Name: Ortotopik Karaciğer Transplantasyonunun Sıçan Modelinde Arteriyel Reconnection Sonrası Azaltılmış Komplikasyonlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-11-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Öğrenin, sıçanlarda ortotopik karaciğer transplantasyonunda arteriyel reconnection tekniğiyle komplikasyonları azaltma ve sağkalım oranlarını artırma yöntemlerini. Bu protokol insan karaciğer nakline benzer şekilde geliştirilmiştir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma UHN'deki Çoklu Organ nakli programından gelen fonlar ve Toronto General ve Toronto Western Foundation'ın desteği ile finanse edilmiştir.

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Küçük hayvan karaciğer nakli modelleri organ bağışıklığı anlamak ve yeni tedavi stratejileri belirlemek için önemlidir32. İdeal küçük hayvan karaciğer nakli modeli arteriyel anastomoz da dahil olmak üzere insan prosedürünün tüm adımları çoğaltır. Çoğu sürümleri komplikasyonlar ve morbidite42daha yüksek oranlarda yol açan bir HA anastomoz adım dahil olmadığı gibi, sıçan OLT modeli sonuçları yorumlamak zor olabilir. Bazı rekonstrüksiyon prosedürleri böbrek arter kullandık, hangi böbrek çıkarılması gerektirir27. Bu protokol organ çıkarılmasını önler, çünkü insan prosedüründe meydana gelenin ötesindedir.
Arteriyel rekonstrüksiyonlar da sıçan aort manipüle ederek yapılabilir31. Ancak, bu yöntemler geniş diseksiyon ve aort kenetleme gerektirir. Kıskaç süresi uzamışsa, alıcı sıçan distal iskemi43ile ilgili kötü sonuçlara sahip olacaktır. İnsanlarda, lt cerrahi tekniği ligasyon ve alıcı gastroduodenal arter bölünmesi içerir (GDA). Ancak kemirgenlerin fizyolojik ve anatomik özellikleri bu tekniği kullanarak transplantasyon yapar ve komplikasyonlara yol açabilir (örneğin, pankreas ve safra kanalı nın nekrozu35 ve safra kaçağı44). Bu protokoldeki arteriyel yeniden bağlantı, bu zorluğu atlatmak, kanal kan akışını sürdürmek ve alıcı sonucunu iyileştirmek için tasarlanmıştır.
Sıçan HA rekonstrüksiyonu için bir kol ve stentleme tekniğikullanımı daha önce27açıklanmıştır . Bu teknikte, bir stent bir kılavuz olarak kullanılır, ve arter alıcı ortak HA donör çölyak gövde yeniden. Alıcı ortak HA sonra dışarı kesilir ve alıcı GDA27kapalı bağlanır. Sonuç olarak, alıcı BD alt kısmına kan akımı ve pankreas başkanı tehlikeye olabilir. Bu alana teminat dolaşımı genellikle safra kanalına yetersiz kan akışını sağlar inanılmaktadır. Örneğin, bu protokol, alıcı GDA'yı önce mikrovasküler bir kliple sıkıştırır, sonra alıcı BD'yi böler. GDA kenetlendi, bölünmüş BD kanamaz. GDA kelepçesi çıkarıldıktan sonra BD'den canlı kanama gözlenir. Bölünmüş alıcı safra kanalına iyi akışı sağlayan bu protokol, yeterli karaciğer kan perfüzyonu sağlayarak ve post-OLT hipoksik karaciğer hasarı önleyerek alıcı karaciğer dokusunun fizyolojisini korur.
Donör tarafında, HA stent çölyak gövde bir yama oluşturarak kolaylıkla greft hazırlanması sırasında çölyak gövde içine yerleştirilir, sol mide arter, ve dalak arter. Stent geniş açıklıktan takılabilir, bu da stenti tek başına çölyak gövdesine sokmaya çalışmaktan daha az zordur. Bu 24 G HA stent için kullanmak için ideal bir boyut olduğu bulunmuştur. Stentin uzunluğu 1,0-1,5 mm uzunluğunda olmalıdır, çünkü alıcının uygun HA'sının donörün ortak HA'sına kolayca çekilmesini sağlamak için açık bir kapı görevi görür. 10-0 ethilon sütür yerleştirilir nerede dikkatli dikkat ile, bu bağlantı üzerinden akan kan doğrudan stent dokunmaz, ve alıcının uygun HA komplikasyon riskini azaltarak, içeriden kalkan olacaktır. Daha da önemlisi, donörün HA vazospazm önlemek için kenetlenmiş asla. Arteriyel rekonstrüksiyonun başarısı donör GDA açık bırakılarak değerlendirilir. Rekonstrüksiyon tamamlandıktan sonra başarılı anastomoz donör GDA'dan iyi kan akışı sağlar.
Bu protokolde, diğerlerine benzer şekilde, SHVC yeniden bağlantısı en yavaş adımdır ve sonuçta anhepatik fazın süresini belirler. Anhepatik zaman arttıkça iskemik yaralanma ve karaciğer fonksiyon bozukluğu riski45'eyükselir. OLT sıçan modellerinin bir diğer kritik bileşeni greft boyutları, stentler, ve manşet. Greft çok küçükse, greft bükülebilir veya takla atarak damar bağlantılarını engelleyebilir. Stent ve manşetlerin boyutu, farenin yaşına, cinsiyetine, kilolarına ve türüne göre ayarlamalar gerektirebilir. Burada kullanılan manşetlerin boyutu daha önce28olarak tanımlanmış ve fare boyutu için kontrol edilen bir manşet boyutu kullanılmıştır. Takip süresi boyunca (bugüne kadar: ortalama = ameliyat sonrası 133 gün, en az = 115 gün ameliyat sonrası, maksimum = ameliyat sonrası 161 gün) sıkıntı veya komplikasyon (karaciğer tıkanıklığı, ödem, asit veya dalak) belirtisi yoktu. Yaş ve cinsiyet için muhasebe çeşitli sıçan suşları için PV ve IHVC uygun boyutunu belirlemek için daha fazla çalışma garanti edilir.
Bu değiştirilmiş sıçan OLT protokolü daha önce açıklandığı gibi, PV ve IHVC için3Dbaskılı manşet kullanır39 ,40. PV ve IHVC bağlamak için mevcut yöntemler bir mikrosuture tekniği32dahil , manşet tekniği46, ve mikrosuture-geçici splint tekniği47. 3D baskılı manşet tekniği seçilmiştir, çünkü manşetin boyutunun fare türüne göre standartlaştırılamasına ve hazırlanması ve kullanımı kolaydır. Aynı boyutlarda büyük miktarlarda manşet aynı anda basılabilir. Manşetin dış yüzeyinde bağların güvenliğini sağlamak ve kaymayı önlemek için iki oluk vardır. Bir kuyruk da manşet daha kolay manipülasyon sağlamak için manşet tasarımı içine dahil edilmiştir. Genel olarak, 3D baskılı manşetlerin biraraya edilmesinin anhepatik süreyi kısaltarak yüksek başarı oranlarına ve OLT prosedürünün tekrarlanabilirliğine yol açtığına inanılmaktadır. Bu tekniğin cerrahi öğrenme eğrisini de kısalttı.
Sonuç olarak, açıklanan protokol, arteriyel yeniden bağlantı adımını bir araya alarak insan karaciğer nakline daha çok benzeyen bir model oluşturmuştur. Bu protokol karaciğer transplantasyonunun birçok immünolojik ve cerrahi yönünü incelemek üzere uyarlanabilir ve transplantasyonla ilgili yeni terapötik müdahaleleri test etmek için bir model görevi görebilir.

Karaciğer hastalığının küresel yükü artmaya devam ediyor, 2005'ten 2013'e kadar1karaciğer hastalığına bağlı ölümlerde %30'luk bir artış1,2. Karaciğer nakli genellikle son dönem karaciğer hastalığı olan hastalar için tek çaredir. Karaciğer en sık nakledilen ikinci katı organdır ve 2015'ten 2016'ya kadar dünya çapında yapılan karaciğer nakli sayısı %7,25 artmıştır1,2. Prevalansına rağmen transplantasyon sonrası sağkalım3oranları 3 ,4,,5durgun hale gelmiştir. 15 yıllık hasta sağkalım oranının %53 olduğu bildirilmesi ve 20 yıllık hasta sağkalım oranının %21 gibi düşük olabileceği bildirilmesi3,5. Yeni tedavilere ve geliştirilmiş klinik sonuçlara yol açabilecek heyecan verici yeni immünobiyoloji girişimleri olmakla birlikte, bunları test etmek için henüz güvenilir bir küçük hayvan modeli yoktur.
Sıçan OLT modeli yaygın ret6dahil olmak üzere karaciğer nakli, soruşturma da kullanılmıştır6 ,7,8,9,10, bağışıklık toleransı11, nakil iskemi-reperfüzyon yaralanması12, immünsupresyon13, ve safra ağacı yaralanması14,15,16,17. Ancak, mevcut haliyle modelin bir dezavantajı yüksek post-operatif morbidite ve mortalite18,19. Bu insan operasyonu ile oran ciddi bir dezavantajı, ve model20klinik olarak ilgili sonuçlar çizmek için yeteneği ni tehlikeye attırıyor.
Ayrıca, bu morbiditenin büyük bir kısmı eksik veya kusurlu hepatik arter (HA) reconnectionatfedilebilir 18. İnsan karaciğer naklinde kritik bir adım olmasına rağmen, teknik zorluklar sıçan OLT modelinde HA reconnection tehlikeye eğilimindedir. Sonuç olarak, safra yolu (BD) anastomoz ince ve safra kaçağı ve BD nekroz21yüksek oranlarda sonuçlanır. Biliyer komplikasyonların yüksek insidansının ötesinde22, arteriyel giriş yokluğu greft karaciğer sonrası transplantasyon fizyolojisini değiştirir23, donör karaciğer grefthipoksi ile24 ve karaciğer hasarı iltihaplı loblar gözlenen19,25,26. Arteriyel reconnection olmadan Rat OLT da fibrozis teşvik eğilimindedir27. Aşağıda açıklanan sıçan OLT protokolü daha önce yayınlanmış bir sıçan OLT yöntemi ile basit bir HA rekonstrüksiyon adım birleştirerek bu sorunları giderir28, karaciğer parankim korunması ve geliştirilmiş sağkalım oranları ile sonuçlanan.
Karaciğer naklinin üç aşaması vardır: (1) donörden karaciğer greftinin çıkarılması, (2) donör karaciğer greftinin hazırlanması ve (3) alıcı karaciğerin karaciğer grefti ile değiştirilmesi. Prosedür beş anatomik yapıların manipülasyoniçerir: suprahepatik inferior vena kava (SHVC), portal ven (PV), infrahepatik inferior vena kava (IHVC), hepatik arter (HA) ve safra yolu (BD).
Sıçanda OLT ilk ShVC, PV ve IHVC mikrosutür anastomoz ve BD29için bir pull-through tekniği kullanılarak Lee ve ark tarafından tanıtıldı . Bu model daha sonra 1979 yılında iki manşet tekniği kullanılarak geliştirilmiş30. O zamandan beri, çeşitli alternatif teknikler önerilmiştir, çoğunluğu venöz anastomoz odaklanan ve birkaç değişiklik ile iki manşet tekniği kullanılarak31. HA anastomoz mikrosutür, manşet ve intraluminal kollar26,31,,32,33,34gibi teknikler kullanılarak sıçan OLT modelinde daha önce tanımlanmış olmasına rağmen, bu teknikler genellikle yüksek eğitimli mikrocerrahi becerileri gerektirir, önemli ölçüde sıçan fizyolojisi değiştirmek, ve tromboz ve / veya safra komplikasyonları 27 tarafından engellenir27,35.33
Ayrıca, cerrahi işlem seçimi de anhepatik zaman etkileyebilir (PV kıskaç gelen reperfüzyon için reperfusion reconstituted PV), sıçan karaciğer nakli başarısı için kritik olan. Özellikle, yüksek sağkalım oranları 15-20 dk36anhepatik kez gözlenir ve 30 dk başarı için üstsınır37,38. Bu nedenle, Bu yöntemin amacı hepatik arter yeniden bağlamak mümkün daha az invaziv ve daha kolay benimsenebilir cerrahi sıçan OLT modeli uygulamaktır, nakledilen karaciğer verimli perfüzyon teşvik, alıcı safra kanalına akışını korumak, ve alıcının fizyolojik durumunu korumak.
Ayrıntılı burada donör karaciğer çölyak gövde manipülasyon yanı sıra 1) 1.5 mm stent kullanımı da dahil olmak üzere bu gözden geçirilmiş protokolün tüm adımları alıcı uygun HA ile bir ekstraluminal kol bağlantısı gerçekleştirmek için, 2) SHVC rekonstrüksiyonu için çalışan bir dikiş, 3) PV ve IHVC rekonstrüksiyonu için iki 3D baskılı plastik manşet39,40, 4) HA18için bir mikrovasküler kol reconnection,27,41 ve 5) daha önce açıklanan BD stentleme tekniği28. İki ek adım da dahildir: PV üzerinden soğuk bir floş, ve önceki bulgulara dayalı bir antibiyotik rejimi17. Bu optimize OLT protokolü perioperatif komplikasyonları ve morbiditeyi en aza indirir ve insan karaciğer transplantasyonunda kullanılan cerrahi ameliyat prosedürünü daha yakından modeller.

<table><tbody><tr><td>10-0 Ethilon</td><td>Ethicon</td><td>2830G</td><td>10-0 Ethilon Siyah 1X5" BV100-4</td></tr><tr><td>Konik 10mL Şırınga</td><td>BD</td><td>B302995</td><td>Luer-Lok Uç, Steril, Tek Kullanımlık</td></tr><tr><td>1mL Şırınga</td><td>BD</td><td>B309628</td><td>Luer-Lok Uç, Steril, Tek Kullanımlık</td></tr><tr><td>20 mL Şırınga</td><td>BD</td><td>B301031</td><td>Luer-Lok Uç, Steril,</td></tr><tr><td>IHVC</td><td></td> <td>için Tek Kullanımlık 3D Baskılı Manşet</td><td></td></tr><tr>PV <td></td><td></td><td></td><td>için Özel 3D Baskılı Manşet</td></tr><tr><td>IHVC</td><td></td><td></td><td></td>için Özel 3D</tr><tr><td>Baskılı Tutucu PV</td><td></td><td></td><td></td>için Özel 3D Baskılı Tutucu Özel</tr><tr><td>3mL Şırınga</td><td>BD</td><td>B309657</td><td>Luer-Lok Uç, Steril, Tek Kullanımlık</td></tr><tr><td>4-0 İpek</td><td>Coviden</td><td>GS-835</td><td>Wx kodlu örgülü ipek, 30", Sütür 1-İğne 26 mm Uzunluk 1/2 Daire Konik Uçlu İğne</td></tr><tr><td>5-0 Monokril</td><td>Ethicon</td><td>Y433H</td><td>Boyasız Monofilament 1X27" TF</td></tr><tr><td>5mL Şırınga</td><td>BD</td><td>B309646</td><td>Luer-Lok Uç, Steril, Tek Kullanımlık</td></tr><tr><td>7-0 İpek</td><td>Teleflex Medical</td><td>103-S</td><td>Siyah</td></tr><tr><td>8-0 Prolene</td><td>Ethicon</td><td>2775G</td><td>8-0 Prolene Mavi 1X24" BV130-5 EVP Çift Kollu</td></tr><tr><td>Barraquer Mikro İğne Tutucu Yakalamasız</td><td>Aesculap Cerrahi Aletler</td><td>FD231R</td><td>Kavisli 120 mm, 4 3/4 & Prime;</td></tr><tr><td>Barraquer İğne Tutucu, Ekstra İnce Çeneler 8.0mm, Kilitsiz Kavisli</td><td>Rumex International Co.</td><td>8-025T</td><td>Küçük Boy, Titanyum</td></tr><tr><td>Barraquer İğne Tutucu, İnce Çeneler 12.0mm, Kilitsiz Kavisli</td><td>Rumex International Co.</td><td>8-021T</td><td>Küçük Boy, Titanyum</td></tr><tr><td>BD Insyte Autoguard BC 22 GA x 1.00 IN</td><td>BD Angiocath / Autoguard</td><td>382523</td><td>22 G x 1.00" (0.9 mm x 25 mm) Kanatsız kateter, 37 mL/dk</td></tr><tr><td>BDPrecisionGlide Tek Kullanımlık İğneler: Düzenli Eğim - Düzenli Duvar.</td><td>BD</td><td>B305106</td><td>PrecisionGlide yarı saydam, renk kodlu, polipropilen göbekli paslanmaz çelik iğneler. 22 G</td></tr><tr><td>BD Precisionglide Şırınga İğnesi 21G</td><td>BD</td><td>305167</td><td>Ölçer 21, uzunluk 1,5 inç, hipodermik iğne</td></tr><tr><td>BD Precisionglide Şırınga İğnesi 30G</td><td>BD</td><td>305128</td><td>Ölçer 30, uzunluk 1 inç, hipodermik iğne</td></tr><tr><td>Purdue Products LP tarafından Betadine Çözümü</td><td>Purdue Ürünleri Lp</td><td>67618-150-17</td><td>%10 Povidon&ndash; iyot topikal çözeltisi USP</td></tr><tr><td>Bupivakain Enjeksiyonu BP% 0.5</td> <td>SteriMax Inc.</td><td>DIN:02443694</td><td>%0,5 (100mg/20mL)</td></tr><tr><td>Kavisli Bağlama Forsepsleri</td><td>Duckworth & Kent</td><td>2-501E</td><td>6mm bağlama platformları, düz miller, düz sap, uzunluk 88mm</td></tr><tr><td>DC Sıcaklık Kontrol Cihazı</td><td>FHC Inc.</td><td>40-90-8D</td><td></td></tr><tr><td>DK İris Makas (Kavisli)</td><td>Duckworth & Kent</td><td>1-211B</td><td>Künt uçlar, kesim uzunluğu 4 mm, uçtan pivota uzunluk 11 mm, yuvarlak sap, uzunluk 107 mm</td></tr><tr><td>Etanol, 200 kanıt (%100), USP, Decon</td><td>Labs Decon Labs, Inc.</td><td>2716</td><td>d2H2O İnce Ayarlanabilir Tel Toplayıcı ile %70'e seyreltin</td></tr><tr><td></td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>17004-05</td><td>Maksimum yayılma: 3,5 cm, Derinlik 5 cm</td></tr><tr><td>Harvard Aparatı İzofluran Huni Doldurma Buharlaştırıcı</td><td>Harvard Appartus Limited</td><td>34-1040SV</td><td></td></tr><tr><td>Heparin LEO (heparin sodyum)</td> <td>LEO Pharma Inc.</td><td>DIN:00453811</td><td>10.000 IU/10 mL</td></tr><tr><td>Ice-Pak</td><td>Cryopak</td><td>FIP88016</td><td>4,00 inç x 7,00 inç, kalınlık 1,50 inç</td></tr><tr><td>İzofluran Amerika Birleşik Devletleri Farmakopesi (USP) %99,9</td> <td>Piramal Sağlık Limited Şirketi</td><td>DIN: 02231929</td><td>250 mL, İnhalasyon Anestezik, NDC 66794-017-25</td></tr><tr><td>Khaw Transkonjonktival Ayarlanabilir Sütür Kontrol Forseps</td><td>Duckworth & Kent</td><td>2-502N</td><td>5mm son derece cilalı bağlama platformları, düz miller, düz sap, uzunluk 84mm</td></tr><tr><td>Laktat Ringer'ın Enjekte Edilmiş USP, 1000mL</td><td>Baxter Co.</td><td>DIN: 00061085</td><td>JB2324</td></tr><tr><td>McPherson Bağlama Forseps</td><td>Duckworth & Kent</td><td>2-500E</td><td>6mm bağlama platformları, düz miller, düz sap, uzunluk 90mm</td></tr><tr><td>Metzenbaum Makas - 14,5 cm</td><td>İnce Bilim Aletleri</td><td>14024-14</td><td>Düz Keskin/Küt</td></tr><tr><td>Mikro Kitzmiller Kelepçe</td><td>Scanlan</td><td>3003-630</td><td>Çene uzunluğu 23mm, Uzunluk 11cm</td></tr><tr><td>Mikroskop-Leica M525 F20</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>Katalog numarası yok</td></tr><tr><td>Dokumasız Gazlı Bez Süngerler</td><td>Fisherbrand</td><td>22-028-556</td><td></td></tr><tr><td>Olsen-Hegar Sütür Kesici</td><td>ile Güzel Bilim Araçları</td><td>12002-14</td><td>15 mm kesme kenarı, 2 mm çene yüzeyi - 14cm</td></tr><tr><td>OptixCare Göz Yağı, 25gm</td><td>OptixCare</td><td>ES-KE8O-69U1</td><td>Eski Adı Optixcare Cerrahi Göz Yağlayıcı</td></tr><tr><td>Piperasilin sodyum tuzu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8396</td><td>Penisilin analog</td></tr><tr><td>Püriten 3 "Standart Pamuklu Çubuklu Ahşap Saplı</td><td>Püriten Tıbbi Ürünler Şirketi LLC</td><td>803-WC</td><td>Ahşap Saplı Normal Pamuk Uçlu Aplikatör</td></tr><tr><td>Yuvarlak Saplı İğne Tutucu Düz w / Kilitli</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>12075-12</td><td>Yuvarlak tutamaklar kolay parmak ucu ayarlamalarına izin verir - 12.5cm</td></tr><tr><td>Shea Makas Kavisli Künt</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14105-12</td><td>Hafif ve narin desenli nakil makası - 12cm</td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik Mikro Serrefines Kavisli - 4mm</td><td>İnce Bilim Aletleri</td><td>18055-06</td><td>Çene uzunluğu 4mm, Çene genişliği 0.75mm, Toplam uzunluk 16mm, Çene basıncı 125g</td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik Mikro Serrefines Kavisli - 6mm</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>18055-05</td><td>Çene uzunluğu 6mm, Çene genişliği 1mm, Toplam uzunluk 17mm, Çene basıncı 100g</td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik Mikro Serrefines Düz - 6mm</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18055-03</td><td>Çene uzunluğu 6 mm, Çene genişliği 1 mm, Toplam uzunluk 15 mm, Çene basıncı 100g</td></tr><tr><td>Cerrahi Platform</td><td></td><td></td><td>Özel, manyetik</td></tr><tr><td>SurgiVet Vaporstick Anestezi Makinesi</td><td>Genel Anestezi Hizmetleri, Inc</td><td>V7015</td><td></td></tr><tr><td>T/Pompa Lokalize Tedavi</td><td>Stryker</td><td></td><td>TP700 Serisi</td></tr><tr><td>Vakum Basınç Pompası</td><td>Barnant Co.</td><td>400-1901</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Mikro Tırtıklı Makas Düz</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>15070-08</td><td>Kesme kenarı: 5mm, Uç çapı: 0,1 mm - 8,5 cm</td></tr><tr><td>Veterjezik Buprenorfin</td><td>Ceva Hayvan Sağlığı Ltd</td><td>NAC No.:12380352</td><td>Köpekler ve Kediler için Enjeksiyon için 0.324 mg / ml buprenorfin hidroklorür Çözeltisi</td></tr><tr><td>Vetroson V-10 Bipolar Elektrocerrahi Ünitesi</td><td>Summit Hill Laboratories</td><td></td><td>No katalog numarası</td></tr><tr><td>Cerrahi Örtü</td><td>PDC Healthcare</td><td>DRP1824</td><td>Çok amaçlı steril şeffaf plastik, 18" x 24", 40/kutu</td></tr></tbody></table>

ortotopik karaciğer transplantasyonunun sıçan modelinde arteriyel reconnection sonrası azaltılmış komplikasyonlar

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

Sıçan ortopik karaciğer transplantasyonu (OLT) modeli akut ve kronik ret çalışması için güçlü bir araçtır. Ancak, arteriyel yeniden bağlantı olmaması nedeniyle insan karaciğer nakli tam bir temsili değildir. Burada açıklanan hepatik arter dahil içeren değiştirilmiş bir transplantasyon prosedürü (HA) reconnection, transplantsonuçlarıbelirgin bir iyileşmeye yol açan. Ortalama anhepatik süresi 12 dakika ve 14 s ile, HA reconnection transplante karaciğer in daha iyi perfüzyon ve% 37.5 den% 88.2 uzun süreli alıcı sağkalım artışı ile sonuçlanır. Bu protokol portal ven ve infrahepatik inferior vena kava bağlamak için 3D baskılı manşet ve sahipleri kullanımını içerir. Karaciğer naklinin bağışıklık yanıtı ve enfeksiyondan prosedürün teknik yönlerine kadar birçok yönünü incelemek için uygulanabilir. Bir mikrovasküler teknik kullanarak arteriyel reconnection için basit ve pratik bir yöntem birleştirerek, bu değiştirilmiş sıçan OLT protokolü yakından insan karaciğer nakli yönlerini taklit ve değerli ve klinik olarak ilgili araştırma modeli olarak hizmet verecek.

Daha önce açıklanan protokol28kullanarak HA olmayan bir anastomoz sıçan OLT modeli oluştururken, ekibimiz operasyon sonrası sırasıyla 21 gün ve 60 günP ve 7,5 sağkalım oranları gözlemledi. HA anastomoz olmadan uzun süreli sağkalım yüksek oranları bazı gruplar tarafından bildirilmiştir rağmen28<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig1.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig1large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig2.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig2large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig3.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig3large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig4.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig4large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig5.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig5large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig6.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig6large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig7.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig7large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Supplementary Figure 1" src="/files/ftp_upload/60628/60628suppfig1.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628suppfig1large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Supplementary Figure 2" src="/files/ftp_upload/60628/60628suppfig2.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628suppfig2large.jpg" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary1.stl" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary2.stl" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary3.stl" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary4.stl" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary5.stl" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary6.stl" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary7.stl" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary8.stl" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary9.stl" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary10.stl" target="_blank"></a>

Bu çalışmanın amacı, sıçan ortotopik karaciğer nakli modelini insan karaciğer naklini daha iyi temsil edecek ve alıcı sağkalımını iyileştirmek için değiştirmektir. Sunulan yöntem alıcı karaciğeruygun karaciğer arter donör karaciğer ortak karaciğer arter bağlayarak hepatik arter girişini yeniden kurar.

Ortotopik Karaciğer Transplantasyonunun Sıçan Modelinde Arteriyel Reconnection Sonrası Azaltılmış Komplikasyonlar

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

Sıçan ortopik karaciğer transplantasyonu modeli karaciğer naklinin birçok yönünü incelemek için güçlü bir araçtır. Enfeksiyondaki bağışıklık yanıtından, prosedürün teknik yönlerine kadar. Bu tekniğin başlıca avantajları komplikasyonları azaltabilir, daha iyi comely karaciğer nakli temsil, ve alıcı sağkalım ını artırmak vardır.Bu modifiye sıçan ortotopik karaciğer nakli protokolü yakından insan karaciğer nakli yönlerini taklit eder ve değişken ve klinik olarak ilgili araştırma modeli olarak hizmet verecek. Umudumuz, görsel gösterim sayesinde izleyicilerin tüm detayları öğrenebiliyor ve bu teknik için gerekli olan mikrocerrahi becerisinde ustalaşmak için öğrenme eğrisini kısaltabilirler. Anestezik 12-14 haftalık bir sıçanın intrahepatik inferior vena kavasına 300 uluslararası ünite heparin sodyum enjekte ettikten sonra, safra kanalı bifurkasyonunun altında beş milimetrelik bir kesi yapın ve safra kanalını ortak safra kanalına yerleştirin.Stenti bir adet 7-0 ipek ligatür, kesiden bir milimetre yukarıda ve bifurkasyonun 10 milimetre altında bir bağ ile sabitleyin. İki bağ arasındaki safra kanalını kesin ve uygun hepatik arteri ortaya çıkar. Gastroduodenal arteri iki 7-0 ipek ligatürler arasında bölün ve sol gastrik arter, dalak arter ve çölyak gövdeortaya.Sonra sol gastrik arter kesti, dalak arter, ve arter bağları arasında çölyak gövde. 21,5 gauge iğneile donatılmış 20 mililitrelik şırınga kullanarak portal damarA 20 mililitre lik dört santigrat derecelik Ringer'ın laktat çözeltisini yavaşça enjekte edin. Donör karaciğer hazırlamak için, çölyak gövde bifurkasyon açık kesmek, dalak arter ve daha büyük bir arterkol manşet oluşturmak için sol gastrik arter ve eklemek 1.5 milimetre uzunluğunda 24 gauge arteriyel stent manşet yoluyla donör ortak hepatik arter içine.Sonra stenti 8-0 ile sabitle. polipropilen ligatür ve Ringer laktat çözeltisi ile stent floş. 12-14 haftalık bir fare alıcısının portal damarını ortaya çıkardıktan sonra, alıcı safra kanalını tiler bifurkasyonun 0,5 santimetre altına bölün ve distal ortak safra kanalına safra kanalı stenti yerleştirin. Sol maruz, orta, ve sağ hepatik arterler ve hepatik arter çatallanma damarları distal kravat.Bağları üzerinde karaciğere yakın arterler kesin ve süper hepatik inferior vena kava arkasında gazlı bez uzun ince bir parça yerleştirin. İntrahepatik vena kavanın arkasına 3D baskılı intrahepatik vena kava tutucu yerleştirin ve 3B baskılı sapın uçlarını birlikte dikmek için Tenno emilemez monofilament sütür kullanın. Gevşek intrahepatik vena kava ve portal ven arasında 3D baskılı tutucu altında 7-0 ipek ligature kravat ve 3D baskılı kava tutucu altında sağ renal ven hemen üzerinde intrahepatik vena kava kelepçe.Portal damarı pilorik venin hemen üstünde ve 3D baskılı PV tutucunun altına kelepçeleyin. 27 gauge iğne bağlı üç mililitreşyon şırınga kullanarak, portal ven çatallanma yoluyla 37 santigrat derece Ringer's laktat çözeltisi iki mililitre floş, ve bir Kitzmiller kelepçe ile karaciğer üzerinde süper hepatik vena kava kelepçe. Sonra mümkün olduğunca karaciğeryakın kıskaç altında kesilmiş ve alıcı karaciğer kaldırmak için portal ven ve inter hepatik vena kava hem de 3D baskılı sahipleri üzerinde kesti.Donör karaciğer nakli için, dikkatli bir üst arnavut kaldırımanomoz oluşturulabilir şekilde alıcının vücut boşluğu içinde donör karaciğer yönlendirmek. Alıcı portal ven içine donör portal ven manşet yerleştirin ve 7-0 ipek kravat sıkın. Süper hepatik vena kavadan atravmatik kelepçeyi çıkarın ve portal ven için mikrovasküler klipsi çıkarın.Karaciğeri sıcak kanla tekrar perfüzyonla dıktan sonra, donör intrahepatik vena kava manşetini alıcı intrahepatik vena kavaiçine takın ve damarı 7-0 ipek kravatla sabitle. Ardından alıcı klibini çıkarmadan önce donör intrahepatik vena kava klibini çıkarın. Bir arteriyel anastomoz gerçekleştirmek için, stent ötesine uzanan donör çölyak gövde kısmını kesti, ve alıcının uygun hepatik arter kelepçe.Sonunda kravat ve damar çevreleyen herhangi bir ekstra doku kesin. Ve hem donör hem de alıcı damar uçlarının lümenlerini yıkamak için Ringer'ın laktat çözeltisini kullanın. Kavisli bir iğne kullanarak, donör hepatik arterin sol kısmından 10-0 ethilon sütür yerleştirin, stentdistal orifisin 2.5 milimetre üzerinde, ve stentin sonuna kadar.Alıcıyı uygun hepatik arteri damarın sol tarafından, arterin sağ tarafına doğru 0.5 milimetre aşağıda niçin transfix. Donör hepatik arterin sağ duvarından bir sonraki sütüye içeriden dışarıya, orijinal dikişle aynı stent orisinden uzak bir mesafede yerleştirin ve alıcıyı düzgün hepatik arteri yukarı ve hepatik arter stentiniçine atmak için 10-0 emilmeyen monofilamentin iki ucunu yukarı çekin. Sonra donör hepatik arter üzerinde kendisi ile 10-0 emilir monofilament kravat.Hem alıcıyı hem de donör safra kanallarını temizle ve donör safra kanallarını alıcı safra kanalına stent takın. Daha sonra alıcı safra kanalı etrafında yerleştirilen kravat sıkın. Bu temsili deneyde, non hepatik arter anastomoz sıçan ortotopik karaciğer nakli modeli, sırasıyla 21 gün ve 60 gün, 50 ve 37.5% sağkalım oranları gösterdi.Buna karşılık, optimize karaciğer arter reconnection prosedürü önemli ölçüde uzun vadeli sağkalım arttı. Hepatik arter rebağlantısı olmayan nakledilen hayvanların temsili bir alt kümesinin histolojik analizi, nakil sonrası altıncı ve on üç gün, santral lobüler nekroz lu hipoksik karaciğer hasarı belirtileri ni saptadı. Geniş karaciğer nekrozu bu hayvanlarda alanin immüno transfereler ve aspartat amino transferaz derece yüksek düzeyleri ile ilişkili ydi.Buna karşılık, hepatik arter rebağlantısı olan nakledilen sıçanlarda karaciğer hasarı belirtisi saptanmadı ve histolojik analizlerde organize acini, lobules, arterler ve safra kanalları ile normal karaciğer parankim yapısı saptandı. Buna ek olarak, non hepatik arter reconnection model sıçanlardan karaciğerhistolojik analizi hipoksik karaciğer hasarı sonrası reaktif değişiklikler ortaya. Pazar safra yolu proliferasyonu dahil, peri portal fibrozis ve inflamasyon, ve bozulmuş karaciğer parankim.Bu protokol karaciğer transplantasyonunun birçok immünolojik ve cerrahi yönünü incelemek üzere uyarlanabilir ve transplantasyonla ilgili yeni terapötik müdahalelerin test edilmesinde bir model olarak hizmet verebilir.

reduced-complications-after-arterial-reconnection-rat-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Burada altın standart olarak görünüyor ortotopik sıçan arka ekstremite nakli prosedürü...

Sıçanlarda Ortotopik Hind-Ekstremite Nakli

Biz sıçan kadavradan karaciğer nakli için klasik iki manşet tekniğinin kolay bir tesis revizyonu sunuyoruz.

Sıçanlarda Ortotopik Karaciğer Nakli

Sıçanlarda transplantasyon'a biyomedikal araştırmalar için vazgeçilmez bir deneysel model. Burada% 50 parsiyel greft kullanılarak hepatik arter rekonstrüksiyonu ile ortotopik sıçan karaciğer nakli için cerrahi işlemler sunuyoruz.

Hepatik Arter İmar Kısmi Ortotopik Karaciğer Nakli Bir Rat Modeli Cerrahi İşlemleri

Yardımcı karaciğer nakli başarısız karaciğer rejenerasyonu kadar, akut karaciğer yetmezliğinde geçici bir destek sağlar. Portal ven ve arteri (PVA) ile heterotopik yardımcı karaciğer transplantasyonu (HALT) yeterli karaciğer fonksiyon oluşturur. Biz greft morfolojisi ve fonksiyonu üzerinde portal ven arteriali etkisini incelemek için, sıçan benzer bir tekniği geliştirdi.

Heterotopik Yardımcı Sıçan Karaciğer Nakli ile Akut Karaciğer Yetmezliği Portal Ven arteriali Akış ayarlı

Burada, yeniden arterialized sıçan kısmi karaciğer nakli ile ilgili bir protokol sunulmuştur. Özellikle, % 70 karaciğer rezeke vivo içinde gemi odaklı hepatectomy Güncellenme Zamanı bir tekniğin kullanmaktı. Hepatik arter bir uç-yan şekilde yeniden. Manşet tekniği infrahepatic vena cava anastomoz süresini kısaltmak için güncellenmiştir.

Yeniden Arterialized sıçan kısmi karaciğer nakli bir vivo içinde gemi odaklı % 70 ile Hepatectomy

Suprahepatic vena kava (SHVC) yeniden inşası sıçan orthotopic karaciğer nakli zor bir adım kalır. Bu makalede, bir roman manyetik anastomoz tekniği kullanarak Sıçanlarda SHVC yeniden inşası için adım adım bir protokol gösteriyoruz.

Orthotopic fare modeli bir roman manyetik anastomoz teknik Suprahepatic Vena kava imar için kullanılarak karaciğer nakli

Bu makale, karaciğer naklinden sonra iskemi-reperfüzyon hasarı ile ilgili temel araştırmaları kolaylaştırmak için sıçanlarda anhepatik fazın (karaciğer iskemisi) bir hayvan modelinin nasıl inşaılacağına dair ayrıntılı bir açıklama sunmaktadır.

Sıçan Karaciğer Nakli Modelinde Hemodinamik Değişiklikleri Simüle Ederek Organ İskemi-Reperfüzyon Yaralanması

Bu protokolde, engraftman sırasında veno-venöz bypass kullanılmadan donör organların 20 saat boyunca statik soğuk depolanmasından sonra domuz ortopik karaciğer transplantasyonu modeli tanımlanmıştır. Bu yaklaşım, anhepatik fazın en aza indirilmesi ve sofistike hacim ve vazopresör yönetimi ile basitleştirilmiş bir cerrahi teknik kullanmaktadır.

Veno-Venöz Bypass Olmadan Domuz Karaciğeri Transplantasyonu Genişletilmiş Kriterli Donör Modeli Olarak

Bu protokol, fare ortotopik karaciğer transplantasyonunda manşet tekniği kullanılarak damar rekonstrüksiyonu için teknik bilgi sağlar.

Fare Ortotopik Karaciğer Transplantasyonunda Cuff Tekniği ile Vasküler Rekonstrüksiyon

Bu video sıçanlarda nakli vaskülopati (TVP) gelişimini incelemek için basit bir model olarak spontan aort nakli modeli göstermektedir.

Ortotopik Aort Nakli: Rat Modeli Kronik Vaskülopati Geliştirme Çalışması

Öğrenin, sıçanlarda ortotopik karaciğer transplantasyonunda arteriyel reconnection tekniğiyle komplikasyonları azaltma ve sağkalım oranlarını artırma yöntemlerini. Bu protokol insan karaciğer nakline benzer şekilde geliştirilmiştir.

Ortotopik Karaciğer Transplantasyonunun Sıçan Modelinde Arteriyel Reconnection Sonrası Azaltılmış Komplikasyonlar

Daha fazla video keşfet