Pilocarpine bağlı Epileptik Farelerde Hafıza Fonksiyonunun Değerlendirilmesi

Bu makalede, pilokarpin kaynaklı epileptik farelerde hafıza bozukluklarının değerlendirilmesi için deneysel prosedürler sunmaktadır. Bu protokol, epilepside en sık görülen komorbiditelerden biri olan epilepsi ile ilişkili kognitif gerilemenin patofizyolojik mekanizmalarını incelemek için kullanılabilir.

Kognitif bozukluk temporal lob epilepsisinde en sık görülen ko-morbiditelerden biridir. Kronik epilepsi fare modeli kullanarak hafıza bozukluğunun nasıl değerlendirileceğini açıklayan bir protokol sunacağız. Yeni nesne konumu, yeni nesne tanıma ve desen ayırma testi hayvanları en az strese katan basit ve kısa kıçlardır.

Bu test epileptik farelerde bellek fonksiyonunu değerlendirmek için en uygun hale getirir, spontan tekrarlayan nöbetler için ek tetikleyiciler olmadan. Başlamak için, en az 30 dakika boyunca, ev kafeslerinde düşük ışık için hayvanlar acclimate. Açık alan kutusu hazırlayın.

Açık alan kutusunun ortasında alışkanlık, yer ve illuminometer ilk gününde. Ve illuminance 60 Lux ayarlayın. Her farenin lokomotor etkinliğini değerlendirmek için hayvan davranışı video izleme yazılımı kullanın.

Video izleme yazılımı açıldıktan sonra, açık alan kutusunun boyutunu kalibre edin. Ardından duvara bakan açık alan kutusuna deneysel bir fareyi nazikçe yerleştirin. Akıllı programı açın, Özelleştirilmiş ve Kabul et'i tıklatın.

Resim Kaynağı'nı tıklatın. Yüklü kamerayı seçtikten sonra Ayarla düğmesine basın. Kamera çözünürlüğünü ayarlayın ve basın, Kabul edin.

Kalibrasyon tıklamamızdan sonra, kutu boyutuna uyacak şekilde bilgisayar faresini sürükleyin. Ve iç kutu boyutunu doldurun. Her kutu boyutunu kaydetmek ve ayarlamak için Bölge Tanımı'nı tıklatın ve sonra Kaydet'i tıklatın.

Kırmızı kutu izlenen aralıktır, bu yüzden iç kutu boyutuna sığar, pembe kutu anahat uygun iken. Algılama Ayarı'na basın. Belirli bir alanın izlenip izlenmeip izlenmemesini denetlemek için Anlık Görüntü'ye tıklayın ve ardından Testi Durdur'u önleyin ve sonra Kabul Edin.

Saat Ayarları'nı tıklatın. Önceden ayarlanmış zamanı seçtikten sonra, gecikme süresini üç saniyelik edinme süresini 15 dakikaya ayarlayın ve Kabul Et tuşuna basın. Kod adını ayarlamak için Konular'a basın.

Varolan ayrıntıları silmek ve nesnelerde değiştirilen kod adını birinci oturuma sürüklemek için Zamanlayıcı'yı tıklatın. Veri Toplama'ya tıklayın. Kaydet düğmesini tıklatın ve Başlat'ı tıklatın.

Fareyi kutuya koyun ve 15 dakika boyunca takip edin. Kayıt 15 dakika sonra ev kafesi için fare dönün. Parlak ışığı geri getirin.

Veri Toplama'yı tıklatın. Ardından yanındaki pencereye Etkin Çözümle metod kodu sham adını tıklatın. Tanımları Bildir düğmesini tıklatın.

Yeni Rapor Tanımları düğmesini tıklatın sonra Özet Raporu'na tıklayın ve Kabul et' tuşuna basın. Bölge'de Konu Adı ve Mesafe'yi tıklatın ve kenara gönderin. Ardından Kabul Et düğmesine basın.

Kırmızı onay işaretine tıklayın ve Analiz et'i tıklatın. Sonuçları kontrol et. İkinci gün ve üçüncü günde, alışma seanslarını tekrarlayın.

Dördüncü gün, alışme oturumunu gerçekleştirin. Loş ışıkta, her fareyi boş açık alana üç dakika yerleştirin. Bu kısa alışkanlığı sonra ev kafesi için hayvan dönün.

Bitişik duvarlardan beş santimetre uzakta, açık alan arenaiçine iki özdeş nesneleri, kauçuk bebek yerleştirin. Nesneleri çift taraflı bantla düzeltin. Deneysel fareyi nesnelerden en uzak duvara bakan açık alan kutusuna tanıyın.

20 dakika boyunca ücretsiz keşif lere izin verin ve iki kronometre kullanarak her iki nesneyi keşfetmek için harcanan zamanı el ile ölçün. Hayvan burun nesnesi doğru işaret etmez keşif zamanı, herhangi bir davranış olarak ölçmek etmeyin. Fare en az 30 saniyelik arama süresine ulaştığında, iki nesne için F1 oturumunu durdurun ve fareyi ev kafesine aktarın.

Fare 20 dakika içinde nesneleri 30 saniye boyunca keşfe çıkamazsa, fareyi açık alan kutusundan çıkarın ve başka oturumlardan hariç taslanın. Beşinci günde, yeni nesne konumu test oturumunu gerçekleştirin. Fareyi üç dakika boyunca yeniden yaşamak için açık alan alanına aktarın.

O zaman onu kafesine geri ver. Bir nesneyi diyagonal konuma taşıyın ve deneysel fareyi açık alan kutusunun duvarına doğru yerleştirin. Bir video izleme sistemi ile ücretsiz keşif ve kayıt 10 dakika izin verin.

Ölçü, iki kronometre kullanarak, her nesneyi keşfetmek için harcanan zaman. Daha sonra, kuyruk kapma tarafından, kendi ev kafesi için fare aktarın. Üç gün boyunca, fare yiyecek ve su ücretsiz erişim ile dinlenme sağlar.

Dokuzuncu günde bir fare için 15 dakikalık bir alışma oturumu gerçekleştirin. 10. günde kısa bir yeniden yaşama seansı, üç dakika boyunca gerçekleştirin. Sonra geçici olarak ev kafesine geri dönün.

Bitişik duvarlardan beş santimetre uzakta, açık alana, 40 mililitre suyla dolu 50 mililitrelik plastik tüpler olmak üzere iki özdeş nesneyi yerleştirin. Deneysel fareyi nesnelerden en uzaktaki duvara bakacak şekilde açık alan kutusuna tanıtın. Fare NO Testi, 50 mililitrelik plastik tüp 40 mililitre su ve bir cam Coplin kavanoz ile dolu iki farklı nesnelere maruz kalacak gibi.

Gruptaki hayvanların yarısı için iki özdeş nesne, cam Coplin kavanoz kavanoz sunarak, aşinalık oturumu sırasında nesneyi dengeleyin. Daha sonra iki farklı nesneyle, 20 dakika boyunca ücretsiz keşif lere izin verin ve iki kronometre kullanarak her iki nesneyi de keşfetmek için harcanan zamanı el ile ölçün. Fare her iki nesne için de en az 30 saniyelik son kullanma süresine ulaştığında, tanımlama oturumunu durdurun.

Ertesi gün, yeni nesne tanıma test oturumunu gerçekleştirin. İlk olarak, üç dakika boyunca, yeniden yaşama için açık alana fare yi aktarın ve sonra ev kafesine geri dönün. Bitişik duvarlardan beş santimetre uzakta, fareler bir tüp ve bir cam Coplin kavanoz kavanoz maruz böylece bir cam Coplin kavanoz kavanoz ile tüp değiştirin.

İlk alıştanklık sırasında cam Coplin kavanoz kavanozlarına maruz kalan hayvanların yarısı için, cam Coplin kavanoz kavanozunu 40 mililitre su yla dolu 50 mililitrelik plastik bir tüple değiştirin. Böylece fareler bir tüp ve bir cam Coplin kavanoz kavanozmaruz kalırlar. Bir video izleme sistemi kullanarak kaydederken ücretsiz keşif 10 dakika izin verin.

Sonra deneysel farenin kuyruğunu kapmak ve ev kafesi aktarın. Üç gün ve fare yiyecek ve su ücretsiz erişim ile dinlenme sağlar. NL analizi için, Özelleştirilmiş Başlat Programı'nı açın ve kabul edin.

Resim Kaynağı'nı tıklatın. Yüklü kamerayı seçtikten sonra Ayarla düğmesine basın. Sadece kamera çözünürlüğü ve Kabul tuşuna basın.

Kaydedilen videoyu açmak için Videoları Klasörü Aç düğmesini tıklatın. Kaydedilen videoyu farenin girdiği andan itibaren 10 dakika boyunca izleyin ve her nesneyi keşfetmek için harcanan zamanı ölçün. 15. günde ilk kez PS Testi için ilk alışma seansını gerçekleştirdik.

Bu, üç dakika lığına tekrar yaşamak için açık alan alanına fare için. Geniş ızgara ve iki özdeş nesneleri ile zemin plakayerleştirin. Açık alan kutusunda 50 mililitre suyla dolu plastik T şişeleri.

Daha sonra deneysel fareyi nesnelerden en uzak duvara bakan açık alan kutusuna soktu. 20 dakika boyunca ücretsiz keşif izin verin. Ayrıca, iki kronometre kullanarak her iki nesneyi de keşfetmek için harcadığı zamanı el ile ölçün.

Fare her iki nesne için de minimum 30 saniyelik keşif süresine ulaştığında, ilk alışma oturumunu durdurun ve hayvanı ev kafesine aktarın. Hayvanların yarısı için nesne ve desen ayırma testi dengelemek için geniş ızgara ve iki özdeş nesneleri, açık alan kutusunda sayaç dengeleme deneyi için cam şişeler ile zemin plakası yerleştirin. Daha sonra deneysel fareyi açık alan kutusuna tanıyın ve 20 dakika boyunca ücretsiz keşiflere izin verin.

Fare iki nesne için minimum 30 saniyelik arama süresine ulaştığında, ilk alışma oturumunu durdurun ve hayvanı ev kafesine aktarın. Ertesi gün, üç dakika boyunca yeniden yerleşim için alan alanına fare yi aktarın. Sonra da kafesine geri ver.

Sonraki dar ızgara katta iki cam şişe ile ikinci alışma oturumu gerçekleştirin. Dengeleme deneyleri için, dar ızgara zeminüzerinde su dolu iki T-matara ile ikinci alışma oturumu gerçekleştirin. Ertesi gün desen ayırma test oturumunu gerçekleştirin.

Fareyi üç dakika boyunca yeniden yaşama nesnesi olmadan açık alan alanına aktarın. Sonra da kafesine geri ver. Sonra, t-flask su ve dar ızgara zemin üzerinde bir cam şişe dolu yerleştirin.

T-şişeleri su ile dolu olun, yeni nesne. Dengeleme deneyleri için, cam şişeyi bu durumda yeni bir nesne yapmak için her nesneyi dar ızgara zemine yerleştirin. Sonra deneysel fare için açık alan alanına 10 dakika keşfetmek için.

Bir video izleme sistemi kullanarak 10 dakikalık ücretsiz keşif ve kayıt izni verin. Deneysel farenin kuyruğunu tut ve ev kafesine aktar. İki kronometre kullanarak her nesneyi keşfetmek için harcanan zamanı ölçün.

Ve iki nesneyi keşfetmek için toplam zamana bölünen tanıdık nesne ile roman nesnesi arasında harcanan zaman arasındaki farka eşit olan ayrımcılık oranını hesaplayın. Pilokarpin indüklenen akut nöbetlerin başlamasından altı hafta sonra. Fareler yeni nesne konum testine tabi tutulacaktır.

Yeni nesne tanıma testi ve desen ayırma testi. Bu sırada testler arasında üç günlük dinlenme süreleri ayrılır. Birlikte sunulan iki nesne arasında anlamlı bir tercih olmadığı doğrulandı.

Epileptik fareler, Şam kontrollerine kıyasla üç testte ayrımcılık oranında önemli bir azalma gösterdi. Uzamsal hafıza bozukluğu gösteriyor. Lokomotor aktivitenin ölçümü, epileptik hayvanlarda önemli bir artış gösterdi.

Oysa nesneleri keşfetme motivasyonu Şam ve epileptik hayvanlar arasında karşılaştırılabilir. Son olarak hipokampal hücre ölümü, nöbetin neden olduğu nöronal hasarı doğrulamak için kristal mor boyama kullanarak pilokarpin indüklenen durum epileptikus'tan sonra değerlendirildi. Pilokarpin tedavi hayvanlar hipokampus ve CA3 alt alanında pyknotic hücrelere gösterdi, Sham kontrolleri aksine.

NO ve PS testinde sayma, bu cihaza özgü nesnelerde olası doğal önyargıyı azaltmak için önemlidir. Buna ek olarak kronik epileptik fareler açık deneysel ayarları için yeterli alkış ulus için birden fazla alışma adımları gerektiren artan anksiyete, göstermektedir. protokolümüzdeki nesnelerin sayısı veya konumu gibi zaman değişiklikleri bellek testlerini sağlayabilir.

Hangi bilişsel gerileme ile ilişkili epilepsi karmaşık mekanizmaları ayrıntılı yararlı olabilir. Bu videoyu izledikten sonra, epilepsi hafıza bozukluğu farklı yönlerini değerlendirmek için nasıl iyi bir anlayışa sahip olmalıdır.