuştur.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60577/60577fig02.jpg"> Şekil 2: Kültür istasyonlarındaki pH ve karıştırıcı hız profillerini test etmek için deneysel koşulların şematik gösterimi. Şekil aynı zamanda gemileri yerleştirmek için doğru düzeni temsil eder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60577/60577fig02large.jp...

Burada, otomatik bir mikro-biyoreaktörde deney tasarımı ve ardından hücre hasadı ve protein nicelemi nin bir Protein A sütunu kullanılarak çalıştırılaması için ayrıntılı bir prosedür saklıyız.

Çin Hamster Yumurtalık Hücre Yetiştiriciliğinde Yüksek İş-İş BulaMetli Otomatik Mikro-Biyoreaktörler Kullanılarak Proses Optimizasyonu

Optimization of bioprocesses to increase the yield of desired products is of importance in the biopharmaceutical industry. This can be achieved by strain ...

Bu videoda, kullanıcılar planlama ve deneyler veya DOE tasarımı yürütülmesi ile mikro biyoreaktör yazılımı içine tanıttı. Analizörler yardımcı vanalar da proses durumunu optimize etmek için gösterilmiştir. Otomatik mikro biyoreaktör yazılımıiçine modet dahil veri analizi için resmi olmuştur.Çok sayıda deneme küçük ölçekte aynı anda planlanabilir ve yürütülebilir. Prosedürü gösteren Tamanna Nagraik, benim laboratuvar bir doktora öğrencisi olacaktır. Metin protokolünde açıklandığı gibi ana tarımda kültür öncesi prosedür ile başlayın.Yeni bir deneme oluşturmak için Amber öz kültür yazılımını açın ve giriş sekmesinde yeni bir deneme oluşturun' seçeneğini tıklayın. Yeni deneme sekmesinde, denemenin yapılacağı tarihle birlikte denemenin adını girin. Ekim sırasında kullanılacak gemilerdeki kültür istasyonu için kontrol noktasını etkinleştirin.Otomatik doe etiketleri de DOE denemeprogramlama sırasında kolay bir geçiş için etkinleştirilir. Sonraki sekmeye geçmek için sonraki"ne tıklayın. Damariçine ortam eklenmesi hakkında bilgi ayarlamak için, anti-köpük ile birlikte, inoculum, yem, ve glikoz, medya plaka eklemek etkinleştirmek"kontrol noktası.Ortamı içeren plaka türünü, adını ve konumunu tanımlayın. Gemilere ortam ekleme'ye tıklayın. Gemilere eklenecek ortamın hacmini girin.Plakadan damarlara medya transferinin haritalamasını tanımlayın. Sonraki sekmeye geçmek için sonraki"ne tıklayın. Medya bilgileri yazılıma aktarıldıktan sonra, yetiştirme koşullarını atayın.Koşul ortamına tıklayın ve sıcaklığı, hedef DO'yu, üst PH limitini ve karıştırma RPM'sini doldurun. Sonra yukarı veya aşağı karıştırma tıklayın. Damarlara inoculum eklenmesini ayarlamak için hücre plakasını etkinleştirin.Ortamı içeren plaka türünü, adını ve konumunu tanımlayın. Damarlara hücre ekleme'yi tıklatın. Aşılama zamanını ve damarlara eklenecek ortamın hacmini girin.Hücreyi plakadan damarlara aktarmak için sıvı işleyicitarafından giden yolu tanımlayın. Sonraki sekmeye geçmek için sonraki"ne tıklayın. Yem, glikoz ve köpük önleyici eklemeyi ayarlamak için, besleme plakası eklemeyi etkinleştirin ve plaka türünü, adını ve konumunu tanımlayın.Damarlara yem ekle'ye tıklayın ve damarlara eklenecek yem hacmini girin. Ekime bağlı olarak, yem ek sayısını ekleyin. Bu ekim için, reaktör her 24 saatte bir 72 saat sonra beslenir.Eklenen hücrelerden gecikmeye veri girerek besleme arasındaki zaman gecikmesini el ile ekleyin. Beslenmenin ilk günü 72 saatlik aşılamadan sonra, bir sonraki gün 96 saat sonra, vesaire. Yemin plakadan damarlara transferinin haritasını tanımlayın.Ekim sırasında örnekleme ayarlamak için, örnek plaka ekle"yi etkinleştirin ve plaka türünü, adını ve konumunu tanımlayın. Gemilerden numune alın" kontrol edin ve damarlardan çıkarılacak numunenin hacmini girin. Ekim boyunca hacmin 10 mililitrenin altına düşmemesini sağlayın.Ekim sırasında alınacak numune sayısını ekleyin. Beslemeye benzer şekilde, her giriş numune noktası için numunenin damardan çıkarıldığı süreyi ekleyin. İşlemi kaydedin.Şimdi idam için hazır. Son olarak, numunenin damarlardan plakaya transferinin haritalamasını tanımlayın. Amber 15 DOE Yazılımını açın.Soruşturma"ya tıklayın ve yeni yi seçin. Create investigation"diyalog kutusuna yeni DOE soruşturmasının adını girin. DOE araştırmasına bir deneme atamak için, farklı parametreleri incelemek için oluşturulan tarifi açın.Gözat'a tıklayın ve ilgili denemeyi seçin. Gemi etiketleri sütunda zaten kayıtlıdır. İstenilen DOE faktörünü tanımlamak için parametreyi seçin ve etiketlenmiş, DOE faktörü olarak etiketlenen sütuna tıklayın.Yeni"yi seçin ve birimlerini, kısaltmayı ve etkenlerin alt ve üst sınırını ekleyin. Yanıtlar sekmesinde, verilerin analizi için dikkate alınacak değerleri tanımlayın. DOE yanıtlarını edit'i tıklatın ve yanıtın adını, kısaltmayı, birimleri ve minimum ve maksimum sınırları tanımlayın.Yanıtlar tanımlandıktan sonra, her yanıt için kehribar değişkenini seçin ve tanımlayın. Bir yanıt otomatik olarak bir mikrop biyoreaktör değişkeni ile ilişkili olabilir. Açılan listeden gerekli değişkeni seçin.Gereksinime bağlı olarak her yanıt için denklemi değiştirin. Minimum, maksimum, ilk, son ve ortalama veriler arasındaki seçimler. Tasarım oluşturmak için, deneme tasarım türünü seçmek ve çoğaltma ve merkez noktalarının sayısını eklemek veya kaldırmak için Tasarım Sihirbazı'nı kullanın.Tasarım ve model seçimini belirleyen hedefi seçin. Metin protokolünde açıklandığı gibi Amber öz kültür Yazılımına aktarılabilen iş paketlerini bitirin ve oluşturun. Deneme sekmesinde, DOE denemesini oluştur'a tıklayın ve DOE yazılımı kullanılarak oluşturulan iş paketine göz atın.Başlat'ı tıklatarak işlemi başlatın. Deneme yürütüldükten sonra, dışa aktarma DOE sonuçlarını kullanarak verileri dışa aktarın. Dışa aktarma DOE sonuçları"penceresi açılır ve kültür gemisi ve istasyonunu gösteren satırlar tabloda listelenir.İstenilen satırları seçin ve tüm sonuçları depolamak ve daha fazla analiz için dosyayı kaydetmek için seçili satırları dışa aktarın veya deneysel verileri dışa aktarın. Sonuçlar sekmesine geçerek ve alma sonuçlarını seçerek verileri Amber DOE Modülüne aktarın. İstenilen veri dosyasına göz atın ve sonuçları analiz et'i tıklatın.Otomatik mikrop biyoreaktörlerindeki hücre büyümesi çok amaçlı biyoreaktörlerle karşılaştırılabilir. Üç farklı ölçekten hücre konsantrasyonu karşılaştırırken, bu 15 mililitre otomatik mikrop biyoreaktör iki litrecam biyoreaktör taklit gözlenmiştir. Sallamak şişesi sonuçları da Amber yararı sergilemek için karşılaştırılır.Farklı karıştırma hızı ve PH etkisi otomatik mikrop biyoreaktörler incelenir. Burada gösterilen canlı hücre konsantrasyonu bir karşılaştırma, veya VCC, ve farklı mikrop biyoreaktörler monoklonal antikor konsantrasyonu. PH 6.9'un VCC üzerindeki olumsuz etkisi görülebilir.Ayrıca, PH 7.3'te PH 7.1 ile karşılaştırıldığında, hücrelerin büyümesi kültür altında önemli ölçüde düzeldi. Burada VCC ve monoklonal antikor konsantrasyonunun tepki kontur çizimleri gösterilmiştir. Değerler aynı PH ve farklı karıştırıcı hızına sahip kaplarda karşılaştırılabilir olup, bu işlem için toplanan karıştırıcı hızının proses çıkışı üzerinde önemli bir etkisi olmadığını gösterir.Makineye verilen her talimat, denemenin yürütülmesi sırasında hata dan kaçınmak için dikkatle yazılmalıdır. Yazılım esnektir ve aynı anda bir dizi deney çalıştırabilir, böylece bir işlemi optimize etmek için gereken süreyi azaltır. Deney tasarımı biyoproses alanında yararlıdır, çünkü sonuçlar bilgiye dayalı süreç anlayışı verir ve bu da diğer organizmalara belirli bir ölçüde genişletilebilir.

process-optimization-using-high-throughput-automated-micro

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

ViBE karmaşık matrisler daha hassas, tekrarlanabilir, otomatik sonuçlar için platform üzerinde özel testlerinin geliştirilmesi açıklanmıştır. Evrensel kartuşu testleri özel testlerin kullanım için kolayca adapte edilmelidir sağlar. Bu çok yönlülük, roman deneyleri ya da bu video örneklediği mevcut manuel testleri otomatik sürümleri, hızlı geliştirme ve doğrulama sağlar.

Akustik Membran mikropartikül Teknoloji Geliştirme Özel Çin Hamsteri Yumurtalık-host Hücre Proteini Tahliller

Protein terapötikler üretmek için hücre hattı geliştirme, üretim, yüksek verimlilik, otomatik bir platform açıklanmıştır. Uygulama, BD FACS Aria Hücre Sıralayıcısı CloneSelect Imager ve Tecan Özgürlük EVO sıvı taşıma sistemi, gelişmiş hücre hattı kalite ve yüksek tekrarlanabilirlik hücre hattı geliştirme işleme kapasitesi önemli ölçüde artış göstermiştir.

Protein Therapeutics İmalat Hücre Hatları Kalkınma Yüksek throughput Otomatik Platformu

Kaynak: Hemmerich, J. ve diğerleri. Otomatik Mikrobiyoreaktör Teknolojisi Kullanarak Heterolog Protein Üretiminin Optimizasyonu İçin Protokol. J. Vis. Exp. (2017).Bu video, farklı ortam formülasyonlarına yanıt olarak bakteriyel büyüme ve floresan protein salgısını izlemek için otomatik bir mikrobiyoreaktör kullanımını göstermektedir. Sekretör floresan protein ifade eden genetik olarak modifiye edilmiş bir bakteri, antibiyotik seçimi altında kültürlenir ve besin çeşitliliğindeki kuyulara...

Otomatik Mikrobiyoreaktörle Farklı Ortam Formülasyonlarında Bakteriyel Büyümenin İzlenmesi

Bu video, Çin Hamster Yumurtalık hücrelerinden hasat edilen hücre kültürü sıvısından monoklonal antikorların saflaştırılması için bir testi göstermektedir. Numunedeki antikorların Fc bölgesine bağlanan ve onları kirleticilerden etkili bir şekilde ayıran hareketsizleştirilmiş protein A içeren gözenekli bir cam reçine kullanır. Düşük pH'lı bir elüsyon tamponunun kullanılması, saflaştırılmış antikorların alınmasını kolaylaştırarak etkileşimi zayıflatır.

Çin Hamster Yumurtalık Hücreleri Tarafından Üretilen Monoklonal Antikorları Saflaştırmak İçin Bir Teknik

Pnömatik bir biyoreaktör kullanarak, memeli hücrelerinin büyümesi için bu tek kullanımlık biyoreaktör sisteminin montajını, çalışmasını ve performansını gösteriyoruz.

Tek kullanımlık Pnömatik Biyoreaktör Sistemi kullanılarak memeli hücrelerinde yetiştirme

Bu el yazması mikrobiyal yetiştirme ortamının terzi tasarımı için genel bir yaklaşımı açıklar. Bu güvenilirlik ve sıvı ortam işleme hızı artırmak için laboratuvar robot tarafından desteklenen yeterli ekimi verimi için deneysel tasarım ve microbioreactor teknoloji Kriging tabanlı birleştiren yinelemeli bir iş akışı tarafından etkin hazırlık.

Otomatik Microbioreactor teknolojisini kullanarak Contegra Protein üretim duruma getirilmesi için genel iletişim kuralı

Detaylı bir protokol 48 paralel hücre kültürlerinde bir microbioreactor sisteminde çeşitli koşullar altında eşzamanlı işlem için sunulmaktadır. Hücre kültür süreci, hasat ve sonraki antikor titresi analiz anlatılmıştır.

Yüksek üretilen iş kullanımı otomatik Microbioreactor sistemi modeli Igg1 CHO hücrelerdeki imalatı için

Otomatik microbioreactors hasat hücre kültürü sıvı (HCCF) bir monoklonal antikor arıtma ve sonraki analizi için ayrıntılı bir protokol açıklanmıştır. Kritik kalite niteliklerini (CQAs) belirlemek ve önemli bilgileri ayıklamak için sınırlı numune hacmini maksimize etmek için analitiklerin kullanılması da sunulmaktadır.

Otomatik bir Mikrobioreactor sistemi kullanılarak Çin hamster yumurtlama hücrelerinden bir monoklonal antikor arıtma ve analitik

Bir antikorun glikozilasyon paterni klinik performansını belirler, bu nedenle glikozilasyonu kontrol etmek için endüstriyel ve akademik çabalar devam eder. Tipik glikomühendislik kampanyaları zaman ve emek yoğun olduğundan, geçici susturma kullanarak glikozilasyon genlerinin etkisini karakterize etmek için hızlı bir protokolün oluşturulması yararlı olacaktır.

Çin Hamster Yumurtalık Hücrelerinde Hızlı Antikor Glikomühendisliği

Burada, GMP sınıfı çözünebilir mikro taşıyıcılara dayanan tamamen kapalı bir sistem aracılığıyla yapışık hücrelerin büyük ölçekli üretimini gerçekleştirmek için bir protokol sunuyoruz. İnsan mezenkimal kök hücrelerinin, HEK293T hücrelerinin ve Vero hücrelerinin yetiştirilmesi doğrulandı ve hücre ve gen terapisi endüstrisi için hem miktar taleplerini hem de kalite kriterlerini karşıladı.

GMP Sınıfı Çözünebilir Gözenekli Mikro Taşıyıcılara Dayalı Büyük Ölçekli Hücre Üretimi

Bu protokol, mikrobiyal monoklonal izolasyon, yetiştirme ve toplama işlemlerini gerçekleştirmek için Tek hücreli Mikrolitre damlacık Kültür Omik Sisteminin (MISS hücresi) nasıl kullanılacağını açıklar. MISS hücresi, mükemmel damlacık monodispersisitesi, yüksek paralel yetiştirme ve yüksek verimli biyokütle tespiti sunan damlacık mikroakışkan teknolojisine dayalı entegre bir iş akışı sağlar.

Tek Hücreli Mikrolitre Damlacık Kültürü Omik Sistemini Kullanarak Otomatik ve Yüksek Verimli Mikrobiyal Monoklonal Yetiştirme ve Toplama

Keşfedin otomatik mikro-biyoreaktörlerde Çin hamster yumurtalık hücre yetiştiriciliği için DOE tabanlı proses optimizasyonunu. Bu yöntem, Protein A kolonlarıyla protein kantifikasyonu ve verimli biyoproses geliştirme sağlar.

Çin Hamster Yumurtalık Hücre Yetiştiriciliğinde Yüksek İş-İş BulaMetli Otomatik Mikro-Biyoreaktörler Kullanılarak Proses Optimizasyonu (Video) | JoVE Journal

Çin Hamster Yumurtalık Hücre Yetiştiriciliğinde Yüksek İş-İş BulaMetli Otomatik Mikro-Biyoreaktörler Kullanılarak Proses Optimizasyonu

Daha fazla video keşfet