Name: Elektrikstimülasyon ile Sıçanlarda Akut Pontin Enfarktüsü Kurulması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-08-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 2 s
Description: Öğrenin, sıçanlarda elektrik stimülasyonu ile akut pons infarktüsü modeli kurmayı. Bu yöntem, insan anterolateral infarktüslerini taklit ederek inme mekanizmalarını araştırmak için güvenilir bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Çin Ulusal Bilim Vakfı (814711181 ve 81870933) tarafından Y. Jiang ve Çin Ulusal Bilim Vakfı (No. 81601011), Jiangsu Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (No. BK20160345) J. Zhu ve Guangzhou Belediye Sağlık Komisyonu Bilimsel Programı (20191A011083) z. Qiu için.

Protokol, AAALACi tarafından akredite edilmiş bir kurum olan Guangzhou Tıp Üniversitesi İkinci Bağlı Hastanesi'nin Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından gözden geçirildi ve onaylandı. Fareler, Güney Tıp Üniversitesi Hayvan Merkezi tarafından sağlandı.
1. Hayvan
<ol><li>250 ± 10 g ağırlığında yetişkin erkek Sprague-Dawley sıçanları kullanın.</li>
	<li>Taşıma sırasında fareleri ameliyattan en az 1 hafta önce 25 °C ortam sıcaklığı, bağıl nem oranı %65 ve 12 h/12 h ışık/karanlık döngüsü ile kontrollü çevre koşullarında barındırır.</li>
	<li>Gıda ve su reklam libitumsağlayın.</li>
</ol>2. Ponlarda enfarktüs kurulması
<ol><li>Ameliyattan önce sıçanları tartın ve aşağıda açıklanan davranıştestlerine göre nörolojik performansı değerlendirin (bölüm 3).</li>
	<li>Isıtıcı yastığı anesteziden hemen önce ısıtın.</li>
	<li>Kafatası matkabını stereotaksik çerçeveüzerindeki tutucuya takın.</li>
	<li>İntraperitoneally 50 mg / kg ketamin ve 5 mg / kg ksilazin ile sıçan enjekte. Parmak kıstırması yanıtı eksikliği olup olmadığını kontrol edin.</li>
	<li>Fareyi stereotaksik çerçeveye yatkın bir pozisyonda monte edin. BaşGüvenliğini sağlamak için kulak çubuklarını kulak kanalının üzerine yerleştirin. Enjeksiyonun herhangi bir eğriliğini önlemek için kafatasının yatay tutulduğundan emin olun.</li>
	<li>Giriş ve çıkış portu olan sıçanlar için stereotaksik burun konisi eki ile isoflurane (%100 oksijen, %2.5 izofluran) ile anesteziyi koruyun. Isıtma yastığı kullanarak sıcaklığı 37 °C'de koruyun ve prosedür boyunca sıcaklığı izleyin.</li>
	<li>Korneanın kurumasını önlemek için göz merhemini kullanın. Ağrı tepkisi olmadığından emin olmak için pençeleri hafifçe çimdiklemek için forceps kullanın.</li>
	<li>Kafatasının saçını mikro tıraş makinesiyle tıraş edin. Klorheksidin cerrahi scrub'ı cerrahi kesi alanından başlayıp dışa doğru dönerek dairesel bir şekilde uygulayın.</li>
	<li>Bir cerrahi marker kalem ile işaretlenmiş olmalıdır posterior fontanelle arkasında 0,5 cm bilateral lateral kanthus çizgisinden bir neşter ile 3 cm orta hat kesi olun.</li>
	<li>Bir kan kaldırmak için bir pamuklu bez kullanın.</li>
	<li>Kafa derisini ortaya çıkarmak için deri kapağının her iki tarafına yerleştirilen bir parça cerrahi bant yerleştirin (Şekil 1).</li>
	<li>Hafifçe% 0.9 NaCl batırılmış bir pamuklu bez ile kafatası kemiğinden bağ dokuları çıkarın. Kaldırılmazsa, bağ dokuları matkapta yakalanır.</li>
	<li>Bregma'yı tanımlayın. Başlangıç noktası olarak bregma merkezi noktası seçti ve ince uçlu siyah cerrahi marker kalem kullanarak işaretleyin.</li>
	<li>6,0 mm AP, 2,0 mm ML (0,5-3,0 mm arasında değişen, Şekil 2A)bir matkap yerleştirin.</li>
	<li>Otomatik matkap kullanarak kraniyotomi (1 mm çapında) gerçekleştirin. Bu nokta venöz sinüs yakın olduğu için, dikkatli bir şekilde devam edin.</li>
	<li>Delkabı stereotaksik çerçeveden çıkarın.</li>
	<li>Stereotaksik çerçeveye yalıtımlı kılıflı 22 G probu yerleştirin(Şekil 3A). Probun ucu kılıfın proksimal ucundan 2 mm yukarı yerleştirilmelidir(Şekil 3A,B; Şekil 2B).</li>
	<li>Kılıfın beyne 7 mm (7 mm DV, Şekil 2B; Şekil 1C).</li>
	<li>Sondanın ucu beyin yüzeyinin 9 mm altında olana kadar probu kılıf boyunca(Şekil 1D)ilerletin(Şekil 2D).</li>
	<li>Elektrotları bir elektrik stimülatörüne bağlayın(Şekil 3C). Anoşu Şekil 1D'degösterildiği gibi sondaya bağlayın. Katot fareler (genellikle sıçanların kulağına) bağlayın.</li>
	<li>Elektriksi uyaranını açın ve aşağıdaki parametreleri ayarlayın: tek darbe genişliği = 4.050 ms; gerilim = 50 V; ve akım = 4 mA (Şekil 3C). Elektriksel stimülasyon sırasında, sıçan titreme sergileyecek. Bu çalışmada, davranış testleri, MRG ve TTC için kullanılan kontrol grubu sıçanlar için cihaz açık değildi.</li>
	<li>Uyarıldıktan sonra probu 5 dk pozisyonda bırakın.</li>
	<li>Sondayı beyinden çıkarın (Şekil 1F).</li>
	<li>Kraniyotomi yi örtmek için kemik çimentosu kullanın. Yara dikiş önce çimento kurumasını bekleyin.</li>
	<li>Yarayı 4-0 poliamid dikiş filamentleriyle dikin. Üç veya dört stiches sonra, kravat 2-1-1 standart cerrahi düğüm.</li>
	<li>İnfeksiyonu önlemek için sıçanlara penisilin (0.25 mL, 4 mL tuzlu suda seyreltilmiş 80 IU) enjekte edin.</li>
	<li>Sıçanlara 2 mg/kg dozda meloksikam enjekte edin ve 24 saatte bir tekrarlayın.</li>
	<li>Tamamen uyanana kadar her 15 dakikada bir fareleri izleyin ve bir ısıtma yastığı ile kafese geri dönün. Kurban edinene kadar yiyecek ve suya ücretsiz erişim sağlayın. NOT: Tüm işlemler aseptik cerrahi ilkelere uymalıdır. Ameliyattan önce, bir scrub üst, cerrahi maske ve steril eldiven ellerin cerrahi scrub sonra koymak. Steril dikiş malzemesini steril alan içinde her zaman koruyun.</li>
</ol>3. Davranış testleri
<ol><li>Longa skoru17<ol>
<li>Fareleri masanın yüzeyine yerleştirin.</li>
		<li>Aşağıdaki gibi rekor skorlar: 0 = hiçbir nörolojik eksikliği; 1 = tam kontralateral forepaw uzatmak için başarısızlık, hafif bir fokal nörolojik açık; 2 = sola daire, orta odak nörolojik açık; 3 = sola düşme, ciddi bir odak açığı; 4 = hiçbir spontan yürüyüş ve bilinç depresif düzeyi.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Berderson puan18<ol>
<li>Sıçanı kuyruğundan tut ve ön ayakların bir masaya uzanmasına izin ver. Puanları aşağıdaki gibi kaydedin: 0 = her iki uzuv tabloya ulaştı; 1 = sadece bir uzuv tabloya ulaşır.</li>
		<li>Hayvanı pürüzlü bir yüzeye yerleştirin. Puanları aşağıdaki gibi kaydedin: 0 = itildiğinde iyi bir direnç ile pürüzlü yüzeyüzerinde güçlü bir kavrama; 1 = sadece bir pençe görülen hafif bir direnç; 2 = tek bir yöne itildiğinde direnç yok.</li>
		<li>Kapalı bir alanda sıçan yerleştirin (18 × 36 içinde) ve serbestçe dolaşmak için izin. Puanları aşağıdaki gibi kaydedin: 0 = daire çizmeden kasanın tüm uzunluğu boyunca yürüyün; 1 = daire ile muhafaza tüm uzunluğu yürümek; 2 = muhafaza uzunluğu yürüyemez ama daire olabilir; 3 = çok hareket edemez. Her görevin değerlendirme puanlarının toplamını son değerlendirme puanı olarak kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Denge ışını testi19<ol>
<li>Cihazın 3 cm genişliğinde ve 70 cm uzunluğunda bir kirişden oluştuğundan ve yerden 20 cm yukarıda olduğundan emin olun. Dar bir giriş ile kirişin uzak ucuna koyu bir kutu yerleştirin.</li>
		<li>Kirişin başlangıcına beyaz bir gürültü jeneratörü ve parlak ışık kaynağı yerleştirin. Gürültü ve ışık, fareyi Kirişi geçmeye ve kale kutusuna girmeye motive etmek için kullanıldı.</li>
		<li>Hayvanlar karanlık kutuya girdiğinde uyaranları sonlandırın. Hedef kutusuna ulaşmak için gecikmeyi kaydedin (saniye cinsinden) ve Kirişi geçerken farenin ekuz performansını engelleyin.</li>
		<li>Her performans için puanları aşağıdaki gibi kaydedin: 0 = sabit duruş ile dengeler; 1 = Kirişin yan tarafını kavrar; 2 = hugs Kiriş ve 1 ekstremite kiriş düşer; 3 = sarılma demeti ve iki uzuv kiriş düşmek, ya da >60 s sonra kiriş üzerinde döner; 4 = Işın üzerinde denge çalışır ama sonra düşer >40 s; 5 = Işın üzerinde denge çalışır ama sonra düşer >20 s; ve 6 = düşer, dengelemek veya <20 s sonra ışın üzerine tutunmak için hiçbir girişim.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Yapışkan kaldırma somatosensoriyel test20<ol>
<li>Fareleri açık bir pleksiglas kutuya yerleştirin ve 2 veya 3 dakika boyunca yeni ortamı keşfetmelerine izin verin.</li>
		<li>Her forelimb'in iç yüzeyine başparmak ve bilek üzerinde 10 mm çapında yeşil renkli yapışkan etiket yerleştirin.</li>
		<li>Fareleri pleksiglas kutuya geri ver.</li>
		<li>Farenin sırasıyla ilk etiketi ve diğer tüm etiketleri kaldırması için gereken süreyi kaydedin. En fazla 3 dk bekleyin. Test eğitimde 2x yapılmalıdır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ekstremite yerleştirme testi<ol>
<li>Sıçanları yatay bir pozisyonda tutun ve hareketi önleyin.</li>
		<li>Sıçan masa yüzeyi (pasif ekstremite hareketi) ile teması kaybettiğinde, masa kenarı ile pençeye dokunsal ve proprioseptif uyaranları uygulayın.</li>
		<li>Pençenin (başarı veya başarısız) masa kenarına yerleştirilmesini değerlendirin.</li>
		<li>Puanları aşağıdaki gibi kaydedin: 0 = yer yok; 0.5 = bitmemiş ve/veya gecikmiş yerleşim; 1 = hemen ve tam yerleştirme.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. MRG ile enfarkt onayı
<ol><li>Ameliyattan 24 saat sonra MRI taraması yapın.</li>
	<li>Isofluran ile sıçan anestezik (indüksiyon için% 5, bakım için% 1-1.5).</li>
	<li>Fare kafasını fare beyin dizi bobinine sabitle ve sadece iletim hacmi bobiniyle birleştirin.</li>
	<li>Bobini ve sıçanı MR Tarayıcısı'na yerleştirin. Diş ve kulak çubuklarını kullanarak fareyi beşiğin içinde sabitle.</li>
	<li>MR tarama işlemi sırasında kapalı devre termal ceket kullanarak vücut ısısını 37 °C ± 0,5 °C'de koruyun.</li>
	<li>Doğru geometriyi sağlamak için bir pilot sıra kullanın.</li>
	<li>Hızlı dönüş yankı dizisi kullanarak T2 ağırlıklı taramaları toplayın: yankı süresi (TE) = 33 ms; tekrarlama süresi (TR) = 8.000 ms; görüş alanı = 30 mm x 30 mm; edinme matrisi = 512 × 512; 50 dilim; 0.4 mm kalınlığında.</li>
	<li>Dört çekimspin-echo düzlemsel görüntüleme DWI taramaları toplamak: yankı süresi = 30.5 ms; tekrarlama süresi = 8000 ms; matris = 96 × 96; görüş alanı = 25 mm x 25 mm; üç yön = x, y, z; B değerleri = 0 1.000 s/mm2 ve 1.000 s/mm2; 50 bitişik eksenel dilim; 0.4 mm kalınlığında.</li>
	<li>Fareleri kafese geri ver.</li>
</ol>5. TTC boyama ile enfarkt onayı
<ol><li>Fareleri deneysel tasarıma göre zaman noktasında kurban edin. Bu deneyde, fareleri ameliyattan 24 saat sonra kurban ettik.</li>
	<li>Kurban etmeden önce %2'lik bir TTC çözeltisi hazırlayın. 10 mL 0,01 M PBS'ye 0,2 g TTC tozu ekleyin (pH 7,4). Seyreltme gümüş kağıt la kaplı ve bir su banyosunda 37 °C önceden ısıtılmış bir 10 cm çanak aktarın.</li>
	<li>Bilinç kaybına kadar sıçanı %5 isoflurane maruz bırak. Daha sonra, solunum durana kadar fareyi CO2'ye (her dakika kafeshacminin %20-%30'u) maruz bırakın, ardından 2 dk CO2 maruziyetini koruyun.</li>
	<li>Ölümü onaylamak için aşağıdaki işaretleri kullanın: göğüste yükselme ve düşme yok, hissedilir kalp atışı yok, kötü mukoza rengi, ayak ucutuya yanıt yok, renk değişikliği veya gözlerde opaklık yok.</li>
	<li>Servikal çıkığı gerçekleştirin.</li>
	<li>Steril bir platform üzerinde pençeleri bantlayarak hayvanları güvenli. Köprücük kemiğinden hipogastriuma orta hat kesisi ve göğüs kafesi boyunca sola ksifoidden lateral bir kesi oluşturun. Göğüs kafesi boyunca diyafram da bir kesim ve kalp ortaya çıkarmak için bir toraks orta hat kesi olun.</li>
	<li>İğneucunu (27 G) sol ventrikülde 4 °C'de 0,01 M PBS içeren bir perfüzyon pompasına bağlayın. NOT: Atriyuma girmemek için ucu ventrikülün sol kenarı boyunca ilerletin. Ucun sol ventrikülde olduğundan emin olmak için perfüzyon pompasını açın ve sağ atriyumu kesin. Burun deliğinden sıvı boşalırsa, uç atriyumdadır ve ayarlanması veya yeniden takılması gerekir.</li>
	<li>Perfüzyon için 4 °C'de tutulan 0,01 M PBS'nin yaklaşık 100 mL'sini kullanın. Karaciğer beyaza dönene kadar perfüzyon pompasını kapatın.</li>
	<li>Farelerin kafasını kes ve makas ve forceps kullanarak tüm beyinleri parçala. Lekeleme kağıdı ile beyin yüzeyinden herhangi bir su çıkarın.</li>
	<li>Tüm beyni 1 dk boyunca -80 °C'de saklayın (donduktan sonra beyin kesitlerini kesmek daha kolaydır). NOT: Beyin bölümleri donmadan iyi kesilebiliyorsa bu adım atlanabilir.</li>
	<li>Beyin kadar dorsal tarafı ile matris içine beyin yerleştirin.</li>
	<li>Şekil 1G'de gösterildiği gibi beyin yüzeyindeki deliği tanımlayın ve 0,21 mm kalınlığında paslanmaz çelik bir bıçak takın. Genellikle enfarktüs en büyük alanı sonda düzlemindedir; bu nedenle, bir bıçak bu bölgeye takılmalıdır.</li>
	<li>Diğer bıçakları 2 mm aralıkla takın.</li>
	<li>Aynı anda bıçakları bir seferde matristen çıkarın ve tüm beyni ttc çözeltisindeki bıçaklarla çanakta yerleştirin. Bıçakları dikkatlice çıkarın. NOT: Burada beyin bölümleri sıvıdan kolayca çıkarılmadı çünkü bazdaki bazı pia mater'in kesite müdahale edilmesine neden oldu. Matriste kalan herhangi bir bölüm varsa, bunları tabağa aktarmak için küçük bir spatula kullanın.</li>
	<li>TTC çözeltisi ve beyin kesitleri ile çanak 37 °C'de bir su banyosuyerleştirin.</li>
	<li>Her 5 dakikada bir çanak kontrol edin ve bölümlerin örtüşme emin olun.</li>
	<li>TTC reaksiyonu sona erdirmek için çanak% 4 paraformaldehit çözeltisi 10 mL ekleyin.</li>
	<li>Rostral'dan kaudal'a kadar olan bölümleri yönlendirin ve fotoğraf çekin.</li>
</ol>6. İstatistik
<ol><li>Bir Öğrencinin t-testini gerçekleştirmek için istatistiksel analiz yazılımLarını (örneğin, GraphPad Prism) kullanın. t NOT: Tüm veriler ortalama ± SE olarak ifade edilir. Gruplar arasındaki farklar iki kuyruklu Öğrencinin t-testleriile belirlenir (p < 0.05 istatistiksel anlamlılık olarak tanımlanır).</li>
</ol>

<ol><li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+local+inflammation+contributes+to+the+neuroprotective+effect+of+ginsenoside+Rb1+in+rats+with+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Suppression of local inflammation contributes to the neuroprotective effect of ginsenoside Rb1 in rats with cerebral ischemia.</a> Neuroscience. 202, 342-351 (2012).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-1906%2C+a+Novel+Regulator+of+Toll-Like+Receptor+4%2C+Ameliorates+Ischemic+Injury+after+Experimental+Stroke+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-1906, a Novel Regulator of Toll-Like Receptor 4, Ameliorates Ischemic Injury after Experimental Stroke in Mice.</a> Journal of Neuroscience. 37, 10498-10515 (2017).</li>
<li>McBride, D. W., Zhang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision+Stroke+Animal+Models%3A+the+Permanent+MCAO+Model+Should+Be+the+Primary+Model%2C+Not+Transient+MCAO%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Stroke+Research%22%5BJournal%5D)">Precision Stroke Animal Models: the Permanent MCAO Model Should Be the Primary Model, Not Transient MCAO.</a> Translational Stroke Research. , (2017).</li>
<li>Liu, F., McCullough, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Middle+cerebral+artery+occlusion+model+in+rodents%3A+methods+and+potential+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedicine+%26+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Middle cerebral artery occlusion model in rodents: methods and potential pitfalls.</a> Journal of Biomedicine & Biotechnology. 2011, 464701(2011).</li>
<li>Jiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+with+less+damage%3A+intranasal+delivery+of+tetracycline-inducible+replication-defective+herpes+simplex+virus+type-1+vector+to+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A new approach with less damage: intranasal delivery of tetracycline-inducible replication-defective herpes simplex virus type-1 vector to brain.</a> Neuroscience. 201, 96-104 (2012).</li>
<li>Lopez, M. S., Vemuganti, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+Transient+Focal+Ischemic+Stroke+in+Rodents+by+Intraluminal+Filament+Method+of+Middle+Cerebral+Artery+Occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Modeling Transient Focal Ischemic Stroke in Rodents by Intraluminal Filament Method of Middle Cerebral Artery Occlusion.</a> Methods in Molecular Biology. 1717, 101-113 (2018).</li>
<li>Pais-Roldan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+assessment+of+recovery+from+coma+in+a+rat+model+of+diffuse+brainstem+tegmentum+injury%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroImage%22%5BJournal%5D)">Multimodal assessment of recovery from coma in a rat model of diffuse brainstem tegmentum injury.</a> NeuroImage. 189, 615-630 (2019).</li>
<li>Merwick, A., Werring, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posterior+circulation+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22The+British+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Posterior circulation ischaemic stroke.</a> The British Medical Journal. 348, 3175(2014).</li>
<li>Nogueira, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombectomy+6+to+24+Hours+after+Stroke+with+a+Mismatch+between+Deficit+and+Infarct%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Thrombectomy 6 to 24 Hours after Stroke with a Mismatch between Deficit and Infarct.</a> The New England Journal of Medicine. 378, 11-21 (2018).</li>
<li>Wilkinson, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+recanalization+of+basilar+artery+occlusion+in+a+previously+healthy+17-month-old+child%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurointerventional+Surgery%22%5BJournal%5D)">Late recanalization of basilar artery occlusion in a previously healthy 17-month-old child.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 10, 17(2018).</li>
<li>Huang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+Subtypes+and+Topographic+Locations+Associated+with+Neurological+Deterioration+in+Acute+Isolated+Pontine+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%3A+The+Official+Journal+of+National+Stroke+Association%22%5BJournal%5D)">Stroke Subtypes and Topographic Locations Associated with Neurological Deterioration in Acute Isolated Pontine Infarction.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases: The Official Journal of National Stroke Association. 25, 206-213 (2016).</li>
<li>Jiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-stent+restenosis+after+vertebral+artery+stenting%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">In-stent restenosis after vertebral artery stenting.</a> International Journal of Cardiology. 187, 430-433 (2015).</li>
<li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topographic+location+of+unisolated+pontine+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurology%22%5BJournal%5D)">Topographic location of unisolated pontine infarction.</a> BMC Neurology. 19, 186(2019).</li>
<li>Banerjee, G., Stone, S. P., Werring, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posterior+circulation+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22The+British+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Posterior circulation ischaemic stroke.</a> The British Medical Journal. 361, 1185(2018).</li>
<li>Wojak, J. C., DeCrescito, V., Young, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basilar+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3A+A+Journal+of+Cerebral+Circulation%22%5BJournal%5D)">Basilar artery occlusion in rats.</a> Stroke: A Journal of Cerebral Circulation. 22, 247-252 (1991).</li>
<li>Namioka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+infusion+of+mesenchymal+stem+cells+for+protection+against+brainstem+infarction+in+a+persistent+basilar+artery+occlusion+model+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Intravenous infusion of mesenchymal stem cells for protection against brainstem infarction in a persistent basilar artery occlusion model in the adult rat.</a> Journal of Neurosurgery. , 1-9 (2018).</li>
<li>Jiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+brain-derived+neurotrophic+factor+protects+brain+from+ischemic+insult+via+modulating+local+inflammation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Intranasal brain-derived neurotrophic factor protects brain from ischemic insult via modulating local inflammation in rats.</a> Neuroscience. 172, 398-405 (2011).</li>
<li>Schaar, K. L., Brenneman, M. M., Savitz, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+assessments+in+the+rodent+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experiments+in+Translational+and+Stroke%22%5BJournal%5D)">Functional assessments in the rodent stroke model.</a> Experiments in Translational and Stroke. 2, 13(2010).</li>
<li>Wu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Keep+warm+and+get+success%3A+The+role+of+postischemic+temperature+in+the+mouse+middle+cerebral+artery+occlusion+model%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model.</a> Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).</li>
<li>Wen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+behavioural+tests+for+the+prediction+of+outcomes+in+mouse+models+of+focal+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Optimization of behavioural tests for the prediction of outcomes in mouse models of focal middle cerebral artery occlusion.</a> Brain Research. 1665, 88-94 (2017).</li>
</ol>

Çıkar çatışması yok.

Bu çalışma akut pontin enfarktüs sıçan modeli oluşturmak için bir protokol sağlar. Bu model pontin inme hastalarında prognoz ve rehabilitasyon (inme sonrası kronik ağrı dahil) üzerine araştırmalar da kullanılabilir.
Bu yöntemin çeşitli güçlü yönleri vardır. İlk olarak, gelecekteki çalışmalar için akut pontin enfarktüsü bir sıçan modeli sağlar. Yukarıda da belirtildiği gibi pontin enfarktüsü daha az dikkat çeken yaygın bir inme alt tipidir. İnme araştırmalarının en önemli eksikliklerinden biri ...

1980'li yıllardan bu yana, silikon filamentler tarafından indüklenen orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli yaygın temel inme araştırma1kullanılmıştır. Diğer yöntemler (örneğin, MCA2'nin bir dalının dikemi ve fotokimyasal indüklenen fokal enfarktüs) de kullanılmıştır. Bu modeller MCA tabanlı inme modelleri olarak adlandırılmıştır ve inmenin altında yatan patofizyolojik mekanizmaların ve potansiyel terapötiklerin araştırılmasına büyük katkıda bulunmuştur. Bu deneysel modellerin sınırlamaları olmasına rağmen3,4, Bu yöntemler birçok laboratuvarlarda kullanılmıştır5,6. MCA tabanlı inme modelleri ön sirkülasyonda bir inme temsil; ancak, birkaç rapor arka dolaşımda inme taklit modelleri araştırdık7.
Anterior ve posterior dolaşım inmeleri arasında etyoloji, mekanizmalar, klinik bulgular ve prognoz arasında anlamlı farklılıklar vardır8. Bu nedenle, ön sirkülasyon inme modellerinden elde edilen sonuçlar posterior dolaşım inme uygulanamaz. Örneğin, ön sirkülasyon için reperfüzyon süresi 6 saate uzatıldı, çalışmaların küçük bir kısmı görüntüleme bulgularına göre 24 saate kadar uzatıldı9. Ancak, posterior dolaşım için zaman penceresi daha uzun olabilir 24 saat, önceki raporlara göre10 ve kendi klinik deneyimleri. Bu uzatılmış reperfüzyon süresi daha fazla çalışılmış ve deneysel modellerde teyit edilmelidir.
Posterior dolaşım inmeleri ile ilgili olarak, pontin enfarktüsü en sık görülen alt tiptir, tüm iskemik inme olgularının %7'sini oluşturan11,12. Enfarktüs topografisine göre pontin enfarktüsü izole ve izole olmayan pontin enfarktüsleri13olarak ikiye ayrılır. İzole pontin enfarktüsleri altta yatan mekanizmalara göre üç tipe ayrılır: büyük arter hastalığı (LAD), baziler arter dal hastalığı (BABD) ve küçük arter hastalığı (SAD). Pontin enfarktüsünün mekanizmaları, bulguları ve prognozu hakkında bilgi olguların klinik araştırmalarından elde edilmiştir14. Ancak pontin enfarktüsü taklit eden bir kemirgen modeli daha az araştırılmıştır.
Önceki çalışmalarda, pons içeren diffüz beyin sapı tegmentum yaralanmaaraştırılmıştır 7. Bir grup baziler arter ligasyonu ile pontin enfarktüs modeli oluşturmak için çalıştı (BA)15. Başka bir grup seçici proksimal BA seçici16dört nokta ligate için 10-0 naylon monofilament sütür kullanılır. Bu model LAD taklit, ancak en pontin enfarktüsBABD ve SAD sonucu. Buna ek olarak, BA seçici ligasyon karmaşık bir cerrahi ve yüksek ölüm oranına sahiptir.
Burada sağlanan elektrik stimülasyon ile akut pontin enfarktüsü kolay, kolayca çoğaltılabilir ve başarılı bir sıçan modeli için ayrıntılı bir protokoldür.

<table><tbody><tr><td>4-0 başarı</td><td>Şanghay Jinzhong</td><td></td><td>Cerrahi aletler</td></tr><tr><td>Yapışkan bant</td><td>Şanghay Jinzhong</td><td></td><td>Cerrahi aletler</td></tr><tr><td>Hayvan anestezi sistemi</td><td>RWD</td><td></td><td>Sistemi kullanırken maske takın</td></tr><tr><td>Kemik çimentosu</td><td>Şanghay Jinzhong</td><td></td><td>Cerrahi alet</td></tr><tr><td>Kürlenmiş kelepçe</td><td>Şanghay Jinzhong</td><td></td><td>Cerrahi enstrüman</td></tr><tr><td>Genel doku makası Şangay</td><td>Jinzhong</td><td></td><td>Cerrahi alet</td></tr><tr><td>IndoPhors</td><td>Çin Guoyao</td><td></td><td>Sterilizasyon</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>RWD</td><td>217181101</td><td></td></tr><tr><td>Lezyon Yapma Cihazı</td><td>Şangay Yuyan</td><td></td><td>Lezyon</td></tr> yapmak <tr><td>MRI sistemi</td><td>Bruker Biospin</td><td></td><td>İn vivo enfarktüsün doğrulanması</td></tr><tr><td>İğne tutucu</td><td>Şangay Jinzhong</td><td></td><td>Cerrahi alet</td></tr><tr><td>Çin'in</td><td></td><td>Penisilin</td> Guoyao <td>Enfeksiyon Önleme</td></tr><tr><td>Probu Anke</td><td></td><td></td><td>Biraz değişiklik gerekiyor</td></tr><tr><td>Q-ipuçları</td><td>Şanghay Jinzhong</td><td></td><td>Cerrahi alet</td></tr><tr><td>Kesme makası</td><td>Şanghay Jinzhong</td><td></td><td>Cerrahi alet</td></tr><tr><td>Stereotaksik aparat</td><td>RWD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sütür iğnesi</td><td>Şangay Jinzhong</td><td></td><td>Cerrahi alet</td></tr><tr><td>Doku tutma forcepts</td><td>Şangay Jinzhong</td><td></td><td>Cerrahi alet</td></tr><tr><td>TTC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BCBW5177</td><td>İn vitro enfarktüs onayı için</td></tr></tbody></table>

elektrikstimülasyon ile sıçanlarda akut pontin enfarktüsü kurulması

Establishment of Acute Pontine Infarction in Rats by Electrical Stimulation

Pontin enfarktüsü posterior sirkülasyonda en sık görülen inme alt tipidir, pontin enfarktüsü taklit eden bir kemirgen modeli yoktur. Burada sağlanan başarılı akut pontin enfarktüsü bir sıçan modeli kurmak için bir protokoldür. Yaklaşık 250 g ağırlığındaki sıçanlar kullanılır ve stereotaksik bir aparat kullanılarak ponlara yalıtımlı kılıflı bir sonda enjekte edilir. Bir lezyon tek bir darbe ile elektriksel stimülasyon tarafından üretilir. Longa skoru, Berderson skoru ve ışın dengesi testi nörolojik açıkları değerlendirmek için kullanılır. Ayrıca, sensorimotor fonksiyonu belirlemek için yapıştırıcı kaldırma somatosensoriyel test kullanılır ve ekstremite yerleştirme testi propriosepsiyon değerlendirmek için kullanılır. MRG taramaları daha sonra in vivo inentüsiyi değerlendirmek için kullanılır ve TTC boyama in vitro enfarktüsü doğrulamak için kullanılır. Burada, rostral pons anterolateral temelinde bulunan başarılı bir enfarktüs tanımlanır. Sonuç olarak, yeni bir yöntem akut pontin enfarktüs sıçan modeli kurmak için açıklanmıştır.

Yukarıda açıklanan ameliyat protokolüne altı hayvan tabi tutuldu. Şekil 4'te gösterildiği gibi kontrol grubu altı sıçandan oluşuyordu. Şekil 4'te gösterilen beyin dilimleri grup başına bir sıçandan elde edilmiştir.
MRG taraması enfarktüsün pons(Şekil 4A)temelinde bulunduğunu gösterdi. Sonda orta hattın 2 mm soluna enjekte edildiği için enfarktüs yanal olarak saptandı. Bu enfarktüs hastalarda anterolateral...

Burada sunulan tek bir darbe ile elektrikstimülasyon yoluyla bir sıçan modelinde akut pontin enfarktüsü kurmak için bir protokoldür.

Elektrikstimülasyon ile Sıçanlarda Akut Pontin Enfarktüsü Kurulması

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided ...

Fare pons infarktüsü kurmak için bir protokol sağlıyoruz. Bu pontin enfarktüs sıçan modeli kolayca yapıldı, kolayca çoğaltıldı ve son derece başarılı bir model. Elektriksel stimülasyon talamus gibi başka bir beyin bölgesinde enfarktüs yapmak için kullanılabilir.Bu modeli gerçekleştirmek isteyen insanlar deneyden önce pontin özerkliğini öğrenmelidir. Ameliyattan önce, fareleri tartın ve eşlik eden metinde açıklandığı gibi davranış testlerine göre nörolojik performanslarını değerlendirin. Isıtma yastığını anesteziden hemen önce 37 dereceye ısıtın ve kafatası matkabını stereotaksik çerçeve nin üzerindeki tutucuya takın.İlk anestezili sıçanda pedal refleksine yanıt eksikliğini onaylayın ve fareyi ısıtma yastığındaki eğilimli pozisyonda stereotaksik çerçeveye monte edin. Kafanın sabitlemesi için kulak çubuklarını kulak kanalının üzerine yerleştirin ve enjeksiyonun herhangi bir eğriliğini önlemek için kafatasının yatay tutulmasına dikkat edin. Hayvanın gözlerine merhem uygulayın ve kafatasından saç kaldırmak için bir mikro tıraş makinesi kullanın.Çift taraflı kanthus çizgisinden posterior fontanelle arkasında 0,5 santimetre kafatasının orta hattı boyunca üç santimetrelik bir çizgi çizmek için bir işaretleyici kullanın ve işaretli çizgi boyunca bir orta çizgi kesi yapmak için bir neşter kullanın. Herhangi bir kan kaldırmak ve kafatası ortaya çıkarmak için deri flep her iki tarafında cerrahi bant bir parça yerleştirmek için bir pamuklu bez kullanın. Kafatasından herhangi bir bağ dokusunu nazikçe çıkarmak ve bregma'yı bulmak için %0,9 sodyum klorür ile ıslatılmış yeni bir bez kullanın.Başlangıç noktası olarak bregma merkezi noktasını belirtmek için ince bir ipucu marker kalem kullanın, altı milimetre anterior posterior, iki milimetre medial lateral matkap yerleştirin. Dikkatle bir milimetre çapında kraniotomi gerçekleştirmek için matkap kullanın. Daha sonra, bir 22 gauge prob ile ucu kılıfıproksimal ucundan iki milimetre daha yerleştirilir ile bir 22 gauge prob ile değiştirildi.Tabakaları beyne yedi milimetre yerleştirin ve sondanın üstü beyin yüzeyinin dokuz milimetre altında olana kadar sondayı kılıf boyunca ilerletin. Elektrotları bir elektrik uyarıcısına bağlayın ve anomu sondaya bağlayın. Sonra sıçan ın kulağına katot bağlayın.Daha sonra, elektrik uyarıcı açın ve 4, 050 milisaniye, 50 volt voltaj ve dört miliamper için akım tek darbe genişliği ayarlayın. Cihazı beyinden çıkarmadan önce uyarılmadan sonra sondayı beş dakika pozisyonda bırakın. Kemik çimentosu ile kraniyotomi kapak ve yara kapatmak için 4.0 poliamid dikiş filamentler kullanmadan önce çimento kurumasını bekleyin.Üç veya dört dikiş sonra, kravat 2-1-1 standart cerrahi düğüm. Sonra intraperitoneally penisilin 250 mikrolitre ile sıçan enjekte ve tamamen uyanık olana kadar her 15 dakikada bir sıçan izlemek onun kafese hayvan dönmeden önce. Bu analizde altı hayvan gösterildiği gibi ameliyata tabi tutuldu ve altı hayvan kontrol olarak tedavi edildi.Bu görüntülerdeki beyin dilimleri grup başına bir sıçandan elde edildi. MRG taraması, enfarktüsün insan hastalarda anterolateral enfarktüsleri taklit eden pons temelinde yer olduğunu ortaya koymuştur. Yalıtımlı kılıf kullanıldığından kortekste, beyincikte veya orta beyinde enfarktüs gözlenmedi.Difüzyon ağırlıklı görüntüler de akut pontin enfarktüsü ortaya. Ameliyat sonrası 24 saat enfarktüs doğrulamak için TTC boyama kullanıldı. Beklendiği gibi, enfarktüs hacmi kontrol grubuna göre cerrahi grupta anlamlı olarak daha yüksekti.Davranış skorları ameliyat öncesi ve sonrası ölçüldü. Kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, pontin enfarktüsü olan fareler sola doğru daireler çizdiler. Longa, Berderson, ekstremite yerleşimi, ışın dengesi ve yapışkan kaldırma somatosensoriyel test puanları arasında pontin enfarktüsü ve kontrol grubu sıçanlarda önemli farklılıklar gözlendi.Herhangi bir beyin bölgesi elektriksel uyarılma yla yok edilecek.

establishment-acute-pontine-infarction-rats-electrical

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Sıçan iskemik beyin hasarı Cerrahi indüksiyon inme araştırma için yaygın olarak kullanılan bir model. Burada orta serebral arter oklüzyonu ile fokal serebral iskemi indüksiyon göstermektedir. Histolojik boyama ve manyetik rezonans görüntüleme ile enfarkt Görselleştirme de gösterilir.

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

Bu video, elektrik stimülasyonu kullanarak anestezi uygulanmış bir sıçanın ponsunda doku hasarını veya enfarktüsünü indüklemek için bir prosedürü göstermektedir.

Elektrik Stimülasyonu Kullanılarak Bir Sıçan Modelinde Akut Pons Enfarktüsünün İndüklenmesi

Kaynak: Jang, S., et al, Postsinaptik Yoğunluk Proteinlerinde Nöbet Kaynaklı Değişiklikleri İncelemek İçin Sıçanlarda Elektrokonvülsif Nöbetler ve Hipokampuslarının Fraksiyonlanması. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, nöbetin neden olduğu nöroplastisiteyi incelemek için bir sıçan modelinde akut elektrokonvülsif nöbetin (ECS) indüksiyonunu göstermektedir. Araştırmacılar, kulak klipsi elektrotları aracılığıyla elektriksel stimülasyon uygulayarak nöronal hipereksitabiliteyi ve klonusu tetikler. Bu...

Bir sıçan modelinde akut elektrokonvülsif nöbetin indüklenmesi

Burada büyük kortikal infarkt ve sürekli açıklarını oluşturmak için karotis arter eşzamanlı tıkanıklığı olan yaşlı dişi farelerde kalıcı distal orta serebral arter oklüzyonu üretmek için bir protokol mevcut. Biz 24 saat ve inme sonrası 8 hafta yapısal MRI kullanarak lezyon büyüklüğü teyidini göstermektedir.

Yaşlı Sıçanlarda Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı ile Kalıcı Distal Orta Serebral Sahne Kortikal İskemi Sürekli Engelli Eğitim için

Bu ayrıntılı protokolünü transkranyal uyarım elektrot yerleştirme temporal kemik üzerinde kısa ve uzun vadeli etkileri Transkraniyal elektriksel stimülasyon fareler serbestçe hareket araştırmak için açıklar.

Kronik Transkraniyal elektriksel stimülasyon ve Sıçanlarda Intracortical kayıt

Akut kriz modelleri epileptiform olaylar altında yatan mekanizmaları eğitim için önemlidir. Ayrıca, epileptiform olaylar üstünde-istek oluşturma yeteneği kendi başlatma altında yatan olay tam sırası çalışmaya son derece verimli bir yöntem sağlar. Burada, fare ve insan dokusu içinde kurulan akut 4-aminopyridine kortikal nöbet modelleri açıklar.

Akut Ictal faaliyet kemirgen ve insan dokusu üretimi ve isteğe bağlı başlatma

Bu çalışmanın amacı, 1-90 sonrası orta serebral arter oklüzyonu/reperfüzyonu (MCAO/R) sonrası beyin enfarktüsü ve sensorimotor fonksiyonunu test ederek beyin iskemisinin iyileşme ve sekel evrelerinde araştırma için bir hayvan modeli oluşturmak ve doğrulamaktır. farelerde gün.

Sıçanlarda Akut İnme Sonrası Beyin İyileşmesini Değerlendiren Bir Preklinik Model

Bu çalışmada, sıçanlarda atriyal fibrilasyonun (AF) etkin indüksiyonu için transözofageal atriyal patlama pacing'in deneysel bir protokolü açıklanmaktadır. Protokol, sağlıklı veya yeniden şekillendirilmiş kalpleri olan sıçanlarda kullanılabilir, AF patofizyolojisinin incelenmesine, yeni terapötik hedeflerin belirlenmesine ve yeni terapötik stratejilerin değerlendirilmesine izin verir.

Sıçanlarda Atriyal Fibrilasyon İndüksiyonu için Transözofageal Atriyal Patlama Pacing

Burada, C57BL/6J farelerde transkraniyal elektrokoagülasyon yoluyla distal orta serebral arter tıkanıklığı (dMCAO) modeli oluşturmak ve sonraki nörolojik davranışları ve histopatolojik özellikleri değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Distal Orta Arter Oklüzyonu Tekniği Kullanılarak Farelerde Akut İskemik İnme İndüksiyonu

Bu protokol, modifiye edilmiş dört damar oklüzyon yöntemi kullanılarak bir serebral iskemik koma modelini indükleme sürecini açıklar.

Modifiye Dört Damar Oklüzyonu ile İndüklenen Serebral İskemik Koma Modeli

Sıçan in vivo modelleri, iskemik inme için patolojik mekanizmaları ve terapötik hedefleri araştırmak için vazgeçilmez araçlardır. Bu çalışma, sıçanlarda orta serebral arter tıkanıklığını (MCAO) takiben enfarktüslü beyin dilimlerinde immünofloresan boyama gerçekleştirmeyi açıklayacaktır.

İskemik İnmenin Sıçan Modelinde İmmünofloresan ile Hücre Ölümü Sinyalinin Değerlendirilmesi

Öğrenin, sıçanlarda elektrik stimülasyonu ile akut pons infarktüsü modeli kurmayı. Bu yöntem, insan anterolateral infarktüslerini taklit ederek inme mekanizmalarını araştırmak için güvenilir bir model sunar.

Elektrikstimülasyon ile Sıçanlarda Akut Pontin Enfarktüsü Kurulması

Daha fazla video keşfet