Name: Fare Birincil Görsel Kortekste Monoküler Görme Yoksunluğu ve Oküler Baskınlık Plastisite Ölçümü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: Öğrenin fare birincil görsel kortekste monoküler görme yoksunluğu ve oküler baskınlık plastisite ölçümü protokolleri. Bu yöntem, kritik dönemde görsel plastisitenin nöral mekanizmalarını incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81571770, 81771925, 81861128001) tarafından desteklenmiştir.

Bu protokolde Erkek C57Bl/6 fareler, Sichuan Tıp Bilimleri Akademisi Laboratuvar Hayvanları Enstitüsü ve Sichuan İl Halk Hastanesi'nden temin edilmiştir. Tüm hayvan bakımı ve deneysel prosedürler Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi, Çin Elektronik Bilimler ve Teknoloji Üniversitesi tarafından onaylandı.
1. Farelerde doğum sonrası 28 günde monoküler yoksunluk (MD)
<ol><li>Cerrahi aletler, dikiş iğnesi (0,25 mm çap, dize çapı 0,07 mm) ve pamuklu bezleri alüminyum bir kutuya koyun ve 120 °C'de 0,5 saat boyunca otoklavlayın. Cerrahi aletleri kurutma fırınında kurutun.</li>
	<li>%2 agarose çözeltisi hazırlayın, katılaşmayı önlemek için 75 °C'de bir su banyosuna koyun.</li>
	<li>Fareyi anestezik oksijenle karıştırılmış isofluran kullanın (%2 indüksiyon ve %1.2-1.5 bakım). Stereotaksik cihaz üzerinde fare yi düzeltin ve farenin vücut sıcaklığını 37 °C'de tutmak ve hipotermiyi önlemek için ısı düzenleyici bir cihaz kullanın.</li>
	<li>Her iki göze de ince bir yağ bazlı göz merhemi uygulayın.</li>
	<li>Aydınlatma ile anatomik mikroskop altında, bir göz üzerinde göz kapağı dikiş. Göz kapağı 2x her iki tarafında olsa iğne geçmek olun(Şekil 1A) ve yaklaşık dört dikiş yapmak.</li>
	<li>Düğüm iplik 2-3x ve sonra iplik kırpma. Stabilitesini artırmak için düğüme 3 μL instant kurutma tutkalı uygulayın. Sonra ekstra dikiş iplik kesti.</li>
	<li>Fareye intraperitoneal buprenorfin (1 mg/kg) enjeksiyonu sağlayın.</li>
	<li>Fareyi vücut ısısını 37 °C'de korumak ve hipotermiyi önlemek ve bilincini geri kazanana kadar izlemek için bir ısıtma yastığına aktarın.</li>
	<li>Fare tamamen uyanık olduğunda ayrı bir tutma kafesi içine yerleştirin.</li>
	<li>Kapalı ve enfekte olmadığından emin olmak için göz kapaklarını günlük olarak kontrol edin. Göz kapağı açıklığı bulunursa fareyi hariç tut.</li>
	<li>Elektrofizyolojik kayıttan önce fareyi anestezik oksijenle karıştırılmış isofluran kullanın (%2 indüksiyon ve %1.2-1.5 bakım).</li>
	<li>Göz küresini ortaya çıkarmak için göz makası ile dikiş çıkarın. Göz kapaklarını dikkatlice kırpın.</li>
	<li>Gözü mercek solüsyonuyla temizleyin ve netlik için mikroskop altında gözü kontrol edin. Kornea opacities veya enfeksiyon belirtileri olan fareler hariç.</li>
</ol>2. 4. gün monoküler yoksunluk sonra fare V1 dürbün bölgesinde kraniotomi
<ol><li>Fareyi anestezi ettikten sonra, bir parmak ucuna yanıt olmadığı için anestezinin derinliğini kontrol edin.</li>
	<li>Fareyi stereotaksik aparata yerleştirin ve düzeltin. Beyni düz ve stabil tutmak için kulak çubuğunun ve diş çubuğunun yüksekliğini ayarlayın.</li>
	<li>Vücut ısısını korumak için bir ısıtma yastığı kullanın.</li>
	<li>Onları nemli tutmak için göz yüzeyine bir petrol bazlı göz merhemi uygulayın.</li>
	<li>Cildini ortaya çıkarmak için farenin kafasındaki saçı çıkarın. İyot ve% 70 etanol 3x alternatif scrubs ile cilt ovmak.</li>
	<li>Kafatasıortaya çıkarmak ve kafa derisi dokusukaldırmak için kulaklar arasında derinin 8 x 8 mm alan eğim. Sonra% 30 hidrojen peroksit ile örten bağ dokusu kaldırın.</li>
	<li>Beyincik üzerinde kafatasında 1 x 1 mm delik delin. Referans olarak deliğe küçük bir kemik vida yapıştırın.</li>
	<li>V1 dürbün bölgesinde, kontralateral yarımküreden yoksun göze kadar 1 mm çapında küçük bir kraniyotomi gerçekleştirin(Şekil 1B, A-P: lambda -0.51–lambda +1.67 mm; M-L: -2.6- -3.0 mm; D-V: 0-1 mm). Dikkatle beyin zarar vermeden kafatası parçası çıkarın.</li>
	<li>Kurumasını önlemek için 40 °C'de %2'lik 75°L'lik agarose ile açık kortikal yüzeyi kapatın.</li>
	<li>Stereotaksik çerçeve üzerinde bir tungsten elektrot düzeltmek. Tungsten elektrotunu, kaydedilen hücrelerin her iki göze de tepki verdiğinden emin olmak için, V1'in dürbün bölgesi olan açık korteksin yüzeyine dikey olarak yerleştirin.</li>
	<li>Göz jeli kaldırmak ve her 2 saat göze silikon yağı uygulamak için pamuklu bezler kullanın.</li>
</ol>3. Görsel uyarılma ve elektrofizyolojik kayıt
<ol><li>Tek gözünü şeffaf olmayan plastik plakayla maskeleyin. Farenin gözünden 23 cm uzaklıktaki bir LCD monitör yerleştirin.</li>
	<li>Fare tamamen anestezi aldığında anesteziyi %0,5-0,8'e düşürün.</li>
	<li>Bir yağ hidrolik mikromanipülatör ile mikroelektrot elektrot yavaş yavaş ilerletin. Yüksek sinyal-gürültü oranı gözlendiğinde ve elektrot 4. Amplifikasyon faktörünün 1.000, filtrenin 300-100 Hz ve numune oranının 40 Hz olarak ayarlandığından emin olun.</li>
	<li>LED monitörde tam alan hareketli sinüzoidal ızgara(Şekil 1D, 12 yön, 0 kontrast, 2 Hz geçici frekans, mekansal frekans derecesi başına 0,04 döngü) sunun.</li>
	<li>Hücrenin yanıtını ipsilateral ve kontralateral gözü ayrı ayrı uyararak ölçün. Mevcut 3-5x toplam.</li>
	<li>Her penetrasyonda beş ila sekiz hücrenin yanıtlarını ölçün. Her farede dört ila altı penetrasyon gerçekleştirin.</li>
	<li>Kayıttan sonra, isofluran akış hızını %5 veya daha fazlaya ayarlayın, 1 dakika boyunca isofluran maruziyetini devam edin ve servikal çıkığı gerçekleştirin. NOT: Ayrı penetrasyonlar V1 dürbün bölgesinde en az 200 μm arayla aralıklı edildi.</li>
</ol>4. Off-line başak sıralama ve veri analizi
<ol><li>Ham sinyal bir eşik seviyesini geçtiğinde ani artışları algıla. Yakalanan ani artışları ilk pozitif veya negatif tepede hizala. Farklı hücrelerden ani artışlar algılamak için yazılım kullanın.</li>
	<li>İki imleç ayarlayın: biri pozitif, diğeri negatif sapma için. Başak şablonu ayarlama (Şekil 2A). Şablon alanını, farklı ani artış sınıfları arasındaki en önemli varyasyonla birlikte buna ayarlayın.</li>
	<li>Kümeler halinde ayırmak için ana bileşen çözümlemesi kullanın. Kümeleme yöntemleri farklı laboratuvarlar arasında farklılık gösterebilir.</li>
	<li>K-anlamına gelir algoritmasını kullanarak bir sınırın başak sınıflandırmak.</li>
	<li>Oryantasyonu başak atış hızıyla ilişkilendirin ve ipsilateral ve kontralateral göz için oryantasyon akort eğrilerini çizin.</li>
	<li>Kontralateral/ipsilateral tepki mukavemet oranını temsil eden tek birim için OD indeksini hesaplayın: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/60600/60600eq1a.jpg"> Rkontra ve Ripsi kontralateral ve ipsilateral göz için hücrenin en uygun yanıt, ve Rspon hücrenin spontan aktivitesi dir.</li>
	<li>OD puanlarını aşağıdaki şekilde 1-7'ye atayın: − 1 - −0,75 = 1; −0,75 ile −0,45 = 2; −0,45 ile −0,15 = 3; −0,15 ile 0,15 = 4; 0,15 ile 0,45 = 5 arası; 0,45 ile 0,75 = 6 arası; ve 0,75 ile 1 = 7 arasında dır.</li>
	<li>Kontralateral sapma indeksi (CBI) hesaplamak: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/60600/60600eq2a.jpg"> n hücre numarası dır ve nx od puanları x'e eşit olan hücre sayısına eşittir.</li>
</ol>

<ol><li>Hubel, D. H., Wiesel, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+monocular+deprivation+in+kittens%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn-Schmiedebergs+Archiv+f%C3%BCr+experimentelle+Pathologie+und+Pharmakologie%22%5BJournal%5D)">Effects of monocular deprivation in kittens.</a> Naunyn-Schmiedebergs Archiv für experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 248 (6), 492-497 (1964).</li>
<li>Daw, N. W., Fox, K., Sato, H., Czepita, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+period+for+monocular+deprivation+in+the+cat+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Critical period for monocular deprivation in the cat visual cortex.</a> Journal of Neurophysiology. 67 (1), 197-202 (1992).</li>
<li>Guire, E. S., Lickey, M. E., Gordon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+period+for+the+monocular+deprivation+effect+in+rats%3A+assessment+with+sweep+visually+evoked+potentials%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Critical period for the monocular deprivation effect in rats: assessment with sweep visually evoked potentials.</a> Journal of Neurophysiology. 81 (1), 121-128 (1999).</li>
<li>Wang, L., Sarnaik, R., Rangarajan, K. V., Liu, X., Cang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+receptive+field+properties+of+neurons+in+the+superficial+superior+colliculus+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Visual receptive field properties of neurons in the superficial superior colliculus of the mouse.</a> Journal of Neuroscience. 30 (49), 16573-16584 (2010).</li>
<li>Niell, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Types%2C+circuits%2C+and+receptive+fields+in+the+mouse+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Cell Types, circuits, and receptive fields in the mouse visual cortex.</a> Annual Review of Neuroscience. 38 (1), 413-431 (2015).</li>
<li>Lee, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+specific+interneurons+improves+V1+feature+selectivity+and+visual+perception%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Activation of specific interneurons improves V1 feature selectivity and visual perception.</a> Nature. 488 (8), 379-383 (2012).</li>
<li>Cossell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+organization+of+excitatory+synaptic+strength+in+primary+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional organization of excitatory synaptic strength in primary visual cortex.</a> Nature. 518 (2), 399-403 (2015).</li>
<li>Lacaruso, M. F., Gasler, L. T., Hofer, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+organization+of+visual+space+in+primary+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Synaptic organization of visual space in primary visual cortex.</a> Nature. 547 (7), 449-452 (2017).</li>
<li>Metin, C., Godement, P., Imbert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+primary+visual+cortex+in+the+mouse%3A+Receptive+field+properties+and+functional+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">The primary visual cortex in the mouse: Receptive field properties and functional organization.</a> Experimental Brain Research. 69 (3), 594-612 (1988).</li>
<li>Marshel, J. H., Garrett, M. E., Nauhaus, I., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+specialization+of+seven+mouse+visual+cortical+areas%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Functional specialization of seven mouse visual cortical areas.</a> Neuron. 72 (6), 1040-1054 (2011).</li>
<li>Gordon, J. A., Stryker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience-dependent+plasticity+of+binocular+responses+in+the+primary+visual+cortex+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Experience-dependent plasticity of binocular responses in the primary visual cortex of the mouse.</a> The Journal of Neuroscience. 16 (10), 3274-3286 (1996).</li>
<li>McGee, A. W., Yang, Y., Fischer, Q. S., Daw, N. W., Strittmatter, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience-driven+plasticity+of+visual+cortex+limited+by+myelin+and+Nogo+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Experience-driven plasticity of visual cortex limited by myelin and Nogo receptor.</a> Science. 309 (5744), 2222-2226 (2005).</li>
<li>Sawtell, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NMDA+receptor-dependent+ocular+dominance+plasticity+in+adult+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">NMDA receptor-dependent ocular dominance plasticity in adult visual cortex.</a> Neuron. 38 (6), 977-985 (2003).</li>
<li>Hofer, S. B., Mrsic-Flogel, T. D., Bonhoeffer, T., Hubener, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prior+experience+enhances+plasticity+in+adult+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Prior experience enhances plasticity in adult visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 9 (12), 127-132 (2006).</li>
<li>Crozier, R. A., Wang, Y., Liu, C., Bear, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deprivation-induced+synaptic+depression+by+distinct+mechanisms+in+different+layers+of+mouse+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Deprivation-induced synaptic depression by distinct mechanisms in different layers of mouse visual cortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (4), 1383-1388 (2007).</li>
<li>Tagawa, Y., Kanold, P. O., Majdan, M., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+periods+of+functional+ocular+dominance+plasticity+in+mouse+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Multiple periods of functional ocular dominance plasticity in mouse visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 8 (3), 380-388 (2005).</li>
<li>Lickey, M. E., Pham, T. A., Gordon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swept+contrast+visual+evoked+potentials+and+their+plasticity+following+monocular+deprivation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Research%22%5BJournal%5D)">Swept contrast visual evoked potentials and their plasticity following monocular deprivation in mice.</a> Vision Research. 44, 3381-3387 (2004).</li>
<li>Cang, J., Kalatsky, V. A., Lowel, S., Stryker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+imaging+of+the+intrinsic+signal+as+a+measure+of+cortical+plasticity+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Optical imaging of the intrinsic signal as a measure of cortical plasticity in the mouse.</a> Vision Neuroscience. 22 (5), 685-691 (2005).</li>
<li>Khan, I. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+different+suturing+techniques+for+cystotomy+closure+in+canines%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Animal+%26+Plant+Sciences%22%5BJournal%5D)">Evaluation of different suturing techniques for cystotomy closure in canines.</a> Journal of Animal & Plant Sciences. 23 (4), 981-985 (2013).</li>
<li>Weisman, D. L., Smeak, D. D., Birchard, S. J., Zweigart, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+a+continuous+suture+pattern+with+a+simple+interrupted+pattern+for+enteric+closure+in+dogs+and+cats%3A+83+cases+%281991-1997%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Veterinary+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Comparison of a continuous suture pattern with a simple interrupted pattern for enteric closure in dogs and cats: 83 cases (1991-1997).</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 214 (10), 1507-1510 (1999).</li>
<li>Heneghan, C. P. H., Thornton, C., Navaratnarajah, M., Jones, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+isoflurane+on+the+auditory+evoked+response+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22BJA%3A+British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Effect of isoflurane on the auditory evoked response in man.</a> BJA: British Journal of Anaesthesia. 59 (3), 277-282 (1987).</li>
<li>Mitzdorf, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+source-density+method+and+application+in+cat+cerebral+cortex%3A+investigation+of+evoked+potentials+and+EEG+phenomenal%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Current source-density method and application in cat cerebral cortex: investigation of evoked potentials and EEG phenomenal.</a> Physiological Reviews. 65 (1), 37-100 (1985).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan.

Biz MD ve ölçüm OD plastisite için tek bir birim kayıt ile ayrıntılı bir protokol sıyoruz. Bu protokol görsel nörolojide yaygın olarak kullanılmaktadır. MD protokolü karmaşık olmasa da, dikkatle takip edilmesi gereken bazı kritik cerrahi prosedürler vardır. İlk olarak, dikiş kalitesini sağlayan iki önemli ayrıntı vardır. Dikişler göz kapağının medial kısmında yoğunlaşmışsa dikiş yeterince kararlıdır. Ayrıca, gözün yeniden açılmasını önlemek için düğümün stabilitesini artırmak için düğüm ün başına 3 μL tutkal uygulanır. İ...

Monoküler görme yoksunluğu V1 plastisiteyi incelemek için mükemmel bir deneysel paradigmadır. Nöral gelişimde görsel deneyimin önemini incelemek için, David Hubel ve Torsten Wiesel1,2 çeşitli zaman noktalarında ve zaman değişen dönemlerde bir göz normal görme yoksun kedi yavruları. Daha sonra v1'de yoksun ve yoksun olmayan gözler için tepki yoğunluğundaki değişiklikleri gözlemlediler. Sonuçları, ilk üç ay içinde kapatılan göze tepki veren anormal derecede düşük sayıda nöron olduğunu gösterdi. Ancak, yavru nöronlar gelen tepkiler bir yıl boyunca kapalı dikişli normal bir yetişkin kedi gözü ile her bakımdan aynı kaldı, ve yavru kurtarıldı değildi. Erişkin kedilerde MD OD plastisite neden olamaz. Bu nedenle, V1 kablolama üzerinde görsel deneyim etkisi geliştirme kısa, iyi tanımlanmış aşamasında güçlüdür, önce ve sonra aynı uyaranların daha az etkisi var. Görsel girişe yatkınlığın arttığı bir evre, görsel kortekste kritik dönem olarak bilinir.
Fare bir nokturnal hayvan olmasına rağmen, fare V1 bireysel nöronlar kedilerde bulunan nöronlar benzer özelliklere sahip3,4,5. Son yıllarda, transgenik teknolojinin hızlı gelişimi ile, görsel nörobilim çalışmaların giderek artan sayıda deneysel bir model olarak fareler kullanmış6,7,8. Fare görsel çalışmalarda, nörologlar farelerin genetik makyaj üzerinde kontrol sağlayan mutantlar ve nakavt fare hatları kullanın. Farelerv1 od kolonları olmamasına rağmen, V1 dürbün bölgesindeki tek nöronlar önemli OD özellikleri göstermektedir. Örneğin, çoğu hücre ipsilateral stimülasyon daha kontralateral stimülasyon daha güçlü yanıt. Kritik dönemde bir gözün geçici olarak kapanması OD indeksdağılımında9,10,11'deönemli bir değişime neden olur. Bu nedenle, MD nöral gelişimsel bozukluklar dahil genlerin in vivo kortikal plastisite nasıl etkilediğini araştırmak için bir OD plastisite modeli kurmak için kullanılabilir.
Burada, MD için deneysel bir yöntem sokulduk ve monoküler görme yoksunluğu sırasında OD plastisitedeki değişimi analiz etmek için yaygın olarak kullanılan bir yöntem (elektrofizyolojik kayıt) öneriyoruz. Yöntem yaygın 20 yılı aşkın bir süredir birçok laboratuvarda12,13,14,15,16için kullanılmaktadır. Kronik görsel uyarılmış potansiyel (VEP) kayıt17ve içsel optik görüntüleme (IOI)18gibi OD plastisite ölçümünde kullanılan diğer yöntemler de vardır. Bu akut yöntemin önemli avantajı takip etmek kolay olmasıdır, ve sonuçlar son derece güvenilir.

<table><tbody><tr><td>502 tutkal</td><td>M & G Chenguang Kırtasiye Co., Ltd.</td><td></td><td></td>AWG97028</tr><tr><td>Satın alma kartı</td><td>Ulusal Kurum</td><td>PCI-6250</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Biowest</td><td>G-10</td><td></td></tr><tr><td>Amplifikatör</td><td>sistemi</td><td>Modeli 1800</td><td></td></tr><tr><td>Atropin</td><td>Aladdin Bio-Chem Technology Co., Ltd</td><td>A135946-5</td><td></td></tr><tr><td>Beyin Stereotaksik Aparatı</td><td>RWD Life Science Co., Ltd</td><td>68001</td><td></td></tr><tr><td>Cohan-Vannas yaylı makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15000-02</td><td></td></tr><tr><td>Kontakt Lens Çözümleri</td><td>Pekin Dr. Lun Göz Bakım Ürünleri Co., Ltd.</td><td></td><td></td>GM17064</tr><tr><td>Pamuklu çubuklar</td><td>Henan Guangderun Medical Instruments Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnce iğne tutucu</td><td>SuZhou Stronger Medical Instruments Co., Ltd</td><td>CZQ1370</td><td></td></tr><tr><td>Forcep</td><td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td><td>53320A</td><td></td></tr><tr><td>Forcep</td><td>66 Vizyon Tech Co., Ltd.</td><td>53072</td><td></td></tr><tr><td>Forcep</td><td>66 Vizyon Tech Co., Ltd.</td><td>#5</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma yastığı</td><td>Stryker</td><td>TP 700 T</td><td></td></tr><tr><td>Aydınlatıcı</td><td>Motic China Group Co., Ltd.</td><td>MLC-150C</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD Life Science Co., Ltd</td><td>R510-22</td><td></td></tr><tr><td>LCD monitör</td><td>Philips (Çin) Investment Co., Ltd.</td><td>39PHF3251/T3</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>SOPTOP</td><td>SZMT1</td><td></td></tr><tr><td>Noninvaziv Yaşamsal Belirti Monitörü</td><td>Mouseox</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Yağı hidrolik mikromanipülatör</td><td>NARISHIGE International Ltd.</td><td>PC-5N06022</td><td></td></tr><tr><td>Petrolatum Göz Jeli</td><td>Dezhou Yile Dezenfeksiyon Technology Co., Ltd.</td><td>17C801</td><td></td></tr><tr><td>Spike2 Cambridge</td><td>Electronic Design, Cambridge, Birleşik Krallık</td><td>Spike2 Sürüm 9</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi makas</td><td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td><td>54010</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi makas</td><td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td><td>54002</td><td></td></tr><tr><td>Sütür İğnesi</td><td>Ningbo Medical Co., Ltd</td><td>3/8 ark 2.5 * 8</td><td></td></tr><tr><td>Tungsten Elektrot</td><td>FHC, Inc</td><td>L504-01B</td><td></td></tr><tr><td>Xylocaine</td><td>Huaqing</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fare birincil görsel kortekste monoküler görme yoksunluğu ve oküler baskınlık plastisite Ölçümü

Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex

Monoküler görme yoksunluğu primer görsel kortikal yanıt plastisite indüklemek için mükemmel bir deneysel paradigmadır. Genel olarak, korteksin bir uyarıcıya karşı kontralateral göze tepkisi, farenin birincil görsel korteksinin (V1) binoküler segmentindeki ipsilateral gözün tepkisinden çok daha güçlüdür. Memelikritik dönemde, kontralateral göz dikiş contralateral göz stimülasyonu V1 hücrelerinin hızlı bir yanıt kaybına neden olacaktır. Transgenik teknolojilerin sürekli gelişimi ile, daha fazla çalışma oküler hakimiyeti belirli genlerin etkilerini incelemek için deneysel modeller olarak transgenik fareler kullanıyor (OD) plastisite. Bu çalışmada, monoküler görme yoksunluğu için ayrıntılı protokoller sunmakta ve Fare V1'de OD plastisitedeki değişimi hesaplıyoruz. Kritik dönemde 4 gün boyunca monoküler yoksunluk (MD) sonrası, her nöronun oryantasyon ayar eğrileri ölçülür ve V1'deki dört nöronun tuning eğrileri ipsilateral ve kontralateral gözlerin uyarılması arasında karşılaştırılır. Kontralateral sapma indeksi (CBI) OD plastisite derecesini belirtmek için her hücrenin oküler OD puanı kullanılarak hesaplanabilir. Bu deneysel teknik kritik dönemde OD plastisiten nöral mekanizmalarının incelenmesi ve nöral gelişimde belirli genlerin rollerinin incelenmesi için önemlidir. En önemli sınırlama, akut çalışmanın aynı farenin nöral plastisitedeki değişimi farklı bir zamanda araştırmayamaz olmasıdır.

Burada açıklanan deneysel sonuçlar, kritik dönemde (P19-P32) yoksun ve yoksun bir fareden başarılı MD ve OD plastisite ölçümleri sağlar. Şekil 1, MD'den 4 gün sonra ipsilateral ve kontralateral gözdeki yanıtları karşılaştırmak için binoküler bölge V1'den 4. Şekil 2, ipsilateral ve kontralateral gözleri uyaran başak sıralama ve oryantasyon alet ölçümlerini gösterir. Başak sıralama için, başak şablonu ani ana bileşen ağırlıkları kümeleme tarafından kurulmuştur. Ör...

Burada, kritik dönemde görsel plastisitenin nöral mekanizmalarının incelenmesinde önemli yöntemler olan monoküler görme yoksunluğu ve oküler hakimiyet plastisite analizi için ayrıntılı protokoller ve spesifik genlerin görsel gelişim.

Fare Birincil Görsel Kortekste Monoküler Görme Yoksunluğu ve Oküler Baskınlık Plastisite Ölçümü

Monocular visual deprivation is an excellent experimental paradigm to induce primary visual cortical response plasticity. In general, the response of the ...

Monoküler görme yoksunluğu primer görsel kortikal yanıt plastisite indüklemek için mükemmel bir deneysel protokoldür. Normalde, fare birincil görsel korteks in dürbün segmentinde nöronlar ipsilateral göz olarak kontralateral göz uyarılması yaklaşık iki kat daha güçlü yanıt. Ancak, dikiş oküler hakimiyet plastisite için kritik dönemde kontralateral göz kapalı contralateral göz stimülasyon V1 nöronlar tarafından hızlı yanıt kaybı ve aynı zamanda ipsilateral göz yanıtı nda bir sonraki artış takip neden.Burada, monoküler yoksunluk için deneysel protokolü tanıtmak ve görsel yoksunluk sırasında oküler hakimiyeti eğilimi analiz etmek için yaygın olarak kullanılan bir yöntem önermek. Cerrahi aletleri alüminyum bir kutuya koyun ve yarım saat boyunca 120 santigrat derecenin altına koyun. Su banyosu nda %2 agarose çözeltisi hazırlayın ve 75 santigrat derecede saklayın.Her iki göze ince bir göz merhemi tabakası uygulayın. Aydınlatma ile anatomik mikroskop altında, göz kapakları dikiş. Yaklaşık dört dikiş at.İş parçacığının 2-3 düğümünü yapın. Düğümün stabilitesini artırmak için düğümün başına üç mikrolitre instant kurutma tutkal 502 uygulayın. Sonra yeterince kısa iplik kesti.Fare tamamen uyanık olduğunda, onları ayrı bir tutma kafesine yerleştirin. Elektrofizyolojik kayıttan önce fareyi anestezik için isoflurane kullanın. Dikişleri çıkarın ve göz küresini ortaya çıkarın.Göz kapağını dikkatlice kırpın. Kontakt lens çözümleri ile gözleri temizleyin ve netlik için gözleri kontrol edin. Sadece göz bebeklerinin iyi durumda olan faresi kullanılabilir.Fareyi uyuşdurarak dıktan sonra fareyi stereotaksik bir çerçeveye yerleştirin. Prosedür boyunca vücut ısısını korumak için bir ısıtma yastığı kullanın. Nemli tutmak için göz merhemini göz yüzeyine uygulayın.Cildini ortaya çıkarmak için farenin saçını çıkarın. Kafatasını ortaya çıkarmak ve kafa derisi dokusunu çıkarmak için her iki kulak arasındaki sekiz milimetrelik deri ile çarpılarak sekiz milimetrelik bir deri eğimi. Sonra hidrojen peroksit ile örten bağ dokusu kaldırın.Beyincik üzerinde kafatasında bir delik aç. Referans olarak delikküçük bir kemik vida düzeltmek. V1 dürbün bölgesinde çapı bir milimetre küçük bir kraniyotomi gerçekleştirin.Dikkatle beyin zarar vermeden kafatası parçası çıkarın. Kurumasını önlemek için açık kortikal yüzeyin %2 agarose ile kaplayın. Stereotaksik çerçeve üzerinde bir tungsten elektrot düzeltmek.Kaydedilen hücrelerin her iki göze de tepki verdiğinden emin olmak için tungsten elektrodu dikey olarak dürbün V1 bölgesine yerleştirin. Uyarıcı rastgele bir blokta 30 derece ile ayrılır. Her ölçümde toplam üç ila beş blok sunuldu.Şeffaf olmayan plastik plaka ile maske bir göz. Farenin gözlerinden 23 santimetre pozisyona LCD1'i sunun. Yağ hidrolik mikromanipülatör tarafından yavaş yavaş mikroelektrot ilerletin.Elektrot dördüncü katmana ilerlediğinde ilerlemeyi durdurun yüksek sinyal gürültü oranı sinyalini durdurun ve ölçüme başlayın. Başak aktivitelerini 1,000'lik bir faktörle yükseltiyoruz ve 300 ile 10 kilohertz arasında filtreleyip 40 kilohertz'de örnekliyoruz. Sonra diğer gözü maskeleyin ve kontralateral gözün tepkisini ölçün.Tek elektrotlarla ölçülen sinyaller popülasyon aktiviteleridir. Farklı hücrelerin ani artışlarını ayırmak için yazılımı kullanın. İlk olarak, 500 ila 5, 000 hertz arasında sinyal filtre.Biri pozitif sapma, diğeri negatif sapma aniları için olmak üzere iki imleç ayarlayın. Başak şablonları ayarlayın. Farklı ani artış sınıfları arasındaki en büyük varyasyonu gösterdiği şablonalanını ayarlayın.Kümeler halinde ayırmak için ana bileşenler çözümlemesi kullanın. K algoritması kullanarak bir sınırın ani artışlarını sınıflandırmak. Oryantasyonu ani ateşleme hızıyla ilişkilendirin ve ipsilateral ve kontralateral gözler için oryantasyon akort eğrilerini çizin.Daha sonra, kontralateral ve ipsilateral yanıtı temsil eden tek hücreler için OD indeksi hesaplamak OD indeksi göre her hücre için bir OD puanı atamak. Formüle göre kontralateral önyargı dizini hesaplayın. Bu diyagram, monoküler yoksun ve yoksun olmayan farede ipsilateral ve kontralateral gözün yön tuning eğrilerini gösterir.Bu protokol, kritik dönemde yoksun ve yoksun bir fareden başarılı monoküler görme yoksunluğu ve göz hakimiyeti ölçümü sağlar. Size bu deneyi nasıl başarabileceğinizi gösterdik ve görsel yoksunluk sırasında göz seli değişimini analiz ettik. Deney sırasında, elektrofizyolojik kayıt sırasında dikiş işlemi ve etkileşiminde enfeksiyondan kaçınmak önemlidir.Videomuzu izlediğiniz için teşekkürler.

monocular-visual-deprivation-ocular-dominance-plasticity-measurement

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Video-oculography çok kantitatif oküler motor performansını incelemek için yöntem yanı sıra motor öğrenmedir. Burada, farelerde video oculography ölçmek nasıl açıklar. Normal, bu tekniği uygulamak-farmakolojik tedavi ya da genetik olarak değiştirilmiş fareler motoru davranışların altında yatan fizyolojik keşfetmek için güçlü bir araştırma aracı.

Farelerde Video-oculography

Kronik oküler hipertansiyon fare gözünde Trabeküler ağın laser kullanılarak meydana gelir. Göz içi basıncı (GİB) lazer tedavi sonrası birkaç ay boyunca yükselir. Görme keskinliği ve Deney hayvanlarının kontrast duyarlılık azalması optomotor testi kullanılarak izlenir.

Görme Kusurları karakterize Kronik Oküler Hipertansiyon bir Lazer-kaynaklı Fare Modeli

Bu video naif fare görsel projeksiyon kontrastlı MR görüntüleme ve akut optik sinir ezilme yaralanma ve kronik optik sinir dejenerasyonu ile ilişkili optik sinir dejenerasyonu tekrarlayan ve uzunlamasına in vivo çalışmalar için, bir klinik 3 T tarayıcı kullanarak, bir yöntemi göstermektedir knock-out fareler (p50 KO).

Farelerde kontrastlı MR ile optik sinir lifi Dürüstlük İn vivo

Ayrıca enüklüeasyon denilen gözlerin kaldırılması, geri dönüşümsüz kısmi (monoküler) veya tam (binoküler) görme kaybına neden olduğundan memeli görme sistemi boyunca görsel, çapraz modal ve gelişimsel plastisite yönlerini incelemek için yararlı bir strateji sağlar. Burada vivo enükleasyonuna gerçekleştirmek için son derece tekrarlanabilir ve basit bir yaklaşım açıklar.

A Çok Reproducible ve Kolay Yöntem gerçekleştir In Vivo Göz Enükleasyon

Yapısal ve görsel dökümanları Rodents optik koherens tomografi ve optokinetic yanıt tarafından değerlendirilmesi için detaylı bir protokol sunulmuştur. Sonuçları Oftalmolojik gibi nörolojik araştırma için değerli bilgiler sağlar.

Optik koherens tomografi ve Optokinetic yanıt yapısal ve işlevsel görsel sistemin çıktıları fareler ve sıçanlar olarak kullanma

Fare vizyonu incelemek için, biz bir giderek test yaptı. Fareler tavan üzerinde bir monitör ile büyük bir kare arenada yerleştirildi. Giderek yükselen görsel uyarıcı, farelerde sürekli olarak donma veya uçuş reaksiyonlarını uyarmaktadır.

Fare vizyonu değerlendirmek için görsel stimuli Looming kullanma

Burada, merkezi görme kaybı olan katılımcılarda dürbün göz hareketlerinin ve bakış kontrollü merkezi görme alanı taramasının değerlendirilmesi için bir protokol sunulmaktadır.

Dürbün Merkezi Görme Alanının ve Dürbün Göz Hareketlerinin İkiTik Görüntüleme Durumunda Değerlendirilmesi

Burada, gül bengal kullanarak retinal ven tıkanıklığı için optimize edilmiş bir protokol ve genetiği değiştirilmiş suşlarda tekrarlanabilirliğini en üst düzeye çıkarmak için önerilerle lazer rehberliğinde retinal görüntüleme mikroskop sistemi açıklanmaktadır.

Değişkenliği Sınırlamak için Retinal Ven Tıkanıklığı Fare Modelinin Optimizasyonu

Burada, optokinetik refleksi ölçmek için standart bir protokol açıklıyoruz. Sanal davul stimülasyonunu ve video-okülografiyi birleştirir ve böylece davranışın özellik seçiciliğinin ve uyarlanabilir plastisitesinin hassas bir şekilde değerlendirilmesine izin verir.

Farelerde Optokinetik Refleksin Görsel Özellik Seçiciliğinin Ölçülmesi

Merkezi görme kaybını simüle eden algısal ve okülomotor araştırmalar için tasarlanmış bir bakış koşullu ekran çerçevesinin geliştirilmesini sunuyoruz. Bu çerçeve, hem simüle edilmiş hem de patolojik merkezi görme kaybı yaşayan bireylerde telafi edici davranışsal ve okülomotor stratejileri incelemek için özellikle uyarlanabilir.

Simüle Edilmiş Merkezi Görme Kaybı ile Algısal Öğrenme Araştırmaları için Bakışa Bağlı Bir Ekran Çerçevesi

Burada, dürbün görüşünü değerlendirmek için kapsamlı bir dizi görev sunuyoruz. Görevler arasında çevresel stereoaküity ve derinlemesine hareket yer alır; bunlar mevcut klinik testlerle değerlendirilmez. Bu görevlerin dahil edilmesi, bir bireyin dürbünlülüğünün derinlemesine bir değerlendirmesini sağlayacaktır.

Yetişkinler için Nicel Dürbün Görme Testleri Paketi: Test Protokolleri

Öğrenin fare birincil görsel kortekste monoküler görme yoksunluğu ve oküler baskınlık plastisite ölçümü protokolleri. Bu yöntem, kritik dönemde görsel plastisitenin nöral mekanizmalarını incelemek için kullanılır.

Fare Birincil Görsel Kortekste Monoküler Görme Yoksunluğu ve Oküler Baskınlık Plastisite Ölçümü

Daha fazla video keşfet