Name: İmmünofluoresans Mikroskobu kullanılarak Parafin Gömülü Kedi Arteriyel Trombisinde Nötrofil Ekstrasellüler Tuzakların Belirlenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: Keşfedin, parafin gömülü kedi arteriyel trombisinde çift immünolabeling ile nötrofil ekstrasellüler tuzaklarını immünofluoresan mikroskobu kullanarak belirleme yöntemini. Bu protokol veteriner tıpta tromboz patofizyolojisini anlamak için değerli bir araçtır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çalışma, Kaliforniya Üniversitesi, Davis, Companion Animal Health Merkezi 'nden (CCAH 2018-30-F) gelen fonlar tarafından desteklendi. Yazarlar floresan mikroskobun kullanımı için Dr Kevin Woolard kabul etmek istiyorum.

Burada açıklanan tüm yöntemler, Davis California Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi'nin yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Dokuların nekropsi ve biyopsileri sahiplerinin rızası ile yapıldı.
1. Doku fiksasyonu, katıştırma ve kesit
<ol><li>Aort bifurkasyon dışarı diseksiyon, inen aort dahil, femoral arter, ve ortak iliak arterler(Şekil 1A), kısa bir süre sonra insancıl ötenazi veya ölüm. Blunt fasya yıkıntın (Şekil 1B) tamamen daldırma önce 10% nötr tamponlu formalin en az 24 saat ve en fazla 48 saat.</li>
	<li>Numuneyi susuz hale getirmek için ilk olarak %10 nötr tamponlu formalin ile 37 °C'ye 1 saat boyunca ısıtılır. Daha sonra, 37 °C'ye ısıtılan etanol konsantrasyonlarını (%70, %95, %100) kadar sualtında Her biri 1 saat için 2x. Son olarak, durulama olmadan, 2x 100% toluen 37 °C için 1 saat her ısıtılan batırın.</li>
	<li>62 °C'ye ısıtılmış parafin ekleyin ve parafinin bir gecede tamamen katılamasını bekleyin.</li>
	<li>Bölüm 2-3 μm parafin gömülü doku bir mikrotom kullanarak ve pozitif yüklü cam slaytlar üzerine yerleştirin. Kesitli dokuları bir sonraki analize kadar -80 °C'de saklayın.</li>
</ol>2. Deparafinizasyon, rehidrasyon ve ısıya bağlı antijen alımı
<ol><li>Cam kaydıraklarda kesitlerin deparafinizasyonunu ve rehidrasyonunu gerçekleştirmek için cam slaytları raflara yerleştirin ve aşağıdaki sırayla işleyerek işlem yapın:<ol>
<li>3 dk. Bu adımı 2x tekrarlayın için % 100 ksilen tamamen batırın. Adımlar arasında durulama yapmayın.</li>
		<li>Etanol konsantrasyonları azalan tamamen batırın (%100, %95, %70) oda sıcaklığında (RT), 3 dk her biri için 3x. Adımlar arasında durulama yapmayın.</li>
		<li>2 dk. Tekrarlayın, tamamen deiyonize suya batırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bölümleri 2-3 dakika boyunca % 0,1 Ara (TBST, pH = 7,6) ile Tris-tamponlu tuzlu içine yerleştirin.</li>
	<li>Rezervuarı 100 °C'ye ısıtılan deiyonize su ile doldurun. Vapur odasının 20 dk boyunca dengede olmasını bekleyin. NOT: Isıya bağlı antijen alımı en iyi, bir gıda buharı gibi önceden ayarlanmış sıcaklık ayarına sahip bir buharlı tarafından üretilen dolaylı ısıtma ile gerçekleştirilir.</li>
	<li>Tris ve EDTA (pH = 9) içeren ticari olarak kullanılabilen antijen alma çözeltisini sıcaklık kontrollü bir sıcak plaka üzerinde 95-97 °C'ye sürekli karıştırarak ısıtın. Kaynamadığından emin olun. NOT: Çözelti ısındıktan sonra bulutlu olmalıdır.</li>
	<li>Isıtılan antijen alma çözeltisini bir slayt kabına dökün ve kabı buhar odasına yerleştirin. Antijen alma çözeltisinin 3-4 dakika boyunca buharlının sıcaklığını dengelemesine izin verin.</li>
	<li>Isıtmalı antijen alma çözeltisi tamamen slaytlar batırın ve 20 dakika boyunca buharlı ile harici ısıtma uygulamasıdevam.</li>
	<li>Slayt kabını buharlı yerden çıkarın ve slaytların ve antijen alma solüsyonunun RT'ye soğumasını bekleyin. Seyreltilmiş antijen alma çözeltisini 4 °C'de saklayın ve gerekirse 2 kata kadar yeniden kullanın.</li>
	<li>5 dakika tbst ile slaytlar 3x yıkayın.</li>
</ol>3. İmmünetiketleme ve otofloresan söndürme
NOT: Tablo 1, aşağıdaki adımlarda kullanılan engelleme arabelleklerinin bileşimini ayrıntılarıyla anlatır.
<ol><li>Nazik sallanan altında RT 2 saat için Tampon 1 Engelleme inkübat bölümleri (30-50 rpm). Kurumasını önlemek için parafin film ile mühür.</li>
	<li>Yıkamadan, hemen 100 μL seyreltilmiş tavşan poliklonal anti-insan sitülilinated histon H3 (citH3) antikor (0.03 mg/mL bloke tampon seyreltilmiş 1) doğrudan slayt üzerine uygulayın.</li>
	<li>Antikor karışımının eşit şekilde dağıtılmasını sağlamak için her bölüme bir kapak kayması (24 mm x 40 mm x 0,13-0,17 mm) yerleştirin.</li>
	<li>4 °C'de 12-16 saat boyunca hafif sallanan (30-50 rpm) inkübat. Kurumasını önlemek için parafilm filmi ile mühürleyin.</li>
	<li>5 dakika TBST ile 3x yıkayın.</li>
	<li>Adım 3.3'te açıklandığı gibi Alexa Fluor 488'e (0.04 mg/mL veya Bloklama Tampon1'de 1:50'lik son konsantrasyona seyreltilmiş) 100 μL keçi anti-tavşan antikor uygulayın. Nazik sallanan altında RT 1 saat için kuluçka (30-50 rpm). Slaytları ışıktan koruyun.</li>
	<li>5 dakika TBST 3x ile yıkayın.</li>
	<li>Bloklama Tampon 2'deki inkübasyon bölümleri gece boyunca 4 °C'de hafif sallanan (30-50 rpm) altında. Işıktan koruyun.</li>
	<li>5 dakika TBST 3x ile yıkayın.</li>
	<li>Blok Buffer 3 blok bölümleri olarak adım 3.3 rt 2 saat nazik sallanan altında (30-50 rpm) açıklanmıştır.</li>
	<li>Biyotinylated poliklonal tavşan anti-insan NE antikor (son konsantrasyon = 0.2 μg/mL Engelleme Tampon 3) ile inkübat bölümleri 4 ° C için 12-16 h adımlar 3.2-3.4 açıklandığı gibi.</li>
	<li>5 dakika TBST 3x ile yıkayın.</li>
	<li>Alexa Fluor 594 streptavidin konjuge ile incubate (1:100 veya 0.02 mg/mL Blokaj Tampon 3) adımlarında açıklandığı gibi 3.2-3.3 için 1 saat RT. Kurumasını önlemek için ışık tan koruyun ve parafin ile mühür.</li>
	<li>5 dakika TBST 1x ile yıkayın.</li>
	<li>100 μL otofloresan söndürme çözeltisi karışımını üreticinin talimatıyla 1 dk boyunca doğrudan bölümlere uygulayın.</li>
	<li>Slaytları hemen TBST 6x ile 10 dk yıkayın.</li>
	<li>Her slaydı karanlıkta 5 dakika boyunca 100 μL 300 nM DAPI ile kapatın.</li>
	<li>3 dk. TBST ile yıkayın 5x toplam bu tekrarlayın.</li>
	<li>Bir damla (~50 μL) antifade montaj ortamı, otomatik floresan söndürme kitinin bir parçası, doğrudan bölümü çevreleyen cam slayt üzerine uygulayın. Herhangi bir kabarcık oluşturmadan bir kapak kaymasını (24 mm x 40 mm x 0,13-0,17 mm) yavaşça bölümün üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Montaj ortamı daldırma lensleri ile mikroskobik analiz için sertleşene kadar numunelerin karanlıkta bir gecede 4 °C'de tedavi edilmesine izin verin.</li>
</ol>4. Nötrofil ekstrasellüler tuzak tanımlama
NOT: Aşağıdaki protokol, 1.280 x 960 dijital CCD fotoğraf makinesine sahip ters epifloresan mikroskobu kullanır (bkz.
<ol><li>Trombüs bulmak için, aort uzunluğu boyunca caudally için cranially tetkik, aort bifurkasyon, ve her femoral arter 10x amacı ile faz kontrast mikroskopisi kullanarak. Trombüs, evre kontrastı ve parlak alan mikroskobunda endotel'e bitişik kırmızı kan hücreleri, beyaz kan hücreleri ve trombositiçeren dokuların bir araya edilmesidir(Şekil 2A, Şekil 2B).</li>
	<li>İlk olarak 10x ve 20x hedefleri(Şekil 2C)ile DAPI kanalını (uyarma = 357/44 nm) kullanan NET'ler için bölümleri inceleyin. Faz kontrastı veya parlak alan mikroskobunda görüldüğünde cfDNA'nın bir hücrenin sitoplazmasının sınırları içinde olmayan yoğuşmuş DNA olarak göründüğünü unutmayın.</li>
	<li>Texas Red kanallarında (uyarma = 585/29 nm, emisyon = 628/32 nm) ve yeşil floresan protein kanalı (uyarma = 470/22 nm, emisyon = 525/50 nm) sırasıyla 10, 20 ve 40x hedefleri ile ekstrasellüler NE ve citH3 tanımlayın.</li>
	<li>Image J (NIH) gibi kullanılabilir yazılımları kullanarak trombüs içindeki NET'leri değerlendirin ve analiz edin. NET oluşumu cfDNA, hücre dışı citH3 ve NE'nin daha önce açıklandığı gibi18'inkolokalizasyonuna göre tanımlanır. Piksel yoğunluğunda doygunluğu önlemek için görüntülerin edinimi boyunca her kanalın tutarlı pozlama süresini ve kazançlarını koruyun.</li>
	<li>Her trombüs, aorta en yakın Bölge 1, aorttan en uzak Bölge 3 ve Bölge 2'yi Bölgeler 1 ve 3'e kadar üç eşit bölgeye bölerek alçalan aorta olan yakınlığına göre haritala. Operatör her deneğin tıbbi durumuna kör ile, her bölgede en az on rasgele alanlar almak. Trombüsdeki NET'lerin dağılımını, her bölgede NET'li alanların ortalamasını alarak veya bölge başına ortalama NET işgal alanını hesaplayarak karakterize edin.</li>
</ol>

<ol><li>Maron, B. J., Fox, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertrophic+cardiomyopathy+in+man+and+cats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Cardiology%3A+The+Official+Journal+of+the+European+Society+of+Veterinary+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Hypertrophic cardiomyopathy in man and cats.</a> Journal of Veterinary Cardiology: The Official Journal of the European Society of Veterinary Cardiology. 17, Suppl 1 6-9 (2015).</li>
<li>Payne, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+indicators+in+cats+with+hypertrophic+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Prognostic indicators in cats with hypertrophic cardiomyopathy.</a> Journal of Veterinary Internal Medicine. 27 (6), 1427-1436 (2013).</li>
<li>Borgeat, K., Wright, J., Garrod, O., Payne, J. R., Fuentes, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterial+Thromboembolism+in+250+Cats+in+General+Practice%3A+2004-2012%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Arterial Thromboembolism in 250 Cats in General Practice: 2004-2012.</a> Journal of Veterinary Internal Medicine. 28 (1), 102-108 (2014).</li>
<li>Brinkmann, V., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+suicide%3A+why+neutrophils+die+to+make+NETs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Beneficial suicide: why neutrophils die to make NETs.</a> Nature Reviews. Microbiology. 5 (8), 577-582 (2007).</li>
<li>Goggs, R., Jeffery, U., LeVine, D. N., Li, R. H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil-extracellular+traps%2C+cell-free+DNA+and+immunothrombosis+in+companion+animals%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Pathology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil-extracellular traps, cell-free DNA and immunothrombosis in companion animals: A review.</a> Veterinary Pathology. , 300985819861721(2019).</li>
<li>de Boer, O. J., Li, X., Goebel, H., van der Wal, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+smears+observed+in+H+%26+E-stained+thrombus+sections+are+neutrophil+extracellular+traps%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Nuclear smears observed in H & E-stained thrombus sections are neutrophil extracellular traps.</a> Journal of Clinical Pathology. 69 (2), 181-182 (2016).</li>
<li>Li, R., Tablin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comparative+Review+of+Neutrophil+Extracellular+Traps+in+Sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Veterinary+Sciences%22%5BJournal%5D)">A Comparative Review of Neutrophil Extracellular Traps in Sepsis.</a> Frontiers in Veterinary Sciences. 5 (291), (2018).</li>
<li>Borissoff, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+levels+of+circulating+DNA+and+chromatin+are+independently+associated+with+severe+coronary+atherosclerosis+and+a+prothrombotic+state%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Elevated levels of circulating DNA and chromatin are independently associated with severe coronary atherosclerosis and a prothrombotic state.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 33 (8), 2032-2040 (2013).</li>
<li>Moschonas, I. C., Tselepis, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathway+of+neutrophil+extracellular+traps+towards+atherosclerosis+and+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">The pathway of neutrophil extracellular traps towards atherosclerosis and thrombosis.</a> Atherosclerosis. 288, 9-16 (2019).</li>
<li>Perdomo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+activation+and+NETosis+are+the+major+drivers+of+thrombosis+in+heparin-induced+thrombocytopenia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Neutrophil activation and NETosis are the major drivers of thrombosis in heparin-induced thrombocytopenia.</a> Nature Communications. 10 (1), 1322(2019).</li>
<li>Li, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+enhance+procoagulant+activity+in+patients+with+oral+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer+Research+and+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps enhance procoagulant activity in patients with oral squamous cell carcinoma.</a> Journal of Cancer Research and Clinical Oncology. 145 (7), 1695-1707 (2019).</li>
<li>Li, R. H. L., Tablin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Canine+Neutrophil+Extracellular+Trap+Formation%3A+Dynamic+and+Quantitative+Analysis+by+Fluorescence+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy.</a> Journal of Visualized Experiments. (138), e58083(2018).</li>
<li>de Boer, O. J., Li, X., Goebel, H., van der Wal, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+smears+observed+in+H%26E-stained+thrombus+sections+are+neutrophil+extracellular+traps%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Nuclear smears observed in H&E-stained thrombus sections are neutrophil extracellular traps.</a> Journal of Clinical Pathology. 69 (2), 181-182 (2016).</li>
<li>Farkas, ÁZ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+in+thrombi+retrieved+during+interventional+treatment+of+ischemic+arterial+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps in thrombi retrieved during interventional treatment of ischemic arterial diseases.</a> Thrombosis Research. 175, 46-52 (2019).</li>
<li>Qi, H., Yang, S., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+Extracellular+Traps+and+Endothelial+Dysfunction+in+Atherosclerosis+and+Thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil Extracellular Traps and Endothelial Dysfunction in Atherosclerosis and Thrombosis.</a> Frontiers in Immunology. 8, 928(2017).</li>
<li>Laridan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+in+ischemic+stroke+thrombi%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps in ischemic stroke thrombi.</a> Annals of Neurology. 82 (2), 223-232 (2017).</li>
<li>Laridan, E., Martinod, K., Meyer, S. F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+Extracellular+Traps+in+Arterial+and+Venous+Thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Thrombosis+and+Hemostasis%22%5BJournal%5D)">Neutrophil Extracellular Traps in Arterial and Venous Thrombosis.</a> Seminars in Thrombosis and Hemostasis. 45 (1), 86-93 (2019).</li>
<li>Li, R. H. L., Johnson, L. R., Kohen, C., Tablin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+approach+to+identifying+and+quantifying+neutrophil+extracellular+trap+formation+in+septic+dogs+using+immunofluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">A novel approach to identifying and quantifying neutrophil extracellular trap formation in septic dogs using immunofluorescence microscopy.</a> BMC Veterinary Research. 14 (1), 210(2018).</li>
<li>Brinkmann, V., Abu Abed, U., Goosmann, C., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunodetection+of+NETs+in+Paraffin-Embedded+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunodetection of NETs in Paraffin-Embedded Tissue.</a> Frontiers in Immunology. 7, 513(2016).</li>
<li>Moelans, C. B., Oostenrijk, D., Moons, M. J., van Diest, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde+substitute+fixatives%3A+effects+on+nucleic+acid+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde substitute fixatives: effects on nucleic acid preservation.</a> Journal of Clinical Pathology. 64 (11), 960-967 (2011).</li>
<li>Rait, V. K., Xu, L., O'Leary, T. J., Mason, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+formalin+fixation+and+antigen+retrieval+with+bovine+pancreatic+RNase+A+II.+Interrelationship+of+cross-linking%2C+immunoreactivity%2C+and+heat+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Investigation%3A+A+Journal+of+Technical+Methods+and+Pathology%22%5BJournal%5D)">Modeling formalin fixation and antigen retrieval with bovine pancreatic RNase A II. Interrelationship of cross-linking, immunoreactivity, and heat treatment.</a> Laboratory Investigation: A Journal of Technical Methods and Pathology. 84 (3), 300-306 (2004).</li>
<li>Willingham, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+fixation-processing+method+for+preembedding+ultrastructural+immunocytochemistry+of+cytoplasmic+antigens%3A+the+GBS+%28glutaraldehyde-borohydride-saponin%29+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%3A+Official+Journal+of+the+Histochemistry+Society%22%5BJournal%5D)">An alternative fixation-processing method for preembedding ultrastructural immunocytochemistry of cytoplasmic antigens: the GBS (glutaraldehyde-borohydride-saponin) procedure.</a> The Journal of Histochemistry and Cytochemistry: Official Journal of the Histochemistry Society. 31 (6), 791-798 (1983).</li>
<li>Davis, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+and+Diminishing+Autofluorescence+in+Formalin-fixed+Paraffin-embedded+Human+Respiratory+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%3A+Official+Journal+of+the+Histochemistry+Society%22%5BJournal%5D)">Characterizing and Diminishing Autofluorescence in Formalin-fixed Paraffin-embedded Human Respiratory Tissue.</a> The Journal of Histochemistry and Cytochemistry: Official Journal of the Histochemistry Society. 62 (6), 405-423 (2014).</li>
<li>Banerjee, B., Miedema, B. E., Chandrasekhar, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+basement+membrane+collagen+and+elastin+in+the+autofluorescence+spectra+of+the+colon%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Medicine%3A+The+Official+Publication+of+the+American+Federation+for+Clinical+Research%22%5BJournal%5D)">Role of basement membrane collagen and elastin in the autofluorescence spectra of the colon.</a> Journal of Investigative Medicine: The Official Publication of the American Federation for Clinical Research. 47 (6), 326-332 (1999).</li>
<li>Hirsch, R. E., Zukin, R. S., Nagel, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+fluorescence+emission+of+intact+oxy+hemoglobins%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Intrinsic fluorescence emission of intact oxy hemoglobins.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 93 (2), 432-439 (1980).</li>
<li>Billinton, N., Knight, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seeing+the+wood+through+the+trees%3A+a+review+of+techniques+for+distinguishing+green+fluorescent+protein+from+endogenous+autofluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Seeing the wood through the trees: a review of techniques for distinguishing green fluorescent protein from endogenous autofluorescence.</a> Analytical Biochemistry. 291 (2), 175-197 (2001).</li>
<li>Mosiman, V. L., Patterson, B. K., Canterero, L., Goolsby, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+cellular+autofluorescence+in+flow+cytometry%3A+an+in-situ+method%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">Reducing cellular autofluorescence in flow cytometry: an in-situ method.</a> Cytometry. 30 (3), 151-156 (1997).</li>
<li>Ducroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombus+Neutrophil+Extracellular+Traps+Content+Impair+tPA-Induced+Thrombolysis+in+Acute+Ischemic+Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Thrombus Neutrophil Extracellular Traps Content Impair tPA-Induced Thrombolysis in Acute Ischemic Stroke.</a> Stroke. 49 (3), 754-757 (2018).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Biz bir çift immünetiketleme protokolü ve immünororesans mikroskopisi kullanarak sabit kedi kardiyojenik arteriyel trombosit NETs tanımlamak için bir protokol açıklar. Sadece kardiyojenik arteriyel trombüs lekelenmiş olmasına rağmen, teoride bu protokol diğer trombüs türleri ve diğer veteriner türleri için kullanılabilir. Kedi artertrombinindeki NET'lerin belirlenmesi, kedilerde trombozda NET'lerin rol oynayabileceğini düşündürmektedir.
Sabit ve parafin gömülü dokuda immünororesans ile NETs te...

Hipertrofik kardiyomiyopatisi olan kediler hayatı tehdit eden tromboembolik komplikasyonlar riski altındadır1,2. Kedi kardiyojenik artertromboemboli (CATE) ile ilişkili yüksek morbidite ve mortaliteye rağmen, KEDILERDE CATE'in altta yatan patofizyolojisi tam olarak anlaşılamamıştır. Bu yıkıcı durum riski altında kedileri tedavi etmek ve tanımlamak için sınırlı tanı ve tedavi araçları da vardır3.
Nötrofillerin doğuştan gelen bağışıklıktaki rolüne ek olarak, nötrofillerin, nötrofil elastazı (NE) ve miyeloperoksidaz gibi histones ve granüler proteinler ile kaplanmış hücresiz DNA (cfDNA) ağları olan nötrofil ekstrasellüler tuzakları (NETs) serbest bırakarak trombozda rol oynadığı gösterilmiştir. Nötrofiller sistemik inflamasyona yanıt olarak NETs oluşumu, patojenler ile doğrudan karşılaşma ve aktif trombositlerileetkileşim 4,5,6,7. Köpeklerde nötrofil kaynaklı DNA'nın pıhtı lyzisini inhibe ettiği, NET proteinlerin ise pıhtı oluşumunu hızlandırdığı gösterilmiştir. NETs yeteneği sirkülasyon hücreleri ve pıhtılaşma bileşenleri tuzak da onların trombojenik özellikleri8,9,,10,11,12anahtarıdır.
NET'ler ekstrasellüler nötrofil proteinlerin, histones ve cfDNA'nın kolokalizasyonu ile saptanır. Bu nedenle, deparafinize dokuların immünororesans ile sabit dokularda NETs belirlenmesi ve nicelleştirilmesi parlak alan mikroskopisi 4 kullanarak geleneksel hematoksilin4ve eozin (H & E) leke üstündür 4,5. Immünororesans mikroskopisi kullanarak yapılan çeşitli insan çalışmaları, KORONER arter trombüsü, serebral inme trombozu, aterothrombosis ve venöz trombosit13,14,,15,1616,17yapısal bileşenleri olarak NETs tespit . Bugüne kadar, kedi trombositindeki NET'leri tespit etmek ve ölçmek için standart laştırılmış bir yöntem tanımlanmamıştır. Kedi kardiyojenik artertrombisinde NET'lerin belirlenmesi, NET'lerde ve trombozlarda gelecekteki çeviri araştırmalarını kolaylaştırabileceğinden, kedilerde parafin gömülü arteriyel trombide NET tanımlama ve değerlendirme tekniklerini açıklıyoruz.

<table><tbody><tr><td>4,6-Diamidino-2-fenilin (DAPI)</td><td>Life Technologies Corporation</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 Streptavidin konjugatı</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>Katalog # S11227</td><td></td></tr><tr><td>Anti-sitrüline histon H3 antikoru</td><td>Abcam</td><td>Ab5103</td><td></td></tr><tr><td>EVOS FL Hücre Görüntüleme Sistemi</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AMEFC4300</td><td></td></tr><tr><td>EVOS Görüntüleme Sistem Amacı 10x</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AMEP4681</td><td>NA 0.25, WD 6.9/7.45 mm</td></tr><tr><td>EVOS Görüntüleme Sistemi Objektif 20x</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AMEP4682</td><td>NA 0.40, WD 6.8 mm</td></tr><tr><td>EVOS Görüntüleme Sistemi Objektif 40x</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AMEP4699</td><td>NA 0.75, WD 0.72 mm</td></tr><tr><td>Keçi anti-tavşan Alexa Fluor 488 antikoru</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>Katalog # A32723</td><td></td></tr><tr><td>Keçi serumu</td><td>Jackson İmmüno Araştırma Laboratuvarları</td><td>Kataloğu # NC9660079. Üretici Parçası # 005-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Nötrofil elastaz antikoru</td><td>Bioss Antikorları</td><td>Bs-6982R-Biotin</td><td>Tavşan poliklonal Antikoru, Biotin konjuge</td></tr><tr><td>NP40</td><td>Pierce</td><td>Ürün # 28324. Lot # EJ64292</td><td></td></tr><tr><td>Pozitif yüklü mikroskop slaytları</td><td>Thomas</td><td>Scientific Üretici No. 1354W-72</td><td></td></tr><tr><td>Tavşan serumu</td><td>Yaşam Teknolojisi</td><td>Kataloğu # 10510</td><td></td></tr><tr><td>Hedef Alma Çözümü</td><td>Agilent Dako</td><td>S2367</td><td>TRIS / EDTA, pH 9 (10x)</td></tr> <tr><td>TrueVIEW Otofloresan Söndürme Kiti</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>SP-8400</td><td></td></tr></tbody></table>

İmmünofluoresans mikroskobu kullanılarak parafin gömülü kedi arteriyel trombisinde nötrofil ekstrasellüler tuzakların belirlenmesi

Identification of Neutrophil Extracellular Traps in Paraffin-Embedded Feline Arterial Thrombi using Immunofluorescence Microscopy

Hücresiz DNA (cfDNA) ve histones ve nötrofil elastaz (NE) gibi proteinlerden oluşan nötrofil ekstrasellüler tuzakları (NETs), sistemik inflamasyon veya patojenlere yanıt olarak nötrofiller tarafından salınır. Daha önce NET'lerin pıhtı oluşumunu artırıp insanlarda ve köpeklerde fibrinolizi inhibe kleri gösterilmiş olsa da, hipertrofik kardiyomiyopatiye sekonder yaşamı tehdit eden bir komplikasyon olan kardiyojenik arteriyel tromboemboli (CATE) olan kedilerde NET'lerin rolü , bilinmemektedir. Kedilerde kardiyojenik artertrombinde NET'leri tanımlamak ve ölçmek için standartlaştırılmış bir yöntem, CATE'deki patolojik rollerini anlamamızı sağlayacaktır. Burada, nekropsi sırasında çıkarılan aort bifurkasyonu içinde formaldehit-sabit ve parafin gömülü trombi de NETs tanımlamak için bir teknik açıklanmıştır. Ksilen ile deparafinizasyon dan sonra, aort bölümleri dolaylı ısı kaynaklı antijen alma yapıldı. Daha sonra kesitler bloke edildi, permeazize edildi ve ex vivo NET'ler hücresiz DNA (cfDNA), sitilinated histon H3 (citH3) ve nötrofil elastaz (NE) immünofloresan mikroskobu kullanılarak kolokalizasyonu ile tespit edildi. Trombide Nİt'lerin immünosaptasyonuna optimize etmek için doku elementlerinin otofloresansı mikroskopi den önce otofloresan söndürme işlemi ile sınırlandırıldı. Bu teknik, diğer türlerde NETs ve tromboz çalışma için yararlı bir araç olabilir ve bu karmaşık durumun patofizyolojisi içine yeni anlayışlar sunuyor.

Bu protokolü deparafinizasyon, ısıya bağlı antijen alımı ve parafin gömülü trombinin çift immünetiketlemesi için kullanarak, kedi CATE'de ilk kez NET'leri tespit ettik. Aort bifurkasyonu içinde trombüs, standart H&amp;E boyama ve faz kontrast lı mikroskopi kullanılarak floresan mikroskobu ve parlak alan mikroskobu ile saptandı. Parlak alan mikroskobunda kedi artertrombisi kırmızı kan hücreleri, lökositler, fibrin ve trombositlerden oluşuyordu(Şekil 3A). H&amp;E belirli NET bileşenlerini leke...

Isıya bağlı antijen alma ve çift immün etiketleme protokolü kullanarak formaldehit sabit ve parafin gömülü kedi kardiyojenik arteriyel trombisinde nötrofil ekstrasellüler tuzaklarını (NET) tanımlamak için bir yöntem tanımladık.

İmmünofluoresans Mikroskobu kullanılarak Parafin Gömülü Kedi Arteriyel Trombisinde Nötrofil Ekstrasellüler Tuzakların Belirlenmesi

Neutrophil extracellular traps (NETs), composed of cell-free DNA (cfDNA) and proteins like histones and neutrophil elastase (NE), are released by ...

Parafinizasyon bu protokol parafinin gömülü aort kesitlerinin antijen alımı takip kedi trombozu nötrofilik trisellüler tuzakların rolünü incelemek için yararlı bir araç olabilir. Sabit ve parafin gömülü dokuda immünororesans tarafından nötrofilik trisellüler tuzakların saptanması, daha güvenli DNA ve ekstrasellüler proteinlerin eşzamanlı olarak algılanmasına olanak sağladığından HNE gibi konvansiyonel histolojik stentlerden üstündür. Bu protokol diğer trombüs türlerinde ve diğer veteriner türlerinde kullanılabilir.Kedi arteriyel trombüs içinde nötrofil ekstrasellüler tuzakların belirlenmesi kedilerde trombozda rol oynayabileceğini düşündürmektedir. Burada sunulan protokoller kurallardır. Araştırmacıları, tatmin edici bir sinyal vermek için antijen alma sürecinin süresini ve koşullarını ayarlamaya önem veririz.Cam slaytlar üzerindeki bölümlerin deparafinizasyonunu ve yeniden hidrasyonunu gerçekleştirmek için otomatik bir sistem kullanmak için cam slaytları raflara yerleştirin. Üç dakika boyunca yüzde 100 tuzlu tamamen batırın. Bu adımı iki kez tekrarlayın.Adımlar arasında durulama yapmayın. Oda sıcaklığında üçer dakika boyunca üç kez etanol konsantrasyonlarını azaltarak tamamen batırın. İki dakika boyunca tamamen deiyonize suya batırın ve bir kez daha tekrarlayın.TBST ile tedavi den sonra, 100 santigrat dereceye ısıtılan deiyonize su ile rezervuar doldurun. Vapur odasının 20 dakika boyunca dengede olmasını bekleyin. Bir ısı plakası üzerinde, pH 9,0 ila 95 ila 97 santigrat derece Tris ve EDTA içeren ticari olarak kullanılabilir antijen alma çözeltisi ısıtın.Kaynamadığından emin olun. Suberge tamamen ısıtmalı antijen alma çözeltisi slaytlar ve 20 dakika boyunca buharlı ile harici ısıtma uygulaması devam edin. Daha sonra, slaytları TBST ile beş dakika boyunca üç kez yıkayın.Şimdi, bölümleri arabellek 1'i engellemeye yerleştirin. 30 ve 50 rpm arasında hafif sallanan altında oda sıcaklığında iki saat kuluçka. Yıkama olmadan, hemen doğrudan slayt üzerine seyreltilmiş tavşan poliklonal anti-insan sitülinated histon H3 antikor 100 mikrolitre uygulayın.Antikor karışımının eşit şekilde dağıtılmasını sağlamak için her bölüme bir kapak fişi yerleştirin. 12 ila 16 saat boyunca 4 santigrat derecede hafif sallanan kuluçka. Bundan sonra, her seferinde beş dakika TBST ile slaytları üç kez yıkayın.Antikor uygulamak için, bir pipet kullanın ve eşit Alexa Fluor 488 konjuge keçi anti-tavşan antikor 100 mikrolitre dağıtmak. Slaytları folyo ile kaplayın ve hafif sallanan altında oda sıcaklığında bir saat boyunca slaytları kuluçkaya yatırın. El yazmasına göre TBST ile yıkandıktan sonra, tampon engelleme bölümleri kuluçka 2 nazik sallanan altında dört derece santigrat gecede.Işıktan koruyun. Her seferinde beş dakika tbst ile üç kez yıkayın. Daha önce oda sıcaklığında hafif sallanan altında iki saat boyunca yapılan tampon 3 engelleme bölümleri engelleyin.Biotin laded ployclonal tavşan anti-insan nötrofil elastaz antikor ile dört derece Santigrat 12 ila 16 saat daha önce açıklandığı gibi bölümleri inkübün. TBST ile yıkandıktan sonra oda sıcaklığında bir saat boyunca Alexa Fluor 594 Streptavidin Conjugate ile slaytlar inkübün. Bundan sonra, Beş dakika tbst ile bir kez yıkayın.100 mikrolitre Autofluorescense Quenching çözeltisi karışımını üreticinin talimatıyla doğrudan bölümlere bir dakika uygulayın. Slaytları her seferinde 10 dakika boyunca altı kez TBST ile yıkayın. Karanlıkta beş dakika boyunca 300 nanomolar DAPI 100 mikrolitre ile her slayt kapağı.Sonra TBST ile her seferinde üç dakika beş kez yıkayın. Bölümü çevreleyen cam kaydırakaya doğrudan bir damla antifade montaj ortamı uygulayın. Herhangi bir kabarcık oluşturmadan yavaşça bölümün üzerine bir kapak kayma yerleştirin.Örneklerin bir gecede karanlıkta dört santigrat derecede tedavi etmesine izin verin. Trombüs bulmak için, 10x amacı ile faz kontrast mikroskopisi kullanarak aort bifurkasyon ve her femeral arter uzunluğu boyunca caudally için kafatasıtöbi tarasık. İlk olarak 357 ve 44 nanometrede uyarma ile DAPI kanalını kullanarak hücresiz DNA kesitlerini inceleyin.Teksas kırmızı ve yeşil floresan protein kanallarında sırasıyla ekstrasellüler nötrofil elastaz ve sitülilofil histon H3 tanımlayın. Piksel yoğunluğunda doygunluğu önlemek için görüntülerin edinimi boyunca her kanalın tutarlı pozlama süresini ve kazançlarını koruyun. Nötrofil ekstrasellüler tuzakları nötrofil elastaz, sitilinated histon H3 ve hücreiçermeyen DNA'nın eş lokalizasyonuna dayalı olarak tanımlanır.Hematoksilin ve eozin lekesi ve brightfield mikroskobu kullanılarak kedi artertrombini kırmızı kan hücreleri, lökositler, fibrin ve trombositlerden oluşur. NETs yakındaki eritrositler ve lökositler çevreleyen çeşitli uzunluklarda derin mor iplikağları olarak ortaya çıktı. Bu protokolü kullanarak, immünofloresan mikroskopisi hücre içermeyen DNA, ekstrasellüler sitülsinated histon H3 ve nötrofil elastaz oluşan NETs büyük agregalar ortaya.İmmün mikroskopide faz kontrastı altında trombüs vasküler alan içinde iyi çizilmiş bir yapı olarak karakterize edildi. Ancak kontrol örneklerinin hiçbirinde trombüs saptanmadı. Bu şekil, 488 nanometre dalga boyunda görüntülendiğinde eritrositler gibi pıhtı elementlerinin derin otofloresence sini göstermektedir.Immünlabelling sonrası kısa otofloresence söndürme önemli ölçüde eritrosit lerin bol olduğu bölgelerde bile protein ko-lokalizasyon ve NET algılama duyarlılığını artırdı. Fiksasyon süresi bazı antijenlerin immünreaktivitesini etkiler. Biz en fazla 24 saat par dehidratasyon ve parafin gömme için fiksasyon öneririz.Alternatif olarak, metanol içermeyen paraformaldehit formaldehit oksidasyonu formik asit ve ketonlar tarafından artifakı sınırlamak için kullanılabilir. Aynı türden kaynaklanan birincil antikorları kullanırken paraziti önlemek için, ikincil antikorlar üzerinde kalan bağlayıcı bölgeleri doyuracak ek engelleme adımı da dahil ettik. Araştırmacılar, izotip antikorlarından oluşan negatif kontrolleri, primer antikorların dışlanmasını ve immün etiketleme adımını ve trombozsuz kedilerden biyolojik kontrolleri içermelidir.Trombin doku sınırlarının otofloresence nötrofil ekstrasellüler tuzakların mikroskobik kimlik çekiç olabilir. Araştırmacı uzak kırmızı floroforlar kullanarak floresan en aza indirebilirsiniz. Bu teknik, diğer veteriner türlerinde nötrofil ekstrasellüler tuzakları çalışma için değerli bir araç olabilir.Bu tromboz patofizyolojisi daha iyi anlaşılmasını sağlayabilir.

identification-neutrophil-extracellular-traps-paraffin-embedded

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Nötrofil dışı tuzaklar (NET) DNA, histon ve nötrofil proteinlerin ağlardır. Doğuştan gelen bağışıklık tepkisinin bir bileşeni olmasına rağmen, ağ otoimmün ve tromboz implike edilmiştir. Bu protokol, köpek nötrofil izolasyon ve bir mikroplaka flüoresans deneyi kullanılarak NET'ler ölçümü için basit bir yöntem tarif eder.

Köpek Nötrofil Ekstrasellüler Trap Release Niceleme için Basit Floresan Testi

Biz tam kan gelen köpek nötrofil yalıtmak ve NET canlı nötrofil floresans mikroskobu kullanılarak oluşumunda görselleştirmek için yöntemleri açıklanmaktadır. Ayrıca açıklanan NET oluşumu ve citrullinated histon H3 ölçmek için iletişim kurallarıdır ayirt mikroskobu kullanarak (citH3) ifade.

Vitro Köpek nötrofil hücre dışı tuzak oluşumu: Floresans mikroskobu dinamik ve nicel analiz

Nötrofil ekstrasellüler tuzakları (NETs) uyarılmış nötrofil granülositler tarafından oluşturulan üç boyutlu yapılardır. Son yıllarda NET'lerin çok çeşitli hastalıklara karıştıkları ortaya çıkmıştır. Dokudaki NET'lerin saptanması tanısal bir önemi olabilir, bu nedenle NET bileşenlerinin etiketlenmesi için standart protokoller gereklidir.

Parafin-Gömülü Dokuda İnsan ve Mürin Nötrofil Ekstrasellüler Tuzaklarının İmmünofloresan Etiketlemesi

Nötrofil hücre dışı tuzaklar (NET'ler) çeşitli hastalıklarla ilişkilidir ve immünofloresan genellikle görselleştirmeleri için kullanılır. Bununla birlikte, çeşitli boyama protokolleri vardır ve çoğu durumda sadece bir doku türü incelenir. Burada, fare ve insan dokusunda NET'lerin boyanması için genel olarak uygulanabilir bir protokol oluşturuyoruz.

İnsan ve Fare Dokularında Nötrofil Hücre Dışı Tuzakların İmmünofloresan Görüntülemesi

Nötrofil Ekstrasellüler Tuzaklar (NET), patojen bakteriler, mantarlar ve parazitler mücadele için önemli bir doğuştan gelen bağışıklık mekanizması. Burada insan kan nötrofil granülositler izole etmek ve NET'ler oluşturmak için bunları etkinleştirmek yöntemleri açıklanmaktadır. Biz ışık ve elektron mikroskobu NET'ler görselleştirmek için hazırlama teknikleri mevcut.

Nötrofil Ekstrasellüler Tuzaklar: Onları nasıl oluşturun ve görselleştirin için

Aşağıdaki protokol, piyasada kolayca bulunabilen ayıraçları kullanarak, insan tüm kanından Nötrofil Ekstrasellüler tuzakları (NET) izole etmek için çok basit bir şekilde tarif eder. Daha sonra izole edilmiş NET'ler kanser hücreleri bir in vitro yapışma deneyinde kullanılabilir gösterilmektedir.

Basitleştirilmiş İnsan Nötrofil Ekstrasellüler Tuzaklar (NET) İzolasyon ve Taşıma

Burada, DIG etiketli 16S rRNA hedefli DNA probları kullanılarak parafine gömülü dokulardaki bakterileri lokalize etmek için bir yöntem açıklanmıştır. Bu protokol, periodontitis, kanserler ve inflamatuar bağışıklık hastalıkları gibi çeşitli hastalıklarda bakterilerin rolünü incelemek için uygulanabilir.

16S rRNA Hedefleme Digoksin-etiketli DNA probu kullanılarak Parafine gömülmüş dokular içinde Bakterilerin in situ tespiti

Lipidler hücresel fonksiyonlarda önemli rol oynadıkları bilinmektedir. Burada, nötrofil hücre dışı tuzak oluşumunun altında yatan mekanizmaların daha iyi anlaşılması için HPTLC ve HPLC birlikte kullanarak, kolesterol seviyesi üzerinde durularak, nötrofillerin lipit bileşimini belirlemek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Yöntemler lipid Nötrofiller değişiklikler ve Nötrofil Ekstrasellüler Tuzaklar sonraki oluşumunu incelemek

Biz burada elde edilmesi ve nötrofil kaynaklı dev fagositler bir yeni özelliği alt popülasyonunu belirlemek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu hücreler taze insan kan nötrofillerinin kültüre geliştirmek ve fagositoz, Otofaji, gayet büyük bir boyut ve uzun ömrü ile karakterize edilir. Bu yöntem ayrıca, bu benzersiz nötrofil türevi alt popülasyonu araştırılması gereklidir.

İnsan Nötrofil türetilmiş Dev Fagositler bir Roman ICSI'nin Gelişimi ve Kimlik İn Vitro

Makrofaj hücre dışı tuzakları yeni açıklanan bir varlık vardır. Bu makale confocal mikroskobu yöntemleri üzerinde konsantre ve nasıl olduklarını vitro ve in vivo akciğer örneklerinden görüntülenir.

Makrofaj hücre dışı tuzaklar Confocal mikroskobu kullanılarak görüntülenmesi

Keşfedin, parafin gömülü kedi arteriyel trombisinde çift immünolabeling ile nötrofil ekstrasellüler tuzaklarını immünofluoresan mikroskobu kullanarak belirleme yöntemini. Bu protokol veteriner tıpta tromboz patofizyolojisini anlamak için değerli bir araçtır.

İmmünofluoresans Mikroskobu kullanılarak Parafin Gömülü Kedi Arteriyel Trombisinde Nötrofil Ekstrasellüler Tuzakların Belirlenmesi (Video) | JoVE Journal

İmmünofluoresans Mikroskobu kullanılarak Parafin Gömülü Kedi Arteriyel Trombisinde Nötrofil Ekstrasellüler Tuzakların Belirlenmesi

Daha fazla video keşfet