Name: İmmünofluoresans kullanarak TNBSye Bağlı Crohn Hastalığı olan Farelerin Kolonlarında Östrojen Reseptörlerinin Görüntülenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Keşfedin, immunofluoresans tekniği kullanarak TNBS ile Crohn hastalığı modeli oluşturulmuş farelerin kolon dokularında östrojen reseptörlerinin görüntülenmesi yöntemini. Bu protokol, kolonik inflamasyon ve östrojen sinyalizasyonunun rolünü anlamak için güvenilir bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çalışma, Lodz Üniversitesi yetkililerinin mali desteği sayesinde yayınlandı: Bilimsel Araştırmadan Sorumlu Rektör Yardımcısı, Ulusal ve Uluslararası İşbirliğinden Sorumlu Rektör Yardımcısı ve Biyoloji ve Çevre Koruma Fakültesi Dekanı. Damian Jacenik, Polonya Ulusal Bilim Merkezi'nden (2017/24/T/NZ5/00045 ve 2015/17/N/NZ5/00336) hibeler ile desteklenmiştir.

Hayvan çalışmaları, Avrupa Parlamentosu'nun 2010/63/AB Direktifi ve 22 Eylül 2010 Tarihli Konsey Direktifi ve kurumsal tavsiyeler doğrultusunda Yerel Etik Komitesi'nin (28/ŁB29/2016) onayı ile gerçekleştirilmiştir.
1. Crohn hastalığının TNBS kaynaklı ürinen üriner modeli
NOT: Bu protokol, 25-28 g. Ağırlığındaki erkek BALB/C farelerini kullanır. ad libitum
<ol><li>Fareyi indüksiyon odasına yerleştirin ve kapağı sıkıca kapatın. Fareyi kısaca izoflurane ile anesthetize edin (25% O2 O2 akış hızı ile 1.5-2 L/dk). NOT: Solunum hızı ritmik ve normalden daha yavaş kalmalı ve zararlı bir uyarıcıya yanıt olarak değişmemelidir.</li>
	<li>0.1 mL0 etanol %0.9 NaCl veya 0.1 mL 0 etanol içinde %0.9 NaCl'de %0.9 NaCl'de bir kateter aracılığıyla distal kolona araç kontrolü olarak 4 mg TNBS aşındırın. NOT: Kateter anüsiçine yaklaşık 3 cm dikkatlice tanıtılmalıdır.</li>
	<li>Vücut ağırlığı, rektal kanama, dışkı tutarlılığı ve mortalite gibi klinik parametreler için fareyi ikinci günden sekiz güne kadar her gün izleyin.</li>
	<li>Sekizinci günde, servikal çıkığı ile fareyi ötenazi edin.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60813/60813fig1.jpg"> Şekil 1: Crohn hastalığının TNBS kaynaklı murine modeli için zaman çizelgesi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60813/60813fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
2. Kolon ayrılması ve makroskopik değerlendirilmesi
NOT: Kolon ayrılmasından bir gün önce, 1 mL fosfat tamponsal salininde (PBS) 100 μL antibiyotik seyreltin ve bir gecede 4 °C'de bırakın.
<ol><li>% 75 etanol ve steril gazlı bez kullanarak karın üzerinde cilt temizleyin.</li>
	<li>Steril makas ve cımbız kullanarak göğüs kemiğinden anüse karın duvarını kesin.</li>
	<li>Anüs ve çekum mümkün olduğunca yakın kolon kesin.</li>
	<li>Petri kabının üzerine kolon yerleştirin. Çekum ucuna anüs boyunca kolon kesin. Soğuk antibiyotik-PBS çözeltisinde kolonu 2-4 kez temizleyin ve yıkayın.</li>
	<li>Tablo 1'egöre kaliper kullanarak makroskopik değerlendirme yapın. NOT: Doku yapışması* ve eritem / kanama#, dışkı kan# ve ishal# görsel değerlendirmeye tabidir. * Doku adezyonu üç noktalı bir ölçek kullanılarak değerlendirmek (0: doku adezyonu olmadan kolon, 1: orta doku adezyonu ile kolon, 2: geniş doku adezyonu ile kolon); #yokluğuna göre (0) veya varlığı (1) eritem / kanama, dışkı kan ve ishal.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Yapışma*</td>
			<td>Eritem / kanama#</td>
			<td>Dışkı kanı#</td>
			<td>İshal#</td>
			<td>Ülser uzunluğu</td>
			<td>Kolon kalınlığı</td>
			<td>Kolon uzunluğu</td>
		</tr>
<tr>
<td>puan (0 - 2)</td>
			<td>puan (0 - 1)</td>
			<td>puan (0 - 1)</td>
			<td>puan (0 - 1)</td>
			<td>cm/noktalar</td>
			<td>mm/puan</td>
			<td>cm/noktalar</td>
		</tr>
<tr>
<td>0 – yok</td>
			<td>0 – yok</td>
			<td>0 – yok</td>
			<td>0 – yok</td>
			<td rowspan="3">0,5 cm = 0,5 nokta</td>
			<td rowspan="3">
n mm = n noktaları</td>
			<td>0 – <kontrolden daha k>
		</kontrolden></td></tr>
<tr>
<td>1 – Orta</td>
			<td>1 – mevcut</td>
			<td>1 – mevcut</td>
			<td>0.5 - hafif/gevşek dışkı</td>
			<td>1 – kontrolden ila daha kısa</td>
		</tr>
<tr>
<td>2 – mevcut</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1 – mevcut</td>
			<td>2 – kontrolden daha kısa</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Crohn hastalığının TNBS kaynaklı modeli ile farelerin bağırsak makroskopik skorlama.
<ol start="6"><li>Ülserin uzunluğu santimetre olarak bir puan ölçeğine dönüştürülür, yani ülserher 0.5 cm 0.5 nokta olarak sayılır. Bir nokta ölçeğine milimetre kolon kalınlığı dönüştürmek, yani, her n mm n noktalarına karşılık gelir.</li>
	<li>Üç noktalı bir ölçekte santimetre olarak kolon uzunluğu dönüştürün. TNBS'ye bağlı Crohn hastalığı olan her fareden elde edilen kolon uzunluğu, kontrol grubu için ortalama kolon uzunluğuna göre değerlendirilir (0: <kontrolden daha k kontrolden ila fazla kontrol>
	<li>Denkleme göre toplam makroskopik skoru hesaplayın: Toplam makroskopik skor = yapışma (puan) + eritem/kanama (puan) + dışkı kanı (puan) + ishal (puan) + ülser uzunluğu (puan) + kolon kalınlığı (puan) + kolon uzunluğu (puan).</li>
</kontrolden></li></ol>3. Kolon numunesi hazırlama
<ol><li>1-2 cm parçalar halinde kolon kesin ve uygun etiketli histolojik kaset sünger her yerleştirin. NOT: Histolojik kasetler için süngerler sıvı parafin dehidratasyon ve kuluçka sırasında kolon katlanmasını önler.</li>
	<li>Kolon parçasını %4 formaldehit ve 4 °C'de en az 24 saat kuluçkaya yatırın.</li>
	<li> </li><li><li><li><li><li><li> </li><li><li><li> </li><li></ol><ol><li><li><li><li><li> </li><li> </li><li><li><li> </li><li> </li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="13"></td><td rowspan="4"></td><td rowspan="4"></td><td rowspan="4"></td><td></td><td rowspan="13"></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td rowspan="6"></td><td rowspan="6"></td><td rowspan="6"></td><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td rowspan="3"></td><td rowspan="3"></td><td rowspan="3"></td><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table><ol start="11"><li><li><li> </li><li><li><li><li> </li><li> </li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td rowspan="2"></td><td colspan="2"></td><td rowspan="2"></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

<ol><li>Zhang, Y. Z., Li, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+bowel+disease%3A+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Inflammatory bowel disease: pathogenesis.</a> World Journal of Gastroenterology. 20 (1), 91-99 (2014).</li>
<li>Morris, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hapten-induced+model+of+chronic+inflammation+and+ulceration+in+the+rat+colon%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hapten-induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon.</a> Gastroenterology. 96 (3), 795-803 (1989).</li>
<li>Okayasu, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+in+the+induction+of+reliable+experimental+acute+and+chronic+ulcerative+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice.</a> Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).</li>
<li>Boirivant, M., Fuss, I. J., Chu, A., Strober, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxazolone+colitis%3A+a+murine+model+of+T+helper+cell+type+2+colitis+treatable+with+antibodies+to+interleukin+4%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Oxazolone colitis: a murine model of T helper cell type 2 colitis treatable with antibodies to interleukin 4.</a> Journal of Experimental Medicine. 188 (10), 1929-1939 (1998).</li>
<li>Morrissey, P. J., Charrier, K., Braddy, S., Liggitt, D., Watson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+T+cells+that+express+high+levels+of+CD45RB+induce+wasting+disease+when+transferred+into+congenic+severe+combined+immunodeficient+mice.+Disease+development+is+prevented+by+cotransfer+of+purified+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">CD4+ T cells that express high levels of CD45RB induce wasting disease when transferred into congenic severe combined immunodeficient mice. Disease development is prevented by cotransfer of purified CD4+ T cells.</a> Journal of Experimental Medicine. 178 (1), 237-244 (1993).</li>
<li>Kühn, R., Löhler, J., Rennick, D., Rajewsky, K., Müller, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-10-deficient+mice+develop+chronic+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis.</a> Cell. 75 (2), 263-274 (1993).</li>
<li>Sundberg, J. P., Elson, C. O., Bedigian, H., Birkenmeier, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous%2C+heritable+colitis+in+a+new+substrain+of+C3H%2FHeJ+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Spontaneous, heritable colitis in a new substrain of C3H/HeJ mice.</a> Gastroenterology. 107 (6), 1726-1735 (1994).</li>
<li>Harnish, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effects+of+estrogen+treatment+in+the+HLA-B27+transgenic+rat+model+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Beneficial effects of estrogen treatment in the HLA-B27 transgenic rat model of inflammatory bowel disease.</a> American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 286 (1), 118-125 (2004).</li>
<li>Pierdominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+estrogen+receptor+%CE%B2+expression+with+inflammatory+bowel+disease+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Linking estrogen receptor β expression with inflammatory bowel disease activity.</a> Oncotarget. 6 (38), 40443-40451 (2015).</li>
<li>Włodarczyk, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((G+protein-coupled+receptor+30+%28GPR30%29+expression+pattern+in+inflammatory+bowel+disease+patients+suggests+its+key+role+in+the+inflammatory+process.+A+preliminary+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastrointestinal+and+Liver+Diseases%22%5BJournal%5D)">G protein-coupled receptor 30 (GPR30) expression pattern in inflammatory bowel disease patients suggests its key role in the inflammatory process. A preliminary study.</a> Journal of Gastrointestinal and Liver Diseases. 26 (1), 29-35 (2017).</li>
<li>Mohammad, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+receptor+%CE%B1+contributes+to+T+cell-mediated+autoimmune+inflammation+by+promoting+T+cell+activation+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Signaling%22%5BJournal%5D)">Estrogen receptor α contributes to T cell-mediated autoimmune inflammation by promoting T cell activation and proliferation.</a> Science Signaling. 11 (526), eaap9415(2018).</li>
<li>Jacenik, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((G+protein-coupled+estrogen+receptor+mediates+anti-inflammatory+action+in+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">G protein-coupled estrogen receptor mediates anti-inflammatory action in Crohn's disease.</a> Scientific Reports. 9 (1), 6749(2019).</li>
<li>Prossnitz, E. R., Barton, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+G+protein-coupled+estrogen+receptor+GPER+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Review+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">The G protein-coupled estrogen receptor GPER in health and disease.</a> Nature Review Endocrinology. 7 (12), 715-726 (2011).</li>
<li>Yaşar, P., Ayaz, G., User, S. D., Güpür, G., Muyan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+estrogen-estrogen+receptor+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of estrogen-estrogen receptor signaling.</a> Reproductive Medicine and Biology. 16 (1), 4-20 (2016).</li>
<li>Pizarro, T. T., Arseneau, K. O., Bamias, G., Cominelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+the+study+of+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Mouse models for the study of Crohn's disease.</a> Trends in Molecular Medicine. 9 (5), 218-222 (2003).</li>
<li>Neurath, M. F., Fuss, I., Kelsall, B. L., Stüber, E., Strober, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+to+interleukin+12+abrogate+established+experimental+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antibodies to interleukin 12 abrogate established experimental colitis in mice.</a> Journal of Experimental Medicine. 182 (5), 1281-1290 (1995).</li>
<li>Ikeda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simvastatin+attenuates+trinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+colitis%2C+but+not+oxazalone-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Digestive+Diseases+and+Sciences%22%5BJournal%5D)">Simvastatin attenuates trinitrobenzene sulfonic acid-induced colitis, but not oxazalone-induced colitis.</a> Digestive Diseases and Sciences. 53 (7), 1869-1875 (2007).</li>
<li>Thavarajah, R., Mudimbaimannar, V. K., Elizabeth, J., Rao, U. K., Ranganathan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+physical+basics+of+routine+formaldehyde+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Maxillofacial+Pathology%22%5BJournal%5D)">Chemical and physical basics of routine formaldehyde fixation.</a> Journal of Oral Maxillofacial Pathology. 16 (3), 400-405 (2012).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Genetik, immünolojik veya spontan modeller de dahil olmak üzere IBD patofizyolojisi muayenesi için çok sayıda hayvan modeli, yanı sıra kimyasal olarak indüklenen modeller15vardır. Kolitin çeşitli hayvan modelleri arasında, bu protokolde açıklanan TNBS kaynaklı model gibi kimyasal kaynaklı modeller nispeten ucuz ve elde edilmesi kolaydır. Kolitin TNBS'ye bağlı murine modelinde CD'nin patolojik temeli ile ilgili çeşitli klinik semptomlar vardır. İndüklenen kolit olan hayvanlar tutarsız dışkı oluşumu...

Crohn hastalığı (CD) kronik bağırsak iltihabı olarak kendini gösteren inflamatuar bir barsak hastalığıdır (IBD). CD etiyolojisi kötü anlaşılmaktadır, ancak cd gelişimi için sorumlu gibi görünen birkaç önemli faktörler vardır, bağırsak mikrobiyota dahil, ve genetik ve çevresel faktörler, diyet veya stres gibi1. Crohn hastalığının patogenezinin daha iyi anlaşılması için, bağırsak iltihabının çeşitli modelleri,2,3,34,5,6,7olarak kullanılmaktadır. Bu makalede, CD'nin 2,4,6-trinitrobenzene sülfonik asit (TNBS) kaynaklı murine modelinden elde edilen sonuçları satıyoruz.
Bu östrojenler kronik bağırsak iltihabı8,9,,10,,11,12modüle yeteneğine sahip olduğu belgelenmiştir. Östrojenlerin biyolojik aktivitesi, aralarında nükleer östrojen reseptörleri (ER), yani ERα (ESR1geni) ve ERβ (ESR2geni) ve G proteinle birleşen östrojen reseptörü, yani GPER (gen GPER1),membrana bağlı ER13,14gibi konjenital reseptörler tarafından aracılık edilir. Östrojen reseptörlerinin düzeyini belirlemek için çeşitli yöntemler vardır, ama sadece birkaç bağırsakta onları görselleştirmek için kullanılabilir.
İmmünohistokimya (IHC), florokrom konjuge antikorları olan hücre veya dokularda bazı antijenlerin saptanması için klinik ve temel çalışmalarda yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. IHC doku yapısı görselleştirme önemli bir yöntem gibi görünüyor, yanı sıra belirlenmesi ve kolit gelişimini anlamak için çok önemli olabilir belirli proteinlerin lokalizasyonu. Burada, immünoresans kullanarak bağırsakta östrojen reseptörlerinin immünohistokimyasal görüntüleme için tam ve doğrulanmış bir protokol salıyoruz.

<table><tbody><tr><td><güçlü>Hayvanlar</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BALB/C fareler</td><td>Lodz Üniversitesi</td><td>NA</td><td></td></tr><<tr><td>güçlü>Ekipman</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kaliper</td><td>VWR</td><td>62379-531</td><td></td></tr><tr><td>Karton blok</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Konfokal mikroskop - TCS SP8</td><td>Leica Biosystems</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Tam otomatik döner mikrotom - RM2255</td><td>Leica Biosystems</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Cam slayt</td><td>Thermo Scientific</td><td>J1800BMNT</td><td></td></tr><tr><td>Isıtmalı Parafin Gömme Modülü - EG1150 H</td><td>Leica Biosystems</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Histolojik kutu</td><td>Marfour</td><td>LN.138747</td><td></td></tr><tr><td>Hidrofobik kalem</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z377821</td><td></td></tr><tr><td>Laboratuvar terazisi</td><td>Radwag</td><td>WL-104-0048</td><td></td></tr><tr><td>LAS X yazılımı</td><td>Leica Biosystems</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Metal kalıp</td><td>Marfour</td><td>CP.5105</td><td></td></tr><tr><td>Steril gazlı bez</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Steril makas</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Steril cımbız</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Doku işlemcisi - TP1020</td><td>Leica Biosystems</td><td>NA</td><td></td></tr><<tr><td>güçlü >Reaktifler< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2, 4, 6-trinitrobenzen sülfonik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>92822</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3294</td><td></td></tr><tr><td>DiOC6 (3)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>318426</td><td></td></tr><tr><td>DyLight 650 ikincil antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab96886</td><td></td></tr><tr><td>ER & alfa; birincil antikor</td><td>Abcam</td><td>ab75635</td><td></td></tr><tr><td>ER ve beta; birincil antikor</td><td>Abcam</td><td>ab3576</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Avantor Performans Malzemeleri Polonya</td><td>396480111</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehit</td><td>Avantor Performans Malzemeleri Polonya</td><td>432173111</td><td></td></tr><tr><td>GPER birincil antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab39742</td><td></td></tr><tr><td>Hidroklorik asit</td><td>Avantor Performans Malzemeleri Polonya</td><td>575283421</td><td></td></tr><tr><td>Hidrojen peroksidaz</td><td>Avantor Performans Malzemeleri Polonya</td><td>885193111</td><td></td></tr><tr><td>izofluran (foran)</td> <td>Baxter</td><td>1001936040</td><td></td></tr><tr><td>Normal keçi serumu</td><td>Gibco</td><td>16210064</td><td></td></tr><tr><td>Parafin</td><td>Leica Biosystems</td><td>39602012</td><td></td></tr><tr><td>Petrie çanak</td><td>Yuva Bilimsel</td><td>705001</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tampon salin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3813</td><td></td></tr><tr><td>Fizyolojik tuzlu su</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>7982</td><td></td></tr><tr><td>Primocin (antibiyotik)</td> <td>DAPI ile invitrojen</td><td>ant-pm-1</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Elmas Antifage Mountant DAPI ile (DAPI ile gliserol bazlı sıvı)</td> <td>Invitrogen</td><td>P36971</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Chempur</td><td>WE/231-598-3</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum sitrat</td><td>Avantor Performans Malzemeleri Polonya</td><td>795780429</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Avantor Performans Malzemeleri Polonya</td><td>853470115</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416</td><td></td></tr><tr><td>Ksilen</td><td>Avantor Performansı Malzemeler: Polonya</td><td>BA0860119</td><td></td></tr></tbody></table>

İmmünofluoresans kullanarak tnbs'ye bağlı crohn hastalığı olan farelerin kolonlarında Östrojen reseptörlerinin görüntülenmesi

Visualization of Estrogen Receptors in Colons of Mice with TNBS-Induced Crohn's Disease using Immunofluorescence

Crohn hastalığı inflamatuar barsak hastalığının en çok tanı konulan tipidir. Bağırsakta gelişen kronik inflamasyon peristalsis bozukluğu ve bağırsak mukozası hasarına yol açar ve kolon neoplastik dönüşüm riski ile ilişkili gibi görünüyor. Kanıt birikmesi östrojen ler ve östrojen reseptörleri sadece hormona duyarlı dokuları etkiler gösterir, ama aynı zamanda diğer dokular doğrudan östrojen ile ilgili değil, akciğerler veya kolon gibi. Burada, tnbs kaynaklı Crohn hastalığının bir murine modelinden elde edilen kolonda östrojen reseptörlerinin başarılı immünororesans boyama protokolünü açıklıyoruz. Crohn hastalığının fare ve bağırsak preparatına indüksiyonu için ayrıntılı bir protokol ve formalin-sabit parafin gömülü bağırsak bölümleri kullanılarak adım adım immünohistokimyasal bir prosedür sağlanmaktadır. Açıklanan yöntemler sadece östrojen reseptör algılama ve in vivo östrojen sinyal araştırma için yararlı değil, aynı zamanda kolit gelişiminde rol olabilir diğer proteinler için uygulanabilir.

TNBS'ye bağlı Crohn hastalığı olan farelerde kolonların makroskopik özellikleri Kontrolden alınan kolonlar ve TNBS ile tedavi edilen farelerin temsili görüntüleri Şekil 2'degösterilmiştir. Crohn hastalığının TNBS kaynaklı modeli olan farelerde, kolon genişliği artarken kolon uzunluğu azalır.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60813/60813fig2a.jpg"> <str...

Protokol, Crohn hastalığının tam doğrulanmış TNBS kaynaklı murine modelini ve parafine gömülü formalin-sabit kolon bölümlerinin immünororesansını kullanarak immünohistokimya ile östrojen reseptörlerinin görüntülenmesi için kullanılan yöntemleri sunar.

İmmünofluoresans kullanarak TNBS'ye Bağlı Crohn Hastalığı olan Farelerin Kolonlarında Östrojen Reseptörlerinin Görüntülenmesi

Crohn&#39;s disease is the most diagnosed type of inflammatory bowel disease. Chronic inflammation developing in the intestine leads to peristalsis ...

Artan kanıtlar fizyolojinin kolon parçası üzerinde östrojen sinyalin etkisini göstermektedir, immünohistokimya kolon östrojen reseptörlerini tanımlamak için umut verici bir tekniktir ve kolit haline gelişir. Biz kolon östrojen reseptörlerinin immünohistokimyasal görselleştirme için tam ve doğrulanmış bir protokol salıyoruz, immünoresans kullanarak. Lodz Üniversitesi Mikroskobik Görüntüleme Laboratuvarı'ndan Dr.Sylwia Michlewska ile birlikte prosedürü göstereceğiz.Bir petri kabına kolon yerleştirin. Bir ila iki santimetre parçalar halinde kolon kesin. Her parçayı uygun şekilde etiketlenmiş histolojik bir kasete süngerin üzerine yerleştirin.%4 paraformaldehit içinde kolon parçası içeren bir kaset yerleştirin. En az 24 saat 4 santigrat derecede kuluçkaya yat. 50%70%90%95 ve %100 etanol, ksilen %100 etanol ve sadece ksilen ve sıvı parafinde en az üç saatlik kuluçka için doku işlemcisini bir saatlik kuluçka için hazırlayın ve programlayın.Kolon parçasını histolojik bir kutuya aktarın. Kutuyu önceden programlanmış doku işlemcisine yerleştirin ve işlemciyi çalıştırın. Doku işlemci içinde kuluçka sonra histolojik kutusundan kolon kaldırmak ve bir metal kalıp kolon parçası yerleştirin, kolo

visualization-estrogen-receptors-colons-mice-with-tnbs-induced-crohn

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Bu video, fare kolon dokusunun immünohistokimyasal boyanması yoluyla kimyasal kaynaklı kolitin değerlendirmesini göstermektedir. Lekeli bir doku bölümünde, hasarlı dokuda çok sayıda bağışıklığa duyarlı hücrenin varlığı, kolit sırasında bağışıklık hücrelerinin infiltrasyonunu temsil eder.

Kolon Dokusu Kesitlerinin İmmünohistokimyasal Analizi ile Kimyasal Kaynaklı Kolitin Değerlendirilmesi

Bu videoda, floresan aracılı tomografi (FMT) kullanılarak bir fare kolit modelinde bağırsak makrofaj infiltrasyonunu değerlendirmek için bir teknik gösterilmektedir. Dekstran sodyum sülfat (DSS) yoluyla bir farede kolit indüklendikten sonra, hayvana kolondaki sızmış makrofajlar üzerindeki F4 / 80 glikoprotein markörünü tanıyan antikorlar enjekte edilir. Fare daha sonra floresan ve yansıma sinyallerinin floresanın uzamsal dağılımını ve yoğunluğunu belirlemek için üç boyutlu bir görüntüye yeniden...

Murin bağırsak iltihabını değerlendirmek için floresan aracılı tomografi kullanma

Küçük hayvan görüntüleme teknikleri seri tetkikler ve in vivo terapötik müdahaleyi sağlar. Son zamanlarda, uygulamaların kapsamı önemli genişletmiştir ve şu anda kolon tümör gelişiminin değerlendirilmesi, yara iyileşmesi ve enflamasyon izleme içerir. Bu protokol kemirgen endoskopi bu çeşitli potansiyel uygulamaları göstermektedir.

Murin için Endoskop In Vivo Karsinojenez ve bağırsak Değerlendirilmesi Multimodaller Görüntüleme Yara İyileşmesi ve İltihap

Doğru kimlik ve bağırsak mukoza zarının üzerinde epitel hücreleri konumu farklı hücre soyları tanımlamak için gereklidir. bağırsak dokuların uygun görüntüleme maksimum çözünürlük ile protein ekspresyonu belirlenmesi için çok önemlidir. Bu çalışma işleme fare bağırsak dokuları için en uygun yöntem ve koşulları belirginleştiren amaçlamaktadır.

Immünohistokimyasal ve immünofloresan Analizleri için Bağırsak Doku Hazırlama için geliştirilmiş Swiss-haddeleme Tekniği

Bu antijen güdümlü kolit modelinde, kırmızı bir floresan proteini eksprese eden OT-II CD4+ T hücreleri, mononükleer fagositlerde (MP'ler) yeşil bir floresan proteini eksprese eden RAG-/- farelere evlat edinilmiş olarak aktarıldı. Ev sahipleri, bir camgöbeği floresan proteinine (CFP) kaynaşmış ovalbümin proteinini (OVA) eksprese eden Escherichia coli (E.coli) ile sorgulandı.

Bir Antijen odaklı Kolit Modelinin Geliştirilmesi Antijen T hücreleri için Hücreler sunulması ile Antijen Sunumu Eğitim için

Burada, farklı fare dokuları içindeki IL-22 üreten hücreleri görselleştirmek için bir transgenik raportör fare modelini açıklıyoruz. Bu yöntem, faredeki diğer sitokinlerin veya salgı proteinlerinin yerini izlemek için kullanılabilir.

Raportör fareler kullanılarak IL-22 eksprese eden lenfositlerin Görselleştirme

Hedef özgü probları protein ifade çeşitli hastalık (Örneğin, iltihap, enfeksiyon ve tumorigenesis) gibi moleküler mekanizmaları analiz etmek için yenilikçi bir araç temsil eder. Bu çalışmada, bağırsak makrofaj infiltrasyonu F4/80 özel tomografi Floresans aracılı kullanarak kolit, fare modeli üç boyutlu bir nicel tomografik değerlendirilmesi açıklar.

Floresan-aracılı tomografi algılama ve fare bağırsak iltihabı makrofaj ile ilgili miktar

Bu çalışmada, Crohn fibrozisi ile karşılaştırılabilir patofizyoloji sergileyen TNBS aracılı intestinal fibrozisin ayrıntılı bir prosedürünü açıklıyoruz. Biz de rapamisin bağırsak fibrozis üzerinde inhibitör etkileri kolaylaştırılan ışığında bu yaklaşımı tartışmak.

TNBS Aracılı Intestinal Fibrozis Gelişimi ve Rapamisin Inhibitör Etkilerinin Değerlendirilmesi Üzerine Mekanistik Bakış

Mevcut protokol, kemirgenlerde Crohn benzeri bir kolit modelinin gelişimini açıklamaktadır. Transmural inflamasyon TNBS damlatma bölgesinde darlığa yol açar ve darlığa yakın segmentte mekanik genişleme gözlenir. Bu değişiklikler kolitte mekanik stresin incelenmesine izin verir.

Crohn Hastalığında Mekanik Stresin Patojenik Rolünü İncelemek için TNBS Kaynaklı Bir Kemirgen Modeli

3 boyutlu kolonoidlerin gelişimi için murin kolonik kriptlerinin izolasyonunu detaylandıran bir protokol açıklıyoruz. Yerleşik kolonoidler daha sonra, enflamatuar bir meydan okuma almadan veya bir epitelyal tek tabaka oluşturmaya yönlendirilmeden önce konakçı epitelinin hücresel bileşimini yansıtacak şekilde terminal olarak farklılaştırılabilir.

İntestinal İnflamasyonun Yerleşik Murin Kolonoidleri Üzerindeki İn Vitro Epitelyal Etkilerinin İncelenmesi

Keşfedin, immunofluoresans tekniği kullanarak TNBS ile Crohn hastalığı modeli oluşturulmuş farelerin kolon dokularında östrojen reseptörlerinin görüntülenmesi yöntemini. Bu protokol, kolonik inflamasyon ve östrojen sinyalizasyonunun rolünü anlamak için güvenilir bir araç sunar.

İmmünofluoresans kullanarak TNBS'ye Bağlı Crohn Hastalığı olan Farelerin Kolonlarında Östrojen Reseptörlerinin Görüntülenmesi

Daha fazla video keşfet