Name: Dorsal Subkutan Polivinil Alkol Sünger İmplantasyonu ve Eksizyonal Kuyruk Deri Yara Modelleri kullanılarak Akut Yara İyileşmesinin Değerlendirilmesi. (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: Keşfedin akut yara iyileşmesini değerlendiren dorsal PVA sünger implantasyonu ve eksizyonal kuyruk derisi yara modellerini. Bu yöntemler sitokin kinetiği ve hücresel yanıtları farelerde incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Kevin Carlson Brown Üniversitesi Akış Sitometri ve Sıralama Tesisi danışma ve akış sitometri deneyleri ile yardım için teşekkür etmek istiyorum. Şekil 1B ve C'deki görüntüler BioRender ile oluşturulmuştur. Kayla Lee ve Gregory Serpa fotoğrafyardım için teşekkür edilir. Bu çalışma aşağıdaki hibeler tarafından desteklenmiştir: Savunma İleri Araştırma Projeleri Ajansı (DARPA) YFAA15 D15AP00100, Yeni Gelişen Yeni Bilim Ödülü Dekan Alanları (Brown Üniversitesi), Ulusal Kalp Akciğer ve Kan Enstitüsü (NHLBI) 1R01HL126887-01A1, Ulusal Çevre Bilimleri Enstitüsü (NIES) T32-ES7272 (Çevre Patolojisi Eğitimi) ve Brown Üniversitesi Araştırma Tohum Ödülü.

Burada açıklanan tüm hayvan çalışmaları Brown Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmış ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Hayvanların Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu uyarınca yürütülmüştür.  NOT: Videoda, cerrahi örtü gösteri amacıyla atlanmıştır.
1. PVA süngerlerinin deri altı implantasyonu
<ol><li>8 mm x 8 mm x 4 mm adet PVA sünger levhakesmek için makas kullanın. PVA sünger parçalarını steril 1x PBS'ye batırarak bir kabın içinde yeniden sulayın.</li>
	<li>Otoklav 1x PBS içinde sünger sterilize etmek ve tamamen serin. Otoklavlı süngerleri steril 1x PBS'de 4 °C'de saklayın.</li>
	<li>Cerrahi implantasyon gerçekleştirmeden önce, laminar akış kaputunda steril koşullar altında steril bir kültür çanağı içine gerekli sayıda sünger aliquot. Ekstra süngerleri steril 1x PBS'de 4 °C'de saklayın. Rehidrasyondan sonra süngerlerin 1 cm x 1 cm x 0,5 cm'ye kadar şişmesini sağlayın. Susuz PVA süngerlerin bir görüntüsü Şekil 1A'dagösterilmiştir. NOT: PVA sünger implantasyon prosedürü, cerrahi alanın sterilitesini korumak için fareyi tek bir kişinin, ikinci bir kişinin ise implantasyon unu gerçekleştirmesini gerektirir.</li>
	<li>80 mg/kg ketamin intraperitoneal enjeksiyon ile 8-12 haftalık erkek C57BL/6J fare anestezi. Analjezi için 40 mg/kg ksilazin intraperitoneal olarak uygulayın.  Bir pedal refleks kaybı ile anestezi derinliğini onaylayın. Makas ile dorsum boyunca saç kaldırarak cerrahi site hazırlayın. Steril gazlı bez kullanarak, tıraş bölgesi2x povidon-iyot çözeltisi uygulayın, ardından% 70 etanol.</li>
	<li>Fareyi steril cerrahi perdelerüzerine yerleştirin. Farenin çekirdek sıcaklığını korumak için cerrahi perdelerin altına ısıtılmış bir ped yerleştirin.</li>
	<li>Ameliyatı gerçekleştirmek için steril cerrahi eldiven giyin. Dizal derisini forceps ile altta yatan dokudan çekin ve steril cerrahi makas kullanarak, kuyruk tabanına yaklaşık 2 cm ön dorsal orta hat boyunca 2 cm'lik bir kesi yapın. Kesisteril forsepslerle açık tutarken, Şekil 1B'debelirtilen pozisyonlardan birinde dorsum boyunca deri altı bir cep oluşturmak için steril kavisli, künt uçlu cerrahi makas kullanın.</li>
	<li>Altta yatan doku dan deri kaldırmak için forseps kullanmaya devam edin. Steril cerrahi makas kullanarak, aşırı PBS kaldırmak için kültür çanak hafifçe bir PVA sünger sıkmak. PVA süngerini steril cerrahi makas kullanarak bir köşeden toplayıp, makasın elindeki köşeyi koyarak süngeri 1.4 adımda oluşan deri altı cebine yerleştirin.</li>
	<li>Şekil 1B'degösterildiği gibi deri altı ceplere toplam altı sünger yerleştirerek bu işlemi 5kat tekrarlayın.</li>
	<li>İncinmiş sırt derisini steril ençelerle birlikte çimdiklayın ve kesiyi iki paslanmaz çelik yara klipsi ile kapatın.</li>
	<li>Her fare için steril cerrahi aletler yeni bir dizi kullanın. Alternatif olarak, fareler arasında aletleri sterilize etmek için bir boncuk sterilizatör kullanın.</li>
</ol>2. PVA süngerlerden sıvıların izolasyonu
<ol><li>Akut yara sitokin ortamını değerlendirmek için, süngerleri 1-14 gün postimplantasyon arasında izole edin.</li>
	<li>5 mL'lik şırınganın namlularını 16 mL'lik bir kültür tüpüne sokarak sıvı toplama tüpü hazırlayın.</li>
	<li>Bir fareyi implante edilmiş PVA süngerleri ile CO2 boğulma sıyrık ve ardından servikal çıkış ile ötenazi.</li>
	<li>Cerrahi zımba çıkarın ve dişli forceps ile kesi açın. Dorsal orta hat boyunca kesi uzatmak için makas kullanın.</li>
	<li>Forceps kullanarak, deri altı cebinden bir sünger ayıklayın ve hazırlanan şırınga varil aktarın, sünger basıncı en aza indirmek için dikkatli olmak. Süngerin yüzeyine yapışılmış kalan bağ dokusunu ayırın. Gerekirse süngeri çevredeki dokudan incelemek için makas kullanın. Kalan süngerlerle sünger kaldırma işlemini tekrarlayın. Süngerleri içeren tüpü buzüzerine yerleştirin.</li>
	<li>Yara sıvısını izole etmek için, 5 mL şırınga içeren kültür tüpünü 10 dk boyunca 700 x g'de süngerlerle santrifüj edin.</li>
	<li>Santrifüjden sonra şırıngayı ve süngerleri atın. Yara sıvısı 16 mL kültür tüpünde toplanmış olacak. Şekil 1D'debir günde 7 yaradan toplanan sıvının temsili bir görüntüsü gösterilmiştir. Yara sıvısını -80 °C'de uzun süreli depolamaiçin temiz bir tüpe aktarın.</li>
</ol>3. PVA süngerlerden hücrelerin izolasyonu
<ol><li>Akut yara iyileştirici hücresel ortamı değerlendirmek için sünger sonrası 1-14 gün arasında sünger toplayın. İmplantasyondan 7 gün sonra yaradan elde edilen süngerler Şekil 1E'degösterilmiştir.</li>
	<li>%1 FBS, %1 HEPES ve %1 penisilin-streptomisin ile desteklenen 1x HBSS (+kalsiyum/+magnezyum/-fenol kırmızısı) içeren toplama ortamı hazırlayın.</li>
	<li>Aliquot 5 mL HBSS toplama ortamı 15 mL konik tüp içine.</li>
	<li>2.2-2.4'te açıklandığı gibi PVA süngerlerini ötenazili farelerden ayıklayın. Süngerleri 5 mL HBSS toplama ortamı içeren konik tüpe yerleştirin.</li>
	<li>Süngerleri ve HBSS toplama ortamını dökerek 80 mL'lik bir blender torbasına aktarın. Raketblender ambarından blender çanta asmak, kürekler sünger ve medya grev şekilde konumlandırılmış. Raket blender ayarlarını 60 s. Basın başlatmak için yüksek çalıştırmak için ayarlayın.</li>
	<li>Ortamı blender torbasından pipetli 15 mL konik boruya aktarın ve süngerleri çantada bırakabilirsiniz. Iyice medya serbest bırakmak için sünger sıkmak. Raket blender ayarlarını yüksek 30 s çalıştırmak için ayarlayın. Blender torbasına 5 mL ortam ekleyin ve toplam üç sünger yıkar için mide işlemini 2 x tekrarlayın.</li>
	<li>Konik tüpü 5 dk için 250 x g'da santrifüj edin. Santrifüjden sonra konik tüpün alt kısmında kırmızı bir hücre ve kırmızı kan hücresi görünür olacaktır.</li>
	<li>Supernatant atın ve kırmızı kan hücresi lysis gerçekleştirmek: hücre pelet ve pipet karıştırmak için 900 μL dH2O ekleyin. 100 μL 10x PBS ile nötralize edin. Lysis'i tamamen nötralize etmek için tüpe 4 mL 1x PBS ekleyin, ardından 5 dk boyunca 250 x g'da santrifüj edin. NOT: Lysis adımı kısa olmalıdır; 3-5 s'den fazla hücrelerle temas halinde su bırakarak kırmızı olmayan kan hücrelerinin lysis neden olabilir.</li>
	<li>Santrifüjden sonra konik tüpün alt kısmında kırmızı kan hücrelerinden yoksun yara hücreleri içeren beyaz bir hücre peleti bulunacaktır. Supernatant atın ve aşağı analizler için istenilen ortamda hücre pelet resuspend.</li>
</ol>4. PVA sünger yaralarından izole edilen doğuştan gelen lökositlerin isteğe bağlı akış sitometri analizi
<ol><li>10 μg/mL anti-CD16/CD32 FcRγII/III antikor içeren 2x blokaj lı antikor çözeltisinin 25 μL'lik 25 l'lik 25l'lik halinde 0.5-1 x 106 yara hücresini yeniden askıya alın ve 1x PBS + %1 BSA ile seyreltildi. NOT: Akış sitometrisi analizi için en uygun konsantrasyonları belirlemek için tüm antikorlar titre edilmelidir.</li>
	<li>Hücreleri 10 dakika boyunca buz üzerinde bloke antikor ile kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>PerCP-eFluor710-Ly6G 2.5 mg/mL, FITC-Ly6C 5 mg/mL, APC-Fire750-CD45.2, APC-R700-Siglec-F ve 10 mg/mL eFluor660-F4-80 içeren antikorların 2x ana karışımını yapın . Doğrudan bloke antikor inkübün hücrelere antikor kokteyl 25 μL ekleyin.</li>
	<li>Hücrelerden 20 dakika boyunca ışıktan korunan buz üzerinde kuluçkaya yat.</li>
	<li>Hücreleri 1x PBS ile 2x yıkayın.</li>
	<li>Amin-reaktif fikse edilebilirlik boya-eFluor506 1x PBS 1:1.000 seyreltilmiş bir ana karışımı olun. Canlıboya çözeltisinin 50 μL'lik hücre peletini yeniden askıya alın. NOT: Serum, boyanın endojen proteinlere bağlanmasını önleyeceği için düzeltilebilir canlılık adımının dışında tutulmalıdır. Hücrelerden 20 dakika boyunca ışıktan korunan buz üzerinde kuluçkaya yat.</li>
	<li>Hücreleri 1x PBS ile 2x yıkayın. Hücre peletini %1 paraformaldehit 50 μL'de yeniden askıya alın.</li>
	<li>Hücrelere ışıktan korunan 15 dakika boyunca %1 paraformaldehit ile buz üzerinde kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>Hücreleri 1x 1x PBS ile yıkayın ve akış sitometrik analizi için 1x PBS pelet resuspend.</li>
</ol>5. Kuyruk deri eksizyonu
<ol><li>8-12 haftalık erkek C57BL/6J fareyi 80 mg/kg ketamin intraperitoneal enjeksiyon la anestelet. Analjezi için 40 mg/kg ksilazin intraperitoneal olarak uygulayın. Bir pedal refleks kaybı ile anestezi derinliğini onaylayın.</li>
	<li>Povidon-iyot solüsyonu 2x uygulamak için steril gazlı bez kullanarak anestezili farenin kuyruğundaki cerrahi bölgeyi hazırlayın ve ardından %70 etanol uygulayın.</li>
	<li>Kuyruğun sırt yüzeyinde 10 mm x 3 mm'lik bir kesit tanımlayın, kuyruğun tabanından 10 mm(Şekil 1C)önceden yapılmış bir şablondan iz sürmek için kalıcı bir işaretleyici kullanarak.</li>
	<li>Steril cerrahi perdeler üzerine anestezili fare yerleştirin.</li>
	<li>Cerrahi prosedürleri gerçekleştirmek için steril cerrahi eldiven giyin. Steril bir neşter bıçak ile, yara alanının sağ, alt ve sol kenarları boyunca tam kalınlıkta kesi yapın.</li>
	<li>Steril çöförler kullanarak, kuyruk uzak excised deri soyma ve yara alanının üst kenarı kesmek için steril cerrahi makas kullanın.</li>
	<li>Kanamayı durdurmak için steril gazlı bez ile basınç uygulayın.</li>
	<li>Yara yatağına bir sprey bariyer filmi uygulayın.</li>
	<li>Yaraları düzenli zaman aralıklarında sabit bir mesafeden fotoğrafla. Yara alanı ölçümlerini belirlemek için fotoğrafları planimetrik analiz ile analiz edin. Alternatif olarak, yara uzunluğu ve genişlik ölçümleri elde etmek için kaliperkullanın.</li>
</ol>

<ol><li>Gottrup, F., Agren, M. S., Karlsmark, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+for+use+in+wound+healing+research%3A+a+survey+focusing+on+in+vitro+and+in+vivo+adult+soft+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%3A+Official+Publication+of+the+Wound+Healing+Society+%5Band%5D+the+European+Tissue+Repair+Society%22%5BJournal%5D)">Models for use in wound healing research: a survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 8 (2), 83-96 (2000).</li>
<li>Elliot, S., Wikramanayake, T. C., Jozic, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Modeling+Conundrum%3A+Murine+for+Cutaneous+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">A Modeling Conundrum: Murine for Cutaneous Wound Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 736-740 (2018).</li>
<li>Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%3A+Mechanisms%2C+signaling%2C+and+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration: Mechanisms, signaling, and translation.</a> Science Translational Medicine. 6 (265), (2014).</li>
<li>Huber-Lang, M., Lambris, J. D., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immune+responses+to+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Innate immune responses to trauma.</a> Nature Immunology. 19 (4), 327-341 (2018).</li>
<li>Novak, M. L., Koh, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+Transitions+of+Macrophages+Orchestrate+Tissue+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Phenotypic Transitions of Macrophages Orchestrate Tissue Repair.</a> The American Journal of Pathology. 183 (5), 1352-1363 (2013).</li>
<li>Martins-Green, M., Petreaca, M., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines+and+Their+Receptors+Are+Key+Players+in+the+Orchestra+That+Regulates+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Wound+Care%22%5BJournal%5D)">Chemokines and Their Receptors Are Key Players in the Orchestra That Regulates Wound Healing.</a> Advances in Wound Care. 2 (7), 327-347 (2013).</li>
<li>Guerrero-Juarez, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+reveals+fibroblast+heterogeneity+and+myeloid-derived+adipocyte+progenitors+in+murine+skin+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis reveals fibroblast heterogeneity and myeloid-derived adipocyte progenitors in murine skin wounds.</a> Nature Communications. 10 (1), 650(2019).</li>
<li>Shook, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofibroblast+proliferation+and+heterogeneity+are+supported+by+macrophages+during+skin+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Myofibroblast proliferation and heterogeneity are supported by macrophages during skin repair.</a> Science. 362 (6417), 2971(2018).</li>
<li>Davidson, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+wound+repair%2C+cell+proliferation%2C+and+collagen+accumulation+are+produced+by+a+cartilage-derived+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Accelerated wound repair, cell proliferation, and collagen accumulation are produced by a cartilage-derived growth factor.</a> The Journal of Cell Biology. 100 (4), 1219-1227 (1985).</li>
<li>Buckley, A., Davidson, J. M., Kamerath, C. D., Wolt, T. B., Woodward, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+release+of+epidermal+growth+factor+accelerates+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Sustained release of epidermal growth factor accelerates wound repair.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 82 (21), 7340-7344 (1985).</li>
<li>Peterson, J. M., Barbul, A., Breslin, R. J., Wasserkrug, H. L., Efron, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+T-lymphocytes+in+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Significance of T-lymphocytes in wound healing.</a> Surgery. 102 (2), 300-305 (1987).</li>
<li>Efron, J. E., Frankel, H. L., Lazarou, S. A., Wasserkrug, H. L., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+and+T-lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Wound healing and T-lymphocytes.</a> Journal of Surgical Research. 48 (5), 460-463 (1990).</li>
<li>Schäffer, M. R., Tantry, U., Thornton, F. J., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+nitric+oxide+synthesis+in+wounds%3A+pharmacology+and+effect+on+accumulation+of+collagen+in+wounds+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Journal+of+Surgery+%3D+Acta+Chirurgica%22%5BJournal%5D)">Inhibition of nitric oxide synthesis in wounds: pharmacology and effect on accumulation of collagen in wounds in mice.</a> The European Journal of Surgery = Acta Chirurgica. 165 (3), 262-267 (1999).</li>
<li>Opalenik, S. R., Davidson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+differentiation+of+bone+marrow-derived+cells+during+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%3A+Official+Publication+of+the+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Fibroblast differentiation of bone marrow-derived cells during wound repair.</a> FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 19 (11), 1561-1563 (2005).</li>
<li>Järveläinen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+decorin+in+cutaneous+wound+healing+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%3A+Official+Publication+of+the+Wound+Healing+Society+%5Band%5D+the+European+Tissue+Repair+Society%22%5BJournal%5D)">A role for decorin in cutaneous wound healing and angiogenesis.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 14 (4), 443-452 (2006).</li>
<li>Luckett, L. R., Gallucci, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-6+%28IL-6%29+modulates+migration+and+matrix+metalloproteinase+function+in+dermal+fibroblasts+from+IL-6KO+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+British+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Interleukin-6 (IL-6) modulates migration and matrix metalloproteinase function in dermal fibroblasts from IL-6KO mice.</a> The British Journal of Dermatology. 156 (6), 1163-1171 (2007).</li>
<li>Daniel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+the+postburn+wound+inflammatory+response+by+gammadelta+T-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Regulation of the postburn wound inflammatory response by gammadelta T-cells.</a> Shock. 28 (3), 278-283 (2007).</li>
<li>MacLauchlan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+fusion%2C+giant+cell+formation%2C+and+the+foreign+body+response+require+matrix+metalloproteinase+9%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Macrophage fusion, giant cell formation, and the foreign body response require matrix metalloproteinase 9.</a> Journal of Leukocyte Biology. 85 (4), 617-626 (2009).</li>
<li>Schwacha, M. G., Thobe, B. M., Daniel, T., Hubbard, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+thermal+injury+on+wound+infiltration+and+the+dermal+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Impact of thermal injury on wound infiltration and the dermal inflammatory response.</a> Journal of Surgical Research. 158 (1), 112-120 (2010).</li>
<li>Ganesh, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostaglandin+E2+Induces+Oncostatin+M+Expression+in+Human+Chronic+Wound+Macrophages+through+Axl+Receptor+Tyrosine+Kinase+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Prostaglandin E2 Induces Oncostatin M Expression in Human Chronic Wound Macrophages through Axl Receptor Tyrosine Kinase Pathway.</a> The Journal of Immunology. 189 (5), 2563-2573 (2012).</li>
<li>Deskins, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stromal+cells%3A+identifying+assays+to+predict+potency+for+therapeutic+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stromal cells: identifying assays to predict potency for therapeutic selection.</a> Stem Cells Translational Medicine. 2 (2), 151-158 (2013).</li>
<li>Daley, J. M., Brancato, S. K., Thomay, A. A., Reichner, J. S., Albina, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+phenotype+of+murine+wound+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">The phenotype of murine wound macrophages.</a> Journal of Leukocyte Biology. 87 (1), 59-67 (2010).</li>
<li>Thomay, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+Interleukin-1+Signaling+Improves+the+Quality+of+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Disruption of Interleukin-1 Signaling Improves the Quality of Wound Healing.</a> The American Journal of Pathology. 174 (6), 2129-2136 (2009).</li>
<li>Brancato, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+4+signaling+regulates+the+acute+local+inflammatory+response+to+injury+and+the+fibrosis%2Fneovascularization+of+sterile+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%3A+Official+Publication+of+the+Wound+Healing+Society+%5Band%5D+the+European+Tissue+Repair+Society%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor 4 signaling regulates the acute local inflammatory response to injury and the fibrosis/neovascularization of sterile wounds.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 21 (4), 624-633 (2013).</li>
<li>Daley, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+macrophage+phenotype+by+soluble+product%28s%29+released+from+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Modulation of macrophage phenotype by soluble product(s) released from neutrophils.</a> Journal of Immunology. 174 (4), 2265-2272 (2005).</li>
<li>Crane, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monocyte+to+macrophage+transition+in+the+murine+sterile+wound%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">The monocyte to macrophage transition in the murine sterile wound.</a> PloS One. 9 (1), 86660(2014).</li>
<li>Falanga, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Full-thickness+wounding+of+the+mouse+tail+as+a+model+for+delayed+wound+healing%3A+accelerated+wound+closure+in+Smad3+knock-out+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Full-thickness wounding of the mouse tail as a model for delayed wound healing: accelerated wound closure in Smad3 knock-out mice.</a> Wound Repair and Regeneration. 12 (3), 320-326 (2004).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+underlying+skeletal+growth+arrest+by+cutaneous+scarring%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms underlying skeletal growth arrest by cutaneous scarring.</a> Bone. 66, 223-231 (2014).</li>
<li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Model+for+Cutaneous+Wound+Healing+and+Scarring+in+the+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">A Novel Model for Cutaneous Wound Healing and Scarring in the Rat.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 143 (2), 468-477 (2019).</li>
<li>Crane, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+influenza+A+virus+infection+leads+to+suppression+of+the+innate+immune+response+to+dermal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Pulmonary influenza A virus infection leads to suppression of the innate immune response to dermal injury.</a> PLOS Pathogens. 14 (8), 1007212(2018).</li>
<li>Grada, A., Mervis, J., Falanga, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+Techniques+Made+Simple%3A+Animal+Models+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Research Techniques Made Simple: Animal Models Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (10), 2095-2105 (2018).</li>
<li>Rittié, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+of+skin+repair+in+humans+and+other+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Communication+and+Signaling%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms of skin repair in humans and other mammals.</a> Journal of Cell Communication and Signaling. 10 (2), 103-120 (2016).</li>
<li>Falanga, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+Bone+Marrow-Derived+Cultured+Mesenchymal+Stem+Cells+Delivered+in+a+Fibrin+Spray+Accelerate+Healing+in+Murine+and+Human+Cutaneous+Wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Autologous Bone Marrow-Derived Cultured Mesenchymal Stem Cells Delivered in a Fibrin Spray Accelerate Healing in Murine and Human Cutaneous Wounds.</a> Tissue Engineering. 13 (6), 1299-1312 (2007).</li>
<li>Lucas, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Roles+of+Macrophages+in+Diverse+Phases+of+Skin+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Differential Roles of Macrophages in Diverse Phases of Skin Repair.</a> The Journal of Immunology. 184 (7), 3964-3977 (2010).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+function+and+fate+of+neutrophils+in+sterile+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Visualizing the function and fate of neutrophils in sterile injury and repair.</a> Science. 358 (6359), 111-116 (2017).</li>
<li>Mirza, R. E., Koh, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contributions+of+cell+subsets+to+cytokine+production+during+normal+and+impaired+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Contributions of cell subsets to cytokine production during normal and impaired wound healing.</a> Cytokine. , 1-4 (2014).</li>
<li>Mirza, R., DiPietro, L. A., Koh, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+and+Specific+Macrophage+Ablation+Is+Detrimental+to+Wound+Healing+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Selective and Specific Macrophage Ablation Is Detrimental to Wound Healing in Mice.</a> The American Journal of Pathology. 175 (6), 2454-2462 (2010).</li>
<li>DiPietro, L. A., Burdick, M., Low, Q. E., Kunkel, S. L., Strieter, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MIP-1alpha+as+a+critical+macrophage+chemoattractant+in+murine+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">MIP-1alpha as a critical macrophage chemoattractant in murine wound repair.</a> Journal of Clinical Investigation. 101 (8), 1693-1698 (1998).</li>
<li>Wetzler, C., Kämpfer, H., Stallmeyer, B., Pfeilschifter, J., Frank, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large+and+Sustained+Induction+of+Chemokines+during+Impaired+Wound+Healing+in+the+Genetically+Diabetic+Mouse%3A+Prolonged+Persistence+of+Neutrophils+and+Macrophages+during+the+Late+Phase+of+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Large and Sustained Induction of Chemokines during Impaired Wound Healing in the Genetically Diabetic Mouse: Prolonged Persistence of Neutrophils and Macrophages during the Late Phase of Repair.</a> Journal of Investigative Dermatology. 115 (2), 245-253 (2000).</li>
<li>Kim, D. J., Mustoe, T., Clark, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutaneous+wound+healing+in+aging+small+mammals%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Cutaneous wound healing in aging small mammals: a systematic review.</a> Wound Repair and Regeneration. 23 (3), 318-339 (2015).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Bu makalede, akut yara iyileşmesi yanıtının değerlendirilmesini sağlayan iki çekilebilir murine yara modeli açıklanmaktadır. İlk yöntem dorsal deri altı alana PVA süngerlerin cerrahi implantasyonu içerir. Bu yaklaşım, izole süngerlerden elde edilen çok sayıda hücre ve yara sıvısı miktarı nedeniyle hücresel yara iyileşmesi yanıtını incelemek için biyopsi bazlı yara modellerine göre belirgin bir avantaj sağlar. Bu işlemin başarılı bir şekilde uygulanabı için, kesi çevresindeki deriyi iyice temizleyerek steril bir cerrahi a...

Yara iyileşme süreçlerini incelemek için birçok murine model sistemleri vardır, her biri belirli avantajları ve sınırlamaları sahip1,2. Aşağıdaki yöntemler, her biri yara iyileşmesi yanıtının belirli bir yönünü ele alan ve yaralanmaya yanıttaki tedirginliklerin neden ve etkisini belirlemek için kullanılabilen iki murine yara modeli sunar. Yara iyileşme süreci farklı evrelerde gerçekleşir. İlk aşama inflamatuardır, trombositlerin hızlı akını ile karakterize, nötrofiller, ve monositler / makrofajlar, yanı sıra proinflamatuar sitokinler ve kemokinler üretimi. İltihapın çözülmesinden sonra, profibrotik ve proanjiogenik sitokinlerin indüksiyonu ve büyüme faktörleri ile ortam daha iyi bir duruma geçmektedir. Granülasyon dokusu birikir ve neokaplar miyofibroblastlar, fibroblastlar, epitel hücreleri ve endotel hücrelerinin göçü ile oluşur. Son aşamalarda, geçici hücre dışı matriks remodeled ve yara oluşumu ve yara kapatma gelirleri2,3,4,5,6,7,8.
Hiçbir tek murine modeli yara iyileşmesi tüm aşamalarında çalışmak için bir sistem sağlar2. Burada iki cerrahi yara modeli tanımlanmıştır: biri akut hücresel ve sitokin yara iyileşme yanıtlarını açıklığa kavuştururken, diğeri yara kapanmasının değerlendirilmesinin yanı sıra histolojik analizlere de olanak sağlar. Bu iki yöntem, yara iyileşmesi yanıtının farklı yönleri üzerinde bir tedirginlik veya komorbiditenin etkilerini değerlendirmek için tamamlayıcı bir şekilde kullanılabilir. Polivinil alkol (PVA) süngerlerin dorsal deri altıimplantasyonu,hücresel ve granülasyon doku yanıtlarının çeşitli yönlerini açıklamak için yıllardır kemirgen modellerinde kullanılan bir sistemdir 9 ,10,11,12,,13,14,15,16,17,18,19,20 ,21,22,23,24. Bu yaklaşım sitokin açısından zengin yara sıvıları ve hücresel infiltrasyon ların alınmasını sağlar. Bu modelde, 1 cm x 1 cm x 0,5 cm PVA sünger parçaları posterior dorsal orta hatta yapılan 2 cm'lik bir kesi ile deri altı ceplere yerleştirilir. Kesi cerrahi klipslerle kapatılır ve süngerler hücre ve sıvı izolasyonu için daha sonraki zaman noktalarında alınabilir. İzole süngerlerin hücresel ve sitokin ortamı, yaklaşık 14 gün postimplantasyona kadar akut yara iyileşmesinin normal evrelerini yansıtır. Daha sonraki zaman noktalarında model granülasyon doku oluşumu ve yabancı cisim yanıtı1incelenmesi için daha avantajlıdır. Bu sistem ile fenotipik ve fonksiyonel tahliller ve RNA izolasyonu için ayrı bir avantaj sunan >106 hücreleri, diğer biyopsi tabanlı yöntemlerden hücreleri izole etme üzerinde1,22,2323,25,26izole etmek mümkündür.
Kuyruk derisi eksizyon modeli kullanılarak yara kapatma oranı belirlenir. Bu modelde, başlangıçta Falanga ve ark. tarafından açıklanan ve diğerleri tarafından bildirilen27,28,29,30, kuyruk derisinin 1 cm x 0.3 cm tam kalınlıkta bölümü kuyruk tabanına yakın kaldırılır. Yara alanı kolayca görselleştirilir ve zaman içinde ölçülebilir. Alternatif olarak, kuyruk dokusu histolojik analiz için izole edilebilir. Bu yaklaşım, köklü sırt yumruğu biyopsisi yöntemine alternatif olarak veya birlikte kullanılabilir. Bu iki model arasındaki birincil ayrımlar yara kapatma oranı, kürk varlığı veya yokluğu ve cilt yapısı2,31,32. Kuyruk deri yaraları, yara kapanmasını değerlendirmek için daha uzun bir zaman dilimi sunar, çünkü tam kapanmanın gerçekleşmesi yaklaşık 21 gün sürer. Bu çok daha hızlı iyileşmek için içler acıklı sırt yumruğu biyopsiler karşı, (~ 7-10 gün), öncelikle panniculus karnosus eylem nedeniyle kasılma ile. Splinted sırt yumruğu biyopsileri daha yavaş iyileşmek ve kontraktil iyileşme etkilerini azaltmak, ama kontraktil tabanlı mekanizmaları 1 kısıtlamak için yabancı bir cisim varlığı güveniyor1,2,27,,30,31,33.
Açıklanan yara modelleri, tedirginlik yokluğunda normal yara iyileşme süreçlerini anlamak için bilgilendiricidir. Kemirgen derisinin iyileşmesi gevşek yapısı, kontraktil iyileşmeye güven ve diğer anatomik farklılıklar da dahil olmak üzere insan derisinden çok önemli şekillerde farklılık gösterirken, minür sistemi mekanistik ve tarama çalışmaları için bazı avantajlar sunar. Bunların başında inbred suşları ve genetik mutantlar, genetik sistem ve düşük maliyet durumudur. Murine çalışmalarından elde edilen mekanistik içgörü, domuz sistemi2,31gibi insan deri iyileşmesini daha yakından taklit eden karmaşık hayvan modellerine çevrilebilir.
Sabit durumda yara iyileşmesi yanıtları incelenmesine ek olarak, bu modeller hücresel, sitokin ve brüt doku düzeyinde yara iyileşmesi kusurlarının temelini anlamak için komorbid koşulları ile kombine edilebilir. Bu iki model, ameliyat sonrası pnömoni gibi belirli bir komorbid durumun etkilerini değerlendirmek için birlikte kullanılabilir bu özel ayarı, hem akut hücresel yara iyileşme yanıtı ve yara kapatma oranı30.

<table><tbody><tr><td>10x Fosfat Tamponlu Tuzlu</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP3991</td><td></td></tr><tr><td>15 mL santrifüj tüpleri, Olympus</td><td>Genesee</td><td>28-103</td><td></td></tr><tr><td>1x HBSS (+Kalsiyum, +Magnezyum, vb.; Fenol Kırmızısı)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14025076</td><td></td></tr><tr><td>5ml Şırınga</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>Anti-fare CD45.2-APC Fire750</td><td>BioLegend</td><td>109852</td><td>Klon 104</td></tr><tr><td>Anti-fare F4/80-eFluor660</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>50-4801-82</td><td>Klon BM8</td></tr><tr><td>Anti-fare Ly6C-FITC</td><td>BD Biosciences</td><td>553104</td><td>Klon AL-21</td></tr><tr><td>Anti-fare Ly6G-PerCP-eFluor710</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>46-9668-82</td><td>Klon 1A8-Ly6g</td></tr><tr><td>Anti-fare Siglec-F-APC-R700</td><td>BD Biosciences</td><td>565183</td><td>Klonu E50-2440</td></tr><tr><td>Autoclip Paslanmaz Çelik Yara Klipsi Uygulayıcı</td><td>Braintree Scientific</td><td>NC9021392</td><td></td></tr><tr><td>Autoclip Paslanmaz Çelik Yara Klipsleri, 9mm</td><td>Braintree Scientific</td><td>NC9334081</td><td></td></tr><tr><td>Blender Çantası, 80 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14258201</td><td></td></tr><tr><td>Kültür Tüpü, 16 mL, 17x100</td><td>Genesee Scientific</td><td>21-130</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu - Standart</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>Sabitlenebilir Canlılık Boyası eFluor506</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>65-0866-14</td><td></td></tr><tr><td>Hepes Çözeltisi, 1M</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-534</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ Yazılımı</td><td>NIH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin (5000 U/mL)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>Polivinil alkol süngeri - geniş gözenek boyutu</td><td>Ivalon/PVA Unlimited</td><td></td><td>www.sponge-pva.com</td></tr><tr><td>Povidon-iyot çözeltisi, %10</td> <td>Fisher Scientific</td><td>3955-16</td><td></td></tr><tr><td>Sprey bariyer filmi, Cavilon</td><td>3M</td><td>3346E</td><td></td></tr><tr><td>Mide 80 Biomaster, 110V</td><td>Seward</td><td>0080/000/AJ</td><td></td></tr></tbody></table>

dorsal subkutan polivinil alkol sünger İmplantasyonu ve eksizyonal kuyruk deri yara modelleri kullanılarak akut yara İyileşmesinin değerlendirilmesi.

Assessment of Acute Wound Healing using the Dorsal Subcutaneous Polyvinyl Alcohol Sponge Implantation and Excisional Tail Skin Wound Models.

Yara iyileşmesi inflamasyon, granülasyon doku oluşumu, fibrozis ve çözünürlük düzenli ilerlemesini gerektiren karmaşık bir süreçtir. Murine modelleri bu süreçlere değerli mekanistik bilgiler sağlar; ancak, tek bir model tamamen yara iyileşme yanıtı tüm yönleriyle adresleri. Bunun yerine, yara iyileşmesi farklı yönlerini ele almak için birden fazla model kullanmak idealdir. Burada yara iyileşmesi yanıtının farklı yönlerini ele alan iki farklı yöntem tanımlanmıştır. İlk modelde polivinil alkol süngerleri fare dorsum boyunca deri altı implante edilir. Sünger alımının ardından hücreler mekanik bozulma ile izole edilebilir ve sıvılar santrifüj ile çıkarılabilir, böylece akut yara ortamında hücresel ve sitokin yanıtlarının ayrıntılı bir karakterizasyonuna olanak sağlar. Bu modelin bir sınırlama yara kapatma oranını değerlendirmek için yetersizlik tir. Bunun için kuyruk derisi eksizyonu modeli kullanılmaktadır. Bu modelde, kuyruk derisinin 10 mm x 3 mm dikdörtgen parçası, kuyruk tabanına yakın, sırt yüzeyi boyunca çıkar. Bu model kolayca iyileşme oranlarını belirlemek için planimetrik analiz için fotoğraflanabilir ve histolojik analiz için excised olabilir. Tanımlanan her iki yöntem de genetik olarak değiştirilmiş fare suşlarında veya yara iyileşme mekanizmalarını açıklamak için diyabet, yaşlanma veya sekonder enfeksiyon gibi komorbid durum modelleri ile birlikte kullanılabilir.

PVA sünger implantasyonu sonrası sistemik inflamatuar yanıt PVA sünger implantasyon cerrahisi, yaralanmadan 1 gün sonra plazmada IL-6 indüksiyonu ile gösterildiği gibi sistemik inflamatuar yanıt üretti(Şekil 2A). TNF-α ve IL-1β gibi diğer proinflamatuar sitokinlerin yanı sıra CCL2 ve CXCL1 dahil olmak üzere bir dizi kemokin ler pva sonrası ilk 7 gün içinde sistemsel olarak indüklenmiştir ve başka bir yerde26,30tan...

Burada, biri hücresel ve sitokin yara iyileştirici yanıtlarını değerlendirmek, diğeri ise yara kapatma oranını ölçmek için tasarlanmış iki murine yara iyileşmesi modeli tanımlanmıştır. Bu yöntemler, kötü yara iyileşmesiçeşitli yönlerini mekanizmaları belirlemek için diyabet gibi karmaşık hastalık modelleri ile kullanılabilir.

Dorsal Subkutan Polivinil Alkol Sünger İmplantasyonu ve Eksizyonal Kuyruk Deri Yara Modelleri kullanılarak Akut Yara İyileşmesinin Değerlendirilmesi.

Wound healing is a complex process that requires the orderly progression of inflammation, granulation tissue formation, fibrosis, and resolution. Murine ...

Bu modeller, hücresel ve sitokin kinetik ve yara kapanması da dahil olmak üzere yara iyileşmesi yanıtının çeşitli yönlerini değerlendirmek için uygulanabilir. PVA sünger modeli, fhenotipik ve fonksiyonel analizler için milyonlarca yara lökositinin kurtarılmasını sağlarken, kuyruk derisi eksizyonu modeli yavaş iyileşen yaraların kolayca görüntülenmesine olanak sağlar. PVA sünger ve eksizyonel kuyruk yarası modelleri, yara iyileşmesi üzerindeki etkilerini anlamak için diyabet veya pnömoni gibi komorbid durumlarla birlikte kullanılabilir.Meredith Crane'in prosedürlerini gösteren bill Henry olacak, laboratuvarımdan araştırma görevlisi. Deneye başlamadan önce, PVA sünger yapraklarını sekize sekiz x 4 milimetrelik parçalara kesmek için makas kullanın. Otoklav PBS sünger sterilize önce 10 dakika boyunca bir kabın steril PBS sünger parçaları rehydrate.Süngerler soğuyunca, pbs'ye batırılmış süngerleri dört santigrat derecede saklayın. İşlem günü, steril laminar akış kaputunda steril bir kültür çanağı içine deneysel hayvan başına altı sünger yerleştirin ve anestezik, sekiz ila 12 haftalık, erkek, C57-Siyah/6 fare ayak ucutu tepki eksikliği ni onaylayın. Bir asistan dorsum ve steril gazlı bez boyunca iki kez, tek bir% 70 etanol uygulaması takip povidon-iyot çözeltisi uygulamak için saç kaldırmak için makas kullanın.Asistan daha sonra fareyi ısıtmalı bir ped üzerine yerleştirilen steril cerrahi perdeler üzerine aktarmalıdır. Steril eldiven ler giyerek, sırt derisini altta yatan dokudan uzaklaştırmak için terlik kullanın ve dorsal orta hat boyunca kuyruk tabanına yaklaşık iki santimetre ön lükte iki santimetrelik bir kesi yapmak için steril cerrahi makas kullanın. Kesiyi steril forsepslerle açık tutarak steril, kavisli, künt uçlu cerrahi makas kullanarak dorsum boyunca şekil deki pozisyonlardan birinde deri altı bir cep oluşturur.Makas takıldıktan sonra, uçları iki kez açıp kapatın ve içine yerleştirilen süngeri tutacak kadar büyük bir cep oluşturacak şekilde kapatın. Cep oluşturulduğunda, aşırı PBS kaldırmak için kültür çanak hafifçe bir PVA sünger sıkmak için steril cerrahi makas kullanın. Daha sonra, bir köşe ile sünger kaldırın ve, makas tarafından düzenlenen köşe ile lider, deri altı cebine sünger yerleştirin.Altı süngerin tümü gösterildiği gibi yerleştirildiğinde, kesici dorsal deriyi bir araya getirmek için steril çifenler kullanın ve kesiği iki paslanmaz çelik yara klipsi ile kapatın. PVA sünger sıvı izolasyonu için, implantasyondan 1 ila 14 gün sonra, cerrahi zımbaları çıkarın ve kesiyi dişli forsepslerle açın. Dorsal orta hat boyunca kesi uzatmak için makas kullanın ve deri altı cebinden bir sünger ayıklamak için forceps kullanın.Süngeri buz üzerinde 16 mililitrelik bir kültür tüpüne yuvalanmış beş mililitrelik şırınganın namlununa yerleştirin ve gerektiğinde süngerin yüzeyine yapışmayan bağ dokusunu ayırmak için makas kullanın. Tüm süngerler çıkarıldığında ve gösterildiği gibi transfer edildiğinde, yara sıvısını toplamak için kültür tüpünü santrifüj edin. PVA süngerhücreleri izole etmek için, az önce gösterildiği gibi süngerleri topladıktan sonra, beş mililitre HBSS toplama ortamı içeren 15 mililitrelik konik bir tüpe yerleştirin.Tüm süngerler toplandığında, sünger süspansiyonuna 80 mililitrelik bir blender torbasına yerleştirin ve küreklerin süngerlere ve ortama çarpması için çantayı kürek blender'ın kapağına asın. Raket blender'ı 60 saniye boyunca yüksekte çalışacak şekilde ayarlayın ve start tuşuna basın. Blender durduğunda, tamamen orta serbest bırakmak için torbadaki süngersıkmak ve 15 mililitrelik tüp geri blender torbasından orta aktarmak için bir pipet kullanın.Raket blender ayarlarını yüksek 30 saniye çalıştırmak için ayarlayın ve blender çantası na orta beş mililitre ekleyin. Toplanan ortamın tüpünü santrifüj etmeden önce mide işlemini iki kez daha tekrarlayın. Konik tüpün alt kısmında hücreler ve kırmızı kan hücrelerinin kırmızı bir pelet görünür olmalıdır.900 mikrolitre distile suyu hücrelerle 3-5 saniye karıştırın ve 10x PBS'nin 100 mikrolitresi ve 1x PBS'nin dört mililitresi ile lysis'i nötralize edin. Santrifüj ile hücreleri toplamak ve downstream analizi için uygun ortamda beyaz hücre pelet resuspend. Bir kuyruk deri yarası oluşturmak için, anestezi, sekiz-12 haftalık, erkek, C57-Siyah / 6 fare, cerrahi siteye iki kez povidon-iyot solüsyonu uygulamak için steril gazlı bez kullanın, anestezik parmak çimdik yanıt eksikliği doğruladıktan sonra% 70 etanol bir uygulama izledi.Kalıcı bir işaretleyici ve önceden yapılmış bir şablon kullanarak, kuyruğun sırt yüzeyinde, kuyruk tabanından 10 milimetre uzakta 10'ar üç milimetrelik bir bölüm izleyin ve fareyi steril cerrahi perdelerüzerine yerleştirin. Steril cerrahi eldivenler giyerek, yara alanının sağ, alt ve sol kenarları boyunca tam kalınlıkta bir kesi yapmak için steril bir neşter bıçak kullanın. Steril çöförler kullanarak, kuyruk uzak excised deri soyma ve yara alanının üst kenarı kesmek için steril cerrahi makas kullanın.Kanamayı durdurmak için yaraya basınç uygulamak için steril gazlı bez kullanın ve yara yatağına bir sprey bariyer filmi uygulayın. Daha sonra, yaraları n düzenli zaman aralıklarında sabit bir mesafeden fotoğraflayın ve yara alanı ölçümlerini belirlemek için planimetrik analiz ile fotoğrafları analiz edin. PVA sünger implantasyon cerrahisi, yaralanmadan bir gün sonra plazmada IL-6 indüksiyonu ile gösterildiği gibi sistemik inflamatuar yanıt oluşturur.PVA sünger yaralarından kurtarılabilen hücrelerin sayısı zamanla artar, nötrofiller, monositler ve süngerler içinde birincil hücresel infiltrasyon popülasyonları oluşturan makrofajlar ile. Nötrofiller Ly6G-pozitif, Siglec-F-negatif hücreler olarak tanımlanır. Siglec-F-pozitif hücreler öncelikle eozinofillerdir.Ly6G-negatif, Siglec-F-negatif hücreleri gating F4/80-pozitif monositler ve makrofajlar belirlenmesini sağlar. F4/80-pozitif hücreler Ly6C yüksek inflamatuar monositleri ve Ly6C düşük monosit türetilmiş makrofajları ayırt etmek için Ly6C ekspresyonu ile daha da ayırt edilebilir. Eksizyonel kuyruk deri modeli yoğun kürk eksik firma cilt yara kapanması çalışma dorsal deri yumruk biyopsi yöntemine bir alternatif sağlar.Yara kapanması zaman içinde yara yatağının alanı ölçülerek ölçülebilir. Kuyruk derisi yarası h ve E ve Masson'un trikrom boyama yoluyla histolojik analiz ile kesitte de görülebilir. Bu görüntülerde, eksire derinin lateral kenar boşlukları kuyruğun sırt yüzeyindeki ok başları ile gösterilir.Kararlı durumda yara iyileşmeanlamak için, terapötik bileşikler veya müdahaleler de doğrudan PVA sünger içine enjeksiyon yoluyla veya kuyruk yara yatağına teslim yoluyla test edilebilir.

assessment-acute-wound-healing-using-dorsal-subcutaneous-polyvinyl

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Ilaçlar, büyüme faktörleri ve / veya yara tamir bir hayvan modelinde manipüle hücrelerin etkilerini analiz etmek için yararlı bir araç tanımlanmıştır. Bu teknik sunar ve içeren ve ayrıca arzu edilen tedavi çıkarıldı ve analiz edilmesi için bir platform sağlamak için bir polivinil alkol (PVA) sünger özellikleri kullanmaktadır.

Polivinil Alkol Sünger Model İmplantasyonu

Fizyolojik ve patofizyolojik ortamlarda terapötik bileşiklerini değerlendirmek için de kullanılabilir deri yara iyileşmesinin Bir murin modeli.

Yara Şifa murin Modeli

Vaskülarizasyon başarılı doku mühendisliği yaklaşımları anahtarıdır. Bu nedenle, güvenilir teknolojileri doku yapıları vasküler ağların gelişimini değerlendirmek için gereklidir. Burada görselleştirmek ve in vivo damarlanmayı ölçmek için basit ve maliyet-etkin bir yöntem mevcut.

A Tam Cilt Hata Modeli Biyomateryallerin vaskülarizasyonunu değerlendirin<em&gt; In Vivo</em

Bu protokolün amacı, doğal cilde benzeyen üç boyutlu tam kalınlıkta bir cilt eşdeğeri oluşturmaktır. Özel olarak yapılmış bir otomatik yaralama cihazı ile, sterilitenin korunması altında hassas ve tekrarlanabilir yaralar oluşturulabilir.

Üç-boyutlu Tam Kalınlığı Deri Üretimi Eşdeğer ve Otomatik Yaralama

sıçan nedeniyle onun büyüklüğü, kullanılabilirlik ve oldukça uysal davranış, yıllardır bir araştırma modeli olarak kullanılmıştır. Bu protokolün amacı, kronik yaraların patofizyolojisi değerli bilgiler sağlamak için bir iskemik deri yara iyileşmesi modeli olarak sıçan kullanmaktır.

Sıçan İskemik Cilt Yara Modeli Gösteri

Burada, primer fibroblastlar kullanarak in vitro çizik testve farelerde in vivo deri yara iyileşmesi test için bir protokol salıyoruz. Her iki tahliller in vitro ve in vivo yara iyileşmesini değerlendirmek için basit yöntemlerdir.

In Vitro ve In Vivo In Vivo Analizi Yara İyileşmesi için Scratch Migration Tahlil ve Dorsal Skinfold Odası

Bu protokol, farelerde ikili, tam kalınlıkta eksizyonel yaraların nasıl üretileceğin ve yaraların morfometrik analiziçin nasıl izlendiğini, hasat edilip hazırlanacağını açıklar. Morfometrik kusurları tanımlamak, tam olarak ölçmek ve tespit etmek için seri histolojik bölümlerin nasıl kullanılacağına iliş bir açıklama dahildir.

Murine Eksizyonel Yara İyileştirme Modeli ve Histolojik Morfometrik Yara Analizi

Burada, ex vivo insan derisini kullanarak yara onarımını değerlendirmek için optimize edilmiş bir teknik ve tam montajlı bir boyama yaklaşımı sergiliyoruz. Bu metodoloji, potansiyel yara tedavilerinin değerlendirilmesi için klinik öncesi bir platform sağlar.

Cilt Onarımını Doğru Değerlendirmek için İnsan Ex vivo Yara Modeli ve Tam Montajlı Boyama Yaklaşımı

Bu çalışma iki önemli deneysel teknik sunmaktadır: yara kapanmasını değerlendirmek için bir murin yara modelinin oluşturulması ve hücresel canlılığı korumak için murin derisinden tek hücreli süspansiyonların hazırlanması.

Fare Yara Modelleri ve Tek Hücre Süspansiyonlarının Hazırlanması

Yaralar küresel bir sağlık sorununu temsil eder. Bu çalışma, yara ölçümü değişkenliğini en aza indirmek için dijital planimetri kullanan standart bir fotoğraf kabini geliştirdi. Farelerde yaraların 14 gün boyunca izlenmesi, yara alanı ve çevresinde başlangıçta bir artış olduğunu ve ardından kademeli olarak kapandığını ortaya koydu. Bu metodoloji, klinik öncesi modellerde yara kapatma kinetiğinin değerlendirilmesine yardımcı olabilir.

Bir Fare Modelinde Yara Kapanma Kinetiğini Değerlendirmek için Dijital Planimetri

Fizyolojik veya patolojik koşullar altında iyileşme sürecinin farklı aşamalarında çeşitli terapötik ajanların değerlendirilmesini sağlayan bir fare derisi yara modeli tanımlanır. Ayrıca, doku onarımı sırasında yara kasılma oranını izlemek için manuel planimetri protokolü detaylandırılmıştır.

Bir Fare Cerrahi Deri Yara Modeli: Yara İyileşme Çalışmaları ve Biyomateryal Değerlendirmesi için Bir Yaklaşım

Keşfedin akut yara iyileşmesini değerlendiren dorsal PVA sünger implantasyonu ve eksizyonal kuyruk derisi yara modellerini. Bu yöntemler sitokin kinetiği ve hücresel yanıtları farelerde incelemek için kullanılır.

Dorsal Subkutan Polivinil Alkol Sünger İmplantasyonu ve Eksizyonal Kuyruk Deri Yara Modelleri kullanılarak Akut Yara İyileşmesinin Değerlendirilmesi. (Video) | JoVE Journal

Dorsal Subkutan Polivinil Alkol Sünger İmplantasyonu ve Eksizyonal Kuyruk Deri Yara Modelleri kullanılarak Akut Yara İyileşmesinin Değerlendirilmesi.

Daha fazla video keşfet