Name: Bademcikler Mononükleer Hücrelerin İzolasyon Ex Vivo Doğuştan Gelen Bağışıklık Yanıtları Bir İnsan Mukozal Lenfoid Doku Çalışma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-14T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: Öğrenin bademcik mononükleer hücre izolasyonunu mukozal bağışıklık yanıtlarını incelemek için. Bu yöntem, insan lenfoid dokusundan canlı immün hücre elde edilmesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Agence National de la Recherche sur le SIDA et les Hépatites ANRS (J-P) tarafından desteklendi. H) deneyler ve N.B. bursu için (AAP 2017 166). N.S., ANRS'den burs (AAP 2016 1), Avrupa Moleküler Biyoloji Örgütü EMBO for Fellowship (LT 834 2017), Ulm Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıp Fakültesi 'Baustein" ve Deutsche Forschungsgemeinschaft DFG (SM 544/1 1 1) için ANRS'den destek kabul eder.

Örnekler özellikle araştırma amacıyla toplanmaz ve çalışma invaziv olarak kabul edilmez. Ancak, insan bademcikleri toplama yerel ilgili makamlar tarafından etik onayı gerektirir. Bizim durumumuzda Comité de Protection des Personnes (IDRCB/EUDRACT: 2018A0135847) tarafından onaylanmıştır. Ayrıca, her hastanın veya yasal temsilcinin rızası, deneysel sonuçların yorumlanmasına yardımcı olabilecek bağışçıların kişisel verilerini (örn. cinsiyet, yaş, KT enfeksiyonlarının öyküsü) elde etmek için istenir.
1. İnsan Bademcik Dokusunun Kullanımı
<ol><li>Her donörden alınan bademcikleri bir steril 50 mL şişeye koyun ve 25 mL PBS 1x içeren ve oda sıcaklığında (RT) kurumun tavsiyelerine göre laboratuvara götürün (şişeler, güvenlik kutusu ve bir çanta olmak üzere üç koruma düzeyi kullanın). NOT: Tüm prosedür biyolojik güvenlik seviyesi 2 laboratuarında yapılmalıdır. Daha önce kalifiye olmadıkları ve bulaşıcı ajanlar içermedikleri için tüm insan örnekleri özenle ele alınmalıdır.</li>
	<li>
Her kullanım arasındaki tüm araçları temizleyin.
	<ol>
<li>Kullanımdan sonra, hücre süzgecinin sökülmesi ve bir gecede deterjan solüsyonu (H2O'da 1/10 hacim deterjan) içeren bir banyoda diğer tüm aletlerle (örn. havaneli, forseps) saklayın.</li>
		<li>Fırça doku kaldırmak ve temiz su ile yıkamak için her mutfak eşyaları.</li>
		<li>Tüm parçaları iyice kurutun, ardından 10 mesh çelik ızgaranın üzerine 60 örgü çelik ızgara yerleştirerek hücre süzgecini (85 mL, 37 mm çapında) hazırlayın ve halkayı sıkıca kapatın.</li>
		<li>Steril çanta ve otoklav tüm araçları yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. İnsan Bademcik dokusunun diseksiyonu ve Bademciklerin Mononükleer Hücrelerinin İzolasyon (TMCs)
<ol><li>Hücre süzgecini bir 150 x 25 mm2 (SPL150) hücre kültür çanağı ve tüm aletleri steril tutmak için başka bir SPL150'ye yerleştirin.</li>
	<li>Steril forceps kullanarak hücre süzgeci içine şişe den bademcikler aktarın. Ayrıca bademcikler çıkış var bazı hücreler içeren PBS, tüm dökün. Gerekirse, ızgarayı batırmak için daha fazla PBS ekleyin. NOT: Doku kurutma önlemek için her zaman batırılmalıdır.</li>
	<li>Forceps ve neşter kullanarak küretkar, kanlı ve fibroid doku çıkarın. NOT: Çocuklardan çıkarılan bademciklerin bu adıma ihtiyacı yoktur.</li>
	<li>Neşter ve kavisli cımbız kullanarak 0,5 cm çapında küçük parçalar halinde dokular kesin. Küçük parçalar her zaman batırılmış olabilir, böylece tüm doku kesin.</li>
	<li>Hücre süzgeci doku birkaç parça yerleştirin ve beyaz stroma sadece gerçekten ince bir tabaka kalana kadar bir cam haşere ile ızgara üzerine kazıyın. Izgarayı tıkamamak için stroma'yı çıkarın ve atın.</li>
	<li>Tüm dokular ızgaradan sıkıştıktan sonra, tüm hücre süspansiyonuna aktarmak için 10 mL'lik bir pipet kullanın ve son bir kez kazıyın.</li>
	<li>Hücre süspansiyonuna 10 mL'lik pipetle steril bir şişeye aktarın. Izgarayı ve hücre süzgecini PBS 1x ile yıkayın. Hücre süspansiyon bankta RT 5 dakika dinlenme sağlar. Bu adım, kalan stromanın, ölü hücrelerin ve serbest bırakılan DNA'nın yağış ve aglomerasyonuna izin verir ve bir sonraki adımı kolaylaştırır.</li>
	<li>Yeni bir 50 mL şişenin üzerine steril 70 m elek yerleştirin (zarftan dikkatlice çıkarın) ve hücre süspansiyonuna 10 mL'lik pipetle yavaşça aktarın. Bir pelet sık sık mevcut olduğu için süspansiyonu karıştırmayın. Elek tıkanmışsa, elekteki hücreleri kazımak için steril 1 mL pipet ucunun arkasını kullanın. Elek gerektiği sıklıkta değiştirin.</li>
	<li>4 °C'de 10 dk için 250 x g'de hücreleri santrifüj edin.</li>
	<li>Süpernatant atın ve yavaşça şişe karıştırarak pelet resuspend, sonra PBS 35 mL hücreleri yeniden askıya.</li>
	<li>Yeni bir şişede, üzerine 70 m'lik yeni bir elek yerleştirin ve hücre süspansiyonuna 10 mL'lik pipetle aktarın. Elek tıkanmışsa, adım 2.7'de ayrıntılı olarak kullanılan tekniği kullanın.</li>
</ol>3. TMC'lerin Hücre Yoğunluğu Gradyan Tarafından İzolasyon
NOT: TMC'ler adım 2.10'dan sonra kullanılabilir. Ancak, daha net bir hücre çözeltisi elde etmek ve diğer hücre enkaz ve herhangi bir kırmızı hücreleri kaldırmak için, mononükleer hücrelerin bir hücre yoğunluğu gradyan izolasyon gerçekleştirmek için tavsiye edilir.
<ol><li>Yeni bir 50 mL şişeye yoğunluk gradyan ortamının (d = 1,076 g/mL) 15 mL'sini ekleyin. TMCs çözeltisini yoğunluk gradyan ortamının üzerine dökün ve süspansiyonun yoğunluk gradyan ortamıyla karıştırılmasını en aza indirmeye dikkat edin.</li>
	<li>Çözeltiyi 1.000 x g'de 30 dk'da RT'de ivmelenme ve kopuşla santrifüj edin.</li>
	<li>10 mL'lik bir pipetle çıkarın ve TMC'ler ile yoğunluk gradyan ortamı arasındaki arabirimi bozmadan üst katmanı (çoğunlukla PBS 1x içeren) atın. NOT: TMCs eritrositsayısı düşük türde içerir, bu nedenle çözüm açıktır. Bu nedenle, PBS'deki TMC'lerin çözümü ile yoğunluk gradyan ortamı arasındaki arabirimi görselleştirmek zor olabilir. Buna göre, yoğunluk gradyanı yapılmadan önce 20 mM HEPES (FBS olmadan) ile takviye edilen RPMI 1640'ta hücreler yeniden askıya alınabilir.</li>
	<li>Steril 1 mL pipet ucu ile TMC'leri çıkarın ve yeni bir 50 mL şişeyerleştirin.</li>
	<li>Fetal büyükbaş hayvan serumunun (FBS) %2'sini içeren 50 mL PBS ve 2 mM EDTA ekleyerek hücreleri yıkayın ve kalan trombositleri çıkarmak için 250 x g'de 10 dakika 4 °C'de tüpü santrifüj edin.</li>
	<li>Adımı 3,5 tekrarlayın, ancak tüpü 4 °C'de 10 dk boyunca 400 x g'de santrifüj edin.</li>
	<li>RPMI 1640'ı %10 ısı inaktive FBS, 2 mM L-glutamin ve antibiyotik çözeltisi (100 U/mL penicillium ve 100 μg/mL streptomisin) ile tamamlayarak kültür ortamını (R10) hazırlayın.</li>
	<li>TMC'leri 10 mL R10'da yeniden askıya alın ve hücreleri sayın. Bu teknik ortalama olarak bademcik çifti başına 5 x 108-2 x 109 TMC verir. Hücreler artık tam kandaki PcBMC'ler (örn. belirli hücre tipinin saflaştırılması, hücre kültürü, akış sitometrisi, RT-qPCR, donma, vb.) gibi araştırmalar için kullanılabilir.</li>
	<li>
Gerekirse, birincil hücre dondurma için standart teknikleri kullanarak daha fazla kullanmak için hücreleri dondurun.
	<ol>
<li>Hücre sayısını say.</li>
		<li>Hücreleri santrifüj ve supernatant kaldırın. Peleti 1 x 108 hücre/mL nihai konsantrasyon için yeterli %100 FBS'de çözün, ardından %80 FBS + %20 DMSO çözeltisinin aynı hacmini ekleyin. Hücreler daha sonra 5 x 107 hücre/mL olacaktır. Bu adım 4 °C'de yapılmalı ve FBS ve DMSO çözeltisi kullanmadan önce 4 °C'de tutulmalıdır.</li>
		<li>Hücre çözeltisinin 1 mL'sini kriyotüplere dağıtın ve hücre dondurma oranını kontrol etmek için bir gecede 4 °C'de olan yavaş bir dondurucu kabına koyun. -80 °C'ye yerleştirin.</li>
		<li>Hücreleri eritmek için cryovials'ı 37 °C'de ılık bir banyoya yerleştirin. Hücreler erimeye başlar başlamaz, DMSO'yu çıkarmak için 49 mL R10 ve santrifüje aktarın. Hücreleri sayın ve Bunları PBMC olarak kullanın. NOT: TMC'lerin dondurulması ve çözülmesi enkazı ortadan kaldırsa da, bazı nadir hücre tiplerine de zarar verecektir. Kümeler veya döküntüler eritme sonra varsa, kullanmadan önce steril bir 70 μm elek ile hücre süspansiyon geçmek en iyisidir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. TMC'lerin Akış Sitometrisine Göre Fenotiliği
<ol><li>Test edilmesi gereken her antikor karışım paneli için önceki çözeltiden 5 x 106 hücre alın ve 5 mL sitometri tüpüne yerleştirin. Lekesiz kontrol için 1 x 106 hücre alın.</li>
	<li>PBS ve santrifüjdeki hücreleri 4 °C'de 5 dk boyunca 400 x g'da yıkayın. 500 μL PBS (1 x 106 hücre/mL) ve karanlıkta 4 °C'de 30 dakika boyunca canlılık lekesi ile kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>100 μL hücre süspansiyonu başına 5 μL ısı inaktive edilmiş insan AB serumu ekleyin ve karanlıkta 4 °C'de 15 dakika kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>PBS + %2 FBS + 2 mM EDTA (Yıkama Tamponu) ve santrifüjdeki hücreleri 4 °C'de 5 dk için 400 x g'da yıkayın.</li>
	<li>Tablo 1'deayrıntılı olarak antikorları içeren 500 μL Yıkama Tampon'undaki TMC'leri yeniden askıya alın. Hücreleri karanlıkta 4 °C'de 30 dk kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>4 °C'de 5 dk için 400 x g'de Yıkama Tamponu ve santrifüjdeki hücreleri yıkayın. Paraformaldehitin (PFA) %0.5'ini içeren 500 μL PBS'deki TMC'leri yeniden askıya alın. Akış sitometritarafından elde edilene kadar 4 °C'de karanlıkta tutun. NOT: PfA tehlikelidir. %0,5 PFA çözümünü hazırlamak için kullanıma hazır ticari bir çözüm kullanın.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Antikor</td>
			<td>Klon</td>
			<td>Florokrom</td>
			<td>Şirket</td>
		</tr>
<tr>
<td>Canlı Ölü</td>
			<td></td>
			<td>BV405</td>
			<td>ThermoFisher Bilimsel</td>
		</tr>
<tr>
<td>CD3</td>
			<td>SP34-2</td>
			<td>V500</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
		</tr>
<tr>
<td>CD8</td>
			<td>SK1</td>
			<td>Amcyan</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
		</tr>
<tr>
<td>CD8</td>
			<td>BW135/80</td>
			<td>VioBlue</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
		</tr>
<tr>
<td>CD4</td>
			<td>RPA-T4</td>
			<td>PE-Cy7</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
		</tr>
<tr>
<td>CD45</td>
			<td>HI30</td>
			<td>PerCP-cy5.5</td>
			<td>Bd</td>
		</tr>
<tr>
<td>CD19</td>
			<td>HD237</td>
			<td>Eçg</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
		</tr>
<tr>
<td>CD20</td>
			<td>2H7</td>
			<td>Alexa Flor 700</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
		</tr>
<tr>
<td>CD14</td>
			<td>M5E2</td>
			<td>PE-cy7</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
		</tr>
<tr>
<td>CD14</td>
			<td>M5E2</td>
			<td>Apc</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
		</tr>
<tr>
<td>CD16</td>
			<td>3G8</td>
			<td>APC-H7</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
		</tr>
<tr>
<td>CD56</td>
			<td>MEM188</td>
			<td>Pe</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
		</tr>
<tr>
<td>CD123</td>
			<td>7G3</td>
			<td>Pe</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
		</tr>
<tr>
<td>BDCA-1</td>
			<td>L161</td>
			<td>Pasifik Mavisi</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
		</tr>
<tr>
<td>BDCA-3</td>
			<td>AD5-14H12</td>
			<td>FITC</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
		</tr>
<tr>
<td>BDCA-4</td>
			<td>AD5-17F6</td>
			<td>Apc</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
		</tr>
<tr>
<td>HLA-DR</td>
			<td>G646-6</td>
			<td>PerCP-cy5.5</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
		</tr>
<tr>
<td>CD11c</td>
			<td>3.9</td>
			<td>Alexa Flor 700</td>
			<td>ebiyobilim</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Akış sitometrisi ile hücre karakterizasyonu için antikorlistesi.
5. TMC'lerin Aktivasyonu ve Sitokin Üretiminin Ölçülmesi Örneği
<ol><li>2 x 106 hücre/mL konsantrasyonelde etmek için R10 orta TMCs seyreltin.</li>
	<li>400.000 TMC'yi 200 μL R10'da 96 yuvarlak alt plakaya dağıtın.</li>
	<li>Hücreleri etkinleştirmek için bir gecede TLR7/8 agonist resiquimod'un (R848) 5 μg/mL'sini ekleyin.</li>
	<li>Plakaları santrifüj edin ve TMC'lerin süpernatantını alın ve daha fazla analiz için dondurun. Sitokin üretimi, üreticinin protokolünü takiben bir akış sitometresi kullanılarak aynı anda birden fazla çözünen sitokinleri ölçmek için boncuk bazlı immünoaslar kullanılarak değerlendirilecektir.</li>
	<li>Üreticinin protokolünden sonra Parlak bir hücre canlılığı testini kullanarak hücrelerin canlılığını değerlendirin. Kısaca, kuyulara 60 μL hücre canlılığı çözeltisi ekleyin ve 10 dakika içinde parlaklığı ölçün (1 s/well için edinim).</li>
</ol>

<ol><li>Taylor, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+History+of+Cell+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses+and+Man%3A+A+History+of+Interactions%22%5BJournal%5D)">A History of Cell Culture.</a> Viruses and Man: A History of Interactions. , 41-52 (2014).</li>
<li>Scherer, W. F., Syverton, J. T., Gey, G. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+propagation+in+vitro+of+poliomyelitis+viruses.+IV.+Viral+multiplication+in+a+stable+strain+of+human+malignant+epithelial+cells+%28strain+HeLa%29+derived+from+an+epidermoid+carcinoma+of+the+cervix%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Studies on the propagation in vitro of poliomyelitis viruses. IV. Viral multiplication in a stable strain of human malignant epithelial cells (strain HeLa) derived from an epidermoid carcinoma of the cervix.</a> The Journal of Experimental Medicine. 97 (5), 695-710 (1953).</li>
<li>Jones, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Record+of+the+first+physician+to+see+Henrietta+Lacks+at+the+Johns+Hopkins+Hospital%3A+History+of+the+beginning+of+the+HeLa+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Record of the first physician to see Henrietta Lacks at the Johns Hopkins Hospital: History of the beginning of the HeLa cell line.</a> American Journal of Obstetrics and Gynecology. 176 (6), s227-s228 (1997).</li>
<li>Cummins, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+Testing+of+Candidate+Topical+Microbicides+for+Anti-Human+Immunodeficiency+Virus+Type+1+Activity+and+Tissue+Toxicity+in+a+Human+Cervical+Explant+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Preclinical Testing of Candidate Topical Microbicides for Anti-Human Immunodeficiency Virus Type 1 Activity and Tissue Toxicity in a Human Cervical Explant Culture.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 51 (5), 1770-1779 (2007).</li>
<li>Abner, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Human+Colorectal+Explant+Culture+to+Evaluate+Topical+Microbicides+for+the+Prevention+of+HIV+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">A Human Colorectal Explant Culture to Evaluate Topical Microbicides for the Prevention of HIV Infection.</a> The Journal of Infectious Diseases. 192 (9), 1545-1556 (2005).</li>
<li>Introini, A., Vanpouille, C., Fitzgerald, W., Broliden, K., Margolis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+Vivo+Infection+of+Human+Lymphoid+Tissue+and+Female+Genital+Mucosa+with+Human+Immunodeficiency+Virus+1+and+Histoculture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Ex Vivo Infection of Human Lymphoid Tissue and Female Genital Mucosa with Human Immunodeficiency Virus 1 and Histoculture.</a> Journal of Visualized Experiments. (140), e57013(2018).</li>
<li>Elmore, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+Histopathology+of+Mucosa-Associated+Lymphoid+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Enhanced Histopathology of Mucosa-Associated Lymphoid Tissue.</a> Toxicologic Pathology. 34 (5), 687(2006).</li>
<li>Strioga, M. M., Dobrovolskiene, N. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+Cells+as+Targets+of+Vaccines+and+Adjuvants%5BTitle%5D)+AND+%22Immunopotentiators+in+Modern+Vaccines%22%5BJournal%5D)">Dendritic Cells as Targets of Vaccines and Adjuvants.</a> Immunopotentiators in Modern Vaccines. , 43-64 (2017).</li>
<li>Bachert, C., Möller, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Die+Tonsille+als+MALT+%28mucosa-associated+lymphoid+tissue%29+der+Nasenschleimhaut%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngo-Rhino-Otologie%22%5BJournal%5D)">Die Tonsille als MALT (mucosa-associated lymphoid tissue) der Nasenschleimhaut.</a> Laryngo-Rhino-Otologie. 69 (10), 515-520 (1990).</li>
<li>Perry, M., Whyte, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunology+of+the+tonsils%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Today%22%5BJournal%5D)">Immunology of the tonsils.</a> Immunology Today. 19 (9), 414-421 (1998).</li>
<li>Perry, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+specialised+structure+of+crypt+epithelium+in+the+human+palatine+tonsil+and+its+functional+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">The specialised structure of crypt epithelium in the human palatine tonsil and its functional significance.</a> Journal of Anatomy. 185, 111-127 (1994).</li>
<li>Cesta, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+Structure%2C+Function%2C+and+Histology+of+Mucosa-Associated+Lymphoid+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Normal Structure, Function, and Histology of Mucosa-Associated Lymphoid Tissue.</a> Toxicologic Pathology. 34 (5), 599-608 (2006).</li>
<li>Kaditis, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obstructive+sleep+disordered+breathing+in+2-to+18-year-old+children%3A+diagnosis+and+management+TASK+FORCE+REPORT+ERS+STATEMENT%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Obstructive sleep disordered breathing in 2-to 18-year-old children: diagnosis and management TASK FORCE REPORT ERS STATEMENT.</a> European Respiratory Journal. 47, 69-94 (2016).</li>
<li>Herbeuval, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HAART+reduces+death+ligand+but+not+death+receptors+in+lymphoid+tissue+of+HIV-infected+patients+and+simian+immunodeficiency+virus-infected+macaques%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS%22%5BJournal%5D)">HAART reduces death ligand but not death receptors in lymphoid tissue of HIV-infected patients and simian immunodeficiency virus-infected macaques.</a> AIDS. 23 (1), 35-40 (2009).</li>
<li>Herbeuval, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+of+IFN-alpha+and+TRAIL%2FDR5+in+lymphoid+tissue+of+progressor+versus+nonprogressor+HIV-1-infected+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Differential expression of IFN-alpha and TRAIL/DR5 in lymphoid tissue of progressor versus nonprogressor HIV-1-infected patients.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (18), 7000-7005 (2006).</li>
<li>Smith, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+TLR7-mediated+type+I+IFN+signaling+in+pDCs+through+CXCR4+engagement-A+new+target+for+lupus+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Control of TLR7-mediated type I IFN signaling in pDCs through CXCR4 engagement-A new target for lupus treatment.</a> Science Advances. 5 (7), eaav9019(2019).</li>
<li>Lucas-Hourani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+pyrimidine+biosynthesis+pathway+suppresses+viral+growth+through+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Inhibition of pyrimidine biosynthesis pathway suppresses viral growth through innate immunity.</a> PLoS Pathogens. 9 (10), e1003678(2013).</li>
<li>Kleiveland, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+Blood+Mononuclear+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Impact+of+Food+Bioactives+on+Health%22%5BJournal%5D)">Peripheral Blood Mononuclear Cells.</a> The Impact of Food Bioactives on Health. , 161-167 (2015).</li>
<li>Ban, Y. L., Kong, B. H., Qu, X., Yang, Q. F., Ma, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BDCA-1%2B%2C+BDCA-2%2B+and+BDCA-3%2B+dendritic+cells+in+early+human+pregnancy+decidua%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Immunology%22%5BJournal%5D)">BDCA-1+, BDCA-2+ and BDCA-3+ dendritic cells in early human pregnancy decidua.</a> Clinical and Experimental Immunology. 151 (3), 399-406 (2008).</li>
<li>Papaioannou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-Dependent+Changes+in+the+Size+of+Adenotonsillar+Tissue+in+Childhood%3A+Implications+for+Sleep-Disordered+Breathing%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Age-Dependent Changes in the Size of Adenotonsillar Tissue in Childhood: Implications for Sleep-Disordered Breathing.</a> The Journal of Pediatrics. 162 (2), 269-274 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

İnsan bademcikleri mukozal arayüzde doğuştan gelen immün yanıtları incelemek için bütünleştirici ve fizyolojik ex vivo modeli temsil eder, çünkü ikincil lenfoid organın rolünü taklit ederler. İlginçtir ki, TMCs hücresel bileşimi PBMCs benzer ve tüm büyük hücre popülasyonları içerir, onların yüzdesi kandan PBMCs farklı olabilir rağmen(Şekil 1). Ek popülasyonlar da bulunabilir, tüm bağışıklık yanıtları dokularda başlatılır gibi (mukoza veya sekonder lenfoid organlar) değil, kanda.
<p class...

İnsan organları üzerinde yapılan çalışmalar erişilebilirliğin yanı sıra bariz etik nedenlerle de kısıtlanmıştır. Ancak, insan biyolojisinin karmaşıklığını tam olarak anlamak için gereklidirler. İzole hücrelerin kültürleri (birincil kültürler veya hücre çizgileri) hücre biyolojisi çalışmalarında kullanılabilirlikleri nedeniyle standart bir sistemdir. İzole hücre kültürleri olağanüstü keşifler izin vermiş olsa da, onlar tam in vivo organ biyolojisi taklit etmez çünkü hücre hatlarının kullanımı daha yakından inceleme üzerine geldi. Ancak, üç boyutlu hücre veya doku eksbitki kültürü son derece karmaşık4,5,6. Gerçekten de, doku veya organ parçası son derece heterojendir çünkü hücre bileşimi dokudaki lokalizasyona bağlı olarak farklılık gösterir. Böylece, doku blokları kullanarak birçok teknik ve biyolojik çoğaltmalar analizi gerektirir, donör veya hastaların çok sayıda ihtiyaç yol açan.
Mukoza ile ilişkili lenfoid dokular (MALT) yapısal lenf düğümleri benzer ama benzersiz işlevleri var, ana rolü mukozal bağışıklık düzenlemek için çünkü7. Genellikle dokulardan bazı mesafelerde bulunan lenf düğümleri aksine, MALT genellikle mukozal doku epitel hemen altında yer almaktadır. Histolojik olarak, çoğunlukla B ve T hücrelerinin yüksek konsantrasyonlarda oluşur, ama aynı zamanda makrofajlar ve dendritik hücreler gibi antijen sunan hücreler. MALT insan vücudundaki lenfoid dokunun yaklaşık% 50'sini oluşturmaktadır. MALT konumlarına bağlı olarak dokuz gruba ayrılır: GALT (gut-), BALT (bronş-), NALT (nazal-), CALT (konjonktiva), LALT (gırtlak-), SALT (cilt-), VALT (vulvo-), O-MALT (organize) ve D-MALT (diffüz). O-MALT esas olarak Waldeyer bademcikhalka bademcikoluşur ve en erişilebilir MALT8,9. Nitekim, orofarenks bulunan bademcikler (potansiyel) invaziv mikroorganizmalar10 sindirim ve solunum10yollarını koruyan önemli bir bariyer oluşturmaktadır. Buna ek olarak, bademcikler ince tabakalı skuamöz olmayan keratinizing epitel ile kaplıdır, kan damarları içeren bağ dokusu bir kapsül tarafından desteklenen, sinirler, ve lenfatikler, bağışıklık hücrelerine kolay erişim sağlayan11,12. Ayrıca bademciklerin giderilmesinde yapılan cerrahi işlem olan tonsillektomi, uyku bozukluğu olan çocuklarda yapılan ve bademciklerin fizyolojik ortamlarda kolayca bulunabilen doku13'ü haline getiren yaygın bir işlemdir.
Bademcikler mukozal bağışıklık içeren patolojilerde immün hücre yanıtının incelenmesine olanak sağlar. Gerçekten de, HIV enfeksiyonu, bademcikler bağışıklık hücrelerinin yüksek konsantrasyonoluşur çünkü, onlar viral çoğaltma ana hedefi ama aynı zamanda dolaşımda tespit edilmez sitokinler büyük miktarda üretmek14,15. Sabit hallerde, doğuştan benzeri hücrelerin nadir popülasyonları bademcikler de dahil olmak üzere çeşitli mukozal dokularda mevcuttur, ancak aslında kan yok.
Bu nedenle bademciklerden (TMC) gelen mononükleer hücreler PBMC'lere göre daha alakalı ve karmaşık bir modeldir ve daha derin sorulara cevap verebilir. Öte yandan, doku eksbitkilerinin kullanımı karmaşık olabilir ve her zaman doğuştan gelen bağışıklık çalışmaları ile ilgili değildir. Böylece, TMCs16kullanarak mukozal immün aktivasyon çalışması için bir model oluşturdu. Burada TMC'lerin taze insan bademciklerinden verimli bir şekilde izolasyonu için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, ex vivo çalışmalar için bütünlüğünü koruyarak bağışıklık hücrelerinin çok sayıda kurtarma sağlar.

<table><tbody><tr><td>10 gözlü çelik ızgara - 1910 & m</td><td>Dutscher</td><td>198586</td><td>Hücre süzgecini koymak için Cellector</td></tr><tr><td>60 gözlü çelik ızgara - 230 & m</td><td>Dutscher</td><td>198591</td><td>Cellector 70 &micro hücre süzgecini koymak için</td></tr><tr><td>; m beyaz ClearLine hücre süzgeçleri</td><td>Dutscher</td><td>141379C</td><td></td></tr><tr><td>Anios Excell D deterjan</td><td>Dutscher</td><td>59852</td><td>Deterjan</td></tr><tr><td>Antibiyotik çözeltisi, 100x</td><td>Thermo Fisher</td><td>15140122</td><td>100 U/mL Penicilium ve 100 &mu; g/mL Streptomisin - kültür ortamına eklemek için</td></tr><tr><td>BD FalconTM Yuvarlak Tabanlı Tüpler, 5 mL</td><td>BD Biosciences</td><td>352063</td><td>FACS Tüpleri</td></tr><tr><td>Hücre süzgeci Cellector, 85 mL ve 37 mm çap</td><td>Dutscher</td><td>198585</td><td></td></tr><tr><td>CellTiter-Glo (CTG) Lüminesan Hücre Canlılık Testi</td><td>Promega</td><td>G7572</td><td>Canlılık</td></tr><tr><td>Testi Santrifüj 5810 R</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Konik tüpler Falcon 50 mL</td><td>Dutscher</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli cımbız</td><td>Dutscher</td><td>711200</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td>Kalsiyum ve magnezyum içermez</td></tr><tr><td>EnVision</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td>Lüminesansı ölçer</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td><td></td><td></td><td>Kültür ortamına eklemek için</td></tr><tr><td>Floresan antikorları etiketler</td>, <td>Tablo 1'e</td><td></td><td></td>bakın</tr><tr><td>Cam Havaneli</td><td>Dutscher</td><td>198599</td><td></td></tr><tr><td>Hepes (1 M)</td><td>Thermo Fisher</td><td>15630056</td><td>20 mM</td></tr><tr><td>İnkübatörde</td><td></td><td></td><td></td></tr> Kullanım <tr><td>LEGENDplex İnsan Anti-Virüs Yanıt Paneli</td><td>BioLegend</td><td>740390</td><td>Boncuk bazlı immünolojik test</td></tr><tr><td>Lymphoprep</td><td>StemCell</td><td>7801</td><td>Yoğunluk gradyan ortamı</td></tr><tr><td>Bay Buzlu kap</td><td>Thermo Fisher</td><td>5100-0001</td><td>Yavaş dondurma kabı</td></tr><tr><td>Pierce %16 Formaldehit (w/v), Metanol içermeyen</td><td>Thermo Fisher</td><td>28908</td><td></td></tr><tr><td>Resiquimod (R848)</td><td>InvivoGen</td><td>tlrl-r848</td><td>TLR7/8 agonisti</td></tr><tr><td>RPMI-1640 Orta</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8758</td><td></td></tr><tr><td>SPL Hücre Kültürü Kabı, 150 mm x 25 mm (SPL150)</td><td>Dutscher</td><td>330009</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi bıçak steril N&deg; 23</td><td>Dutscher</td><td>132523</td><td></td></tr><tr><td>UltraComp eBeads Kompanzasyon Boncukları</td><td>Thermo Fisher</td><td>01-2222-41</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure 0.5 M EDTA, pH 8.0</td><td>Thermo Fisher</td><td>15575020</td><td>PBS'de yıkama tamponu yapmak için</td></tr></tbody></table>

bademcikler mononükleer hücrelerin İzolasyon ex vivo doğuştan gelen bağışıklık yanıtları bir İnsan mukozal lenfoid doku Çalışma

Isolation of Tonsillar Mononuclear Cells to Study Ex Vivo Innate Immune Responses in a Human Mucosal Lymphoid Tissue

Mukoza ile ilişkili lenfoid dokulardan izole hücrelerin incelenmesi (MALT) mukozal bağışıklığı içeren patolojilerde bağışıklık hücrelerinin yanıtının anlaşılmasını sağlar, çünkü dokudaki konak-patojen etkileşimleri modelleyebilirler. Dokulardan elde edilen izole hücreler ilk hücre kültürü modeli iken, doku elde etmek zor olabilir, çünkü bunların kullanımı ihmal edilmiştir. Bu protokolde, sağlıklı insan bademciklerinden bademcikteknükleer hücrelerinin (TMC) aktivasyon üzerine doğuştan gelen immün yanıtları incelemek ve mukozal dokularda viral enfeksiyonu taklit etmek için nasıl kolayca işleyip kültürlendirilebildiğini açıklıyoruz. Bademciklerden TMC'lerin izolasyonu hızlıdır, çünkü bademciklerde ancak epitel vardır ve milyarlarca büyük bağışıklık hücresi tipine kadar verim verir. Bu yöntem, kandan periferik mononükleer hücrelerin (PBMCs) kullanımına benzer immünoassays, qPCR, mikroskopi, akış sitometrisi, vb. gibi çeşitli teknikler kullanılarak sitokin üretiminin saptanmasını sağlar. Ayrıca, TMC'ler uyuşturucu testine, gelecekteki toksisite testleri için dikkate alınması gereken PBMC'lere göre daha yüksek bir duyarlılık göstermektedir. Böylece ex vivo TMC kültürleri kolay ve erişilebilir bir mukozal modeldir.

İlk olarak kültürde bulunan hücrelerin bağışıklık profilini karakterize ettik ve TMC miktarını analiz ettik. TMC'leri bademciklerden akış sitometrisi ile fenotiple ettik. Şekil 1'degösterildiği gibi, Kandan Gelen PBMCs mevcut tüm büyük bağışıklık hücresi tipleri bademcikler TMCs temsil edildi. Ancak, TMCs b hücreleri hariç tüm hücre türlerinin sıklığı, PBMCs daha düşüktü.
<img alt="Figure 1" class="...

Bu protokolde, kısmi cerrahi tonsillektomi uygulanan sağlıklı insanlardan bademcikler mononükleer hücrelerin invazyon asyonunu inceleyip mukozal dokularda viral enfeksiyonu taklit etmek için nasıl kolayca işleyip kültürlendirilebileceğimizi açıklıyoruz.

Bademcikler Mononükleer Hücrelerin İzolasyon Ex Vivo Doğuştan Gelen Bağışıklık Yanıtları Bir İnsan Mukozal Lenfoid Doku Çalışma

Studying isolated cells from mucosa-associated lymphoid tissues (MALT) allows understanding of immune cells response in pathologies involving mucosal ...

Bademcikler mononükleer hücreler kan hücrelerinden daha alakalı ve karmaşıktır ve izolasyonları mukozal bağışıklığı içeren patolojilerde bağışıklık hücresi yanıtının incelenmesine olanak sağlar. Kurduğumuz teknik, çok sayıda bağışıklık hücresinin bir mukozal dokudan kurtarılmasını sağlarken, ekstrem itimatçalışmaları için bütünlüklerini korumasını sağlar. Yöntem oldukça basittir, ancak bademcikler verimi en üst düzeye çıkarmak için hızlı ve dikkatli bir şekilde ele alınması gerekir.El yazması metinde açıklandığı gibi insan bademcik dokusunu laboratuvara taşıyın. Daha sonra, hücre süzgeci bir 150 tarafından 25 milimetrelik kültür çanak üzerine yerleştirin. Onları steril tutmak için başka bir çanak tüm diseksiyon aletleri yerleştirin.Tüm ana numuneleriniz daha önce kalifiye olmadıkları ve bulaşıcı ajanlar içermedikleri için özenle ele alınmalıdır. Sonra bir süzgeç içine şişeden PBS dökün, bademcikler çıkış var bazı hücreler içerecektir çünkü. Steril forceps kullanarak, steril forceps kullanarak kültür çanak içine şişe bademcikler aktarın.Gerekirse, ızgarayı batırmak için daha fazla PBS ekleyin. Diseksiyonu bademcik başına yaklaşık 45 dakika sürer. Bu süre zarfında bademciklerin iyi canlılık ve hücre verimi sağlamak için batık olması çok önemlidir.Forceps ve neşter kullanarak kürterize kanlı ve fibroid doku çıkarın. Neşter ve kavisli cımbız kullanarak, çapı yarım santimetreden daha az küçük parçalar halinde doku kesti. Küçük parçalar her zaman batırılmış olabilir, böylece tüm doku kesin.Hücre süzgecine birkaç parça doku yerleştirin. Beyaz stroma sadece çok ince bir tabaka kalana kadar bir cam haşere ile ızgara üzerine kazıyın. Izgarayı tıkamamak için stroma'yı çıkarın ve atın.Daha sonra hücre süspansiyonuna ızgaraya aktarmak ve son bir kez kazımak için 10 mililitrelik bir pipet kullanın. Daha sonra, hücre süspansiyonuna steril bir şişeye aktarmak için 10 mililitrelik bir pipet kullanın. Izgarayı ve hücre süzgecini pbs ile bir kez yıkayın ve PBS'yi de şişeye aktarın.Devam etmeden önce hücre süspansiyon oda sıcaklığında beş dakika boyunca bankta dinlenmeye bırakın. Yeni bir 50 mililitrelik şişe üstüne steril 70 mikrometre elek yerleştirin. Hücre süspansiyonuna 10 mililitrelik pipetle yavaşça elek aktarın.Elek tıkanmışsa, hücreleri elekten kazımak için steril bir mililitrelik pipet ucunun arkasını kullanın. Elek gerektiği sıklıkta değiştirin. Hücreleri 250 kez g'de 10 dakika 4 santigrat derecede santrifüj edin.Santrifüjden sonra, supernatant atın. Şişeye hafifçe dokunarak peleti yeniden askıya alın ve 35 mililitre PBS'deki hücreleri yeniden askıya alın. Hücre izolasyonunun ilk aşamasını tamamlamak için, yeni bir şişenin üzerine 70 mikrometrelik yeni bir elek yerleştirin ve hücre süspansiyonuna 10 mililitrelik pipetle aktarın.Daha net bir hücre çözeltisi elde etmek için, yeni bir 50 mililitrelik şişeye 15 mililitre yoğunluk degradeli ortam ekleyerek başlayın. Karıştırmayı en aza indirmek için dikkatli olmak için, yoğunluk gradyan ortamın üstüne TMC çözeltisi dökün. Daha sonra, hızlanma ve fren kapalı oda sıcaklığında 30 dakika boyunca 1000 kez g çözeltisantrik.Santrifüjden şişeyi çıkardıktan sonra, üst katmanı çıkarmak ve atmak için 10 mililitrelik bir pipet kullanın. TMC'ler ve yoğunluk gradyan ortamı arasındaki arabirimi rahatsız etmeyin. Daha sonra steril bir mililitrelik pipet ucu ile TMC'leri çıkarın ve 50 mililitrelik yeni bir şişeye aktarın.Hücreleri yıkamak için, ilk% 2 fetal sığır serum ve 2 milimolar EDTA içeren PBS 50 mililitre ekleyin. Sonra tüpü 250 kez g'de 10 dakika 4 santigrat derecede santrifüj edin. Hücreleri tekrar yıkayın, ama bu sefer 400 kez g dört santigrat derece 10 dakika boyunca tüp santrifüj.RPMI 1640'ı %10 ısı yalıtımlı FBS, 2 milimolar L-glutamin ve antibiyotik çözeltisi ile tamamlayarak R10 kültür ortamını hazırlayın. TMC'leri 10 mililitre R10'da yeniden askıya alın. O zaman hücreleri say.Hücreler ya hemen kullanılabilir ya da makalede açıklandığı gibi gelecekteki kullanım için dondurulmuş. TMC'ler boyandı, antikorlarla kuluçkaya yatırıldı ve akış sitometrisi kullanılarak karakterize edildi. TMC'ler kandan periferik mononükleer hücrelerde bulunan tüm majör immün hücre tiplerini içeriyordu, kısaltılmış PMBC.Ancak, B hücreleri hariç tüm hücre türlerinin frekansları TBMC'lerde KİT'lere göre daha düşüktü. Sitokin üretiminde hücre aktivasyonunu incelemek için, TMC'ler requimod R848 ile bir gecede uyarıldı. TMCs, mavi çizilmiş, ifn Lambda 2/3 ve IL-8 dışında test edilen tüm sitokinler üretti, üretim PBMCs daha düşük olmasına rağmen, yeşil çizilmiş.R848 stimülasyonunu karşılaştırarak kat artar stimülasyonu kırmızı ile belirtilir. Saflaştırılmış ve izole TMCs, mavi, ve bademcik doku blokları, turuncu, Influenza A virüsü ile 24 saat boyunca uyarıldı, IAV. IFN üretimi TMC'lerde saptandı, ancak doku bloklarının süpernatantında doku eksplandanlarının sitokin salgılanması ve hücre aktivasyonu çalışmaları için en iyi model olmadığını gösteren bir yapıda değil.Toksik ilaç C1 ile ön kuluçka ve R848 ile stimülasyon sonra, TMCs ve PBMCs canlılık için tsayed edildi. TMC'ler C1'e karşı daha duyarlıydı. Bu, gelecekteki tedavilerde yeni ilaçların sadece hücre hatları, PBMCs veya doku eksplorleri üzerinde değil, dokulardan gelen hücrelerde test edilmesi gerektiğini göstermektedir. Bu prosedür bize tam kandan PBMCs gibi TMCs kullanmak ve belirli bir hücre tipi, hücre kültürü, akış sitometri veya donma saflaştırma gibi aynı hücresel deneyler gerçekleştirmek için izin verir.TMC'lerin izolasyonları, mukozal bağışıklığı içeren patolojilerde sekonder lenfoid organlarda immün yanıtı ilgili bir modelde daha iyi karakterize etmeyi mümkün kılmıştır.

isolation-tonsillar-mononuclear-cells-to-study-ex-vivo-innate-immune

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Intranazal aşılara farelerin burun ve sistemik immün yanıtlar için nazofaringeal ilişkili lenforetiküler dokular (NALT) katkılarını incelemek için Yöntemler açıklanmıştır. Biz NALT bağımlı fare modeli kurmak için bir cerrahi prosedür göstermek...

Aşılar Fare yanıtlar içinde Nazofaringeal ilişkili lenforetiküler Doku (NALT) Rolü incelenmesi

Peyer plaklarında hücrelerin belirli altgrupları (PPs), gut-ilişkili lenfoid dokuların primer endüktif sitelerin immünolojik işlevlerini anlamak giderek artan bir ilgi var. Burada akım sitometri analizi ve immun için PP cryosections için tek hücre hazırlıkları PP hazırlamak için paralel protokolleri anahat.

Lenfositler ve mürin Peyer en Yamalar itibaren Dendritik Hücreler İzolasyon Ve immün

Lenf nodu stromal hücrelerinin izolasyonu, fibroblastik retiküler hücreler, lenfatik ve kan endotel hücreleri elde etmek için enzimatik sindirim ve mekanik ayrıştırmayı içeren çok aşamalı bir prosedürdür. Tarif edilen prosedürde, canlı lenf nodu stromal hücrelerinin yüzey işaretleyici bozulmasını en aza indirmek için kısa bir sindirim otomatik mekanik ayrıştırma ile birleştirilir.

Kemirgen Lenf Düğümü Stromal Hücrelerinin İzolasyonu

Palatin bademcikler B ve T lenfositleri açısından zengin bir kaynaktır. Burada, B ve T lenfositlerini insan palatin bademciklerinden izole etmek için kolay, verimli ve hızlı bir protokol sunuyoruz. Açıklanan yöntem, bademcik iltihabı olarak bilinen bademcik iltihabının viral etiyolojisi üzerine yapılan çalışmalar için özel olarak uyarlanmıştır.

İnsan Palatine Bademcikler B ve T Lenfosit için Verimli İzolasyon Protokolü

Biz izolasyon, fenotipik karakterizasyonu ve kemirgen dişetinin gelen bağışıklık hücrelerinin fonksiyonel analiz için bir teknik kurduk.

İzolasyon, Karakterizasyonu ve Dişeti Bağışıklık Hücre Ağı Fonksiyonel Sınav

Bağırsak lenfositlerinin kantitatif karakterizasyonuna, bu hücrelerin çeşitli bağırsak ve sistemik hastalıklarda kritik bir rol oynadığının giderek daha fazla tanınması nedeniyle artan bir ilgi vardır. Bu protokolde, sonraki akış sitometrik karakterizasyonu için tek hücreli popülasyonların farklı ince bağırsak bölmelerinden nasıl izole edileceğini açıklıyoruz.

Fare Küçük Bağırsak Lenfositler izolasyonu ve Akım Sitometrisi Karakterizasyonu

Lenfositler, adaptif immün yanıtlarda ana oyunculardır. Burada, in vitro ve in vivo lenfosit aktivasyonunda istenen moleküllerin fizyolojik fonksiyonlarını belirlemek için bir lenfosit saflaştırma protokolü sunuyoruz. Açıklanan deneysel prosedürler, kontrol ve genetik olarak değiştirilmiş lenfositler arasındaki fonksiyonel kapasiteleri karşılaştırmak için uygundur.

İzolasyon ve murin lenfositlerin aktivasyonu

Burada biz lenfositler gut ilişkili lenfoid doku Peyer's yamalar ve boşaltma Mezenterik lenf düğümleri de dahil olmak üzere İndüktif sitelerinden ve lamina propria dahil efektör mekanları ekran koruyucu yalıtım için detaylı bir protokol tanımlamak ve bağırsak epitel küçük bağırsak bağışıklık sisteminin.

Lenfositler fare küçük bağırsak bağışıklık sistemi yalıtma

Bu protokolün amacı kollajenaz kullanarak dokunun enzimatik sindirimi ile kolon lamina propria bulunan mononükleer hücreleri izole etmektir. Bu protokol, mononükleer hücrelerin verimli bir şekilde izolasyonuna olanak sağlar ve bu da sağlam immünhenototipleme için kullanılabilir tek bir hücre süspansiyonu ile sonuçlanır.

Lamina Propria Mononükleer Hücrelerin Murine Kolondan Kollajenaz E Kullanarak İzolasyon

Tip 2 inflamasyonda rol oynayan Grup 2 doğuştan gelen lenfoid hücreler (ILC2'ler), esas olarak helmint enfeksiyonuna, alerjik hastalıklara, metabolik homeostaza ve doku onarımına yanıt olarak katılır. Bu çalışmada, ILC2'leri murin burun mukozasından izole etmek ve CD226 ekspresyonunu saptamak için bir prosedür gösterilmiştir.

CD226 Ekspresyonunu Saptamak için Grup 2 Doğuştan Gelen Lenfoid Hücrelerin Fare Burun Mukozasından İzolasyonu

Öğrenin bademcik mononükleer hücre izolasyonunu mukozal bağışıklık yanıtlarını incelemek için. Bu yöntem, insan lenfoid dokusundan canlı immün hücre elde edilmesini sağlar.

Bademcikler Mononükleer Hücrelerin İzolasyon Ex Vivo Doğuştan Gelen Bağışıklık Yanıtları Bir İnsan Mukozal Lenfoid Doku Çalışma

Daha fazla video keşfet