Name: Fonksiyonel Çalışma için Ex Vivo Basınçlı Hipokampal Kapiller-Parenkimal Arteriyol Hazırlığı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: Öğrenin, fare hipokampusundan arteriyol ve kapiller izolasyonu için ekz vasküler hazırlama yöntemini. Bu teknik, basınç miyografisi ve immünofloresan analizlerle damar sinyalini çevre doku etkileri olmadan incelemenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Jules Morin'e el yazması hakkındaki anlayışlı yorumları için teşekkür etmek isterler. Bu araştırma, KAR Amacı Gütmeyen Umut Organizasyonumuz, Kadın Sağlığı ve Araştırma Merkezi ve NHLBI R01HL136636 (FD) tarafından finanse edilmiştir.

Tüm deneyler Colorado Üniversitesi, Anschutz Tıp Kampüsü Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı ve Ulusal Sağlık Enstitüleri yönergelerine göre yapıldı.
1. Çözümler
<ol><li>Diseksiyon için MOPS-tamponlu tuzlu kullanın ve numuneleri kullanılmadan önce 4 °C'de tutun. Çözeltiye gaz yapmayın. Aşağıdaki bileşimi ile MOPS tamponlu tuzlu hazırlayın: 135 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM KH2PO4, 1 mM MgSO4, 2.5 mM CaCl2, 5 mM glikoz, 3 mM MOPS, 0.02 mM EDTA, 2 mM piruvat, 10 mg/mL büyükbaş serum albumin, pH 7.3 4 °C.</li>
	<li>Banyo çözeltisi ve pipet çözeltisi olarak yapay beyin omurilik sıvısı (aCSF) kullanın. Gaz hem aCSF ve Ca2 +-% 5 CO2ile ücretsiz aCSF , % 20 O2, ve N2 dengesi. Aşağıdaki bileşimi ile çözelti hazırlayın: 125 mM NaCl, 3 mM KCl, 26 mM NaHCO3, 1.25 mM NaH2PO4, 1 mM MgCl2, 4 mM glikoz, 2 mM CaCl2, pH 7.3 (% 5 CO2ile havalandırma ile , 20% O2, ve N2 dengesi).</li>
	<li>Nominal ca2+-free aCSF (0 mM [Ca2+]o, 5 mM EGTA) cinsinden maksimal dilatasyonu elde edin.</li>
</ol>2. Organ odası hazırlığı
<ol><li>Borosilikat cam kılcal damarları (dış çap = 1,2 mm; iç çap = 0,69 mm; uzunluk = 10 cm) bir cam çekmeceye yerleştirin. Bir ucunda uzun, ince bir ucu yapmak için kılcal çekin.</li>
	<li>Odanın bir tarafına, luminal damar basınç minyatür peristaltik pompa bağlanabilir bir kanül ekleyin. Bir diseksiyon mikroskobu altında, kanülün ucunu kırın, böylece ilgi kabına uyacak kadar küçük, ancak çözeltilerin uçtan akmasına izin verecek kadar büyüktür. Ucun yaklaşık 10-15 μm çapında olduğundan emin olun.</li>
	<li>Kanülleri bir şırınga kullanarak oksijenli aCSF ile 0,22 μm'lik bir filtre ile doldurun. Kanülde hava kabarcığı veya enkaz olmadığından emin olun.</li>
	<li>Odanın karşı tarafına iki kanül daha ekleyin. Onların ipuçlarını kırmak etmeyin.</li>
</ol>3. Hipokampus diseksiyon ve izolasyon
<ol><li>Ötenazi ve bir farenin kafasını kesmek. Bu deney için, erkekler ve dişiler arasındaki farkları karşılaştırmak için 8 haftalık bir C57BL6/J farekullanın. Fareye pentobarbital enjekte edin ve cerrahi makasla kafasını kesin.</li>
	<li>Küçük diseksiyon makasları kullanarak, başının üst kısmında orta hat boyunca deri kesti. Deriyi yanlara doğru hareket ettirin.</li>
	<li>Kafatasının kaudal tarafında başlayarak, koku ampulleri ulaşılır kadar orta hat boyunca kafatası kesti. Beyin açığa çıkana kadar kafatasının bazı kısımlarını çıkarın.</li>
	<li>Farenin burnunun yanından başlayarak yavaşça beyni çıkarın. Koku ampulleri, kranial sinirler ve omurilik küçük diseksiyon makas ile yapıları keserek beyin ayırın.</li>
	<li>Beyni tamamen batırmak için yeterli MOPS çözeltisi ile bir diseksiyon plakayerleştirin. Bir diseksiyon mikroskobu kullanarak, ventral tarafı aşağı bakan diseksiyon plakasının ortasına beyin yerleştirin.</li>
	<li>Jilet kullanarak, uzunlamasına çatlak boyunca beyni ikiye böl. Keskin kenar, diseksiyon plakasının altına paralel olacak şekilde bıçağı tutun. Bıçağı tek vuruşta beyne doğru bastır. Bir yarımküreyi plakanın kenarına doğru hareket ettirin.</li>
	<li>Her yarımküre için ayrı ayrı veya paralel olarak aşağıdaki adımları gerçekleştirin.<ol>
<li>Orta çizgi aşağı bakacak şekilde plakanın ortasına bir yarımküre yerleştirin. Sonra beyincik ve beyin sapı kaldırmak için enine çatlak boyunca kesmek için jilet kullanın. Bıçağı dokuyu doğruit.</li>
		<li>Hemisferi medial tarafın yukarı bakacak şekilde döndürün (Şekil 1A). Yerde beyin tutmak için bir spatula kullanın. İkinci bir spatula kullanarak, hipokampus kapsayan talamus, septum ve hipotalamus kaldırmak için corpus callosum ve kepçe altında alt ucu ekleyin (Şekil 1B).</li>
		<li>Hipokampus artık serebrum arka tarafında yakın kavisli bir yapı olarak görünür olduğundan emin olun. Serebrumu yerinde tutmak için bir spatula kullanarak, hipokampusu serebrumdan çıkarmak için ikinci spatulayı kullanın (Şekil 1C).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hipokampi'yi MOPS çözeltisi ile yarı yolda dolu yeni bir diseksiyon plakasına aktarın. Beynin geri kalanını at.</li>
</ol>4. Hipokampal arteriyol izolasyonu
<ol><li>Her hipokampus için aşağıdaki adımları tamamlayın.<ol>
<li>Bölümün her iki ucunda küçük iğneler kullanarak hipokampi birini sabitle. Hipokampal arter yukarı bakıyor.</li>
		<li>Çok keskin forceps kullanarak, yavaşça hipokampus küçük bölümleri germek. Bu arteriyolçevreleyen doku gevşetmek, daha kolay onları incelemek için yapım.</li>
		<li>Dış enine arter initeetmek için dorsal hipokampal doku ile arama (Şekil 1C)16,27.</li>
		<li>Yavaşça dış enine arter kapmak ve yavaş yavaş hipokampus CA3 bölge perfusing arteriyol ve kılcal toplamak için doku uzak çekin.</li>
		<li>Dokudan çıkarılacak başka damar lar kalmadıktan sonra hipokampi'yi atın. Kullanımda değilken plakalar buz üzerinde damarları tutun.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Hipokampal kapiller-parenkimal arteriyol kanülülasyonu
<ol><li>Kılcal damarlar ile biten bir dalı ile bir arteriyol bulun. Organ odasına aktarın. Arteriyol tam olarak genişlendiğinde yaklaşık 15-30 μm olduğundan emin olun (Şekil 1D).</li>
	<li>Kanül ucunu hedef alanın altındaki arteriole duvarından iterek kan damarını dikkatlice monte edin. Dikkatle kravat yerleştirmek için yeterli doku olana kadar kanül üzerine gemi kaydırın.</li>
	<li>Kan damarı ve kanül üzerine sığar, böylece 12-0 naylon dikişile gevşek bir düğüm yapın. Bağları güvence altına almak için yarım otostop çeldiğini kullan. Sonra düğüm sıkmak ve kanül arteriol güvenli uçları çekin. Yavaşça forceps ile çekerek kravat altında herhangi bir yabancı gemi dalları çıkarın.</li>
	<li>Başka bir kravat yapmak ve mühür için arteriole diğer ucunda güvenli.</li>
	<li>Odanın altındaki kapak kaymasına karşı düz olana kadar bağlı olan kanülile kanülü indirin. Kanülçok fazla düşürmek için dikkatli olun ya da kıracak.</li>
	<li>Odanın karşı tarafında bir kanül kullanarak, aşağı böylece noktası arteriol sonunda kravat aşağı pins.</li>
	<li>Kapiller dalı kapak kaymasına sabitlemek için üçüncü kanülkullanın. Kılcal damarların uçlarını açıkta bırakarak ucu dalanın ucuna yakın yerleştirin (kanülün altına değil).</li>
</ol>6. Basınç miyografisi
<ol><li>Kayıt yazılımıyla odayı diseksiyon alanından mikroskoba taşıyın.</li>
	<li>Giriş ve çıkış borularını perfüzyon için hazneye bağlayın. Perfüzyonu ısıtmalı aCSF (37 °C) ile 4 mL/dk akış hızında başlatın.</li>
	<li>Basınçlı kanülü basınç transdüseri ile eşleştirilmiş peristaltik bir pompaya takın ve iç basıncı 20 mm Hg'ye getirin.</li>
	<li>Kayıt yazılımını başlatın. Mümkün olan en net görüntüyü elde etmek için mikroskop ve görüntüleme ayarlarını ayarlayın. Ayarlar algılama yazılımı için optimize edildikten sonra kaydı başlatın.</li>
	<li>Bir kenar algılama yazılımı ile arterçapı nı kaydederken damar Basıncını 40 mm Hg'ye kadar artırın.</li>
	<li>~ 15-20 dakika aCSF ile oda dışında MOPS çözeltisi yıkamak için izin ve HiCaPA hazırlık sağlamak ve miyojenik sesi geliştirmek.</li>
	<li>Bir geminin canlılığını test etmek için banyo perfüzyonuna 1 μM NS309 çözeltisi uygulayın (Bkz. Şekil 2A,B ve Temsili Sonuçlar bölümü). Arterioler segment daha önce açıklandığı gibi yaklaşık% 30-40 miyojenik sesi gösteren, büyütmek gerekir3,14,20.</li>
</ol>7. Kapiller uçların fokal stimülasyonu
<ol><li>Arteriyol için temel tonu kurulduktan ve endotel fonksiyonu değerlendirildikten sonra, kapiller stimülasyon yanıtını test edin.</li>
	<li>Bir cam çekmece kullanarak, bir ucunda ince bir nokta olacak şekilde kanüller olun. Test edilen ilacın 5 psi'de uçtan sorunsuz bir şekilde akabilmesi için bir kanülden ucu kırın.</li>
	<li>Kanülü ilgi ilaç çözeltisi ile doldurun ve mikroskopbağlı bir 3 eksenli mikromanipülatör ekleyin. Boruyu basınç çıkarma sisteminden kanüle bağlayın.</li>
	<li>Yavaş yavaş kılcal damarlar yakınındaki banyo içine kanül aşağı, oda içinde gemi veya donanım herhangi bir parçası vurmak için dikkatli olmak. Onlara dokunmadan kılcal damarların uçlarının yanındaki kanülün ucunu manevra. Kanülün ucunu, kanül sızıntıları halinde uyarılmasını önlemek için kapağın hemen dışında tutun.</li>
	<li>Kılcal damarları uyarmaya hazır olduğunuzda, kanülleri kapak kaymasına ve kılcal damarların hemen yanına indirin. Basınç ejeksiyon sistemini istenilen fırlatma süresiyle (burada 20 s) etkinleştirin. Stimülasyon bittikten sonra, daha fazla uyarılma önlemek için biraz kanül yükseltmek.</li>
	<li>Gerektiğinde uyarımı tekrarlayın. Farklı ilaç bileşikleri test etmek için basınç ejeksiyon sistemi kanül değiştirin.</li>
	<li>Sadece kılcal damarların uyarıldığını doğrulamak için kanülü 1 μM NS309 çözeltisi ile doldurun ve yukarıdaki adımları tekrarlayın. NOT: Kapiller endotel hücreleri NS309 tarafından aktive K+ kanalları ifade etmez, bu nedenle arteriyol uyarılma yanıt vermemelidir. Arteriol genişlerse kanülyeniden konumlandırılmalı veya deliğin çapının daha küçük olması gerekir (Bkz. Şekil 2A,B ve Temsili Sonuçlar bölümü).</li>
</ol>

<ol><li>Nishimura, N., Schaffer, C. B., Friedman, B., Lyden, P. D., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penetrating+arterioles+are+a+bottleneck+in+the+perfusion+of+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Penetrating arterioles are a bottleneck in the perfusion of neocortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (1), 365-370 (2007).</li>
<li>Shih, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+and+fragile+aspects+of+cortical+blood+flow+in+relation+to+the+underlying+angioarchitecture%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation+%28New+York%2C+N.Y.%3A1994%29%22%5BJournal%5D)">Robust and fragile aspects of cortical blood flow in relation to the underlying angioarchitecture.</a> Microcirculation (New York, N.Y.:1994). 22 (3), 204-218 (2015).</li>
<li>Cipolla, M. J., Smith, J., Kohlmeyer, M. M., Godfrey, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SKCa+and+IKCa+Channels%2C+Myogenic+Tone%2C+and+Vasodilator+Responses+in+Middle+Cerebral+Arteries+and+Parenchymal+Arterioles%3A+Effect+of+Ischemia+and+Reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">SKCa and IKCa Channels, Myogenic Tone, and Vasodilator Responses in Middle Cerebral Arteries and Parenchymal Arterioles: Effect of Ischemia and Reperfusion.</a> Stroke. 40 (4), 1451-1457 (2009).</li>
<li>Nystoriak, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundamental+increase+in+pressure-dependent+constriction+of+brain+parenchymal+arterioles+from+subarachnoid+hemorrhage+model+rats+due+to+membrane+depolarization%5BTitle%5D)+AND+%22AJP%3A+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Fundamental increase in pressure-dependent constriction of brain parenchymal arterioles from subarachnoid hemorrhage model rats due to membrane depolarization.</a> AJP: Heart and Circulatory Physiology. 300 (3), H803-H812 (2011).</li>
<li>Dabertrand, F., Nelson, M. T., Brayden, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acidosis+dilates+brain+parenchymal+arterioles+by+conversion+of+calcium+waves+to+sparks+to+activate+BK+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Acidosis dilates brain parenchymal arterioles by conversion of calcium waves to sparks to activate BK channels.</a> Circulation Research. 110 (2), 285-294 (2012).</li>
<li>Dabertrand, F., Nelson, M. T., Brayden, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ryanodine+receptors%2C+calcium+signaling%2C+and+regulation+of+vascular+tone+in+the+cerebral+parenchymal+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation+%28New+York%2C+N.Y.%3A1994%29%22%5BJournal%5D)">Ryanodine receptors, calcium signaling, and regulation of vascular tone in the cerebral parenchymal microcirculation.</a> Microcirculation (New York, N.Y.:1994). 20 (4), 307-316 (2013).</li>
<li>Cipolla, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+pressure-induced+tone+in+rat+parenchymal+arterioles+vs.+middle+cerebral+arteries%3A+role+of+ion+channels+and+calcium+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Increased pressure-induced tone in rat parenchymal arterioles vs. middle cerebral arteries: role of ion channels and calcium sensitivity.</a> Journal of Applied Physiology. 117 (1), 53-59 (2014).</li>
<li>De Silva, T. M., Modrick, M. L., Dabertrand, F., Faraci, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+Cerebral+Arteries+and+Parenchymal+Arterioles+with+Aging%3A+Role+of+Rho+Kinase+2+and+Impact+of+Genetic+Background%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Changes in Cerebral Arteries and Parenchymal Arterioles with Aging: Role of Rho Kinase 2 and Impact of Genetic Background.</a> Hypertension. 71 (5), 921-927 (2018).</li>
<li>Shih, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+smallest+stroke%3A+occlusion+of+one+penetrating+vessel+leads+to+infarction+and+a+cognitive+deficit%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The smallest stroke: occlusion of one penetrating vessel leads to infarction and a cognitive deficit.</a> Nature Neuroscience. 16 (1), 55-63 (2013).</li>
<li>Koide, M., et al. The yin and yang of KV channels in cerebral small vessel pathologies. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKoide%2C+M+%22Microcirculation+%28New+York%2C+N.Y.%3A1994%29%22">Microcirculation (New York, N.Y.:1994)</a>. 25 (1), (2018).</li>
<li>Girouard, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytic+endfoot+Ca2%2B+and+BK+channels+determine+both+arteriolar+dilation+and+constriction%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Astrocytic endfoot Ca2+ and BK channels determine both arteriolar dilation and constriction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (8), 3811-3816 (2010).</li>
<li>Dabertrand, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostaglandin+E2%2C+a+postulated+astrocyte-derived+neurovascular+coupling+agent%2C+constricts+rather+than+dilates+parenchymal+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Prostaglandin E2, a postulated astrocyte-derived neurovascular coupling agent, constricts rather than dilates parenchymal arterioles.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 33 (4), 479-482 (2013).</li>
<li>Longden, T. A., Dabertrand, F., Hill-Eubanks, D. C., Hammack, S. E., Nelson, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-induced+glucocorticoid+signaling+remodels+neurovascular+coupling+through+impairment+of+cerebrovascular+inwardly+rectifying+K%2B+channel+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Stress-induced glucocorticoid signaling remodels neurovascular coupling through impairment of cerebrovascular inwardly rectifying K+ channel function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (20), 7462-7467 (2014).</li>
<li>Dabertrand, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potassium+channelopathy-like+defect+underlies+early-stage+cerebrovascular+dysfunction+in+a+genetic+model+of+small+vessel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Potassium channelopathy-like defect underlies early-stage cerebrovascular dysfunction in a genetic model of small vessel disease.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (7), E796-E805 (2015).</li>
<li>Pires, P. W., Sullivan, M. N., Pritchard, H. A. T., Robinson, J. J., Earley, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unitary+TRPV3+channel+Ca2%2B+influx+events+elicit+endothelium-dependent+dilation+of+cerebral+parenchymal+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22AJP%3A+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Unitary TRPV3 channel Ca2+ influx events elicit endothelium-dependent dilation of cerebral parenchymal arterioles.</a> AJP: Heart and Circulatory Physiology. 309 (12), H2031-H2041 (2015).</li>
<li>Johnson, A. C., Cipolla, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+hippocampal+arteriole+structure+and+function+in+a+rat+model+of+preeclampsia%3A+Potential+role+in+impaired+seizure-induced+hyperemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Altered hippocampal arteriole structure and function in a rat model of preeclampsia: Potential role in impaired seizure-induced hyperemia.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 37 (8), 2857-2869 (2016).</li>
<li>Johnson, A. C., Miller, J. E., Cipolla, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+impairment+in+spontaneously+hypertensive+rats+is+associated+with+hippocampal+hypoperfusion+and+hippocampal+vascular+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Memory impairment in spontaneously hypertensive rats is associated with hippocampal hypoperfusion and hippocampal vascular dysfunction.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. , (2019).</li>
<li>Iadecola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Neurovascular+Unit+Coming+of+Age%3A+A+Journey+through+Neurovascular+Coupling+in+Health+and+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The Neurovascular Unit Coming of Age: A Journey through Neurovascular Coupling in Health and Disease.</a> Neuron. 96 (1), 17-42 (2017).</li>
<li>Roy, C. S., Sherrington, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+Regulation+of+the+Blood-supply+of+the+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">On the Regulation of the Blood-supply of the Brain.</a> The Journal of Physiology. 11 (1-2), 85-158 (1890).</li>
<li>Longden, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capillary+K%2B-sensing+initiates+retrograde+hyperpolarization+to+increase+local+cerebral+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Capillary K+-sensing initiates retrograde hyperpolarization to increase local cerebral blood flow.</a> Nature Neuroscience. 20 (5), 717-726 (2017).</li>
<li>Harraz, O. F., Longden, T. A., Dabertrand, F., Hill-Eubanks, D., Nelson, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+GqPCR+activity+controls+capillary+electrical+signaling+and+brain+blood+flow+through+PIP2+depletion%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Endothelial GqPCR activity controls capillary electrical signaling and brain blood flow through PIP2 depletion.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (15), E3569-E3577 (2018).</li>
<li>Harraz, O. F., Longden, T. A., Hill-Eubanks, D., Nelson, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PIP2+depletion+promotes+TRPV4+channel+activity+in+mouse+brain+capillary+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">PIP2 depletion promotes TRPV4 channel activity in mouse brain capillary endothelial cells.</a> eLife. 7, 351(2018).</li>
<li>Hodgkin, A. L., Huxley, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+description+of+membrane+current+and+its+application+to+conduction+and+excitation+in+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">A quantitative description of membrane current and its application to conduction and excitation in nerve.</a> The Journal of Physiology. 117 (4), 500-544 (1952).</li>
<li>Ballanyi, K., Doutheil, J., Brockhaus, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+potentials+and+microenvironment+of+rat+dorsal+vagal+cells+in+vitro+during+energy+depletion%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Membrane potentials and microenvironment of rat dorsal vagal cells in vitro during energy depletion.</a> The Journal of Physiology. 495 (Pt 3), 769-784 (1996).</li>
<li>Filosa, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+potassium+signaling+couples+neuronal+activity+to+vasodilation+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Local potassium signaling couples neuronal activity to vasodilation in the brain.</a> Nature Neuroscience. 9 (11), 1397-1403 (2006).</li>
<li>Attwell, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+and+neuronal+control+of+brain+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Glial and neuronal control of brain blood flow.</a> Nature. 468 (7321), 232-243 (2010).</li>
<li>Coyle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+patterns+of+the+rat+hippocampal+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Vascular patterns of the rat hippocampal formation.</a> Experimental Neurology. 52 (3), 447-458 (1976).</li>
<li>Wang, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+inhibition+of+the+K%28ir%292+family+of+inward+rectifier+potassium+channels+by+a+small+molecule+probe%3A+the+discovery%2C+SAR%2C+and+pharmacological+characterization+of+ML133%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Selective inhibition of the K(ir)2 family of inward rectifier potassium channels by a small molecule probe: the discovery, SAR, and pharmacological characterization of ML133.</a> ACS Chemical Biology. 6 (8), 845-856 (2011).</li>
<li>Pires, P. W., Dabertrand, F., Earley, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Cannulation+of+Cerebral+Parenchymal+Arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and Cannulation of Cerebral Parenchymal Arterioles.</a> Journal of Visualized Experiments. (111), 1-11 (2016).</li>
<li>Bayliss, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+local+reactions+of+the+arterial+wall+to+changes+of+internal+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">On the local reactions of the arterial wall to changes of internal pressure.</a> The Journal of Physiology. 28 (3), 220-231 (1902).</li>
<li>Montagne, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+breakdown+in+the+aging+human+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier breakdown in the aging human hippocampus.</a> Neuron. 85 (2), 296-302 (2015).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+heparin+oligosaccharides+rapidly+target+the+hippocampus+in+sepsis%2C+potentially+impacting+cognitive+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Circulating heparin oligosaccharides rapidly target the hippocampus in sepsis, potentially impacting cognitive functions.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (19), 9208-9213 (2019).</li>
<li>Kim, K. J., Filosa, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+in+vitro+approach+to+study+neurovascular+coupling+mechanisms+in+the+brain+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Advanced in vitro approach to study neurovascular coupling mechanisms in the brain microcirculation.</a> The Journal of Physiology. 590 (7), 1757-1770 (2012).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Bu el yazmasında açıklanan basınçlı HiCaPA (hipokampal kapiller-parenkimal arteriyol) hazırlığı, parenkimal arteriyol29'u izole etmek, basınçlandırmak ve çalışma prosedürümüzün bir uzantısıdır29. Yakın zamanda beyin kapiller endotel hücrelerinde Kir2.1 kanallarının sinirsel aktivasyonile ilişkili [K+]o hissartışları olduğunu ve yukarı yayılan arteriyoles20'yigenişleten bir hiperpolarize sinyal ürettiğini bildirdik. Kılcal damarlar için bu daha önce bek...

Beyin yüzeyinde pial dolaşım çok çalışmanın nesnesi olmuştur, kısmen deneysel erişilebilirlik nedeniyle. Ancak serebral vaskülatürün topolojisi farklı bölgeler oluşturur. Kan akışını yönlendirmek için önemli kapasite ile anastomozlar açısından zengin sağlam pial ağ aksine, intraserebral parenkimal arterioller (PAs) mevcut sınırlı teminat kaynağı, her biri sinirdokusununayrı bir hacim perfüzyon 1,2. Bu, benzersiz fizyolojik özellikleri ile birlikte3,4,5,6,7,8, intraserebral arterioller serebral kan akımı için önemli bir site yapar kan akışı üzerinde bir darboğaz etkisi oluşturur (CBF) yönetmelik9,10. Izolasyon ve PAs cannülasyonu doğasında teknik zorluklara rağmen, son on yılda basınçlıkaplar 11 ,12,13,14,15,16,17kullanarak ex vivo fonksiyonel çalışmalarda artan bir ilgi gördü. Bu artan ilgi nin nedenlerinden biri nörovasküler kaplin (NVC), beyin fonksiyonel hiperemi18sürdüren mekanizma üzerinde yürütülen önemli araştırma çabasıdır.
Bölgesel olarak, CBF hızla lokal nöral aktivasyon19aşağıdaki artabilir. NVC'yi kontrol eden hücresel mekanizmalar ve sinyal özellikleri tam olarak anlaşılamamıştır. Ancak, nöral aktivite algılama ve yukarı arteriyol20,21,22dilate bir hiperpolarize elektrik sinyali içine çevirerek NVC sırasında beyin kılcal damarları için daha önce beklenmedik bir rol tespit . Eylem potansiyelleri23,24 ve astrositik endfeet üzerinde büyük iletkenlik Ca2 +aktive K+ (BK) kanallarının açılması25,26 interstisyel potasyum iyon konsantrasyonu artırmak [K+]o, hangi kılcal damar damar endotel güçlü içe doğrulayıcı K+ (Kir) kanallarının aktivasyonu ile sonuçlanır. Bu kanal harici K+ tarafından değil, aynı zamanda hiperpolarizasyon kendisi tarafından aktive edilir. Boşluk kavşakları ile yayılan, hiperpolarize akım sonra arteriyol kadar komşu kapiller endotel hücrelerinde yeniler, nerede miyosit gevşeme ve CBF artış nedenolur 20,21. Bu mekanizmanın çalışması bize vazoaktif ajanlar ile kapiller stimülasyon sırasında arterioler çapı ölçmek için basınçlı kapiller-parankimal arteriyol (CaPA) hazırlık geliştirmek için yol açtı. CaPA preparat bozulmamış bir kanüle intraserebral arteriyol segmenti oluşur, aşağı kapiller ramification. Kılcal uçlar bir mikropipet ile oda cam alt karşı sıkıştırılır, hangi tıkabasır ve tüm vasküler oluşumu stabilize20,21.
Daha önce fare korteks20,21 ve sıçan amigdala13 ve hipokampus16,17arteriyollerden CaPA preparatları görüntüleyerek enstrümantal yenilikler yaptık. Hipokampal vaskülatür patolojik koşullara yatkınlığı nedeniyle daha fazla dikkat alır gibi, burada fare hipokampus CaPA hazırlık için bir adım adım yöntem sağlamak (HiCaPA) sadece fonksiyonel NVC çalışmalarda değil, aynı zamanda moleküler biyoloji, immünokimya ve elektrofizyoloji kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>0.22 ve mikro; m Şırınga Filtreleri</td><td>CELLTREAT Bilimsel Ürünler</td><td>229751</td><td></td></tr><tr><td>12-0 Naylon (12cm) Siyah</td><td>Mikrocerrahi Aletleri, Inc</td><td>S12-0 NAYLON</td><td></td></tr><tr><td>Otomatik Sıcaklık Kontrol Cihazı</td><td>Warner Instruments</td><td>TC-324B</td><td></td></tr><tr><td>Borosilikat Cam OD: 1.2 mm, İç Çap: 0.68 mm</td><td>Sutter Instruments</td><td>B120-69-10</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 dihidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3881</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glukoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5767</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Kapsamı</td><td>Olympus</td><td>SZ11</td><td></td></tr><tr><td>ECOLINE VC-MS/CA 4-12 &mdash; Sürücülü ve MS/CA 4-12 pompa kafalı komple pompa</td><td>Ismatec</td><td>ISM 1090</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4378</td><td></td></tr><tr><td>İnce Makas - Keskin</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>14063-09</td><td></td></tr><tr><td>Sıralı Su Isıtıcı</td><td>Warner Instruments</td><td>SH-27B</td><td></td></tr><tr><td>Integra&trade; Milteks ve ticaret; Doku Forseps</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-117</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5379</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat heptahidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1880</td><td></td></tr><tr><td>MgCl Susuz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>Mikromanipülatör</td><td>Narishige</td><td>MN-153</td><td></td></tr><tr><td>ML 133 hidroklorür</td><td>Tocris</td><td>4549</td><td></td></tr><tr><td>MOPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1254</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9625</td><td></td></tr><tr><td>NaH2P<O>sub</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8875</td><td></td></tr><tr><td>NS309</td><td>Tocris</td><td>3895</td><td></td></tr><tr><td>Picospritzer III - Hücre İçi Mikroenjeksiyon Dağıtım Sistemleri, 2 kanallı</td><td>Parker Hannifin</td><td>052-0500-900</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltik Pompalı Basınç Servo Kontrol</td> Cihazı <td>Yaşam Sistemleri Enstrümantasyonu</td><td>PS-200</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum piruvat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3662</td><td></td></tr><tr><td>Süper İnce Forseps</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Makas - Keskin-Künt</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>14001-13</td><td></td></tr><tr><td>Dikey Mikropipet Çektirme</td><td>Narishige</td><td>PP-83</td><td></td></tr></tbody></table>

fonksiyonel Çalışma için ex vivo basınçlı hipokampal kapiller-parenkimal arteriyol hazırlığı

Ex Vivo Pressurized Hippocampal Capillary-Parenchymal Arteriole Preparation for Functional Study

İnce davranışsal değişikliklerden geç evre demansa kadar, vasküler kognitif bozukluk genellikle serebral iskemi sonrasında gelişir. İnme ve kardiyak arrest son derece cinsel dimorfik hastalıklardır, ve her ikisi de serebral iskemi neden. Ancak, vasküler bilişsel bozukluğu anlamada ilerleme, ve daha sonra cinsiyete özgü tedaviler geliştirme, kısmen fonksiyonel çalışmalarda fare modellerinden beyin mikrosirkülasyon soruşturma zorlukları ile sınırlı olmuştur. Burada, fare beyninden ex vivo hipokampal kapiller-parenkimal arteriyol (HiCaPA) preparatında kapiller-arteriyol sinyalini incelemek için bir yaklaşım salıyoruz. Kapiller stimülasyona yanıt olarak arterioler çapı ölçmek için mikrosirkülasyonu nasıl izole edebileceğimizi, kanülasyonu nasıl bastırabileceğimizi ve basınçlendirebileceğimizi anlatıyoruz. Biz uygun fonksiyonel kontroller HiCaPA hazırlık bütünlüğünü doğrulamak ve tipik sonuçlar görüntülemek için kullanılabilir göstermek, bir nörovasküler kaplin ajan olarak potasyum test ve Kir2 içe doğrulayan potasyum kanal ailesinin son karakterize inhibitörü etkisi de dahil olmak üzere, ML133. Ayrıca, erkek ve dişi farelerden elde edilen preparatlarda yanıtları karşılaştırıyoruz. Bu veriler fonksiyonel araştırmaları yansıtırken, yaklaşımımız moleküler biyoloji, immünkimya ve elektrofizyoloji çalışmalarında da kullanılabilir.

Endotel küçük iletkenliği (SK) ve ara iletkenlik (IK) Ca2+duyarlı K+ kanalları PA'ların çapı üzerinde dilatrasyon etkisi uygular. Sentetik IK ve SK kanal agonisti olan 1 μM NS309'un banyo uygulaması maksimal genişlemeye neden olur(Şekil 2A,B). Ancak, kapiller endotel hücreleri IK ve SK kanalları eksikliği ve NS30920yanıt olarak hiperpolarize vermedi. Sonuç olarak, fokal basınç ejeksiyonu (20 s, 5 ...

Mevcut el yazması, hipokampal arteriyol ve kılcal damarları fare beyninden nasıl izole edilebildiğini ve basınç miyografisi, immünoresans, biyokimya ve moleküler çalışmalar için nasıl basınçlandırılabildiğini ayrıntılarıyla anlatmaktadır.

Fonksiyonel Çalışma için Ex Vivo Basınçlı Hipokampal Kapiller-Parenkimal Arteriyol Hazırlığı

From subtle behavioral alterations to late-stage dementia, vascular cognitive impairment typically develops following cerebral ischemia. Stroke and ...

Yöntemimiz aksi takdirde hipokampus gibi Vivo görüntü zor olurdu yapılarda bulunan kan damarlarının çalışma sağlar. Kan damarları beyin dokusundan çıkarıldığı için, kılcal damarlar ve arteriyol arasındaki sinyal, çevredeki doku üzerinde hedef dışı etkisi olmadan incelenebilir. Hipokampus izole etmek için, fare başının üst kısmında orta hat boyunca deri kesmek ve yanlara deri taşımak için küçük diseksiyon makası kullanın.Kafatasının kaudal tarafında başlayarak, koku ampuller ulaşıncaya kadar orta hat boyunca kafatası kesilmiş ve beyin maruz kalana kadar kafatasının bölümlerini çıkarın. Farenin burun yakın başlayarak, yavaş yavaş koku ampuller, kranial sinirler ve omurilik kesmek için makas kullanarak, beyin kaldırın. Beyni batırın, Ventral tarafı MOPS Tamponlu Tuzlu'da, bir diseksiyon plakasının ortasına, ve plakayı bir diseksiyon mikroskobunun altına yerleştirin.Çanak alt paralel keskin kenar tutarak, tek bir vuruşta uzunlamasına çatlak boyunca beyni ikiye kesmek için jilet kullanın. Orta çizgi aşağı bakacak şekilde plakanın ortasına bir yarımküre yerleştirin ve beyincik ve beyin sapını çıkarmak için enine çatlak boyunca dokuyu düz itin. Medial tarafı yukarı bakacak şekilde yarımküreyi döndürün ve beyni yerinde tutmak için bir spatula kullanın.Corpus callosum altında ikinci bir spatula ucunu yerleştirin, hipokampus talamus kaldırmak için doku altında kepçe, septum, ve hipotalamus. Hipokampus artık serebrumun arka tarafına yakın kavisli bir yapı olarak görülmelidir. Serebrum yerinde tutmak için bir spatula kullanarak, serebrum hipokampus kepçe için ikinci spatula kullanın.Sonra yeni bir diseksiyon plaka sıyrık hippocampi aktarın, taze MOP çözeltisi ile yaklaşık yarım dolu. Hipokampal arter izolasyonu için, örnek hipokampal arter tarafını sabitlemek için bir hipokampusun her iki ucuna küçük iğneler yerleştirin. Çok keskin forceps kullanarak, yavaşça arteriyolçevreleyen doku gevşetmek için hipokampi küçük bölümleri germek.Ve dış enine arterleri tanımlamak için dorsal hipokampal dokuları arayın. Arter bulunduğunda, hipokampus dış enine arter kapmak ve yavaş yavaş arteriyol ve kılcal damarlar toplamak için doku dan çekin. Her hipokampus arter ayrı ayrı kaldırılır.Çıkarılacak başka damar olmadığında, örnekleri buza yerleştirin ve kalan hipokampal dokuyu atın. Arteriollerin kanülasyonu için, kapiller ile biten bir dal ile bulmak ve arteriol ve bir organ odasına arteriol yerleştirin. Kan damarını monte etmek için kanül ucunu hedef alanın altındaki arteriyol duvarından dikkatlice itin.Daha sonra, dikkatle kravat yerleştirmek için yeterli doku olana kadar kanül üzerine damar kaydırın. Kan damarı ve kanül üzerinde uyacak gevşek bir düğüm yapmak için 12-0 naylon dikişler kullanın ve bağları güvenli bir yarım aksaklık düğüm kullanın, kanül arteriol güvenli hale getirmek için düğüm sıkmak için uçları çekin. Kapatmak için arteriyol'un diğer ucuna bir kravat daha bağlayın.Odanın karşı tarafında, kanül noktası arteriol sonunda kravat aşağı pins kadar ikinci bir kanül düşürün. Daha sonra kılcal damarların uçlarını açıkta bırakarak ucu şubenin sonuna yakın bir yere yerleştirerek kılcal damar ı coverslip'e sabitlemek için üçüncü bir kanül kullanın. Beyin mikrosirkülasyonu zarif kırılgan olduğu gibi, arteriyollerin hayatta kalmasını sağlamak için kanülasyon işlemi sırasında damarların germe ve işleme en aza indirmek için emin olun.Basınç miyografi analizi için, odayı kayıt yazılımı ile hafif bir mikroskop aşamasına aktarın ve giriş ve çıkış borularını profüzyon için hazneye bağlayın. Dakikada dört mililitre akış hızında 37 santigrat derece Yapay beyin omurilik sıvısı ile profüzyon başlayın ve bir basınç transdüser ile eşleştirilmiş peristaltik pompa ya basınçlı kanül takın. İç basıncı 20 milimetre Merkür'e getirin ve kayıt yazılımını başlatın.Mümkün olan en net görüntüyü elde etmek için mikroskobu ve görüntü ayarlarını ayarlayın. Ve arteriyol çapı yaklaşık 15-30 mikrometre olup olmadığını kontrol etmek için Kenar Algılama yazılımı kullanın tam olarak genişlemiş olduğunda. Ayarlar optimize edildikten sonra, kayda başlayın ve damardaki damar içi basıncı 40 milimetreci Merkür'e kadar artırın ve edge detection yazılımı ile arteriyol çapını kaydedin.Sonra MOP çözeltisi yıkamak için 15 ila 20 dakika boyunca oda bol. Geminin canlılığını test etmek için, banyo profüzyonu için bir mikromolar NS309 çözeltisi uygulamak, arterioler segment iliklenmeli, gösteren 30-40%myojenik sesi. Arteriyol için temel sesi kurulduktan sonra, bir ucunda ince bir nokta ile kanüller yapmak için bir cam çekmece kullanın, ve her kanül ucu kırmak için forseps kullanın, böylece ilgi ilaç inç kare başına basınç beş kilo ucundan sorunsuz akabilir.Kanülleri ilgi çekici ilaçla doldurun. Ve kanülü mikroskoba bağlı üç eksenli bir mikromanipülatöre yükleyin. Basınç fırlatma sisteminden kanüle boru bağlayın ve yavaşça kapiller yakınındaki banyoiçine kanül aşağı, geminin veya odanın herhangi bir parçası vurmak için dikkat.Kılcal damarları uyarmak için, kapillerin hemen yanındaki kasayı kapağına indirin ve istenilen fırlatma süresiyle basınç çıkarma sistemini etkinleştirin. Uyarım sonunda, daha fazla uyarılma önlemek için biraz kanül yükseltmek. Sadece kılcal damarların uyarıldığını doğrulamak için, yeni kanülü bir mikromolar NS309 çözeltisi ile doldurun ve gösterildiği gibi kılcal damarları uyarın.Daha sonra kalsiyumsuz çözelti ile preparat yıkanarak maksimal vazodilatasyon elde edin. Bir mikromolar NS309 banyo uygulaması endotel kalsiyum duyarlı Potasyum kanalları nedeniyle arteriol yakın maksimal dilatasyon neden olur. Kapiller endotel hücreleri ancak, orta ve küçük iletkenlik kanalları eksikliği ve agonist yanıt olarak hiperpolarize yok, sonuç olarak, uyarıcı kapiller NS309 ile biter, upstream arterioler dilatasyona neden olmaz, Bu NS309 arteriole ulaşmadı gösterir, ve basınç ejeksiyon üzerine uygulanan bileşik sipac kısıtlama erişmek için bir kontrol olarak kullanılabilir.Gösterildiği gibi hipokampal kapiller parenkim parenkar arteriyol preparatının kullanılması, kılcal uçlara 10 milimolar Potasyum ile desteklenen yapay beyin-omurilik sıvısı uygulaması, erkek ve dişi farelerin preparatları arasında farklılık göstermeyen upstream arteriolar genişleme ile sonuçlanır. Ayrıca, Kir2 inhibitörü ML 133 eklenmesi, neredeyse kılcal damar genişlemesi ile ortadan kaldırır, yanıt olarak 10 milimolar Potasyum hem erkek hem de dişi farelerin preparatları. Kan vesssel montaj, zarar en aza indirmek için kan damarı ile doğrudan etkileşimleri sınırlamak, ve damarın canlılığını artırmak.Bir kez kan damarı izole edilmiştir, farklı ilaç bileşikleri test edilebilir veya kan damarı daha fazla oleküler biyoloji, immünkimya, veya elektrofizyoloji çalışmaları için işlenebilir.

ex-vivo-pressurized-hippocampal-capillary-parenchymal-arteriole

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Iskemik beyin hasarı birçok açıdan üreyen veriyor entorhino-hipokampal organotipik dilim kültürleri için bir protokol, sunulmuştur. Nöronlarda değişikliklere ek olarak neurovasculature değişiklikleri inceleyerek, bu protokol yaralanma sonrası nöral dokuda plastik değişiklikleri incelemek için çok yönlü bir araçtır.

Içinde Neurovascular Yaptırma Analizi Entorhino-hipokampal Organotipik Dilim Kültürler

Bu makale, beyindeki vasküler mimarinin in vivo ve ex vivo iki foton mikroskobu kullanılarak ölçülebileceği bir yöntemi açıklamaktadır.

HIV kaynaklı Nöroinflamasyondan bir Fare Modeli İki foton Mikroskop kullanarak Serebral Vasküler Mimarlık Niceleme

Bu el yazması, basınç miyografisi, immünofloresan, biyokimya ve moleküler çalışmalarda kullanılmak üzere farelerden intraserebral arteriyollerin (parankimal arteriolleri, penetran arteriolleri ve pre-kılcal arteriolleri kapsayan bir grup kan damarı) izolasyonu için basit ve tekrarlanabilir bir protokolü açıklamaktadır.

İzolasyon ve Serebral Parankimal arteriollerin kanülasyonu

Multifoton görüntüleme sadece doku yüzeyinden sınırlı derinliklerde etkili olurken, pCLE ile herhangi bir derinlikte 3 μm çözünürlükte görüntüleme elde etmek mümkündür. Burada, iktal ve vahşi tip farelerin hipokampusundaki mikrovasküler dinamikleri ölçmek için pCLE görüntüleme yapmak için bir protokol sunuyoruz.

Uyanık Farelerde Hipokampal Kılcal Damarların İn Vivo Fiber Bağlantılı Klinik Öncesi Konfokal Lazer Taramalı Endomikroskopisi (pCLE)

İnsan beyin dokusundan izole beyin kılcal bariyer fonksiyonu fizyolojik ve patofizyolojik koşullar altında çalışmaya preklinik model olarak kullanılabilir. Burada, beynin kılcal taze insan beyin dokusundan izole etmek için en iyi duruma getirilmiş bir iletişim kuralı mevcut.

Yalıtım taze insan beyin dokusundan beyin kapiller

Biz daha fazla ateş altında yatan erken etkinlik kazandırabileceğini kurulan eski-vivo beyin tekniğine dayalı bir yöntemini in vivo ve in vitro deneyler avantajlarını birleştiren mevcut. Ayrıca, tedavi ve tedavi edilmezse grubun aynı anatomik düzlemde doğrudan karşılaştırma için eşsiz bir fırsat temsil eder.

Ateş Ex Vivo sıçan beyin dilimleri kullanarak birincil olayları incelemek için alternatif bir yaklaşım

Bu el yazması arteriyoller elektrofizyolojik, kalsiyum görüntüleme ve baskı myography çalışmalarda kullanılan fare retina üzerinden yalıtım için basit bir protokol açıklar.

Retina arteriyoller yalıtım Ex Vivo Hücre fizyolojisi çalışmaları için

Mevcut protokol, hipokampusa ventral tegmental alan (VTA) glutamat projeksiyonlarının izlenmesi için basit bir yöntem göstermektedir. VTA glutamat nöronlarının fototimülasyonu, VTA glutamat terminallerinin CA1 putatif piramidal ateşleme hızını in vivo olarak nasıl modüle ettiğini göstermek için CA1 kaydı ile birleştirildi.

Hipokampustaki Ventral Tegmental Alan Glutamat Terminallerinin Kombine In Vivo Anatomik ve Fonksiyonel İzlenmesi

Serebral parankimal arteriollerden sağlam fare serebral endotelyal "tüplerinin" yoğun bir şekilde hazırlanması, serebral kan akışı regülasyonunu incelemek için gösterilmiştir. Ayrıca, bu endotel çalışma modelinin floresan görüntüleme ve anahtar hücresel sinyal yollarının elektrofizyoloji ölçümü için, hücre içi [Ca2+] ve membran potansiyelindeki değişiklikler de dahil olmak üzere deneysel güçlerini gösteriyoruz.

Fare Beyin Parankiminin Arteriyolar Endotelinin İzolasyonu ve Fonksiyonel Analizi

Buradaki protokol, bir mikrodiyaliz sistemi kullanarak uyanık sıçanların hipokampüsünden hücre dışı sıvının ayrıntılı bir gerçek zamanlı dinamik örneklemesini sağlar.

Bir Mikrodiyaliz Sistemi Kullanarak Bilinçli Sıçanlardan Hipokampal Hücre Dışı Sıvının Gerçek Zamanlı Dinamik Toplanması

Öğrenin, fare hipokampusundan arteriyol ve kapiller izolasyonu için ekz vasküler hazırlama yöntemini. Bu teknik, basınç miyografisi ve immünofloresan analizlerle damar sinyalini çevre doku etkileri olmadan incelemenizi sağlar.

Fonksiyonel Çalışma için Ex Vivo Basınçlı Hipokampal Kapiller-Parenkimal Arteriyol Hazırlığı

Daha fazla video keşfet