Name: Karaciğer Alkol Dehidrogenaz SNS Kobalt(II) Kıskaç Model Kompleksleri Hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 31 s
Description: Keşfedin karaciğer alkol dehidrogenaz için SNS kıskaç kobalt(II) model komplekslerinin sentez ve tek kristal büyütme yöntemini. Bu güvenilir teknik koordinasyon bileşikleri hazırlamada uygulanabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

John Miecznikowski bu proje için aşağıdaki mali destek aldı: Connecticut NASA Uzay Hibe İttifakı (Ödül Numarası P-1168), Fairfield Üniversitesi Bilim Enstitüsü, Sanat ve Bilim Ler Yayın Fonu Koleji, Fairfield Üniversite Fakültesi Yaz Araştırma Ödeneği ve Ulusal Bilim Vakfı-Büyük Araştırma Enstrümantasyon Programı (Grant Numarası CHE-1827854) 400 MHz NMR spektrometre satın almak için fon için. Ayrıca elektrosprey kütle spektrumları elde yardım için Terence Wu (Yale Üniversitesi) teşekkür. Jerry Jasinski Bir X-ışını diffraktometre satın almak için fonlar için Ulusal Bilim Vakfı-Büyük Araştırma Enstrümantasyon Programı (Grant Number CHE-1039027) kabul eder. Sheila Bonitatibus, Emilse Almanza, Rami Kharbouch ve Samantha Zygmont yaz araştırma ödeneği sağlamak için Hardiman Akademisyenler Programı kabul.

1. Kloro-(n3-S,S,N)-[2,6-bis(N-izopropil-N'-metileneimidazol-2-tiyoon)piridin]kobalt(II)tetraklorokodatat [4] sentezi
<ol><li>Karmaşık 4hazırlamak için, 2,6-bis (N-izopropil-N'-metileneimidazol-2-tione)piridin (C19H25N5 S2)6 ila 15 mL asetonitrile 100 mL yuvarlak alt flask 0,121 g (3,12 x 10-4 mol) ekleyin. Daha sonra, bu çözeltiye 0,0851 g (3,58 x 10-4 mol) kobalt klorür (II) heksahidrat (CoCl2·6H2O) ekleyin. Reaksiyon çözeltisi kobalt(II) klorür heksahidat eklendikten hemen sonra açık sarıdan zümrüt yeşiline renk değiştirmelidir.</li>
	<li>Şişeye bir karıştırma çubuğu ekleyin. Reflü ve tam reaksiyon sağlamak için 20 saat için reaksiyon karıştırın. Azaltılmış basınç altında bir rotovap kullanarak çözücü çıkarın.</li>
</ol>2. Kloro-(n3-S,S,N)-[2,6-bis(N-izopropil-N'-metileneimidazol-2-tione)piridin]kobalt(II)tetraklorokodatat [4] yavaş difüzyon ile yeniden kristalizasyonu
<ol><li>Çözünürea asetonitril (7,5 mL) çözün, çözeltiyi filtreleyin ve çözeltiyi 1 dram şişeye eşit olarak yerleştirin. Her şişeyi 1,5 mL asetonitril çözeltisi ile doldurun.<ol>
<li>Yavaş buhar difüzyon sağlar şişeleri, kap pamuk ekleyin. Şişenin üst kısmındaki açıklığa pamuk ları rahatça sığdırın.</li>
		<li>Şişeleri 50 mL dietil eter içeren 240 mL'lik bir kavanoza yerleştirin. Kavanozu bir kapakla kapatın.</li>
		<li>Kristallerin 1 haftalık bir süre içinde büyümesine izin verin. NOT: Yeniden kristalizasyon 1 günden uzun sürebilir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Kloro-(n3-S,S,N)-[2,6-bis(N-izopropil-N'-metylenetriazol-2-tiyodin]kobalt(II)tetraklorokodatat [5]
<ol><li>Karmaşık 5hazırlamak için, 2,6-bis(N-izopropil-N'-methylenetriazole-2-tione)piridin (C17H23N7S2)6 ila 15 mL asetonitrile 100 mL yuvarlak alt şişe 0,183 g (4,70 x 10-4 mol) ekleyin. Bu çözeltiye 0,223 g (9,37 x 10-4 mol) kobalt klorür hekzahidit (CoCl2·6H2O) ekleyin. Reaksiyon çözeltisi kobalt(II) klorür heksahidat eklendikten hemen sonra açık sarıdan kraliyet mavisine renk değiştirmelidir.<ol>
<li>Şişeye bir karıştırma çubuğu ekleyin. Reflü ve tam reaksiyon sağlamak için 20 saat için reaksiyon karıştırın. Azaltılmış basınç altında bir rotovap kullanarak çözücü çıkarın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Kloro-(n3-S,S,N)-[2,6-bis(N-izopropil-N'-methylenetriazole-2-tione)pyridine]kobalt(II)tetraklorokodatat [5] yavaş buhardifüzyonu ile yeniden kristalizasyonu
<ol><li>Çözünürea asetonitril (9,0 mL) çözün, çözeltiyi filtreleyin ve çözeltiyi 1 dram şişeye eşit olarak yerleştirin. Her şişeyi 1,5 mL asetonitril çözeltisi ile doldurun.<ol>
<li>Yavaş buhar difüzyon sağlar şişeleri, kap pamuk ekleyin. Şişenin üst kısmındaki açıklığa pamuk ları rahatça sığdırın.</li>
		<li>Şişeleri 50 mL dietil eter içeren bir kavanoza yerleştirin. Şişeyi bir kapakla kapatın.</li>
		<li>Kristallerin 1 haftalık bir süre içinde büyümesine izin verin. NOT: Yeniden kristalizasyon 1 günden uzun sürebilir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. X-ışını kristalografisi
<ol><li>Naylon halka üzerine 4 kristal monte edin. Rigaku Oxford Kırınım difraktometresi ile ilgili verileri toplayın. Burada X-ışını kırınım verileri 173(2) K.'da toplanır.16 17 En az kareler en aza küçültme kullanarak ShelXL18 arıtma paketi ile yapıyı hassaslaştırın.</li>
	<li>Naylon halka üzerine 5 kristal monte edin. Rigaku Oxford Kırınım difraktometresi üzerinde X-ışını kırınım verilerini toplayın. Burada X-ışını kırınım verileri 173(2) K.'da toplanır.16 17 En az kareler en aza küçültme kullanarak ShelXL18 arıtma paketi ile yapıyı hassaslaştırın.</li>
</ol>

<ol><li>Holm, R. H., Kennepohl, P., Solomon, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+Functional+Aspects+of+Metal+Sites+in+Biology%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Structural and Functional Aspects of Metal Sites in Biology.</a> Chemical Reviews. 96 (7), 2239-2314 (1996).</li>
<li>Ibers, J. A., Holm, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+coordination+sites+in+metallobiomolecules%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Modeling coordination sites in metallobiomolecules.</a> Science. 209 (4453), 223-235 (1980).</li>
<li>Kannan, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+structure+of+human+erythrocyte+carbonic+anhydrase+B.+Three-dimensional+structure+at+a+nominal+2.2-A+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+USA%22%5BJournal%5D)">Crystal structure of human erythrocyte carbonic anhydrase B. Three-dimensional structure at a nominal 2.2-A resolution.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 72 (1), 51-55 (1975).</li>
<li>Eklund, H., Brändén, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+differences+between+apo-+and+holoenzyme+of+horse+liver+alcohol+dehydrogenase%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Structural differences between apo- and holoenzyme of horse liver alcohol dehydrogenase.</a> Journal of Biological Chemistry. 254, 3458-3461 (1979).</li>
<li>Miecznikowski, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Syntheses%2C+Characterization%2C+Density+Functional+Theory+Calculations+and+Activity+of+Tridentate+SNS+Zinc+Pincer+Complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Syntheses, Characterization, Density Functional Theory Calculations and Activity of Tridentate SNS Zinc Pincer Complexes.</a> Inorganica Chimica Acta. 376, 515-524 (2011).</li>
<li>Miecznikowski, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Syntheses%2C+Characterization%2C+Density+Functional+Theory+Calculations%2C+and+Activity+of+Tridentate+SNS+Zinc+Pincer+Complexes+Based+on+Bis-Imidazole+or+Bis-Triazole+Precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Syntheses, Characterization, Density Functional Theory Calculations, and Activity of Tridentate SNS Zinc Pincer Complexes Based on Bis-Imidazole or Bis-Triazole Precursors.</a> Inorganica Chimica Acta. 387, 25-36 (2012).</li>
<li>Sunderland, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+liver+alcohol+dehydrogenase+catalysis+using+an+NADH+biomimetic+and+comparison+with+a+synthetic+zinc+model+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Polyhedron%22%5BJournal%5D)">Investigation of liver alcohol dehydrogenase catalysis using an NADH biomimetic and comparison with a synthetic zinc model complex.</a> Polyhedron. 114, 145-151 (2016).</li>
<li>Miecznikowski, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+characterization+of+three-+and+five-coordinate+copper%28II%29+complexes+based+SNS+ligand+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Polyhedron%22%5BJournal%5D)">Synthesis and characterization of three- and five-coordinate copper(II) complexes based SNS ligand precursors.</a> Polyhedron. 80, 157-165 (2014).</li>
<li>Miecznikowski, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis%2C+Characterization%2C+and+Computational+Study+of+Three-Coordinate+SNS+Copper%28I%29+Complexes+based+on+Bis-Thione+Ligand+Precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Coordination+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Synthesis, Characterization, and Computational Study of Three-Coordinate SNS Copper(I) Complexes based on Bis-Thione Ligand Precursors.</a> Journal of Coordination Chemistry. 67, 29-44 (2014).</li>
<li>Lynn, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper%28I%29+SNS+Pincer+Complexes%3A+Impact+of+Ligand+Design+and+Solvent+Coordination+on+Conformer+Interconversion+from+Spectroscopic+and+Computational+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Copper(I) SNS Pincer Complexes: Impact of Ligand Design and Solvent Coordination on Conformer Interconversion from Spectroscopic and Computational Studies.</a> Inorganica Chimica Acta. 495, (2019).</li>
<li>Web Elements. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.webelements.com/zinc/atom_sizes.html">https://www.webelements.com/zinc/atom_sizes.html</a> (2019).</li>
<li>Web Elements. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.webelements.com/cobalt/atom_sizes.html">https://www.webelements.com/cobalt/atom_sizes.html</a> (2019).</li>
<li>Caballero, A., Díez-Barra, E., Jalón, F. A., Merino, S., Tejeda, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1%2C1%27-%28pyridine-2%2C6-diyl%29bis%283-benzyl-2%2C3-dihydro-1H-imidazol-2-ylidine%29%2C+a+new+multidentate+N-heterocyclic+bis-carbene+and+its+silver%28I%29+complex+derivative%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Organometallic+Chemistry%22%5BJournal%5D)">1,1'-(pyridine-2,6-diyl)bis(3-benzyl-2,3-dihydro-1H-imidazol-2-ylidine), a new multidentate N-heterocyclic bis-carbene and its silver(I) complex derivative.</a> Journal of Organometallic Chemistry. 617-618, 395-398 (2001).</li>
<li>Albrecht, M., van Koten, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platinum+Group+Organometallics+Based+on+%22Pincer%22+Complexes%3A+Sensors%2C+Switches%2C+and+Catalysis%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Platinum Group Organometallics Based on "Pincer" Complexes: Sensors, Switches, and Catalysis.</a> Angewandte Chemie International Edition. 40 (20), 3750-3781 (2001).</li>
<li>Peris, E., Crabtree, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+factors+in+pincer+ligand+design%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">Key factors in pincer ligand design.</a> Chemistry Society Reviews. 47, 1959-1968 (2018).</li>
<li>Dolomanov, O. V., Bourhis, L. J., Gildea, R. J., Howard, J. A. K., Puschmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+complete+structure%2C+solution%2C+refinement%2C+and+analysis+program%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Crystallography%22%5BJournal%5D)">A complete structure, solution, refinement, and analysis program.</a> Journal of Applied Crystallography. 42, 339-341 (2009).</li>
<li>Sheldrick, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+Space+Group+and+Crystal+Structure+Determination%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Integrated Space Group and Crystal Structure Determination.</a> Acta Crystallography. 71, 3-8 (2015).</li>
<li>Sheldrick, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+Structure+Refinement+with+SHELXL%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Crystal Structure Refinement with SHELXL.</a> Acta Crystallography. 71, 3-8 (2015).</li>
<li>Pauling, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-metal+bond+lengths+in+complexes+of+transition+metals%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academies+of+the+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Metal-metal bond lengths in complexes of transition metals.</a> Proceedings of the National Academies of the Sciences of the United States of America. 73, 4290-4293 (1976).</li>
<li>Trzhtsinskaya, B. V., Abramova, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imidazole-2-Thiones%3A+Synthesis%2C+Structure%2C+Properties%5BTitle%5D)+AND+%22Sulfur+Reports%22%5BJournal%5D)">Imidazole-2-Thiones: Synthesis, Structure, Properties.</a> Sulfur Reports. 10 (4), 389(1991).</li>
<li>Schneider, G., Eklund, H., Cedergren-Zeppezauer, E., Zeppezauer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+structure+of+the+active+site+in+specifically+metal-depleted+and+cobalt+substituted+horse+liver+alcohol+dehydrogenase+derivatives%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academies+of+the+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Crystal structure of the active site in specifically metal-depleted and cobalt substituted horse liver alcohol dehydrogenase derivatives.</a> Proceedings of the National Academies of the Sciences of the United States of America. 80, 5289-5293 (1983).</li>
<li>Yang, L., Powell, D. R., Houser, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+variation+in+copper%28I%29+complexes+with+pyridylmethylamide+ligands%3A+structural+analysis+with+a+new+four-coordinate+geometry+index%2C+%CF%844%5BTitle%5D)+AND+%22Dalton+Transactions%22%5BJournal%5D)">Structural variation in copper(I) complexes with pyridylmethylamide ligands: structural analysis with a new four-coordinate geometry index, τ4.</a> Dalton Transactions. , 955-964 (2007).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

4 ve 5 komplekslerinin hazırlanması kolaydır. Önemli adım, katı CoCl2·6H2O'yu ilgili ligand öncülü içeren bir asetonitril çözeltisine eklemektir. Çözelti, CoCl2·6H2O eklenmesinden sonra saniyeler içinde koyu yeşile dönerek kompleks 4oluşturur. CoCl2·6H2O eklendikten sonra çözelti parlak maviye döner ve kompleks 5oluşturur. Tam reaksiyon sağlamak için, çözüm bir gecede reflü yerleştirilir.<...

Sunulan yöntemin amacı, metalloenzimlerin katalitik aktivitesini daha iyi anlamak için LADH'nin küçük moleküllü analoglarını hazırlamaktır. LADH kofaktör bağlayıcı etki alanı ve çinko (II) metal içeren katalitik etki alanı1içeren dimerik bir enzimdir. LADH, co-faktör NADH varlığında, ketonlar ve aldehitler kendi alkol türevleri2azaltabilir. NADvarlığında +, LADH ketonlar ve aldehitler 2 alkollerin oksidasyonu ters kataliz gerçekleştirebilirsiniz. LADH'nin aktif bölgesinin kristal yapısı, çinko(II) metal merkezinin bir azot atomuna bağlı olduğunu, histidin yan zinciri ve iki kükürt atomu tarafından sağlandığını ve iki sistein ligandı tarafından sunulduğunu göstermektedir3. Daha fazla araştırma çinko metal merkezi bir labile su molekülü ile ligated olduğunu göstermiştir, metal merkezi etrafında sözde tetrahedral geometri ile sonuçlanan4.
Biz daha önce rapor ve SNS kıskaç ligand öncüleri yanı sıra ZnCl2 ile ligand öncüleri metallated zn (II) tridentate ligand öncüsü içeren kompleksleri oluşturmak içinkullanılan 5,6,7. Bu ligand öncülleri Şekil 1'degösterilmiştir. Bu çinko(II) kompleksleri elektron fakiri aldehitlerin stokiyometrik azalması için aktivite sergilediler ve böylece LADH için model kompleksleridir. Daha sonra, SNS ligand öncüleri içeren bakır(I) ve bakır(II) kompleksleri bir dizi sentezve karakterizasyonubildirilmiştir 8,9,10.
LADH bir çinko (II) enzimi olmasına rağmen, LADH'nin kobalt(II) analogları hakkında daha fazla spektroskopik bilgi elde etmek için LADH'nin kobalt(II) model komplekslerini hazırlamakla ilgileniyoruz. Kobalt(II) kompleksleri renklidir, çinko(II) kompleksleri ise beyaz değildir. Kobalt(II) kompleksleri renkli olduğundan, komplekslerin ultraviyole görünür spektrumları elde edilebilir ve kobalt(II) komplekslerinde ligand alanının gücü hakkında bilgi de toplanabilir. Gaussian hesaplamaları ve deneysel olarak elde edilen ultra-viyole görünür spektrumlar kullanılarak, ligand alanının gücü hakkında bilgi elde edilebilir. Kobalt(II) çinko (II) için iyi bir yedek, her iki iyonik yarıçap ve benzer Lewis asitler11,olduğundan ,12.
Sunulan yöntem ladh doğal katalitik davranışı taklit etmeye çalışmak için model kompleksleri sentezleme ve karakterizasyonu içerir5,6. Daha önceLaDH4 çinko aktif sitenin yapısı ve reaktivitesi modellenmiş ladh, çinko (II) model kompleksleri oluşturmak için ZnCl2 ile ligand öncüleri bir aile metallated var. Birden fazla deney sayesinde, bu kıskaç ligands farklı çevre koşulları altında sağlam olduğu kanıtlanmıştır ve bağlı R-gruplarının çeşitli bir koleksiyon ile istikrarlı kalmıştır. 5,6
Tridentate ligandlar monodenat ligandlara göre tercih edilirler, çünkü tridentat etekli ligandların güçlü şelat etkileri nedeniyle metalasyonda daha başarılı oldukları bulunmuştur. Bu gözlem, tekdenat ligand13'ekıyasla tridentate pincer ligand oluşumunun daha çok tercih edilen bir entropiden kaynaklanmaktadır. Ayrıca, tridentate kıskaç ligands dimerization metal kompleksleri, dimerization karmaşık bir katalitik aktivite yavaş muhtemeldir çünkü tercih edilir dimerization önlemek olasıdır14. Böylece, tridentate pincer ligands kullanarak katalitik aktif ve sağlam komplekslerin hazırlanmasında organometalik kimya başarılı olduğu kanıtlanmıştır. Kıskaç kompleksleri diğer kıskaç sistemlerine göre daha az çalışılmıştır, çünkü kıskaç kompleksleri genellikle ikinci ve üçüncü sıra geçiş metalleri15içerir.
Metaloenzimler üzerinde yapılan bu araştırma, biyolojideki diğer alanlara uygulanabilen enzimatik aktivitelerinin anlaşılmasına yardımcı olabilir. Model komplekslerini alternatif yönteme göre sentezleme yöntemi (LADH'nin tüm proteininin sentezi) birçok nedenden dolayı olumludur. İlk avantajı, model komplekslerinin moleküler kütlesinin düşük olması ve hala doğal enzimin aktif bölgesinin katalitik aktivitesini ve çevre koşullarını doğru bir şekilde temsil etme yeteneğine sahip olmasıdır. İkinci olarak, model kompleksleri ile çalışmak ve güvenilir ve ilişkilendirilebilir veriler üretmek daha kolaydır.
Bu el yazması, LADH'nin iki kobalt(II) kıskaç modeli kompleksinin sentetik hazırlanmasını ve karakterizasyonunu açıklamaktadır. Her iki kompleksde de sülfür, azot ve kükürt donör atomları içeren bir kıskaç ligandı bulunmaktadır. İlk kompleks (4) bir imidazol öncüsü dayanmaktadır, ve ikinci (5) bir triazol öncüsü dayanmaktadır. Kompleksler bir hidrojen donör varlığında elektron yoksul aldehitlerin stokiyometri azaltma için reaktivite göstermektedir. Bu reaktivite sonuçları bir sonraki el yazmasında bildirilecektir.

<table><tbody><tr><td>100 mL Yuvarlak Tabanlı Şişe</td><td>Kimyasal Cam</td><td>CG150691</td><td>100 mL Tek Boyunlu Yuvarlak Tabanlı Şişe, 19/22 Dış Eklem</td></tr><tr><td>Asetonitril</td><td>Fisher</td><td>HB9823-4</td><td>HPLC</td></tr><tr><td>Sınıfı Chiller roto-vap</td><td>Lauda</td><td>L000638</td><td>Alpha RA 8</td></tr><tr><td>Kobalt Klorür hekzahidrat</td><td>Acros Organics</td><td>AC423571000</td><td>Acros Organics</td></tr><tr><td>Dietil Eter</td><td>Fisher</td><td>E-138-1</td><td>Dietil Eter Anhydorus</td></tr><tr><td>dereceli silindir</td><td>Fisher</td><td>S63456</td><td>25 mL dereceli silindir</td></tr><tr><td>ocak gözü</td><td>Fisher</td><td>11-100-49SH</td><td>Isotemp Temel Karıştırma Ocak Gözü</td></tr><tr><td>kavanozları</td><td>Fisher</td><td>05-719-481</td><td>250 mL kavanozlar</td></tr><tr><td>Ligand</td><td>-----</td><td>-----</td> <td>Daha önce Profesör Miecznikowski tarafından sentezlenmiştir</td></tr><tr><td>Orta pamuk topları</td><td>Fisher</td><td>22-456-80</td><td>orta boy pamuk topları</td></tr><tr><td>bir dram şişesi</td><td>Fisher</td><td>03-339</td><td>TFE Astarlı Kapaklı bir dram</td></tr><tr><td>şişesi pipet</td><td>Fisher</td><td>13-678-20B</td><td>5.75 inç pipetler</td></tr><tr><td>pipet ampulleri</td><td>Fisher</td><td>03-448-21</td> kum banyosu için pipet yeniden kristalleştirme kabı <td>için Fisher Marka Lateks Ampul</td></tr><tr><td></td><td>Fisher</td><td>08-741 D</td><td>325 mL kum banyosu</td></tr><tr><td>geri akış kondansatörü</td> için yeniden kristalleştirici <td>çanak Kimyasal Cam</td><td>CG-1218-A-22</td><td>19/22 iç eklemli kondenser</td></tr><tr><td>Rotovap</td><td>Heidolph Collegiate</td><td>36000090</td><td>Brinkmann; Heidolph Collegiate Döner Evaporatör Heidolph WB eko banyolu Heidolph Döner Evaporatör</td></tr><tr><td>kum banyosu için deniz kumu</td><td>Acros Organics</td><td>612355000</td><td>kum banyosu için yıkanmış deniz kumu</td></tr><tr><td>Karıştırma çubuğu</td><td>Fisher</td><td>07-910-23</td><td>Yumurta Şeklinde Manyetik Karıştırma Çubuğu</td></tr><tr><td>Vakum gresi</td><td>Fisher</td><td>14-635-5D</td><td>Dow Corning rotovap</td></tr><tr><td>Heidolph Collegiate</td> için Yüksek Vakumlu<td>Gres vakum pompası</td><td>36302830</td><td>Heidolph Rotovac Valf Kontrolü</td></tr></tbody></table>

karaciğer alkol dehidrogenaz sns kobalt(ii) kıskaç model kompleksleri hazırlanması

Preparation of SNS Cobalt(II) Pincer Model Complexes of Liver Alcohol Dehydrogenase

Kimyasal model kompleksleri bir enzimin aktif bölgesini temsil etmek üzere hazırlanır. Bu protokolde, tridentate kıskaç ligand öncüleri bir aile (her iki kükürt ve bir azot donör atom işlevleri (SNS) ve bis-imidazol veya bis-triazol bileşikleri dayalı) bir aile Tridentate SNS kıskaç kobalt (II) kompleksleri göze CoCl2·6H2O ile metallated vardır. Karaciğer alkol dehidrogenaz için kobalt (II) model komplekslerinin hazırlanması kolay. CoCl2·6H2O'yu ligand öncülünü içeren asetonitril çözeltisine ekledikten sonra hızlı bir renk değişimine dayanarak, karmaşık hızla oluşur. Metal kompleksinin oluşumu, çözeltinin bir gecede reflüye izin vererek tamamlanır. Bu kobalt(II) kompleksleri karaciğer alkol dehidrogenaz (LADH) çinko aktif site için model olarak hizmet vermektedir. Kompleksler tek kristal X-ışını kırınımı, elektrosprey kütle spektrometresi, ultraviyole görünür spektroskopi ve element analizi ile karakterizedir. Kompleksin yapısını doğru bir şekilde belirlemek için, tek kristal yapısı belirlenmelidir. X-ışını kırınımı için uygun olan komplekslerin tek kristalleri daha sonra kobalt(II) kompleksini içeren bir asetonitril çözeltisine diethyl eterin yavaş buhardifüzyonu ile yetiştirilir. Yüksek kaliteli kristaller için, yeniden kristalizasyon genellikle 1 haftalık bir süre içinde gerçekleşir, ya da daha uzun. Bu yöntem diğer model koordinasyon komplekslerinin hazırlanmasında uygulanabilir ve lisans eğitim laboratuarlarında kullanılabilir. Son olarak, başkalarının kendi araştırma için yararlı tek kristaller elde etmek için bu recrystallization yöntemi bulabilirsiniz inanılıyor.

Sentez 4 ve 5 komplekslerinin sentezleri kobalt (II) klorür heksahiditile bis-tione ligand öncüsü içeren bir asetonnitril çözeltisine tepki vererek başarıyla gerçekleştirilmiştir (Şekil 2). Bu reaksiyon hava varlığında bir reflü sıcaklığında meydana geldi. Genel olarak, kompleksleri 4 ve 5 asetonitril, dimetil sülfoksit, diklorometan ve metanol çözünür olduğu gözlendi. Kompleks 4 yeşil re...

Karaciğer alkol dehidrogenaz SNS pincer kobalt (II) model kompleksleri hazırlanması burada sunulmaktadır. Kompleksler CoCl2·6H2O ile ligand öncülü tepki vererek hazırlanabilir ve daha sonra diethyl eter yavaş yavaş kobalt kompleksi içeren bir asetonitril çözeltisi içine yayılarak izin vererek yeniden kristalize edilebilir.

Karaciğer Alkol Dehidrogenaz SNS Kobalt(II) Kıskaç Model Kompleksleri Hazırlanması

Chemical model complexes are prepared to represent the active site of an enzyme. In this protocol, a family of tridentate pincer ligand precursors (each ...

Bu yöntem bir enzim karaciğer alkol dehidrogenaz bir kimyasal model kompleksi hazırlamak ve tek kristaller büyümek için kullanılabilir. Bu tekniğin avantajları, karmaşık oluşumun kolay olması ve yeniden kristalizasyon yönteminin diğer koordinasyon komplekslerinin hazırlanmasında uygulanabilebileceğidir. Bu yöntem, inorganik koordinasyon bileşiklerinin hazırlanması ve yeniden kristalizasyonu hakkında bilgi sağlayabilir ve tek kristaller yetiştirmek için herhangi bir ilgi bileşimine uygulanabilir.Tek kristalleri yetiştirmek pratik gerektirir. Anahtar mümkün olduğunca konsantre olarak metal kompleksi içeren asetonitril çözeltisi yapmaktır. Karmaşık dört hazırlamak için, 2 0.121 gram ekleyin, 6-BIS-N-izopropil-N'metilenimidzol-2-tiyone-piridin ve kobalt II klorür heksahidat gram 100 mililitre yuvarlak alt şişe içeren 100 mililitre yuvarlak alt şişe 15 mililitre asetonile.Reaksiyon kobalt II klorür heksahidat eklendikten hemen sonra zümrüt yeşili açık sarı renkten değiştirilmelidir. Daha sonra reflü ve çözücü kaldırmak için azaltılmış basınç altında bir rotovap kullanmadan önce tam reaksiyon sağlamak için 20 saat boyunca reaksiyon karıştırın. Kloro-N3-S, S, N-2, 6-BIS-N-izopropil-N'metilenimidzol-2-tiyone-piridin kobalt II tetraklorobaltate recrystallization yavaş buhar difüzyonu ile, asetonitrile 10 mililitre çözünür, filer çözüm, sonra bir vial vial arasında bile çözelti aliquot.Her şişe ye taze asetonitril çözeltisi 1,5 mililitre ekleyin ve pamuk ile şişeleri snugly kap. Şişeleri 50 mililitre dietil eter içeren 240 mililitrelik bir kavanoza yerleştirin ve kavanozu bir kapakla kapatın. Sonra kristaller bir hafta kadar büyümeye izin verin.Karmaşık beş hazırlamak için, 2 0.183 gram ekleyin, 6-BIS-N-izopropil-N'methylenetriazole-2-tiyon-piridin ve kobalt II klorür heksahidit 0.223 gram 100 mililitre yuvarlak alt flask asetonitrril 15 mililitre. Reaksiyon kobalt II klorür heksahidat eklendikten hemen sonra kraliyet maviaçık sarı renk renk değiştirmek gerekir. Daha sonra reflü ve azaltılmış basınç altında bir rotovap kullanarak çözücü çıkarmadan önce tam reaksiyon sağlamak için 20 saat boyunca reaksiyon karıştırın.Kloro-N3-S, S, N-2, 6-BIS-N-izopropil-N'methylenetriazole-2-tione-piridine kobalt II tetraklorobaltate recrystallization yavaş buhar difüzyonu ile, asetonitrile 10 mililitre solute çözünür ve çözeltiyi eşit olarak tek bir vi dramals olarak filtrelemeden önce çözünür. Her şişeyi 1,5 mililitre asetonitril çözeltisi ile doldurun ve şişeleri pamukla kaplayın. Yüksek kaliteli tek kristaller büyümek için, pamuk fişi bir dram şişe içinde snugly sığar önemlidir.Her şişe için bir pamuk tan biraz daha az kullanıyoruz. Sonra dietil eter 50 mililitre içeren bir kavanoza şişeleri yerleştirin, bir kap ile kavanozkapatın, ve kristaller kadar bir hafta büyümeye izin. Komplekslerin sentezi dört ve beş kobalt II klorür heksahidat ile bir bis-tione ligand öncüsü içeren bir asetonitril çözeltisi tepki vererek başarıyla yapılabilir.Yavaş buhar difüzyonu yoluyla komplekslerin dört ve beş tek kristallerin edinimi, numunelerin kristalize edilmesi zor için tek kristaller yetiştirmek için mükemmel bir yöntemdir. Yeniden kristalize edilen komplekslerin elementanalizi, karbon, hidrojen ve azotun hesaplanan yüzdeleri karbon, hidrojen ve azot un bulunan yüzdeleriyle mükemmel bir uyum içinde olduğu için dört ve beş komplekslerinin saf olduğunu göstermektedir. Buna ek olarak, 4 ve 5 komplekslerinin ultraviyole görünür spektroskopisi, karmaşık dört ünün görünür bölgede 680, 632 ve 589 nanometrede üç tepe sergilediğini ve bu karmaşık beşin görünür bölgede 682, 613, 588 ve 573 nanometrede dört zirve sergilediğini ortaya koymaktadır.Hatırlanması gereken en önemli şey, kompleksi hazırlarken, bir ligand öncüsü içeren bir asetonitril çözeltisine kobalt klorür heksahidrat eklemeniz gerektiğidir. Yeniden kristalizasyon yöntemi, yeniden kristalize edilmesi zor olan herhangi bir organik veya inorganik bileşiğe uygulanabilir. Şu anda karşı-aniyon kobalt içermeyen kobalt II kompleksleri hazırlanıyor ve onların reaktivite için kompleksleri tarama.Tüm reaksiyonları duman kaputunda yürüttüğünden emin olun.

preparation-sns-cobalt-ii-pincer-model-complexes-liver-alcohol

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Burada, etkili bir hidroliz ve bir Ni-Schiff-baz kompleksi izole edilen bir amino asidin daha sonra Fmoc koruma sunmaktadır. asit-labil yan zincir koruma gruplarının tutma gerekli olduğunda burada sunulan Hidroliz koşulları kullanılmak üzere uygundur. Bu teknik, doğal olmayan amino asit çeşitli substratlar için adapte edilebilir.

Koruma Grupları aside dayanıksız Saklanmasına için uygun bir Ni-Schiff-Base hidrolizi Kompleksi kullanma Koşullar

Burada, bir tekniği, spectroscopically karbon elektrot, doğrudan elektrokimyasal kontrol altında incelenecektir immobilize Redoks proteinler sağlar protein film kızılötesi elektrokimya açıklayın. Kızılötesi spectra tek protein örneği bir mesafeden uygulanan potansiyelleri ve çözüm koşulları çeşitli altında kaydedilir.

Protein Film kızılötesi elektrokimya H2 oksidasyon çalışma için [NiFe] Hydrogenase tarafından gösterdi

İyonik Sıvılar içinde Bimetalik nano tanecikleri sentezi ve onların katalitik doymamış aldehitler seçici hidrojenasyon içinde test prosedürü için bir protokol açıklanmıştır.

Bimetal Pt/Sn tabanlı nano tanecikleri İyonik Sıvılar içinde sentezi

Trikarbonil(tropon)demire amin nükleofillerin eklenmesi ve ortaya çıkan komplekslerin sonraki demetallasyonu için temsili deneysel prosedürler ayrıntılı olarak sunulmuştur.

Trikarbonil(tropon) demir ilerbulu 6-aminosiklohepta-2,4-dien-1-bir Türevlerinin hazırlanması

Viral poliproteine gömülü homolog konak-patojen protein dizilerinin (SSHHPS) kısa uzantılarını belirlemek için genel bir protokol sayılmiyoruz. SSHHPS viral proteazlar tarafından tanınan ve çeşitli Grup IV virüsler tarafından belirli konak proteinlerin hedefli imha doğrudan.

Grup IV Viral SSHHPS In Vitro ve In Silico Yöntemleri Kullanılarak Analizi

Nötron proteini kristalografisi, hidrojen atomlarının lokalizasyonuna izin veren ve böylece protein fonksiyonunun önemli mekanistik ayrıntılarını sağlayan yapısal bir tekniktir. Burada bir protein kristali montajı için iş akışını sunuyoruz, nötron kırınım veri toplama, yapı iyileştirme ve nötron saçılma uzunluğu yoğunluk haritalarının analizi.

Protein Yapılarında Hidrojen Atomlarının Modellenmesi için Nötron Kristalografisi Veri Toplama ve İşleme

Bu çalışma, respirometrik ve enzimatik testler yoluyla mitokondriyal fonksiyon üzerindeki ksenobiyotik etkileri incelemek için bir metodoloji sunmaktadır. Çeşitli türlerde elektron taşıma zinciri modülasyonunu inceleyerek, böcek vektörü kaynaklı hastalıklara karşı hedeflenen biyopestisit gelişimi için içgörüler sunar.

İzole Mitokondride Ksenobiyotik Taşınma ve Etkilerinin Ortaya Çıkarılması: Respirometrik ve Enzimatik Testlerden Görüşler

Membran-gömülü protein etki arasındaki etkileşimler biyofiziksel ve biyokimyasal çalışmalarda uygun çalışma malzemesi elde edilir ilki birçok teknik sorunlarla karşı karşıya. Bu makale, çözelti nükleer manyetik rezonans (NMR) ve diğer analitik uygulamalar tarafından yapısal analizi için uygun olan disülfid stabilize transmembran peptid komplekslerini üretme ve arıtma için bir protokol açıklanmaktadır.

Yapısal Çalışmaları üretimi disülfid stabilize Transmembran Peptit Kompleksi

Cu (I) içeren bir metalokoperon model peptidin NMR çözelti yapısı belirlendi ve numune hazırlama ve 1D ve 2D veri toplamadan üç boyutlu bir yapıya kadar ayrıntılı bir protokol açıklandı.

Peptit-Metal Komplekslerinin Yapı ve Koordinasyon Tayini 1D ve 2D 1H NMR Kullanılarak

Havaya duyarlı bir titanyum ve vanadyum anti-kanser ajanlarının sentezi için bir yöntem olup, MTT testi ile insan kanser hücre çizgisi karşı sitotoksik aktivitenin değerlendirilmesi ile birlikte tarif edilmiştir.

MTT deneyi ile sentez ve Sitotoksisite Değerlendirilmesi: Anticancer Metal Kompleksleri

Keşfedin karaciğer alkol dehidrogenaz için SNS kıskaç kobalt(II) model komplekslerinin sentez ve tek kristal büyütme yöntemini. Bu güvenilir teknik koordinasyon bileşikleri hazırlamada uygulanabilir.

Karaciğer Alkol Dehidrogenaz SNS Kobalt(II) Kıskaç Model Kompleksleri Hazırlanması

Daha fazla video keşfet