Name: Test (Neo) adjuvan Tedaviler için İntam Rezeke Yumuşak Doku Sarkomu Bir Fare Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-07-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Öğrenin yumuşak doku sarkomu için fare modelinde tamamlanmamış cerrahi rezeksiyon tekniğini. Bu yöntem, (neo)adjuvan tedavileri test etmek ve kanser immünoterapisinde yara iyileşmesinin etkisini anlamak için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma Sarcoma için Çorap gelen hibe tarafından desteklenir! Vakfı, Avustralya ve Yeni Zelanda Sarkomu Derneği, Çocuk Lösemi ve Kanser Araştırma Vakfı ve Sürekli Hayırseverlik. W.J.L Simon Lee Bursu ve Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi bir araştırma bursu tarafından desteklenir ve Kanser Konseyi WA.

Bu deneylerde kullanılan hayvanlar Hayvan Kaynakları Merkezi'nden (Perth, Batı Avustralya) elde edilmiştir. Hayvanlar, Harry Perkins Tıbbi Araştırma Biyokaynakları Kuzey Tesisi'nde (Perth, Batı Avustralya) standart patojensiz koşullar altında muhafaza edildi. Tüm deneyler, Harry Perkins Tıbbi Araştırma Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanan protokol sonrasında yapılmıştır. Bu deneylerde 8-12 haftalık BALB/c fareler kullanılmıştır. WEHI 164 fibrosarkom hücre hattı CellBank Avustralya (Westmead, NSW) elde edildi.
1. Hücrelerin aşılanması
<ol><li>Hücre ve hayvanların hazırlanması<ol>
<li>Hücre hattının önerilen ortamda tutulmasından emin olun. Örneğin, Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 orta 2 mM L-glutamin, 10% fetal sığır serumu, 20 mM HEPES, 0.05 mM 2-mercaptoetanol, 100 U/mL penisilin ve 100 μg/mL streptomycin ile takviye wehi 164 hücre hattı korumak. NOT: Gebe hücreler kriyojenik depodan çıkarıldıktan sonra en az 3 ve en fazla 5 kez. Optimum hücre canlılığı sağlamak için, hücreler% 70-80 arasında konfluent olduğunda bölünmelidir. Tümör hücre hatları mikoplazma için test edilmelidir, enfeksiyon hücre büyümesini değiştirebilir ve in vivo bağışıklık yanıtını etkileyebilir gibi.</li>
		<li>Aşılamadan bir gün önce, sağ alt kanadında ki fareleri makas kullanarak tıraş edin. NOT: Bu deneyde 8-12 haftalık, normal kiloda (16 -22 gram) dişi BALB/c fareler kullanılmıştır.</li>
		<li>Aşılama gününde WEHI 164 hücrelerini %70-80 oranında trypsinizasyon la kapladığında hasat edin.<ol>
<li>Doku kültürü şişelerinden kültür ortamıaspire ve sonra steril fosfat tamponlu çözelti (1x PBS) ekleyin, fetal sığır serum (FBS) kalan izlerini kaldırmak için.</li>
			<li>Doku kültürü şişelerinden PBS aspire. %0,05 tripsin (T75 şişesi için) 3 mL ekleyin ve sonra şişeyi hücreli şişenin tüm yüzeyinin tripsin ile kaplanması için döndürün.</li>
			<li>Şişeyi 37 °C'de, %5 CO2 kuluçka makinesinde 3 dk.</li>
			<li>Hücre kültürü kuluçka gelen şişeleri çıkarın ve trypsin nötralize FBS ile desteklenen medya 5 mL ekleyin. NOT: Bu hücrelere zarar verebilir ve düşük hücre canlılığı yol açabilir gibi, gerekli daha uzun tripsin hücreleri bırakmayın.</li>
			<li>Tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için pipet süspansiyonu birden çok kez. Hücre süspansiyonu konik santrifüj tüpüne aktarın.</li>
			<li>3 dk için 350 x g iplik tarafından pelet hücreleri.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Hücreleri 1x PBS'de üç kez yıkayın.<ol>
<li>Steril 1x PBS 50 mL hücreleri resuspend ve yukarı ve aşağı hücre süspansiyon pipetleme hücreleri yıkayın. 3 dk için 350 x g iplik tarafından pelet hücreleri.</li>
			<li>Steril 1x PBS'nin 15 mL'inde süpernatant ve resuspend hücreleri aspire edin. Hücre süspansiyonuna boru ile tutarak hücreleri yıkayın. 3 dk için 350 x g iplik tarafından pelet hücreleri.</li>
			<li>Steril 1x PBS'nin tam 10 mL'inde süpernatant ve resuspend hücreleri aspire edin. 1.1.4.2'deki gibi hücreleri yıkayın ve az miktarda (yaklaşık 100 μL) hücre süspansiyonunu saymak için bir santrifüj tüpüne aktarın. 3 dk için 350 x g iplik tarafından pelet hücreleri.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Hemositometre veya otomatik hücre sayacı kullanarak Trypan mavi dışlama yöntemini kullanarak hücre numarasını belirleyin. Steril 1x PBS'deki hücreleri 5 x 106 hücre/mL konsantrasyonda yeniden askıya alın. Hücre süspansiyonuna buz da tut. NOT: Tekrarlanabilir tümör büyümesini sağlamak için tümör hücrelerinin canlılığı %80'in üzerinde olmalıdır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Deri altı aşısı<ol>
<li>Hücre süspansiyonuna iyice karıştırın ve steril 1x PBS'de 100°L hücre süspansiyonu (5 x 105 hücre) ile 26 G iğneile şırınga doldurun. Bir sonraki şırıngayı yüklemeden önce hücrelerin karıştırılması tekrarlayın. NOT: Canlılığı korumak için işlem boyunca hücreleri buzüzerinde tutun.</li>
		<li>Fareyi uygun şekilde dizginler ve sağ alt kanadına erişimi sağlar. Fareyi alttan sol kanatta aşılama. NOT: İğneyi hafifçe kaldırarak aşının peritonda olmadığından emin olun, deri altında görülmelidir. Aşılamadan sonra derinin altında kabarcık benzeri bir yumru oluşmalıdır.</li>
		<li>Fareleri ilgili etik onayı gerektirdiği şekilde izleyin ve tümörler yaklaşık 50 mm2boyutuna büyüdüğünde cerrahi rezeksiyon yapın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Tümörün parsiyel cerrahi rezeksiyonu
NOT: Bu protokol İkİ araştırmacı gerektirir; biri cerrahi işlemler (CERRAH) ve diğeri fare izleme (ASSISTANT) için.
<ol><li>Cerrahi kurulum<ol>
<li>Gün 12 post aşılama, tümörler yaklaşık 50 mm2boyutuna ulaştığında, 100 μL (0.1 mg /kg) buprenorfin s.c. ile doz fareler boyun scruff içinde, ameliyattan 30 dakika önce.</li>
		<li>Tezgah kat ile kaplı bir ısı yastığı ile cerrahi alan kurmak ve anestezi için bir burun konisi kurmak. Kullanmadan önce cerrahi araçları sterilize edin ve her hayvan arasında bir ısı boncuk sterilizatör kullanarak, araçları kullanmadan önce soğumasını sağlar. Aşağıdaki cerrahi ekipmanı temiz ve kolay ulaşılabilecek bir yerde bulunur: klorheksidin, bez, gazlı bez, göz jeli, iki kavisli çözgü, makas, klips aplikatör, klip sökücü, klips dolumları(Şekil 2A, 2B).</li>
		<li>Isıtma haznesini 37 °C'ye ısıtın ve geri kazanım için başka bir ısı yastığı ayarlayın(Şekil 2C). Sterilize edilmiş aletleri otoklavpedler gibi steril bir yüzeye yerleştirin.</li>
	</ol></li>
	<li>Anestezi<ol>
<li>Fareyi indüksiyon odasına yerleştirin ve fareyi %4 izofluran (%100 oksijende %4 1 L/dk akış hızında% 4 oksijen) ile anestezi edin, ta ki solunum hızı dakikada yaklaşık 60 nefese (saniyede 1) yavaşlayana kadar (bu genellikle <1 dk). NOT: Fareyi boğulma ve ölüme yol açabileceği sürece odada çok uzun süre bırakmayın. Aynı anda anestezi altında sadece bir fare var.</li>
		<li>Fareyi ameliyat masasındaki ısı yastığına aktarın, burnu burun koniile fareyi yerleştirin ve anestezi durumunu %100 oksijende %100 oksijenle 0,5 L/dk. Anestezi derinliğinin korunmasını sağlamak için nefes alma hızını izleyin. NOT: YARDIMCI anestezinin doğru düzeyde tutulmasını sağlamak için ameliyat boyunca farenin nefesini izlemelidir. Nefes alma çok yavaş olursa anestezi konsantrasyonu düşürün veya anestezi derinliği çok sığ ise konsantrasyonu artırmak. Fare nefes almaya başlarsa, fareyi burun konisinden çıkarın, anestezi konsantrasyonunu azaltın ve burun konisini tekrar koymadan önce nefes inin normale dönmesini bekleyin.</li>
		<li>Farenin ameliyata başlamadan önce tamamen anestezi olduğundan emin olmak için "çimdik testi" ve "kornea refleks testi"14 yapın. NOT: Farenin herhangi bir bölümünün hareketi, farenin tam olarak anestezili olmadığının bir göstergesidir. Anestezi konsantrasyonu artırılarak hayvana hemen ek anestezi verilmelidir.</li>
		<li>Göz kuruluğu önlemek için göz kuruluğu az miktarda göz ile farenin gözlerini kaplayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Cerrahi işlem (CERRAHİ)<ol>
<li>Cerrahi bölgeyi alkollü klorheksidin le 3 kez temizler. Forceps ve makas bir çift kullanarak, dorsal tarafı boyunca 1 cm düz kesi yapmak, tümörden 3 mm uzaklıkta(Şekil 3A, 3B). NOT: Kesinin her farede 1 cm'ye kadar standartlaştırılması (cetvel kullanarak) fareler arasındaki yara iyileşmesinin bile değerlendirilmesine olanak sağlar. Kesinin tümörden 3 mm uzakta bulunması, yaradan sızmadan sonraki intratümöral adjuvan tedaviye olanak sağlar.</li>
		<li>Cımbız kullanarak, tümör ve periton arasında facia ve deri altı yağ dokusu çekin. Deri altı tümör normalde deri tarafına takılır.</li>
		<li>Yarayı, cımbız kullanarak tümörün yan tarafındaki deriyi hafifçe tutarak açın ve tümörü dışarıda görülebilmesi için "ters çevirin"(Şekil 3C, 3D). NOT: Tümörün debulked edilecek bölümü, yarayı kapatmak için yeterli cilde sahip olmak için açıklığa en yakın olmalıdır. Tümörü çıkarırken cildi kesmemeye dikkat edin.</li>
		<li>Makas bir çift kullanarak, kaldırmak için yarısından tümör kapsülü kesip, açılışa en yakın tümörün tabanından başlayarak.</li>
		<li>%50 debulk cerrahisi için, tümörün ortasından kes. Kavisli forceps kullanarak, tümör ünkikini çıkarılacak kısmı kepçe (%50);</li>
		<li>%75 debulk için, yukarıdaki bölüm 2.3.5 olarak% 50 tümör debulk gerçekleştirin. Daha sonra tümörün kalan % 50'sinin yarısını kesip tümörün %25'ini kepçelerler, yukarıda açıklandığı gibi kavisli forcep'ler kullanarak.</li>
	</ol></li>
	<li>Cerrahi alanın kapatılması<ol>
<li>Kalan tümörü derinin altına geri yerleştirin ve forceps kullanarak deri fleplerini bir araya getirin ve yara boyunca deriyi hizalayın.</li>
		<li>Yaranın kenarından 5 mm kadar deriyi bir arada tutun ve çersepse en yakın olan taraftan başlayarak yarayı kapatmak için cerrahi klipsler kullanın. Hiçbir altta yatan doku maruz olduğundan emin olmak için gerektiği kadar klips uygulayın. Genellikle, klipsler arasında 2 mm boşluklar ile üç ila dört klips uygulanır. NOT: Herhangi bir klip iyi uygulanmazsa, klip sökücü kullanarak çıkarın ve yeni klipler ile değiştirin.</li>
	</ol></li>
	<li>Farelerin kurtarılması (YARDIMCI)<ol>
<li>Farelerin ılık (37 °C) ısıtma odasına koyarak toparlanmalarına izin verin.</li>
		<li>Farenin kafesini ısı yastığına yerleştirin. Onlar anestezi (uyanık ve yürüyüş) kurtarıldı ve daha sonra kafesiçine fareler geri koymak kadar ısıtma odasında fareler izleyin. Fareler daha aktif hale gelene kadar kafesi ısı yastığında 10 dakika daha bekletin.</li>
		<li>Farelere ıslak ve yumuşak yiyecekler verin. Kurtarma için ameliyattan 1 saat sonra fareleri izleyin ve klipslerin yerinde kalmasını sağlayın. Hayvanların gözetimsizken sıcaklığı kendi kendine düzenlemelerine izin vermek için kafesin ısı yastığının yarısı açık/yarım olduğundan emin olun.</li>
		<li>0.1 mg/kg buprenorfin (boyun scruffin 100 μL subkutan), ameliyattan sonra 6-8 saat (günün sonunda) ile doz fareler. Fareleri ertesi sabah erken saatlerde izleyin ve fareleri tekrar 0.1 mg/kg buprenorfin (boyun scruff'unda 100 μL subkutan olarak) doza. Gerektiği gibi daha fazla ıslak gıda verin.</li>
		<li>Önümüzdeki yedi gün boyunca fareleri her gün izleyin. Klipsöküc kullanılarak klipler yedi gün sonra kaldırılabilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Adjuvan veya neoadjuvan tedavi<ol>
<li>Fareleri herhangi bir zamanda (neo)adjuvan tedavi ile perioperatif olarak tedavi edin, ilgi tedavisine bağlı olarak.</li>
		<li>Örneğin, aşıdan sonra 15 gün boyunca 100 μg anti-CTLA-4 intraperitoneally (yani) veya aşılama dan sonra 15, 17 ve 19.</li>
	</ol></li>
	<li>Deneysel kontroller<ol>
<li>Bu modeli inflamasyon/yara iyileşmesinin etkilerini değerlendirmek için kullanırken, aşağıdaki kontrol gruplarını kullanmayı düşünün: 1) Ameliyatsız kontrol (tedaviler hala intratümörel olarak uygulanabilir); 2) Sham cerrahi kontrolü: Deride cerrahi kesi yapılır; tümör manipüle edilir ve maruz kalır, ancak tümör dokusu çıkarılır; yara klipslerle kapatılır.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Orosco, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+Surgical+Margins+in+the+10+Most+Common+Solid+Cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Positive Surgical Margins in the 10 Most Common Solid Cancers.</a> Scientific Reports. 8 (1), 5686(2018).</li>
<li>Haas, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+Management+of+Extremity+Soft+Tissue+Sarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Perioperative Management of Extremity Soft Tissue Sarcomas.</a> Journal of Clinical Oncology. 36 (2), 118-124 (2018).</li>
<li>Brennan, M. F., Antonescu, C. R., Moraco, N., Singer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+learned+from+the+study+of+10%2C000+patients+with+soft+tissue+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lessons learned from the study of 10,000 patients with soft tissue sarcoma.</a> Annals of Surgery. 260 (3), 416-421 (2014).</li>
<li>Smith, H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+disease+relapse+in+primary+extremity+soft-tissue+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Patterns of disease relapse in primary extremity soft-tissue sarcoma.</a> British Journal of Surgery. 103 (11), 1487-1496 (2016).</li>
<li>Uramoto, H., Tanaka, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recurrence+after+surgery+in+patients+with+NSCLC%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Lung+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Recurrence after surgery in patients with NSCLC.</a> Translational Lung Cancer Research. 3 (4), 242-249 (2014).</li>
<li>Stojadinovic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+prognostic+significance+of+microscopic+margins+in+2%2C084+localized+primary+adult+soft+tissue+sarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Analysis of the prognostic significance of microscopic margins in 2,084 localized primary adult soft tissue sarcomas.</a> Annals of Surgery. 235 (3), 424-434 (2002).</li>
<li>Krall, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+systemic+response+to+surgery+triggers+the+outgrowth+of+distant+immune-controlled+tumors+in+mouse+models+of+dormancy%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">The systemic response to surgery triggers the outgrowth of distant immune-controlled tumors in mouse models of dormancy.</a> Science Translational Medicine. 10 (436), (2018).</li>
<li>Bakos, O., Lawson, C., Rouleau, S., Tai, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combining+surgery+and+immunotherapy%3A+turning+an+immunosuppressive+effect+into+a+therapeutic+opportunity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+for+ImmunoTherapy+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Combining surgery and immunotherapy: turning an immunosuppressive effect into a therapeutic opportunity.</a> Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 6 (1), 86(2018).</li>
<li>Predina, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+surgical+models+of+postoperative+tumor+recurrence+for+preclinical+adjuvant+therapy+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Characterization of surgical models of postoperative tumor recurrence for preclinical adjuvant therapy assessment.</a> American Journal of Translational Research. 4 (2), 206-218 (2012).</li>
<li>Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+to+evaluate+novel+and+conventional+therapeutic+strategies+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer.</a> American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).</li>
<li>Khong, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficacy+of+tumor+debulking+surgery+is+improved+by+adjuvant+immunotherapy+using+imiquimod+and+anti-CD40%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">The efficacy of tumor debulking surgery is improved by adjuvant immunotherapy using imiquimod and anti-CD40.</a> BMC Cancer. 14, 969(2014).</li>
<li>Broomfield, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial%2C+but+not+complete%2C+tumor-debulking+surgery+promotes+protective+antitumor+memory+when+combined+with+chemotherapy+and+adjuvant+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Partial, but not complete, tumor-debulking surgery promotes protective antitumor memory when combined with chemotherapy and adjuvant immunotherapy.</a> Cancer Research. 65 (17), 7580-7584 (2005).</li>
<li>Predina, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+positive-margin+resection+model+recreates+the+postsurgical+tumor+microenvironment+and+is+a+reliable+model+for+adjuvant+therapy+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biology+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">A positive-margin resection model recreates the postsurgical tumor microenvironment and is a reliable model for adjuvant therapy evaluation.</a> Cancer Biology & Therapy. 13 (9), 745-755 (2012).</li>
<li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Animals%22%5BJournal%5D)">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li>
<li>Overwijk, W. W., Restifo, N. P. B16 as a mouse model for human melanoma. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOverwijk%2C+WW+%22Current+Protocols+in+Immunology%22">Current Protocols in Immunology</a>. , Chapter 20, Unit 20-21 (2001).</li>
<li>Predina, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+local+tumor+microenvironment+in+recurrent+cancers+may+explain+the+failure+of+vaccines+after+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Changes in the local tumor microenvironment in recurrent cancers may explain the failure of vaccines after surgery.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (5), E415-E424 (2013).</li>
<li>Endo, M., Lin, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+margins+in+the+management+of+extremity+soft+tissue+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Surgical margins in the management of extremity soft tissue sarcoma.</a> Chinese Clinical Oncology. 7 (4), 37(2018).</li>
<li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Efficacy+of+Neoadjuvant+Compared+to+Adjuvant+Immunotherapy+to+Eradicate+Metastatic+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Improved Efficacy of Neoadjuvant Compared to Adjuvant Immunotherapy to Eradicate Metastatic Disease.</a> Cancer Discovery. 6 (12), 1382-1399 (2016).</li>
<li>Park, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extended+release+of+perioperative+immunotherapy+prevents+tumor+recurrence+and+eliminates+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Extended release of perioperative immunotherapy prevents tumor recurrence and eliminates metastases.</a> Science Translational Medicine. 10 (433), (2018).</li>
<li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+tumor+model+of+surgical+stress+to+explore+the+mechanisms+of+postoperative+immunosuppression+and+evaluate+novel+perioperative+immunotherapies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A mouse tumor model of surgical stress to explore the mechanisms of postoperative immunosuppression and evaluate novel perioperative immunotherapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (85), e51253(2014).</li>
<li>Gast, C. E., Shaw, A. K., Wong, M. H., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+Procedures+and+Methodology+for+a+Preclinical+Murine+Model+of+De+Novo+Mammary+Cancer+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), (2017).</li>
<li>Qiu, W., Su, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+orthotopic+pancreatic+tumor+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Development of orthotopic pancreatic tumor mouse models.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 215-223 (2013).</li>
<li>Erstad, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+and+heterotopic+murine+models+of+pancreatic+cancer+and+their+different+responses+to+FOLFIRINOX+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Orthotopic and heterotopic murine models of pancreatic cancer and their different responses to FOLFIRINOX chemotherapy.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (7), (2018).</li>
</ol>

Açıklama yok.

Biz perioperatif tedavileri test etmek için yumuşak doku sarkomu eksik cerrahi rezeksiyon bir fare modeli için bir protokol sağlar. Ayrıca tedavi sonrası fareler arasında yara iyileşmesinin değerlendirilmesine olanak sağlamak için cerrahi kesi standardize edildi.
Tümör yerleşimi bu protokolün önemli bir parçasıdır. Biz fareler üzerinde en az yük ile tümör bölgesi ve lokal tedavilerin uygulanması kolay cerrahi erişim sağlamak için bir deri altı tümör modeli tercih ettik. Tümörlerin periton için...

Cerrahi birçok katı tümörler için ana tedavi seçeneği olmaya devam etmektedir1, yumuşak doku sarkomu dahil2,3. Kanser cerrahisi teknikleri gelişmelere rağmen, ve kombinasyonları ile (neo)adjuvan tedaviler, hala kanser nüks ve metastaz primer tümör rezeksiyonu aşağıdaki yüksek bir risk var4,5. Yumuşak doku sarkomunda, nüksler özellikle lokoregionally, cerrahi yerinde meydana gelir ve morbidite ve mortalite artar. Klinik ortamda, yeterince geniş marjları elde etmek zor olabilir (örneğin, anatomik kısıtlamalar nedeniyle), eksik rezeksiyon ve sonraki tümör nüks neden6. Cerrahi stres ve yara iyileşme sonraki süreci tümör nüks için uygun bir immünsupresif tümör mikroenvironment oluşturmak için bilinmektedir7,8. Bu nedenle, yumuşak doku sarkomu için yeni tedavilerin keşfi ve geliştirilmesi, özellikle immünoterapiler, ideal olarak cerrahi yara iyileşme yanıtı dikkate almalıdır.
Adjuvan tedaviler için en preklinik çalışmalar başlangıçta cerrahi stres ve yara iyileşme yanıtı dahil olmadan, subkutan singenik veya ksenotransplante fare modelleri kullanılarak yapılır9,10. Bu nedenle, eksik cerrahi rezeksiyon içeren bir sinjenik deri altı fare yumuşak doku sarkom modeli geliştirdik. WEHI 164 fibrosarkom hücreleri subkutan olarak aşılanır ve tümörler oluşturulduktan sonra tümör kütlesinin %50-75'ini çıkarıyoruz(Şekil 1A-E). Tümörler sürekli olarak kalan tümörden yeniden büyürler. Bu model cerrahi stres ve yara iyileşmesi nin etkisini göz önünde bulundurarak adjuvan tedavilerin test edilmesine olanak sağlar. Eksik rezeksiyon benzer cerrahi modeller çeşitli gruplar tarafından çalışmalarda bir dizi kullanılan ve tekrarlanabilir ve etkili olduğu bulunmuştur11,12,13. Burada, bu protokolün ayrıntılı bir açıklamasını sağlar.

<table><tbody><tr><td>26 gauge 0.5 mL insülin şırıngası</td><td>Becton Dickinson, Avustralya</td><td>326769</td><td>Yok</td></tr><tr><td>2-Merkaptoetanol</td><td>Yaşam Teknolojileri Avustralya Ticaret A.Ş.</td><td>21985023</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Anestezik gaz makinesi</td><td>Darvall Vet, Avustralya</td><td>SKU: 2848</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Anti-CTLA-4</td><td>BioXcell, ABD</td><td>BE0164</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Anti-PD-1</td><td>BioXcell, ABD</td><td>BP0273</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Buprenorfin Hidroklorür Enjeksiyonu, 0.3mg/mL</td><td>RB healthcare UK Limited, UK</td><td>55175</td><td>Reçete siparişi</td></tr><tr><td>Klorheksidin Cerrahi Fırçalama %4</td> <td>Perigo Avustralya, Avustralya</td><td>CHL01449F(ovma</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Fetal Sığır serumu</td><td>CellSera, Avustralya</td><td>AU-FBS-PG</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Forseps İnce 10,5 cm</td><td>Cerrahi ev, Batı Avustralya</td><td>CC74110</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Forseps İnce 12 cm Tırtıklı</td><td>Cerrahi evi, Batı Avustralya</td><td>CC74212</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Forseps Halsted 14 cm</td><td>Cerrahi ev, Batı Avustralya</td><td>CD01114</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Isıtma odası</td><td>Datesand Ltd, Birleşik Krallık</td><td>Mini-Thermacage</td><td>Yok</td></tr><tr><td>HEPES (1M)</td><td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td><td>15630080</td><td>Yok</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Henry Schein Hayvan Sağlığı, Avustralya</td><td>SKU: 29405</td><td>Reçete siparişi</td></tr><tr><td>Kayganlaştırıcı Göz Merhemi</td><td>Alcon</td><td>n/a</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Penisilin/streptomisin 1000X</td><td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td><td>15140122</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Çözelti 10x</td><td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td><td>70013-032</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Refleks 7mm Klips</td><td>Mümkün bilimsel, Avustralya</td><td>AS59038</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Refleks 7mm Yara Klipsi Aplikatörü</td><td>Able scientific, Avustralya</td><td>AS59036</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Refleks Yara Klipsi Sökücü</td><td>Yetenekli bilimsel, Avustralya</td><td>AS59037</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Kemirgen Qube Anestezi Solunum Devresi</td><td>Darvall Vet, Avustralya</td><td>#7885</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Enstitüsü (RPMI) 1640 Orta + L-glutamin</td><td>Yaşam Teknolojileri Avustralya Ticaret A.Ş.</td><td>21870092</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Makas İris STR 11 cm</td><td>Cerrahi ev, Batı Avustralya</td><td>KF3211</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Makas İris STR 9 cm</td><td>Cerrahi ev, Batı Avustralya</td><td>JH4209</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Küçük İndüksiyon Odası</td><td>Darvall Vet, Avustralya</td><td>SKU: 9630</td><td>Yok</td></tr><tr><td>TrypLE ekspres 1x</td><td>Yaşam Teknolojileri Avustralya Ticaret A.Ş.</td><td>12604-021</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Çimlendirici 500 Cam Boncuk Sterilizatörü</td><td>Cellpoint Scientific Inc., ABD</td><td>5-1460-DK</td><td></td></tr></tbody></table>

test (neo) adjuvan tedaviler için İntam rezeke yumuşak doku sarkomu bir fare modeli

A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing (Neo)adjuvant Therapies

Cerrahi genellikle birçok katı tümörler için ilk tedavi yöntemidir. Ancak adjuvan veya neo-adjuvan tedavilere rağmen primer tümör rezeksiyonu sonrasında lokal nüksler sıklıkla ortaya çıkar. Bu cerrahi marjları yetersiz tümöriçermeyen oluşur, artık kanser hücreleri ile sonuçlanan. Biyolojik ve immünolojik açıdan bakıldığında, cerrahi boş bir olay değildir; yara iyileştirici ortamın hem pro- hem de anti-tümörijenik yolları indüklemesi bilinmektedir. Sonuç olarak, lokal nüksetmeyi önlemeye yönelik ilaç gelişimi için preklinik modeller, cerrahi ile tedavi edilen hastalarda klinik ayarları modellemek için yeni (neo) adjuvan tedavileri test ederken cerrahi rezeksiyonu da içine almalıdır.
Burada, bir yara iyileşmesi yanıtı ayarında (neo)adjuvan tedavilerin test edilmesine olanak sağlayan WEHI 164 yumuşak doku sarkomu eksik cerrahi rezeksiyon bir fare modeli açıklayın. Bu modelde, tümörün%50 veya %75'i çıkarılır, klinik ortamda ameliyat sonrası brüt kalıntı hastalığı nı modellemek için bazı kanser dokusu nu yerinde bırakır. Bu model aynı zamanda yara iyileşme yanıtı göz önünde bulundurularak cerrahi bağlamında test tedavileri sağlar, hangi etkinliğini etkileyebilir (neo)adjuvan tedaviler. Eksik cerrahi rezeksiyon, adjuvan tedavi nin yokluğunda tüm farelerde tümörün tekrarlanabilir şekilde yeniden büyümesi ile sonuçlanır. Kontrol noktası ablukası ile adjuvan tedavi tümör regrowth azaltılmış sonuçlanır. Bu model böylece debulking cerrahi ve ilişkili yara iyileşme yanıtı bağlamında terapiler test etmek için uygundur ve katı kanser diğer türleri için uzatılabilir.

50 mm2 boyutunda tümör büyümesi kısmi debulk için ideal bir boyut. 50 mm2 tümörün tamamlanmamış cerrahi rezeksiyonu adjuvan immünoterapi yokluğunda tümörlerin 0 (n=5) tekrarlanabilir rebüyüme ile sonuçlanır(Şekil 4A).<img alt="Fare tümörü çalışma diyagramı; sıra: aşılama, cerrahi, terapi; Araştırma Zaman Çizelgesi ...

Bu protokolde, yumuşak doku sarkomunun (neo) adjuvan tedavileri test etmek için tamamlanmamış cerrahi rezeksiyonunun fare modelini tanımladık.

Test (Neo) adjuvan Tedaviler için İntam Rezeke Yumuşak Doku Sarkomu Bir Fare Modeli

Surgery is often the first treatment for many solid tumors. However, local relapses frequently occur following primary tumor resection, despite adjuvant ...

Bu protokol, tümör debulking cerrahisi sonrası kalıntı hastalığın klinik ayarı taklit etmeyi amaçlamaktadır ve bu nedenle postoperatif yara iyileşmesi bağlamında yeni kanser tedavilerini test etmemizi sağlar. Bu tekniğin avantajı, oluşan yara miktarının standardizasyonuna ve tümör miktarının kalmasını sağlamasıdır. Bu teknik özellikle kanserler için yeni tedavilerin belirlenmesinde klinik öncesi çalışmalar için önemlidir, bu yerel olarak nüks hangi yumuşak doku sarkomu bir örnek.Bu görsel gösteri, deri tarafına bağlı tümörü ortaya çıkarmamızı sağlayan ters çevirme tekniğini göstermek için çok önemlidir. Metin protokolünde açıklandığı gibi, farelerde hazırlanmış kanser hücrelerinin deri altı aşısı ile bu prosedüre başlayın. 12. günde, post inoculation, tümörler yaklaşık 50 milimetre boyutuna ulaştığında, boyun scruffand buprenorfin 100 mikrolitre ile doz fareler, ameliyattan 30 dakika önce.Tezgah kat ile kaplı ısı yastığı ile cerrahi alan kurmak ve anestezi için bir burun konisi kurmak. Klorhekzadin, bez, gazlı bez, göz jeli, iki kavisli ençes, makas, klip aplikatör, klip sökücü ve klips dolumları da dahil olmak üzere kolay ulaşılabilecek şekilde temiz cerrahi ekipmanlar düzenleyin.

a-mouse-model-incompletely-resected-soft-tissue-sarcoma-for-testing

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, kolorektal kanser hastadan türetilmiş ksenogreftlerin veya PDX'lerin spontan metastaz fare modelini oluşturmak için kullanılan protokol açıklanmaktadır. Bu ksenogreft modelleri, insan karsinomlarının özelliklerini kısmen taklit eder ve invazyon ve metastaz dahil olmak üzere insan malignitelerinin kritik yönlerini anlar.

Spontan Metastaz Fare Modelleri: Ortototopik Olarak Enjekte Edilen Kolorektal Kanser Hücrelerinin Metastatik Potansiyelini İncelemek İçin Bir Platform

Bu video, tam olarak rezeke edilmemiş deri altı tümörleri olan bir fare modelinde adjuvan veya ek tedavinin test edilmesini göstermektedir. Kısmen tümör rezeke edilen fare, T düzenleyici hücrelerin anti-sitotoksik proteinini hedef alan, potansiyel olarak tümör büyümesini azaltan ve etkili adjuvan tedavi öneren bir antikor ile tedavi edilir.

Tam Rezeke Edilmemiş Subkutan Tümörü Olan Bir Fare Modelinde Adjuvan Tedavi

Kaynak: Alomari, S., et al. Yüksek canlılığa sahip doku toplanması için kemirgenlerde minimal invaziv beyin tümörü rezeksiyonunun uygulanması. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, bir tümör implante edilmiş anestezi uygulanmış bir fareden tümör dokusunu çıkarmak için minimal invaziv bir rezeksiyon sisteminin (MIRS) kullanımını göstermektedir. Prosedür, fareyi stereotaktik bir çerçeveye sabitlemeyi, beyne erişmek için önceki cerrahi bölgeyi yeniden açmayı ve tümör bölümlerini çıkarmak için emme ve dönen...

Minimal İnvaziv Rezeksiyon Sistemi Kullanan Bir Farede Beyin Tümörü Rezeksiyonu

Cerrahi stres bir fare tümör modeli postoperatif immün baskılanması metastatik hastalık teşvik nasıl keşfetmek ve ımmunostımulator perioperatif tedavilerin değerlendirilmesi için kullanılır.

Ameliyat sonrası Immunosupressjon&#39;un ve Mekanizmaları keşfedin ve Roman Perioperatif İmmünoterapiler Değerlendirmesinde Cerrahi Stres Fare Tümör Modeli

Spontan metastatik renal hücre karsinomu (RCC), hastalığın ilerlemesine modelleri klinik olarak anlamlı bir ortamda tedavi değerlendirmek için de kullanılabilir. Bu protokol, kadavradan böbrek tümör hücre implantasyonu, uygun nefrektomi için farklı prosedürler gösterir ve nihayet metastatik yükü ve lokalizasyon görsel ve biyolüminesens puanlama için bir otopsi rehber özetliyor.

Farelerde spontan metastatik renal hücreli karsinom (MRCC) modelleme ardından nefrektomi

Ortotopik meme kanseri primer tümör modeli ve primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması açıklanan spontan metastaz oluşturmak için fare ömrünü uzatmak için. tümör büyümesi ve ilerlemesi izlenir ve lusiferaz floresan görüntüleme ile ölçülür.

Spontan Meme Kanseri metastaz Ortotopik Fare Modeli

Meme kanseri metastazını hedef alan adjuvan tedaviyi değerlendiren klinik öncesi modeller eksiktir. Buna değinmek için, de novo pulmoner meme adenokarsinom metastazına ait bir fare modeli geliştirdik, burada adjuvan ortamında (primer tümörlerin cerrahi sonrası rezeksiyonu) uygulanan terapiler önceden tohumlanmış pulmoner metastazları etkilemek için etkinlik açısından değerlendirilebilir.

Klinik Öncesi Bir Murin Modeli İçin Cerrahi Prosedürler ve Metodoloji<emDe Novo</emMeme Kanseri Metastazı

İmünokompetan farelerde böbrek hücreli karsinom ortotopik bir model uygulanması Araştırmacı aynı hayvanda bir primer böbrek tümörü, akciğer metastazların varlığı ile tanımlanan bir klinik açıdan ilgili bir sistem elde edilir. Bu sistem, klinik öncesi, in vivo olarak tedaviler çeşitli test etmek için de kullanılabilir.

Preklinik Tedaviler Nicel ve Boyuna Değerlendirme A sinjeneik Fare Modeli Yapmış Bir Renal Hücreli Karsinom

Hücre dışı veziküller (EVs) kanser kaynaklı direkt enjeksiyon kemik iliği tümör ilerleme destekleyen yeniden programlama için yol açar; Ancak, bu etkinin hangi hücrelerin aracılık belli değildir. Burada, biz EV-aracılı tümör Mezenkimal Kök hücre (MSC) etkileşimleri vivo içindearaştırmak için adım adım bir protokol için EV eğitimli MSCs metastaz içinde çok önemli bir rol açığa tanımlamak.

Tümör ve Mezenkimal Kök hücreler arasında ekstrasellüler vezikül aracılı iletişim tanımlamak için osteosarkom preklinik fare modeli

Klinik bağlamda lokalize pankreas kanseri olan hastalar pankreastektomi ve ardından adjuvan tedavi görecektir. Burada bildirilen bu protokol, pankreas kanserinin ortotopik implantasyonu ve ardından distal pankreasektomi ve splenektomi yoluyla çıplak farelerde bu klinik senaryoyu modellemek için güvenli ve etkili bir yöntem oluşturmayı amaçlamaktadır.

Pankreas Kanserinin Ortotopik Rezeksiyonlu Fare Modeli

Ağız boşluğunda kurulan ağız skuamöz hücreli karsinom tümörlerinin cerrahi olarak rezeksiyon edilmesinin benzersiz bir yöntemi burada gösterilmiştir.

Oral Skuamöz Hücreli Karsinomun Farenin Preklinik Modelleri İçin Translasyonel Olarak İlgili Tümör Rezeksiyon Modeli

Öğrenin yumuşak doku sarkomu için fare modelinde tamamlanmamış cerrahi rezeksiyon tekniğini. Bu yöntem, (neo)adjuvan tedavileri test etmek ve kanser immünoterapisinde yara iyileşmesinin etkisini anlamak için kullanılır.

Test (Neo) adjuvan Tedaviler için İntam Rezeke Yumuşak Doku Sarkomu Bir Fare Modeli

Daha fazla video keşfet