Name: Küçük Balık, Büyük Sorular: Meksika Tetra Araştırmaları için Modern Teknikler Koleksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-24T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 s
Description: Keşfedin Meksika mağara balığı Astyanax mexicanus için gen manipülasyonu, davranış izleme ve görüntüleme protokollerini. Bu yöntemler gelişim biyolojisi ve genetik araştırmalarında standartlaştırılmış analizler sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nden (NH089934, DK108495) fon sağladığını kabul etmektedir. F. Leal ve A. Powers'a düzenleme için teşekkür edilmiştir.

<ol><li>Mitchell, R. W., Russel, W. H., Elliot, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mexican+eyeless+characin+fishes%2C+Genus+Astyanax%3A+Environment%2C+Distribution%2C+and+Evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Special+Publications%2C+the+Museum+Texas+Tech+University%22%5BJournal%5D)">Mexican eyeless characin fishes, Genus Astyanax: Environment, Distribution, and Evolution.</a> Special Publications, the Museum Texas Tech University. 12, (1977).</li>
<li>Elliott, W. R. Cave Exploration and Mapping in the Sierra de El Abra Region. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aElliott%2C+WR+%22Biology+and+Evolution+of+the+Mexican+Cavefish%22">Biology and Evolution of the Mexican Cavefish</a>. , 9-40 (2015).</li>
<li>Herman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+gene+flow+in+rapid+and+repeated+evolution+of+cave-related+traits+in+Mexican+tetra%2C+Astyanax+mexicanus%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Ecology%22%5BJournal%5D)">The role of gene flow in rapid and repeated evolution of cave-related traits in Mexican tetra, Astyanax mexicanus.</a> Molecular Ecology. 27, 4397-4416 (2018).</li>
<li>Rohner, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryptic+variation+in+morphological+evolution%3A+HSP90+as+a+capacitor+for+loss+of+eyes+in+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%2880%29%22%5BJournal%5D)">Cryptic variation in morphological evolution: HSP90 as a capacitor for loss of eyes in cavefish.</a> Science (80). 342, 1372-1375 (2013).</li>
<li>McGaugh, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cavefish+genome+reveals+candidate+genes+for+eye+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">The cavefish genome reveals candidate genes for eye loss.</a> Nature Communications. 5, (2014).</li>
<li>Lyon, A., Powers, A. K., Gross, J. B., O'Quin, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+-+Three+loci+control+scleral+ossicle+formation+via+epistasis+in+the+cavefish+astyanax+mexicanus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Two - Three loci control scleral ossicle formation via epistasis in the cavefish astyanax mexicanus.</a> PLoS One. 12, (2017).</li>
<li>Atukorala, A. D. S., Franz-Odendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+linkage+between+altered+tooth+and+eye+development+in+lens-ablated+Astyanax+mexicanus%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Genetic linkage between altered tooth and eye development in lens-ablated Astyanax mexicanus.</a> Developmental Biology. , (2018).</li>
<li>Gore, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+epigenetic+mechanism+for+cavefish+eye+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Ecology+%26+Evolution%22%5BJournal%5D)">An epigenetic mechanism for cavefish eye degeneration.</a> Nature Ecology & Evolution. 2, 1155-1160 (2018).</li>
<li>Sumner-Rooney, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kingdom+of+the+blind%3A+disentangling+fundamental+drivers+in+the+evolution+of+eye+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+and+Comparative+Biology%22%5BJournal%5D)">The kingdom of the blind: disentangling fundamental drivers in the evolution of eye loss.</a> Integrative and Comparative Biology. , (2018).</li>
<li>Protas, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+cavefish+reveals+molecular+convergence+in+the+evolution+of+albinism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of cavefish reveals molecular convergence in the evolution of albinism.</a> Nature Genetics. 38, 107-111 (2006).</li>
<li>Protas, M., Conrad, M., Gross, J. B., Tabin, C., Borowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regressive+Evolution+in+the+Mexican+Cave+Tetra%2C+Astyanax+mexicanus%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Regressive Evolution in the Mexican Cave Tetra, Astyanax mexicanus.</a> Current Biology. 17, 452-454 (2007).</li>
<li>Protas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-trait+evolution+in+a+cave+fish%2C+Astyanax+mexicanus%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Multi-trait evolution in a cave fish, Astyanax mexicanus.</a> Evolution & Development. 10, 196-209 (2008).</li>
<li>Stahl, B. A., Gross, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+Mc1r+gene+expression+are+associated+with+regressive+pigmentation+in+Astyanax+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22Development+Genes+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">Alterations in Mc1r gene expression are associated with regressive pigmentation in Astyanax cavefish.</a> Development Genes and Evolution. 225, 367-375 (2015).</li>
<li>McCauley, D. W., Hixon, E., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+pigment+cell+regression+in+the+cavefish+Astyanax%3A+A+late+step+in+melanogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Evolution of pigment cell regression in the cavefish Astyanax: A late step in melanogenesis.</a> Evolution & Development. 6, 209-218 (2004).</li>
<li>Duboué, E. R., Keene, A. C., Borowsky, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+convergence+on+sleep+loss+in+cavefish+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Evolutionary convergence on sleep loss in cavefish populations.</a> Current Biology. 21, 671-676 (2011).</li>
<li>Yoshizawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+genetic+architecture+underlies+the+emergence+of+sleep+loss+and+prey-seeking+behavior+in+the+Mexican+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biology%22%5BJournal%5D)">Distinct genetic architecture underlies the emergence of sleep loss and prey-seeking behavior in the Mexican cavefish.</a> BMC Biology. 13, 15(2015).</li>
<li>Jaggard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lateral+line+confers+evolutionarily+derived+sleep+loss+in+the+Mexican+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The lateral line confers evolutionarily derived sleep loss in the Mexican cavefish.</a> Journal of Experimental Biology. 220, 284-293 (2017).</li>
<li>Jaggard, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypocretin+underlies+the+evolution+of+sleep+loss+in+the+Mexican+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Hypocretin underlies the evolution of sleep loss in the Mexican cavefish.</a> Elife. 7, (2018).</li>
<li>Duboué, E. R., Borowsky, R. L., Keene, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-adrenergic+signaling+regulates+evolutionarily+derived+sleep+loss+in+the+mexican+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%2C+Behavior+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">β-adrenergic signaling regulates evolutionarily derived sleep loss in the mexican cavefish.</a> Brain, Behavior and Evolution. 80, 233-243 (2012).</li>
<li>Aspiras, A. C., Rohner, N., Martineau, B., Borowsky, R. L., Tabin, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanocortin+4+receptor+mutations+contribute+to+the+adaptation+of+cavefish+to+nutrient-poor+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Melanocortin 4 receptor mutations contribute to the adaptation of cavefish to nutrient-poor conditions.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112, 9668-9673 (2015).</li>
<li>Riddle, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+resistance+in+cavefish+as+an+adaptation+to+a+nutrient-limited+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Insulin resistance in cavefish as an adaptation to a nutrient-limited environment.</a> Nature. 555, 647-651 (2018).</li>
<li>Xiong, S., Krishnan, J., Peuß, R., Rohner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+adipogenesis+contributes+to+excess+fat+accumulation+in+cave+populations+of+Astyanax+mexicanus%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Early adipogenesis contributes to excess fat accumulation in cave populations of Astyanax mexicanus.</a> Developmental Biology. , (2018).</li>
<li>Yoshizawa, M., Gorički, Š, Soares, D., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+a+behavioral+shift+mediated+by+superficial+neuromasts+helps+cavefish+find+food+in+darkness%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Evolution of a behavioral shift mediated by superficial neuromasts helps cavefish find food in darkness.</a> Current Biology. 20, 1631-1636 (2010).</li>
<li>Franz-Odendaal, T. A., Hall, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modularity+and+sense+organs+in+the+blind+cavefish%2C+Astyanax+mexicanus%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution+and+Development%22%5BJournal%5D)">Modularity and sense organs in the blind cavefish, Astyanax mexicanus.</a> Evolution and Development. 8, 94-100 (2006).</li>
<li>Hinaux, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+evolution+in+blind+cavefish+is+driven+by+early+embryonic+events+during+gastrulation+and+neurulation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Sensory evolution in blind cavefish is driven by early embryonic events during gastrulation and neurulation.</a> Development. 143, 4521-4532 (2016).</li>
<li>Blin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+evolution+and+developmental+plasticity+of+the+olfactory+epithelium+and+olfactory+skills+in+Mexican+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Developmental evolution and developmental plasticity of the olfactory epithelium and olfactory skills in Mexican cavefish.</a> Developmental Biology. , (2018).</li>
<li>Lloyd, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+shift+towards+lateral+line+dependent+prey+capture+behavior+in+the+blind+Mexican+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Evolutionary shift towards lateral line dependent prey capture behavior in the blind Mexican cavefish.</a> Developmental Biology. 441, 328-337 (2018).</li>
<li>Powers, A. K., Boggs, T. E., Gross, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Canal+neuromast+position+prefigures+developmental+patterning+of+the+suborbital+bone+series+in+Astyanax+cave-+and+surface-dwelling+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Canal neuromast position prefigures developmental patterning of the suborbital bone series in Astyanax cave- and surface-dwelling fish.</a> Developmental Biology. 441, 252-261 (2018).</li>
<li>Rohner, N. "Out of the Dark" Cavefish Are Entering Biomedical Research. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRohner%2C+N+%22Zebrafish%2C+Medaka%2C+and+Other+Small+Fishes%22">Zebrafish, Medaka, and Other Small Fishes</a>. , 253-268 (2018).</li>
<li>Yoshizawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolution+of+a+series+of+behavioral+traits+is+associated+with+autism-risk+genes+in+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">The evolution of a series of behavioral traits is associated with autism-risk genes in cavefish.</a> BMC Evolutionary Biology. 18, 89(2018).</li>
<li>Stockdale, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+Regeneration+in+the+Mexican+Cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Heart Regeneration in the Mexican Cavefish.</a> Cell Reports. 25, 1997-2007 (2018).</li>
<li>Peuß, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gamete+Collection+and+In+Vitro+Fertilization+of+Astyanax+mexicanus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Gamete Collection and In Vitro Fertilization of Astyanax mexicanus.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2019).</li>
<li>Luc, H., Sears, C., Raczka, A., Gross, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wholemount+In+Situ+Hybridization+for+Astyanax+Embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Wholemount In Situ Hybridization for Astyanax Embryos.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2019).</li>
<li>Riddle, M., Martineau, B., Peavey, M., Tabin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Raising+the+Mexican+Tetra+Astyanax+mexicanus+for+Analysis+of+Post-larval+Phenotypes+and+Whole-mount+Immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Raising the Mexican Tetra Astyanax mexicanus for Analysis of Post-larval Phenotypes and Whole-mount Immunohistochemistry.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2018).</li>
<li>Stahl, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manipulation+of+Gene+Function+in+Mexican+Cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Manipulation of Gene Function in Mexican Cavefish.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2019).</li>
<li>Duboué, E. R., Keene, A. C. Investigating the Evolution of Sleep in the Mexican Cavefish. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDubou%C3%A9%2C+ER+%22Biology+and+Evolution+of+the+Mexican+Cavefish%22">Biology and Evolution of the Mexican Cavefish</a>. , 291-308 (2015).</li>
<li>Frøland Steindal, I. A., Beale, A. D., Yamamoto, Y., Whitmore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+Astyanax+mexicanus+circadian+clock+and+non-visual+light+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Development of the Astyanax mexicanus circadian clock and non-visual light responses.</a> Developmental Biology. , (2018).</li>
<li>Carlson, B. M., Gross, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+comparison+of+activity+profiles+exhibited+by+the+cave+and+surface+morphotypes+of+the+blind+Mexican+tetra%2C+Astyanax+mexicanus%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Biochemistry+and+Physiology+Part+C%3A+Toxicology+%26+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Characterization and comparison of activity profiles exhibited by the cave and surface morphotypes of the blind Mexican tetra, Astyanax mexicanus.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology. 208, 114-129 (2018).</li>
<li>Jaggard, J. B., Lloyd, E., Lopatto, A., Duboue, E. R., Keene, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+Measurements+of+Sleep+and+Locomotor+Activity+in+Mexican+Cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Automated Measurements of Sleep and Locomotor Activity in Mexican Cavefish.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2019).</li>
<li>Kowalko, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convergence+in+feeding+posture+occurs+through+different+genetic+loci+in+independently+evolved+cave+populations+of+Astyanax+mexicanus%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Convergence in feeding posture occurs through different genetic loci in independently evolved cave populations of Astyanax mexicanus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 16933-16938 (2013).</li>
<li>Worsham, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+Tracking+and+Neuromast+Imaging+of+Mexican+Cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Behavioral Tracking and Neuromast Imaging of Mexican Cavefish.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2019).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Hayvan çeşitliliğinin kökenlerine uzun süredir devam eden ilgimize rağmen, morfoloji, fizyoloji ve davranışın evriminin altında yatan genetik değişiklikler hakkında sınırlı bir anlayışa sahibiz. Meksika tetrası, Astyanax mexicanus, özelliklerin nasıl evrimleştiğine dair anlayışımızı ilerletmek için güçlü bir model olarak ortaya çıkmıştır. Bu balık türü, Meksika ve Güney Teksas'taki nehirlerde bol miktarda bulunan gözlü nehirde yaşayan morf (yüzey balığı) ve Kuzeydoğu Meksika'daki Sierra del Abra bölgesindeki sürekli karanlık kireçtaşı mağaralarında gelişen gözsüz mağarada yaşayan morflar (mağara balığı) olmak üzere iki morfotip olarak bulunur1. En az iki bağımsız yüzey balığı istilasından kaynaklanan bilinen 29 mağara popülasyonu vardır 2,3. Mağara ve nehir morfları birbirine bağlı kalmıştır ve laboratuvarda üremeleri kolaydır, bu da araştırmacıların mağaradaki benzersiz seçici baskılara yanıt olarak gelişen özellikleri genetik olarak haritalandırmasına olanak tanır. Örneğin, ışığın yokluğu gözlerin 4,5,6,7,8,9, pigmentin 10,11,12,13,14 ve uykunun 15,16,17,18,19 gerilemesine yol açmıştır; besin sınırlaması aşırı yemeyi20, kilo almayı21 ve yağ depolamayı22 seçmiştir; ve karanlıkta gezinmek, çevreyi algılama yeteneğinin artmasını sağlamıştır 23,24,25,26,27,28. Giderek artan sayıda araştırmacı, evrimin genetik temelini keşfetmek için bu balıktan yararlanıyor. Mağara balıklarında adaptif olan bazı özellikler insanlarda zararlı olduğundan, mağara balığı biyomedikal araştırmalar için de çekici hale gelmiştir 21,29,30,31. Tekrarlanabilirliği teşvik etmek ve yeni araştırmacılar için bir platform sağlamak amacıyla, bu JoVE Yöntemleri Koleksiyonu, hayvancılık, özellik ölçümü ve gen aktivitesinin incelenmesi için teknikler sağlar.
Başlangıç noktası olarak, Peuß ve arkadaşları tarafından gösterilen tüp bebek prosedürü. 32 , 1) üremesi zor olabilecek mağara/yüzey melezleri, 2) mikroenjeksiyonlar için tek hücreli aşama embriyoları ve 3) embriyonik fenotiplerin analizi için aşama uyumlu örnekler elde etmek için bir yöntem sağladığı için birden fazla amaca hizmet eder. A. mexicanus tipik olarak gece yumurtlar. Peuß ve diğerleri. Aydınlık-karanlık döngüsünü değiştirmek ve normal çalışma saatleri içinde gamet toplamak için hazırlanmış balıkları elde etmek için bir sistem tanımlayın. Gamet koleksiyonunun görsel gösterimi, bu adım dikkatli bir teknik gerektirdiğinden özellikle yararlıdır. Makaleleri, embriyogenez sırasında gen ekspresyon modellerinin karşılaştırılması da dahil olmak üzere bir dizi aşağı akış uygulaması için gereklidir.
Luc ve diğerleri. 33 , A. mexicanus embriyolarında gen ekspresyonunu görselleştirmek için optimize edilmiş sağlam bir in situ hibridizasyon protokolü sağlar. Bir kontrol listesi (ek dosya olarak sağlanır) kullanarak bu çok günlük prosedürü basitleştirirler ve sorun giderme yönergelerini paylaşırlar. Bu yöntemin tamamlayıcısı olan Riddle ve ark. 34 , tam montajlı immünohistokimya kullanılarak yumurtadan çıkmış balıklarda gen ekspresyonunun ve protein lokalizasyonunun nasıl inceleneceğini gösterir. Yumurtadan çıktıktan ve beslenme başladıktan sonra morfotipler arasında anlamlı karşılaştırmalar yapmak için büyüme koşullarını kontrol etmek gerekir. Yetişkinlerin doğal yumurtlama yoluyla nasıl yetiştirileceğini ve diğer besin kaynaklarına kıyasla besin içeriği ve maliyet açısından önemli avantajlara sahip bir rotifer diyetinde sabit yoğunluklarda larvaların nasıl yetiştirileceğini gösterirler. İmmün boyama protokolleri, beyin, bağırsak ve pankreastaki antijenleri, yumurtadan çıktıktan 12 gün sonra başarılı bir şekilde tanır ve organ gelişiminin ve işlevinin geç aşamalarının sorgulanmasına olanak tanır. Daha da önemlisi, A. mexicanus'ta başarıyla kullanılan antikorların bir listesini sağlarlar. Luc ve arkadaşlarının kombine yöntemleri. ve Riddle ve diğerleri. genetik manipülasyonun etkilerini analiz etmek için yararlıdır.
Bu Yöntemler Koleksiyonunda, Stahl ve diğerleri. 35 , A. mexicanus'ta gen fonksiyonunu manipüle etmenin birçok yolunu tanımlar: morfolino mikroenjeksiyonu, CRISPR-Cas9 aracılı mutajenez ve Tol2 aracılı transgenez. Piko-enjeksiyonu ve enjekte edilen embriyoların taranmasını göstermenin yanı sıra, morfolinoların, kılavuz RNA'ların ve transgenlerin tasarlanması için yararlı kılavuzlar sağlarlar. Bu tekniklerin her birini doğrulayan sonuçları paylaşırlar. Örneğin, ekleme bloke edici bir morfolino kullanarak Hipokretin/oreksin'i (HCRT) hedeflemek, mağara balıklarında lokomotor aktiviteyi azaltır ve uykuyu artırır; CRISPR/Cas9 kullanarak yüzey balıklarında oca2'nin (mağara balığı albinizmine neden olan lokus) düzenlenmesi, albino yüzey balıkları üretir; ve Tol2 transgenezi kullanılarak bir pan-nöronal zebra balığı promotorörü tarafından yönlendirilen genetik olarak kodlanmış bir kalsiyum göstergesinin eklenmesi, Meksika tetrasında neredeyse her yerde bulunan nöronal ekspresyon sağlar. Zebra balıklarında geliştirilen genetik araçların çoğunun, benzer genomları nedeniyle doğrudan mağara balıklarına aktarılabileceğine dikkat çekiyorlar. Makaleleri, A. mexicanus'ta fonksiyonel çalışmalar yapan araştırmacılar için önemli bir kaynaktır ve davranış da dahil olmak üzere fenotipleri ölçmeye odaklanan ek makaleleri tamamlar.
Mağara balıkları uykuyu önemli ölçüde azalttı ve sirkadiyen ritmi değiştirdi 36,37,38. Bu, bir omurgalıda uykudaki varyasyona genetik ve çevrenin katkısını araştırmak için heyecan verici bir fırsat sunuyor. Jaggard ve diğerleri. 39, farklı yaşam evrelerinde ve farklı bağlamlarda uykuyu kaydetmek için kullanılabilecek ucuz malzemelerden bir sistemin nasıl oluşturulacağını gösterir. Ayrıca, bu kurulumda balık takibinin nasıl otomatikleştirileceğini ve uyku ve hareket için nicel ölçümlerin nasıl elde edileceğini açıklarlar. Teknikleri, yüksek verimli ilaç ve genetik taramanın yanı sıra geleneksel genetik haritalama çalışmaları için de geçerlidir.
Azalan uykuya ek olarak, mağara balıkları, değişen beslenme açısı ve titreşim çekimi 16,30,40 dahil olmak üzere, yiyecek aramayla bağlantılı lokomotor aktivitelerde farklılıklar geliştirmiştir. Bu faaliyetlerin nasıl geliştiğini anlamanın merkezinde, onları gelişimsel değişikliklerle ilişkilendirmek yer alır. Worsham ve diğerleri. 41 davranışları kaydetmek ve bunları nöromastlardaki değişikliklerle ilişkilendirmek için mevcut yöntemler; su akışına tepki veren dış mekanosensoriyel yapılar. İlk olarak, titreşim çekimini ve uykuyu kaydetmek için odaların nasıl oluşturulacağını gösterirler ve özgür yazılım ve özelleştirilebilir komut dosyaları kullanarak davranışların nasıl ölçüleceğine dair ayrıntılı bir açıklama sağlarlar. Daha sonra, bir floresan mitokondriyal boya kullanarak canlı yetişkin balıklarda nöromastların nasıl görselleştirileceğini ve yine özgür yazılım kullanarak nöromast sayısının yarı otomatik bir şekilde nasıl ölçüleceğini gösterirler. Titreşim çekimi ve nöromast sayısı23 ile ilişkilidir; Yöntemleri, bu ilişkiyi sorgulamak için adım adım bir protokol sağlar. Jaggard ve Worsham'ın yöntemleri, ek davranışları ortaya çıkarmak için kullanılabilir ve diğer balık türlerine de uygulanabilir. Bu yöntemler, davranışsal evrimin genetik temelini keşfetmek için gerekli olan nicel ve tutarlı sonuçlar üretir.
Gen fonksiyonunu ölçmek ve manipüle etmek için modern teknikler, evrimsel çalışmaları karşılaştırmalı çalışmalardan mekanik hale getirmiştir. Birleştirildiğinde, bu Yöntemler Koleksiyonundaki makaleler, A. mexicanus'ta gen fonksiyonu araştırmalarını yürütmek için bir rehber kitap görevi görür. Araştırmacılar, yüzey ve mağara morfları arasındaki morfoloji, fizyoloji ve davranışta büyüleyici farklılıklar ortaya çıkarmış olsa da, henüz ayrıntılı olarak keşfedilmemiş ve muhtemelen keşfedilecek daha çok şey var. Daha fazla çalışma yapıldıkça, bu küçük balık evrim anlayışımız üzerinde büyük bir etkiye sahip olmaya devam edecek.

küçük balık, büyük sorular: meksika tetra araştırmaları için modern teknikler koleksiyonu

Little Fish, Big Questions: A Collection of Modern Techniques for Mexican Tetra Research

Tartışılan Makaleler:
Stahl, BA ve ark. Meksika Mağara Balıklarında Gen Fonksiyonunun Manipülasyonu. Görselleştirilmiş Deneyler Dergisi. (146) (2019).
Peuß, R. ve ark. Gamet Toplama ve İn Vitro Fertilizasyon Astyanax mexicanus. Görselleştirilmiş Deneyler Dergisi. (147) (2019).
Worsham, M. ve ark. Meksika Mağara Balıklarının Davranışsal İzleme ve Nöromast Görüntüleme. Görselleştirilmiş Deneyler Dergisi. (147) (2019).
Jaggard, J.B., Lloyd, E., Lopatto, A., Duboue, E.R., Keene, A.C. Meksika Mağara Balıklarında Uyku ve Lokomotor Aktivitenin Otomatik Ölçümleri. Görselleştirilmiş Deneyler Dergisi. (145) (2019).
Luc, H., Sears, C., Raczka, A., Gross, J.B. Astyanax Embriyoları için Wholemount In Situ Hibridizasyon. Görselleştirilmiş Deneyler Dergisi. (145) (2019).
Riddle, M., Martineau, B., Peavey, M., Tabin, C. Meksika tetra Astyanax mexicanus'un larva sonrası fenotiplerin ve tam montajlı İmmünohistokimyanın Analizi için yetiştirilmesi. Görselleştirilmiş Deneyler Dergisi. (142) (2018).

Küçük Balık, Büyük Sorular: Meksika Tetra Araştırmaları için Modern Teknikler Koleksiyonu

Tartışılan Makaleler:
Stahl, B. A. ve ark. Manipulation of Gene Function in Mexican Cavefish. Journal of Visualized Experiments. (146) (2019).
Peuß, R. ...

little-fish-big-questions-collection-modern-techniques-for-mexican

Without Section

Keşfedin Meksika mağara balığı Astyanax mexicanus için gen manipülasyonu, davranış izleme ve görüntüleme protokollerini. Bu yöntemler gelişim biyolojisi ve genetik araştırmalarında standartlaştırılmış analizler sağlar.

Küçük Balık, Büyük Sorular: Meksika Tetra Araştırmaları için Modern Teknikler Koleksiyonu

Daha fazla video keşfet