Test (Neo) adjuvan Tedaviler için İntam Rezeke Yumuşak Doku Sarkomu Bir Fare Modeli
July 28th, 2020
Bu protokolde, yumuşak doku sarkomunun (neo) adjuvan tedavileri test etmek için tamamlanmamış cerrahi rezeksiyonunun fare modelini tanımladık.
Bu protokol, tümör debulking cerrahisi sonrası kalıntı hastalığın klinik ayarı taklit etmeyi amaçlamaktadır ve bu nedenle postoperatif yara iyileşmesi bağlamında yeni kanser tedavilerini test etmemizi sağlar. Bu tekniğin avantajı, oluşan yara miktarının standardizasyonuna ve tümör miktarının kalmasını sağlamasıdır. Bu teknik özellikle kanserler için yeni tedavilerin belirlenmesinde klinik öncesi çalışmalar için önemlidir, bu yerel olarak nüks hangi yumuşak doku sarkomu bir örnek.
Bu görsel gösteri, deri tarafına bağlı tümörü ortaya çıkarmamızı sağlayan ters çevirme tekniğini göstermek için çok önemlidir. Metin protokolünde açıklandığı gibi, farelerde hazırlanmış kanser hücrelerinin deri altı aşısı ile bu prosedüre başlayın. 12. günde, post inoculation, tümörler yaklaşık 50 milimetre boyutuna ulaştığında, boyun scruffand buprenorfin 100 mikrolitre ile doz fareler, ameliyattan 30 dakika önce.
Tezgah kat ile kaplı ısı yastığı ile cerrahi alan kurmak ve anestezi için bir burun konisi kurmak. Klorhekzadin, bez, gazlı bez, göz jeli, iki kavisli ençes, makas, klip aplikatör, klip sökücü ve klips dolumları da dahil olmak üzere kolay ulaşılabilecek şekilde temiz cerrahi ekipmanlar düzenleyin. Isıtma odasını 37 dereceye ısıtın ve geri kazanım için başka bir ısı yastığı ayarlayın.
Bu yordamın iki kişi gerektirdiğini unutmayın. Bir asistan işlem sırasında farenin nefesini yakından izlemelidir. Metin protokolünde açıklandığı gibi fareyi anestezi ettikten sonra, ameliyata başlamadan önce farenin tamamen anestezi li olduğundan emin olmak için bir tutam testi ve kornea refleks testi yapın.
Göz kuruluğu önlemek için göz kuruluğu az miktarda göz ile farenin gözlerini kaplayın. Klorhekzadin ile cerrahi alanı temizleyerek bu cerrahi başlayın. Perifre ve makas kullanarak tümörden üç milimetre uzakta, dorsal tarafı boyunca bir santimetre düz kesi yapar.
Iyi iyileşmez gibi doğrudan tümör kapsayan deri kesmeyin. Tümörü kesmek için bir neşter kullanmaktan kaçının ve parçaları kepçe cımbız kullanın. Cımbız kullanarak, tümör ve periton arasında fasya ve deri altı yağ dokusu çekin.
Deri altı tümör normalde deri tarafına takılır. Yarayı, cımbızkullanarak tümörün yan tarafındaki deriyi hafifçe tutarak açın ve tümörü dışarıda görülebilmesi için ters çevirin. Makas bir çift kullanarak, kaldırmak için yarısından tümör kapsülü kesip, açılışa en yakın tümörün tabanından başlayarak.
%50 debulk cerrahisi için, tümörün ortasından kes. Kavisli forceps kullanarak çıkarılacak tümör bölümünü kepçe. Debulk bölgesinden kalan tüm kalıntıları topla.
%75 debulk için, %50 tümör debulk yaparak başlayın ve tümörün kalan %50'sinin yarısını kesin. Kavisli forceps kullanarak tümörün%25'ini kepçeyle toplayıp. Cerrahi bölgeyi kapatmak için, kalan tümörü derinin altına geri yerleştirin ve forceps kullanarak, deri fleplerini bir araya getirin ve yara boyunca deriyi hizalayın.
Yaranın kenarından beş milimetre uzakta deriyi bir arada tutun ve çersepse en yakın olan yan taraftaki yarayı kapatmak için cerrahi klipsler kullanın. Hiçbir altta yatan doku maruz olduğundan emin olmak için gerektiği kadar klips uygulayın. Genellikle, klipler arasında iki milimetrelik boşluklar ile üç ila dört klips uygulanır.
Farelerin sıcak ısıtma odasına koyarak kurtarmak için izin verin. Farenin kafesini ısı yastığına yerleştirin. Fareleri anesteziden iyileşene kadar ısıtma odasında izleyin.
Daha sonra, fareleri kafese geri koyun, fareler daha aktif hale gelene kadar 10 dakika daha ısı yastığı üzerinde kafes bırakın. Farelere ıslak ve yumuşak yiyecekler verin. İyileşmek için ameliyattan bir saat sonra fareleri izleyin.
Günün sonunda ve ertesi sabah fareleri tekrar izleyin ve klipslerin yerinde kalmasını sağlayın. Fareleri herhangi bir zamanda gelişi veya neoadjuvan tedavi ile perioperatif olarak tedavi edin, ilgi tedavisine bağlı olarak. Örneğin, aşıdan sonra 15.
Alternatif olarak, fareleri aşılamadan sonra günde 200 mikrogram anti-PD-1 intraperitoneal, 15, 17 ve 19 dozile tedavi edin. 50 milimetrekarelik tümörlerin tamamlanmamış cerrahi rezeksiyonu, burada noktalı çizgi ile gösterilen adjuvan immünoterapi yokluğunda tümörlerin %100 tekrarlanabilir rebüyüme ile sonuçlanır. Bu nedenle, 50 milimetre lik bir boyuta tümör büyüme kısmi debulk için ideal bir boyut.
Model daha sonra kontrol noktası modüllerine karşı antikorlar kullanılarak adjuvan immünoterapileri test etmek için kullanıldı, sitotoksik T lenfosit ilişkili protein dört ve programlanmış ölüm reseptörü bir. Anti-CTLA-4 ile farelerin tedavisi, %80'lik bir kür oranı ile sonuçlanırken, anti-PD-1 ile farelerin tedavisi %25'lik bir kür oranıile sonuçlanırAnti-PD-1 ile yanıt, yanıt oranını daha da artırmak için yeni kombinasyonları test etme fırsatı sağlar. Kalan tümörün cilde bağlı kalması önemlidir, aksi takdirde kan akımı kesilir ve tümör nekrotik olur.
Bu işlemden sonra tümörler, cerrahinin tümör emzme hücreleri nasıl etkilediğini değerlendirmek için akış sitometrisi gibi çeşitli yöntemlerle analiz edilebilir. Bu fare modeli bize nasıl yara iyileşmesi kanser immünoterapiler etkiler keşfetmek için izin verdi.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Genel Bakış
Bu protokol, yumuşak doku sarkomunun incomplet cerrahi rezeksiyonu için bir fare modelini tanımlar ve (neo)adjuvant terapilerin test edilmesine olanak tanır. Tümör küçültme ameliyatından sonra kalan hastalığın klinik ortamını taklit eder.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Onkoloji
- Preklinik Araştırma
- Cerrahi Teknikler
Arka Plan
- Yumuşak doku sarkomu ameliyattan sonra sıklıkla lokal nüks yapar.
- Model, yara ve kalan tümör miktarını standardize eder.
- Yeni kanser tedavilerinin tanımlanması için kritik öneme sahiptir.
- Tümör maruziyeti için inversiyon tekniğini gösterir.
Çalışmanın Amacı
- Kontrollü postoperatif ortamda yeni kanser terapilerini test etmek.
- Terapilerin kalan hastalık üzerindeki etkilerini değerlendirmek.
- Kanser bağlamında yara iyileşmesini daha iyi anlamak.
Kullanılan Yöntemler
- Fareleri altkutanöz olarak kanser hücreleri ile inoküle etmek.
- Belirli bir boyuta ulaşana kadar tümör büyümesini izlemek.
- Ameliyat öncesi buprenorfin uygulamak.
- İncomplet rezeksiyonu modellemeye yönelik cerrahi tekniklerin uygulanması.
Ana Sonuçlar
- Standartlaştırılmış model, tekrarlanabilir sonuçlara olanak tanır.
- (Neo)adjuvant terapilerin test edilmesini kolaylaştırır.
- Cerrahi tekniklerin tümör davranışı üzerindeki etkisini gösterir.
- Postoperatif iyileşme süreçleri hakkında bilgiler sağlar.
Sonuçlar
- Model, yumuşak doku sarkomu için preklinik çalışmalarda etkilidir.
- Lokal tümör nüksünü daha iyi anlamak için kullanılır.
- Yeni terapötik stratejilerin geliştirilmesini destekler.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
This model addresses a critical gap in preclinical oncology by simulating residual disease after incomplete tumor resection, enabling evaluation of (neo)adjuvant therapies in the context of postoperative wound healing. It supports target validation and mechanistic de-risking by capturing the biological complexity of surgery-induced microenvironmental changes that influence therapeutic response. The reproducible tumor regrowth in untreated controls provides a robust benchmark for assessing therapeutic efficacy, directly informing go/no-go decisions in early discovery pipelines.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of therapeutic hypotheses in a disease-relevant system that includes residual tumor and surgical wound response.
- Operational Value: Standardizes tumor burden and wound variables to reduce experimental noise and improve reproducibility across studies.
- Predictive Value: Supports preclinical model selection by demonstrating differential response to immunomodulators like anti-CTLA-4 and anti-PD-1, aiding in lead identification.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates quantitative tumor regrowth metrics that serve as a dependent variable for assessing (neo)adjuvant therapy impact.
- Operational Value: Facilitates assay standardization through defined resection percentages (50% or 75%) and measurable endpoints like tumor size at 50 mm².
- Scalability: Enables consistent compound evaluation across laboratories by modeling gross residual disease in a controlled surgical context.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Models the clinical scenario of gross residual disease, allowing assessment of how wound healing modulates antitumor immunity and therapy efficacy.
- Translational Continuity: Bridges discovery and preclinical stages by incorporating a key clinical variable—surgical resection—into therapeutic testing.
- Risk-Adjusted Decision-Making: Provides data to prioritize therapies that overcome surgery-induced immunosuppression or promote immune reactivation in residual disease settings.
Pipeline & Workflow Integration
The model fits within the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing, particularly for immunomodulatory agents where postoperative microenvironment affects outcomes.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing on how surgical stress alters tumor-immune interactions and therapeutic susceptibility.
- Screening: Delivers reproducible, quantitative tumor growth readouts essential for comparing compound effects in residual disease models.
- Analytics: Enables statistical analysis of tumor regrowth inhibition, providing measurable outputs for dose-response and combination therapy evaluation.
- Translational Research: Connects to biomarker studies by allowing flow cytometric analysis of tumor-infiltrating lymphocytes in the context of wound healing.
- Enterprise Reuse: Represents a adaptable platform for solid tumor types beyond soft tissue sarcoma, supporting cross-indication preclinical validation.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence by modeling a clinically relevant resistance mechanism—surgical wound healing—that contributes to local relapse.
- Operational Value: Enhances reproducibility through standardized surgical technique and defined residual tumor thresholds.
- Strategic Value: Improves capital efficiency by identifying ineffective (neo)adjuvant candidates early, reducing late-stage failure risk due to unmodeled surgical biology.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted advancement of therapies demonstrating efficacy in residual disease, aligning with clinical trial design for adjuvant settings.
Implementation Considerations
- Requires expertise in murine surgical techniques, anesthesia monitoring, and aseptic procedure to ensure model consistency and animal welfare.
- Dependent on instrumentation including heating chambers, surgical clips, and precision tools for controlled tumor debulking and wound closure.
- Necessitates cross-team standardization between biology and surgical teams to maintain resection fidelity across experimental groups.
- Adaptation considerations include tumor model selection, inoculation site, and postoperative monitoring timelines to align with therapeutic mechanisms of interest.
- Practical limitations include the need for postoperative care and monitoring to ensure wound integrity and exclude confounding variables like infection or necrosis.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
0:04
Introduction
0:56
Set-up for Partial Surgical Resection of the Tumor
2:23
Partial Surgical Resection of the Tumor
4:20
Recovery of Mice and Adjuvant or Neoadjuvant Treatment
5:35
Results: Tumor Regrowth Following Incomplete Tumor Resection and Immunotherapy
6:35
Conclusion
